Буфер колонки: Доступ ограничен: проблема с IP

Содержание

Акустика — активные акустические системы в Казахстане для дома бу и новые

Алматы, Алатауский район Сегодня 15:52

Алматы, Бостандыкский район Сегодня 15:26

Алматы, Медеуский район Сегодня 15:18

1 500 000 тг.

Договорная

Алматы, Алмалинский район Сегодня 15:04

35 000 тг.

Договорная

Семей Сегодня 14:43

Алматы, Жетысуский район

Сегодня 14:27

Талдыкорган, Микрорайон 1 Сегодня 14:24

Колонки буфер

Прежде чем купить колонки для компьютера, необходимо обратить на особо важные параметры модели. Говоря об акустике, всегда нужно учитывать эти основные показатели:. От материала изготовления корпуса во многом зависит чистота звучания. Колонки активные чаще всего изготавливаются из дерева, потому что звук хорошо отражается от стенок и исключает помехи. Купить компьютерные колонки также можно из МДФ, металла, стекла или пластика.


Поиск данных по Вашему запросу:

Схемы, справочники, даташиты:

Прайс-листы, цены:

Обсуждения, статьи, мануалы:

Дождитесь окончания поиска во всех базах.

По завершению появится ссылка для доступа к найденным материалам. ПОСМОТРИТЕ ВИДЕО ПО ТЕМЕ: Акустика DNS при включении гудит / РЕМОНТ

сабвуфер работает а колонки нет


Некачественный звук, нет баса, не работает сабвуфер Добрый день! Подскажите пожалуйста, не работает сабвуфер, не басит а пещит, аналогично при Как подключить колонки и сабвуфер Здравствуйте. Подскажите пожалуйста как подключить две колонки и саб вуфер к компьютеру? Новые колонки — сабвуфер гремит даже если немного прибавишь Здравствуйте , помогите пожалуста! Купила калонки с сабвуфером, работают, только вот сабвуфер гремит Конечно, я понимаю, что надо покупать обе вещи для отличного звука, но все же Нет звука, красный крест у значка и не работает не одно гнездо пробывал и колонки и наушники Заходил в диспетчер устройств там только микрофон, во вкладке звук пишет- звуковые устройства не Не работает сабвуфер в системе 2.

Сабвуфер к компу подключается через один 3. Не работает сабвуфер в системе 5. Нужна помощь. У меня есть система 5. Материнская плата: asus Microlab ma 4. В один прекрасный день ни с того ни с сего перестал работать сабвуфер. Блоги программистов и сисадминов. Vkontakte ,. Facebook , Twitter. Тесты Блоги Социальные группы Все разделы прочитаны.

Просмотров Ответов 7. Метки нет Все метки. Что делать? QA Эксперт. Возможно динамики перегорели. Проверить легко — подключить батарейку на полтора вольта — если есть челчок, значит хорошие. А усилитель может выйти из строя по причине большой громкости, перегрев тоже может быть причиной.

Не исключены помехи в сети — импульсом пробило усилитель. Но нам не известно что и как, поэтому трудно точно сказать. Answers Эксперт. Опции темы. Реклама — Обратная связь. Регистрация Восстановить пароль. Все разделы прочитаны.

Ответов 7 Метки нет Все метки всегда все работало хорошо и внезапно перестала работать одна колонка,на следующий день другая отказала,я в недоумении,сабвуфер работает,а колонки нет. Ответы с готовыми решениями: Некачественный звук, нет баса, не работает сабвуфер Добрый день! Искать еще темы с ответами Или воспользуйтесь поиском по форуму:.

КиберФорум — форум программистов, компьютерный форум, программирование.


Акустические системы в Украине — буфер

Компьютеры без монитора Компьютеры с монитором Неттопы. Все ноутбуки Ноутбуки для офиса Мультимедийные ноутбуки Игровые ноутбуки. Кронштейны и крепления. Проекторы Экраны проекционные Лампы для проекторов. USB flash-накопители Карты памяти. Антивирусные программы Операционные системы Офисные программы Подписки.

➤【КОЛОНКИ 】Закажите дешево прямо Сейчас — потому что Сегодня БЕСПЛАТНО ➤【Купить】лучшие модели Недорогие цены и скидки.

Акустические системы и колонки

Низкие звуковые частоты плохо локализуются, то есть человеку сложнее определить, откуда идёт звук и, исходя из этого, — в многополосной аудиосистеме можно сделать одну большую низкочастотную колонку на всю систему, а в остальных колонках » сателлиты » держать лишь средне- и высокочастотные динамики. Это делает акустическую систему более компактной, уменьшает стоимость и позволяет поместить громоздкий и вибрирующий сабвуфер в место, где он не будет мешать например, под стол. Кроме того, подбирая подходящее место для сабвуфера, можно попытаться погасить низкочастотные стоячие волны , неизбежно возникающие в небольшом замкнутом помещении. Сабвуфер обычно применяется в системах, рассчитанных на просмотр современных насыщенных спецэффектами фильмов см. На стыке АЧХ может быть как провал, так и завышение уровня из-за несоответствия частотного диапазона или интерференции волн с разным фазовым сдвигом. Поэтому на некоторых сабвуферах существует возможность подстройки его верхней граничной частоты и фазы. Активный сабвуфер имеет встроенный усилитель мощности который позволяет снять низкочастотную нагрузку с усилителя и активный кроссовер, что позволяет отфильтровывать высокие частоты, упрощает согласование сабвуфера с широкополосными акустическими системами. Может получать сигнал линейного уровня с уже удаленными ВЧ с отдельного канала источника.

Компьютерная акустика

Грудки Сегодня Хотите продавать быстрее? Узнать как. Фастов Вчера Радча 10 окт.

Некачественный звук, нет баса, не работает сабвуфер Добрый день! Подскажите пожалуйста, не работает сабвуфер, не басит а пещит, аналогично при

Компьютерные колонки

Лидеры продаж. Дай ПЯТЬ добру! Скидки на посуду. Скидки на планшеты. Лучшие предложения из мира гейминга! Предзаказ Xiaomi Redmi Note 8.

Акустика (колонки)

Хотите продавать быстрее? Узнать как. Темиртау Сегодня Караганда, Казыбекбийский район Вчера Алматы, Ауэзовский район 11 окт.

В KNS можно купить колонка Микролаб в кредит онлайн. Клубная цена. Купить. черные {, 2 колонки+сабвуфер дерево черные, 12Wx2 + 16W RMS }.

Колонки в Алматы

Колонки, акустика в широком ассортименте! JBL Charge 4 — погрузи колонку в воду! Устал от музыки с проводами и розетками? JBL Xtreme 2 — почувствуй глубину звука!

Лидеры продаж. Дай ПЯТЬ добру! Скидки на посуду. Скидки на планшеты.

Пытаться с лету подобрать себе компьютерные колонки по техническим характеристикам — прямой путь к тому, чтобы ощутить себя слегка неполноценным.

Музыкальные колонки — это не просто дополнение к вашему компьютеру. Не зависимо от того, какую музыку вы предпочитаете слушать, она всегда помогает вам расслабиться и насладиться звучанием любимых мелодий. А уж если вы и соседей любите приобщать к прекрасному — тогда к выбору колонок нужно отнестись с максимальной серьезностью. Колонки для компьютера по размерам чуть меньше, чем обычные колонки, а еще они оснащены специальным изолированным магнитным полем и наличие этих характеристик несколько снижает качество звучания. Компьютерные колонки можно поделить на активные и пассивные. Пассивные устройства по ценовой категории стоят дешевле, но вот качество воспроизведения звука у них не очень хорошее.

Запорожье, Днепровский 11 окт. Запорожье, Шевченковский Вчера Харьков, Киевский 11 окт.


Advooc — поиск объявлений

Advooc
  • О проекте
  • Политика конфиденциальности
Электроника и современные гаджеты
Домашние животные и товары для них
Одежда, обувь и аксессуары
Автозапчасти
Стройматериалы и инструменты
Оборудование для бизнеса и промышленности
Мебель и интеръер
Техника для дома
Работа
Сервис и услуги
Антиквариат и коллекционирование
Косметика и товары для ухода
Еда и напитки
Музыка и музыкальные инструменты
Товары для детей
Товары для спорта и активного отдыха
Бытовая химия
Книги и журналы
Аренда недвижимости
Продажа недвижимости

Казахстан: adkza adkze advoos advooc adkzu adkzy Украина: aduaa aduae aduau aduao aduaho Беларусь: adbyf adbyt adbye adbyy Узбекистан: aduza aduze aduzy aduzu Азербайджан: adaza adazu Таджикистан: adtja adtju Киргизия: adkga adkgu Болгария: adbgf adbgt adbgd adbgl adbgy Румыния: adroa adroe adroi

© Advooc

Изысканный динамики буфера для великолепного звука

О продукте и поставщиках:
Сказочный. динамики буфера, представленные на Alibaba.com, представляют собой захватывающий способ насладиться увлекательной музыкой с превосходным качеством звука. Они входят в обширную коллекцию, которая включает в себя богатое разнообразие продуктов с различными атрибутами, начиная от физических размеров, дизайна, звука, цвета и других характеристик. Это огромный выбор. динамики буфера позволяет каждому покупателю найти наиболее подходящий вариант для удовлетворения своих потребностей. 

Эти. динамики буфера предлагают соблазнительные скидки, которые делают их невероятно доступными по сравнению с их стоимостью. Они демонстрируют образцовые характеристики прекрасных звуков, такие как удивительно низкочастотное расширение для превосходных глубоких басов и нот. Их точная частотная характеристика позволяет им воспроизводить точный звук с точными басами и высотой тона. Это делает их универсальными для использования в качестве звукового выхода для фильмов, музыки и другого контента.

Все. динамики буфера, представленные на Alibaba.com, изготовлены из прочных материалов, что делает их долговечными и обеспечивает высочайшую производительность. Установить и использовать их назначение легко, потому что производители включают в себя инструкции для пользователей. Они готовы к подключению к различным устройствам, включая телевизоры, мобильные телефоны и флэш-диски, для полноценного развлечения. Их элегантный дизайн делает их привлекательными и дополняет внешний вид помещений, в которых они используются.

Благодаря обширному выбору. динамики буфера на Alibaba.com, все покупатели могут выбрать лучшее соотношение цены и качества, выбрав наиболее подходящее для своих целей. Их удивительная стоимость и качество делают их достойными каждого вложенного в них доллара. Покупки на веб-сайте очень выгодны, поскольку покупатели экономят время и деньги.

Железные динозавры, или моя история путешествия во времени / Хабр

 



Mafia II. Знакомая атмосфера?

Все мы помним и любим старые фильмы по типу «Назад, в будущее», «Охотники за привидениями», «фольксваген жук» или многочисленная советская классика. Многие из нас играли в знаменитую серию игр «Мафия», а кто-то даже застал одну из минувших эпох в гараже, чиня роскошные автомобили тех лет. Некоторые, может быть, даже являлись одними из участников каких-нибудь грандиозных событий, о которых с удовольствием сейчас рассказывают своим внукам. 

В общем, я думаю, среди людей найдётся много гикков и сопереживающих, которые, подобно Тарантино, бережно хранят в своей душе, в своём творчестве, кусочек их любимой эпохи. Так, любой из нас, скорее всего, знаком с атмосферой давних лет. Возможно, кого-то до сих пор привлекает частичка этого быта, ну, например,  старые машины, Элвис Пресли, Чак Берри, костюмы-тройки со шляпами и рок-н-ролл…. Ведь каждая эпоха по-своему уникальна, и одной из наиболее узнаваемых и всеми любимыми, пожалуй, являются 50-60-е годы. Так называемый послевоенный период, когда у нас пошла оттепель, а у них — мода на американскую мечту и грезы о прекрасном.

Не соответсвует тематике хабра! Низкий технический материал!

Эта статья абсолютно соответствует тематике всех хабов, в которых она находится (в том числе и коммерческого блога). Не рискуя удивить вечно негодующего и никому не известного ностальгирующего по прошлому критика в комментариях, добавлю, что писать мы можем о чём угодно, если материал качественный и интересен большинству компьютерщиков. И это понятное дело! Поэтому можете сколько угодно называть нас платными авторами, но и обсуждать тогда с платными авторами (только по вашему мнению), а также с коммерческими блогами и с администрацией проблему каких-либо публикаций на хабре, это бороться с ветряными мельницами. Рыцарство это конечно хорошо, но только тогда, когда в этом есть смысл. Но его нет, ибо попытка достучаться до нас в комментариях утонет в этом спойлере и обесценит ваш комментарий.

Помимо того, что данная статья соответствует всем хабам, в которых она находится, отмечу также, что она соответствует и той сложности технического материала, которую требуют от статьи данные хабы. Лучше переходите сразу к прочтению других материалов, которые соответствуют вашим потребительским предпочтениям. Открою вам истину капитана: лента Хабра настраивается так, как захотите вы! Не нравятся наши статьи, читайте те статьи, в которых пишут исключительно по IT! Не портите себе настроения, уважайте мнение других и хорошего Вам дня! Живите дружно!



Кадр из последнего фильма Тарантино  «Однажды в голливуде»

Я, как любитель не только динозавров, но и просто всего старого, не мог пройти мимо такой возможности. Покупать жигули классику, чтобы окунуться в старперство — это для меня слишком. Такие машины в наши дни являются по большей части инструментом для окунания в другие сферы, поэтому я копнул чуть глубже — машины 50-х. Тем более они уже давно перешли в разряд винтажа, и достать их в хорошем состоянии не так-то просто. Сегодня я расскажу вам про тот период времени, когда я только начинал увлекаться машинами, но, как технарь, уже четко знал, что найти добротный ретро-автомобиль — задача вполне осуществимая.

Волга — автомобиль мечты, но не для меня.



Даже Юра Деточкин хочет Волгу.

Потому что не зацепила. Не спорю, что это был легендарный автомобиль с интересной историей. Все же мы помним про то, как Волгу на Горьковском автозаводе сделали? По типично русскому принципу же — привезли, значит, Ford Mainline и сказали: —. «Сделайте такую же, только лучше! Это — скучновато». Так, первые Волги были даже с коробкой-автоматом, но в наших реалиях не прижились, и более того, те редкие первые партии потом все равно переоборудовались на обычную механику. Собственно, при всей своей внешней красоте, Волга достаточно скучна. Внутри — салон больше напоминает что-то из 40-х, при этом не сочетается сам с собой, и, тем паче, с внешним видом. Плюс коробка полузеркального «неправильного» типа — первая включается вниз, то есть «на себя». Хотя, стоит отметить, что это, конечно, всего лишь вкусовщина и дело привычки, но для меня Газ-21 потому и не сыскал должной любви и уважения.


Салон автомобиля ГАЗ-21. Мне он кажется слишком монотонным и «недополированным». 

Плюс ко всему, к тому времени я обладал уже ГАЗ 31105 — последней «настоящей» Волгой, еще на ЗМЗ 406 и отечественных комплектующих, при этом оснащенной максимально по-современному. Этот люксовый экземпляр с заводским кондиционером и кожаным салоном даже был на службе в какой-то конторе, судя по ПТС. Это была еще одна причина отвернуться от большого и неповоротливого корабля. 

Москвич — моё счастье



Первый Москвич 400/401 был копией немецкого Opel Kadett, построенный на трофейном оборудовании.

Меня больше привлекло второе поколение Москвичей, их часто называют «маленькой Волгой», но все скорее наоборот. Хоть и имея немецкие корни, модель 402 была полностью собственной разработкой, несколько лет дорабатывавшейся и вставшей на ход гораздо раньше Волги. К тому же, меня больше привлекал салон —  пусть и потеснее газовского, но торпеда в цвет кузова, пластиковые вставки под дерево и хромированая решетка динамика явно делали оглядку на лучшие американские образцы. Конечно, и этот салон идеальным я не мог назвать — меня больше всего беспокоил выступ под радиоприемником, но смотрелось все гораздо более гармонично.
 
Москвичи 402 на испытаниях, в пробном оформлении, не пошедшем в серию.

Немного изучив тему, я остановил свой выбор на модели 403. Именно ее и надо брать. Самая первая модель второго поколения 402 —  с нижнеклапанным мотором еще от первого москвича, но расточенным до 35лс. Устаревшая конструкция нижнеклапанных моторов к тем годам уже подошла к своей кончине. Из-за низкой степени сжатия в 5,5 атмосферы и плохой продуваемости клапанов только с одной стороны мощность таких двигателей можно было поднимать исключительно наращиванием количества цилиндров.

 
Устройство нижнеклапанного двигателя

Следующая модель 407 в том же кузове уже обладала верхнеклапанным двигателем со степенью сжатия 7 (сейчас и это какие-то гроши, не так ли?) мощностью уже 45 лс и все еще нижним валом. То есть, ни ремня, ни цепи двигатель не имел — все также нижний распредвал с длинными толкателями и коромыслами, разумеется, все еще без гидрокомпенсаторов. ГБЦ такого мотора можно снимать и ставить, не беспокоясь за метки. И да, на этом двигателе головка сама по себе уже присутствовала, в отличие от предыдущего, где блок цилиндров сразу накрывался клапанной крышкой. 


Чертеж верхнеклапанного двигателя Москвич-407. Обратите внимание на объем камеры сгорания в момент сжатия, о «касаниях» кошмаров тогда еще не ходило. 

Машина обладала напольными педалями, механическим (рычаг) приводом сцепления и ГТЦ, установленном на лонжероне. О втором контуре, конечно, речи быть не может — при любой неисправности гидравлики тормоза пропадали целиком и полностью, а аварийных датчиков никаких тогда еще не существовало.
 

Найдя подходящий вариант, я сразу же поехал и забрал машину. Правда ведь красотка?

После 407 планировался выпуск 408 модели — абсолютно новой и по тем временам современной, но на заводе были проблемы по кузовным элементам и двигателю, из-за чего несколько лет не удавалось наладить выпуск новой модели. И тогда и вышла в свет машина, которой не должно было быть — Москвич 403. Все еще в старом кузове и со старым двигателем, но уже с новой усовершенствованной подвеской, новым удобным рулевым управлением, подвесными современными педалями, новыми тормозами и «правильной» 4-ступкой. По сути, это был 407 с максимальным осовремениванием, запчасти по ходовой, на который можно до сих пор найти. На оригинальный 407, купить что-то по тормозам или подвеске — целая история, а вот на 403, на котором стоят узлы, использовавшиеся на последующих 408 и 412, до сих пор китайцы делают запчасти. 


Салон выглядит так, будто я с боем забирал машину у пенсионера

После регистрации в ГИБДД и экспертизы я приступил к работе — двигатель в такой машине убить, кажется, невозможно, поэтому сначала главное — гидравлика. Тормозные цилиндры, само собой, все давно заклинили, привод сцепления также жаждет вмешательства. Сливая жидкость, я словно натолкнулся на геологический срез — сначала шла черная тормозуха, потом коричневая, потом фиолетовая БСК, потом желтая…  Да, в советские годы лили определенно, что есть. 



Передние тормозные цилиндры

Гуляя в поисках тормозных цилиндров по Южному порту, наткнулся на советские запасы и на мои негодования, по поводу  того, что они давно сгнили. Хотя,  продаван уверял, что «да они каучуковые, им ничего не будет». Ну, всё же я рискнул их поставить. Мои опасения подтвердились — цилиндры также подклинивали и перегревали барабан. 

После неудачи пришлось покупать тормоза современной фирмы

Fenox

. Да, на это производство много жалоб, но цилиндры оказались отлично рабочими и не клинящими. Если и брать советские с хранения, то надо обязательно менять резиновую манжету, ну а что с ней еще могло произойти за 50 лет? Вот только качественные манжеты сейчас тоже не найти, зато подходят волговские от ГЦС, но качество у них также очень хромает на обе ноги.


Водяной насос (помпа) двигателя Москвич-407

Следующая вечная проблема после гидравлики — система охлаждения. Проработав всю жизнь на воде из-под крана, она не выживает никогда. Подшипники помпы всегда разваливаются, сальник течет, а радиатор сгнивает изнутри. Если помпу или ее ремкомплект найти еще можно в свободной продаже, то с радиаторами всегда сложнее, но тоже еще попадаются. Хотя, конечно, всегда можно попробовать его промыть, да и в любом случае, вся система требует промывки. Нет, в автозапчасти за промывками спешить не следует, сначала в бытовую химию.


Промывка системы охлаждения электролитом

Вековую ржавчину ничего не возьмет, кроме родного электролита. Жестче его, наверное, только серная кислота. Заливаем прямо при работающем двигателе в перемешку с водой. Возможно, процедуру придется неоднократно повторить. После этого засыпаем лимонную кислоту, после — заливаем промывку и долго на ней катаемся, после чего заливаем дистиллированную воду для финальной промывки, и, если вода сольется чистая, льём антифриз.



Итог промывки — как новое

Дальше, разумеется, уже идут плановые работы — замена всех резинотехнических изделий, фильтров, расходников, устранение прочих неисправностей, косметические работы. 


Масляный щуп

Все пластиковые элементы —  ручки, накладки, руль и прочее — продаются в свободном доступе новодельного исполнения, найти никакой сложности, а оригинальный советский пластик практически никогда не сохраняется ввиду времени и растрескивания от лучей солнца.


Восстановленный салон. Разве не красота? Установил также магнитолу с закосом под винтаж

Клапана не имеют гидрокомпенсаторов, поэтому регулировать их надо вручную. Но, сделав один раз, можно забыть про них очень надолго. Из-за выработки регулировать их по щупам оказалось бесполезной затеей — пришлось перенастраивать чисто по слуху и люфту. Зазор надо оставлять минимальный, около 0,15, зажимать клапана ни в коем случае нельзя —  могут прогореть из-за недозакрытия. 


Моя машина (сзади) на одном из съездов москвичистов

Остальные элементы редко преподносят проблем — все металлические детали надежны, однако, ходовая на таких машинах часто убита нашими дорогами, а обслуживалась редко. Типичная болезнь — разбитые хвостовики, сайлентблоки, иногда — подшипники.
 

Салон машины при свете дня

Нередко бывают проблемы с прокладкой ГБЦ — тут роль играет сама ее старость, или возможные перегревы в прошлом. Благо, снять башку труда не составляет — никакие метки соблюдать не надо, благодаря нижнему валу, процедура превращается в «снял-поставил», только клапана придется перенастраивать. Перегревы двигателя у этих машин, кстати, крайне редки благодаря закипающему вмиг бензонасосу — он расположен прямо под выпускным коллектором, поэтому летом при небольшом заторе на дороге в бензонасосе образуется паровая пробка и двигатель глохнет. Дальше в ход идут дедовские методы —  мокрая тряпка, поливание водой. 

Можно поискать и механический бензонасос, который не будет закипать, но тут могут быть сложности с совместимостью. Также рекомендуется заменить родной вентилятор на 6-лопастной от 412, для этого придется пересверлить отверстия в нем, но встанет отлично. На родном температура в пробках будет расти очень стремительно из-за несовместимостью с современным бензином.


Блок двигателя со снятой головкой. Видно, что масло подтекало из-под прокладки. В углу можно заметить электрический бензонасос. Коленвал, к сожалению, трехопорный

Много я ездил на своей машине по разным городам, и ни разу она не подводила. Ну, кроме закипаний бензина на МКАДе, пока я не разобрался с этой ситуацией. Простота, надежность и своевременное обслуживание делают из этого автомобиля неубиваемый танк.


Москвич в одной из поездок

Из Прошлого в современность и обратно в прошлое.

Побывав на различных выставках и мероприятиях, недешевая игрушка стала уже постепенно надоедать. Да и друзья вечно подстрекают — «

Да купи ты нормальную машину, зачем тебе это ведро

?». Так и случилось —  спустя год я продал машину, а на вырученные деньги купил VW Polo четвертого поколения. 


Поменять Москвич на немца — таких анекдотов еще не было  
Привыкнув к мягким диванам и удобной посадке, сидеть в Поло я просто не мог. Педали не регулируются, хотя в Москвиче такая услуга есть, сиденье, руль пусть и с регулировками, но устроиться просто никак не представлялось возможным. Нога быстро затекала, пятая точка уставала. Под педали я подкладывал доски, а на сиденье купил дорогую подстилку из овечьей шерсти, чтобы хоть какой-то бы комфорт. Но ничего не помогало. В очередной раз я понял, что слушать окружающих не стоит.  И вот, уже спустя непродолжительное время, я снова шерстил сайты в поисках другой машины. В моем городе один перегной, либо неадекватно большие деньги. После долгих поисков, я нашел один-единственный нормальный вариант, но в Яранске. 



Классическая обстановка

Что ж, машина оказалась очень хорошей внешне, но совершенно неподготовленной к дальним броскам технически. Работают только задние тормоза, ручника нет, передачи ловятся где-то в космосе, радиатор течет, что по остальному фронту вообще неизвестно. Но машина едет, а значит в путь!

Опасное путешествие с медведями и гаечным ключом.



Мой новый Москвич уехал недалеко

Пройти предстояло около 1000 километров, но сломался я, едва выехав с Яранска. Двигатель тут же перегрелся, выдавил воду через пробку радиатора, одно из задних колес тоже немного нагрелось определенно подклинивают тормоза. Благо, я в дорогу прихватил пятилитровку с водой. Долив жидкости, я стал ехать аккуратно, постоянно поглядывая за температурой, а она также не переставала расти, а вода все также выдавливалась. Проехав кое-как 50 километров, я стал искать проблему. Жалюзи открыты, термостат открывается, через пробку видно, как вода циркулирует и поступает в радиатор, но изнутри вместе с водой лезет и какая-то болотная жидкость  радиатор определенно забит. Я посдавливал патрубки, пытаясь продавить пробку, снова долил воды и отправился дальше. 

  
Очередной отдых на охлаждение двигателя

Запас воды быстро закончился, а мне надо было дотянуть хотя бы до Йошкар-Олы. Я заранее договорился с автовозом, чтобы меня смогли забрать, если вдруг  сам не в силах буду передвигаться, к тому же, в городе можно купить запчасти и хоть что-то.
 
Набрав воды в ближайшем болоте и отбившись гаечным ключом от медведей (нет, это лишь абстракция от насущных проблем), я отправился дальше. На подходе к городу я заметил, что как-то подозрительно быстро испаряется и бензин. Уже в Йошкар-Оле я увидел, как за мной тянется полоса бензина старый шланг совсем прохудился и практически соскочил с бензонасоса. Благо запчасти рядом, также ещё закупил масла на всякий случай, а сверху стирального порошка, крота, и залил это добро в радиатор. Ходил по кафешкам с бутылкой,  прося налить воды. Проблему это не решило вода все также выдавливалась из радиатора, не желая в нем находиться. 


Йошкар-Ола — красивый и интересный город

Звоня автовозу, я наткнулся на новую проблему майские праздники. Ну конечно, обязательно на них надо было искать приключения. Водители забухали, после многочисленных попыток дозвониться, наконец, я получил ответ — «мол извини чувак, не ранее, чем через несколько дней». С автосервисами та же проблема никто не работает. И вот я, в незнакомом городе, со сломанной машиной, сижу и думаю, что же делать. Ну а делать нечего, кроме как аккуратно отправляться дальше в сторону Москвы. 


Следующая остановка — Чебоксары

Потихоньку, с многочисленными остановками добравшись до Чебоксар, тут я решил заночевать. Город тоже интересный, но смотреть его уже было мало времени. Также его двойные светофоры на бульварах меня напрягали как только мигает зеленый остановиться уже не успеешь, из-за одних только задних тормозов, а добавить газу на еле живом двигателе тоже проблема. Передние тормоза забирают на себя примерно 70% всего тормозного усилия, поэтому с одним рабочим задом ехать приходилось крайне внимательно и аккуратно.
 

Памятник Остапу Бендеру в Чебоксарах

Наутро я стал думать, что же делать дальше. Праздники все еще не закончились, друзья мне по телефону посоветовали выкинуть термостат может, он не открывается. Хоть вода и определенно циркулировала, я решил последовать совету, но это опять же ни разу не помогло. До Москвы еще далеко, и я стал думать нестандартно если вода выдавливается через пробку, может, дело в самой пробке? Нет, при исправной системе охлаждения такой автомобиль может ехать вообще без пробки, мне и приходилось так делать, когда радиатор тек, чтобы не порвало давлением. Поэтому я запихнул под пробку каких-то пакетов, и, алилуйя! Температура стала стабильна, а вода больше не выдавливалась. К тому же, пошли ливни, добавляя прохлады для двигателя. Печка, правда, не работала, поэтому пришлось открывать окна.


Благо хоть водительский дворник работает

По пути к Нижнему у меня сломался гудок начал сам бибикать, пришлось отключить. Далее сломался спидометр стал противно выть, я был вынужден отсоединить тросик. На подъезде к городу меня ждала жуткая пробка. Боялся перегрева, так и случилось температура из-за забитого радиатора начала медленно расти, но останавливаться остывать пришлось всего один раз. 


На въезде в город меня кто-то сфотографировал

В Нижнем я уже неоднократно бывал, но все равно решил отдохнуть от руля и немного прогуляться. Также подъехал и к Горьковскому Автозаводу. 


Маленькая Волга дразнит большую

Наутро, проверив состояние машины, я увидел, что количество тормозной жидкости уменьшилось. Это меня напрягло, ведь даже ручник не работает, но я долил и отправился в дорогу, решив не останавливаться во Владимире. Как раз на объездной вокруг города я почувствовал, как педаль уходит в пол, а и без того еле живые тормоза вообще отказываются работать. Остановившись у обочины, я увидел перетертую об мост тормозную трубку на заднее правое колесо. При нажатии на педаль жидкость просто вытекает через трещину. 

Практически без тормозов я доковылял до ближайшей заправки, где попросил картонку и полез под машину. Можно, конечно, заглушить правое колесо и оставить только одно тормозящим, но это даже для меня слишком смело. Замотав трубку изолентой и кое-как обжав ее, я аккуратно отправился дальше, готовый, в случае чего глушить двигатель и уходить на обочину. Изолента плохо держала давление, пропускала жидкость, тормозил я как поезд и чуть не сбил пару бабулек на переходе, но, наконец, нашел работающий магазин запчастей, и там нашлась даже полностью подходящая тормозная трубка. Но дальше мне пришлось так и ехать ровно до Ногинска, где мы с другом, наконец, поменяли трубку и прокачали тормоза. А после этого я дождался вечера, чтобы пробки рассосались, и совершил последний марш-бросок до Москвы.

Заключение

Стоит также отметить еще один интересный момент

насмотревшись старой классики, я захотел сделать себе кабриолет. Для этого был куплен совершенно убитый 407 Москвич, нет, действительно, в нем было убито абсолютно все, даже ступица стучит!


Работы по металлу

Чтобы кузов не сложился, было усилено днище, заварены задние двери, после чего уже спиливалась крыша. Ехал он еле-еле и от Яранска уже точно не доехал бы. Но чисто для прикола, сделать кружок по району очень даже веселый проект! Мечта идиота, ни так ли?


Даже заправщикам интересно

Не стоит забывать, что такой кабриолет средство чрезвычайно высокой опасности. Я уж молчу про ремни и подушки, ведь благодаря валкости машины и высокому клиренсу перевернуть ее крайне легко, а вот что будет при перевороте с людьми в машине можно только догадываться. Так что, не повторяйте за мной и до новых встреч! Надеюсь, вам было интересно мое знакомство со старыми ведрами! И в армии москвичеводов будет пополнение!

Обзоры Климат — MegaObzor

Обзор Nubi Fresh HUMION. Ультразвуковой увлажнитель с аромадиффузором и ионизатором

Для здоровья и снижения рисков респираторных заболеваний важно поддерживать относительную влажность в ква…Обзор HIPER IoT Humidifier 3.5L. Умный увлажнитель с УФ-лампой и верхним заливом воды

Поддерживать рекомендованный уровень влажности в комнате с началом отопительного сезона и зимнего периода…Обзор STARWIND SHC2325. Недорогой увлажнитель с верхним заливом воды

С наступлением отопительного сезона поддерживать комфортный уровень влажности без «помощников» проблемати…Обзор Polaris PUH 1010 WIFI IQ Home. Увлажнитель с Алисой и Марусей

В большей части России начался отопительный сезон, а вместе с теплом квартиры пришла и проблема низкой вл…Обзор Polaris PMH 2115 Wi-Fi IQ Home. Микатермический обогреватель с голосовым управлением

Централизованное отопление есть далеко не в каждой квартире и тем более доме, а там, где есть, уровень те…Обзор HAIER JADE AS25JBJHRA-W. Премиум кондиционер с самоочисткой

Не так давно мы провели тестирование высокотехнологичного кондиционера серии HAIER FLEXIS SUPER MATCH с ф…Обзор HAIER FLEXIS SUPER MATCH AS50S2SF1FA-B. iPhone в мире кондиционеров

Сильная жара в этом году стала для многих весомым поводом, чтобы решиться на покупку кондиционера и подар…Обзор NETATMO NHC-EC. Умная станция мониторинга качества воздуха в помещении

В рамках «Лаборатории» ранее, когда делились опытом эксплуатации первых …Обзор Nubi FRESH MULTI-AIR 360. Мультифункциональный очиститель воздуха

Поддержание чистоты воздуха в помещении является важной составляющей профилактики респираторных заболеван…Обзор HIPER Iot Humidifier 2.2L Wi-Fi. Умный увлажнитель воздуха

На прошлой неделе мы детально рассматривали очиститель воздуха …Обзор HIPER Purifier ION mini v1. Умный очиститель воздуха с ионизатором

Прошедший 2020 год заставил задуматься о качестве воздуха в квартире не только тех, кто страдает от аллер…Обзор NUBI Fresh O3 Station. Бытовой озонатор-ионизатор для воздуха, воды и продуктов

В прошлом году в разгар пандемии мы проводили тестирование портативного озонатора …Обзор Clever&Clean HealthAir UV-07. Очиститель воздуха с УФ-лампой и ионизацией

В рамках «Лаборатории» проводили тестирование очистителя воздуха …Обзор Polaris PUH 9105 IQ Home. Увлажнитель воздуха с Алисой

Понимание важности поддержания микроклимата в помещении за последний год заметно возросла. Мы уже затраги…Обзор Mia Air Compact. Очиститель воздуха с антимикробным покрытием

Жители мегаполисов и крупных городов, даже самых современных и технологичных жилых комплексов, часто стал…Обзор Playme CVD-20. УФ-стерилизатор с Qi-зарядкой 10 Вт

Хочется верить, что в 2021 году накал, связанный со сложной эпидемиологической ситуацией в мире, уменьшит…Обзор REMEZair RMA-201. Стационарный очиститель — обеззараживатель

Не так давно мы проводили тестирование очистителя-обеззараживателя воздуха REMEZair RMA-107-01 с подд…Обзор Remezair RMA-107-01. Очиститель-обеззараживатель с Wi-Fi, таймерами и сценариями

Сегодня мы вновь затронем вопрос очистки воздуха и поддержания его качества в квартире или небольшом офис…Обзор CLEVER&CLEAN HEALTHAIR UV-03. Очиститель воздуха с УФ и ионизацией

Сложная эпидемиологическая ситуация в мире с вирусными респираторными заболеваниями заставила многих из н…Обзор REMEZair RMA-102-02. Очиститель-обеззараживатель для автомобиля

На прошлой неделе мы проводили тестирование очистителя-обеззараживателя …Обзор REMEZair RMA-101-01. Домашний очиститель-обеззараживатель

За последнее время заметно возрос интерес к поддержанию чистоты воздуха. Касается это не только пыли, но …Обзор TrendVision ST-1. Ультрафиолетовый рециркулятор для дома и офиса

Осень и зима традиционное время всплеска респираторных заболеваний, хотя с учетом текущих трендов, риск с…Обзор Xiaomi Mi Air Purifier 3H (FJY4031GL). Очиститель воздуха с HEPA 360 и поддержкой Яндекс.Алиса

Качество вдыхаемого воздуха напрямую влияет на качество выдыхаемого воздуха. В условиях мегаполиса вопрос…Обзор LEXAND LUV-3000. Портативный УФ-стерилизатор

На прошлой неделе мы проводили тестирование термобутылки LEXAND LU…Первый взгляд на Dyson PH01. Первый увлажнитель-очиститель от Dyson

Качество воздуха колоссальным образом влияет на наше в здоровье, в особенности если говорить про квартиры…Обзор Comanche. Война в воздухе

Сегодня мы поговорим о достаточно интересной игре, ключевым элементом которой являются летательные средст…Обзор Redragon SPLIT ROCK. Портативная колонка с базой сабвуфером

Тестируемая сегодня портативная акустика Redragon SPLIT ROCK может похвастать интересной конструкцией со …Обзор Hisense ECOLife (AE-33R4BNS/AE-33R4BFS). Чистый воздух у вас в квартире

Аллергия – серьёзная болезнь, которая не даёт покоя людям по всему миру. С каждым годом все больше людей …Обзор Dyson Pure Hot+Cool HP05. Очиститель воздуха с обогревом и охлаждением

В прошлом году мы проводили детальное тестирование очистителя воздуха Dyson Pure Cool, не так давно компа…Обзор Ballu Air Master 2 BMAC-300/Base. Приточный очиститель воздуха

Воду и воздух можно смело отнести к самым важным составляющим жизнедеятельности человека. Если в случае с…Обзор видеокарты MSI GeForce GTX 1060 GAMING X 6G в камуфляже CAMO SQUAD. Ждем выход NVIDIA RTX 2060

Ожидается, что первоначально компания NVIDIA анонсирует выход старших видеокарт GTX 2070, GTX 2080 и GTX …Обзор SINBO SAH 6112. Недорогой ультразвуковой увлажнитель

Поддержание комфортного микроклимата в квартире позволяет улучшить качество сна, снизить риск возникновен…Обзор Creative Aurvana Trio. Внутриканальные наушники с сабвуфером и двумя драйверами

В начале текущего года были впервые представлены внутриканальные наушники Creative Aurvana Trio, соответс…Обзор PIXAERO MOBUS. Телесуфлер для видеоблогеров и видеостудий

Занимаясь съемкой видеороликов и подготавливая мультимедийный контент, мы уже давно находимся в поиске уд…Обзор Dyson Pure Cool. Напольный вентилятор с фильтрацией воздуха

Вентиляторы Dyson, пожалуй, самые технологичные и футуристичные. Чего стоит только полное отсутствие вращ…Обзор Polaris PUH 6005Di. Увлажнитель с внешним гигрометром

Зима — это не только снежки, снеговики, елка, дед мороз и снегурочка, но и отопительный сезон в большинст…Обзор Arctic Cooling P533. Игровые наушники с камуфляжем

В начале текущего года мы впервые познакомились с акустикой от Arctic Cooling, протестировав беспроводные…Обзор Rain of Money. Деньги из воздуха

Очень увлекательная игра, которая не требует никаких интеллектуальных размышлений — просто тянешь деньги …Обзор Sky Force. Выжить в воздухе не так просто

Очень веселая и красочная игра с большим количеством спецэффектов, выстрелов и взрывов. Вы полюбите ее с …Обзор Make Rain. Делаем деньги из воздуха

Очень крутое приложение, после игры в которое понимаешь, как же в реальной жизни тяжело зарабатывать день…Тесты Defender Game Racer Wireless V2.0. Атака с воздуха

…Обзор Clipdiary. Шпион или менеджер буфера обмена?

Операционная система — настолько неизученная область для абсолютного большинства пользователей, что уж пр…

Ноутбук ASUS Sülearv. ROG Strix SCAR 17, ENG, W11H G733ZX-LL003W

Описание IPS-экран
Ноутбук ROG Strix SCAR 17 оснащен IPS-экраном с частотой обновления 240 Гц, а широкие углы обзора обеспечивают яркие и равномерные цвета даже при взгляде на экран из экстремальных положений.

WI-FI 6
Ноутбук ROG Strix SCAR 17 позволит Вам шагнуть в будущее, так как он оснащается быстрым Wi-Fi 6 (802.11ax), который обеспечивает высокую скорость соединения и позволяет достичь большего. Будь то видеозвонки, передача файлов или игра – медленный WiFi больше не будет помехой.

Клавиатура с RGB-подсветкой
Печатать на клавиатуре с RGB-подсветкой будет одинаково удобно и приятно и в светлое, и в темное время.

Bluetooth Bluetooth 5.2
Объём 90 Wh
Кэш-память 24 MB
Скорость 2.5 GHz
Видеокарта NVIDIA GeForce RTX™ 3080 Ti
Объём памяти видеокарты 16 GB
Колонки 4x speaker with Smart Amp Technology
Глубина 28.2 cm
Тип SSD
Вес 2.9 kg
Процессор 12900H
Цвет black
Поддерживаемые языки Russian
Ёмкость 90 Wh
Тачпад True
Ширина 39.5 cm
Длина 28.2 cm
Высота 2.34 cm
Яркость 300 nitti
HDMI True
Частота процессора 2.5 GHz
Refresh Rate 240 Hz
L2 Размер кэша 24 MB
Backlight True
Производитель процессора Intel®
Ширина 39.5 cm
Лысый 2.9 kg
Количество ядер 14
Поверхность экрана matte
Graphics card NVIDIA GeForce RTX™ 3080 Ti
Ekraani pind matt
Tuumade arv 14
Paigutus ENG
Ширина 39.5 cm
Высота 2.34 cm
Глубина 28.2 cm
Вес 2.9 kg
Емкость 90 Wh
Цвет черный
Видеокарта NVIDIA GeForce RTX™ 3080 Ti
Процессор 12900H
HDD / Flash memory capacity 1000 GB
mäluseadme maht 1000 GB
Объем жесткого диска / накопителя 1000 GB
Поверхность экрана матовая
Яркость 300 nitti
heledus 300 nitti
Частота 2.5 GHz
mäluseadme tüüp SSD
Тип устройства памяти SSD
key arrangement ENG
Раскладка латинская
paneeli värskendussagedus 240 Hz
Частота обновления 240 Hz
protsessori tootja Intel®
Производитель процессора Intel®
Буфер 24 MB
HDD type PCIE GEN4 NVMe
ühendusliides PCIE GEN4 NVMe
graphics card memory 16 GB
Видеопамять 16 GB
USB 3.2 2 TK
Количество ядер 14
puuteplaat True
Тачпад True
keeled Vene
Языки русский
charger output voltage 280 W
toiteadapteri väljundvõimsus 280 W
Выходная мощность адаптера питания 280 W
full-size Yes
täisasetus Jah
Полная раскладка Yes
headset connector True
kõrvaklappide liides True
Разъем для наушников True
backlight features RGB
taustvalgustuse omadused RGB
Свойства подсветки RGB
USB-C features Data transfer, Displayport, Power Delivery, Thunderbolt 4
taustvalgustus True
Подсветка True
USB-C 3.2 1 TK
USB-C 4.0 1 TK
Интерфейс PCIE GEN4 NVMe

Колоночная хроматография

Колоночная хроматография

— один из самых мощных методов фракционирования. Может разделять компоненты смесей на основе:

размер

(гель-фильтрация/исключение размера)

заряд (ионный обмен)

аффинность (аффинность специфического связывания)

 

Общим для всех трех типов хроматографических методов является то, что все они используют смолу (твердую фазу) с особыми химическими свойствами, помещенную в стеклянный цилиндр (называемый «колонкой»).Буферный раствор (подвижная фаза) просачивается через колонку и собирается в пробирки («фракции») на выходе из колонки. Белковая смесь наносится на подвижную фазу и просачивается через колонку в виде расширяющейся полосы. Различные белки мигрируют по-разному в зависимости от их свойств и свойств смолы.

 

Ниже мы рассмотрим различные формы и рассмотрим их особые свойства.

 


Гелевая фильтрация/исключение размера

При гель-фильтрации, или, как ее иногда называют, эксклюзионной хроматографии, смола является пористой (см. рисунок слева).Некоторые молекулы (синие здесь) могут проникать в смолу, и, как показывают линии, это не прямой путь; таким образом, маленьким молекулам требуется больше времени, чтобы пересечь колонку, чем большим молекулам, которые путешествуют по внешней стороне смолы. Это показано на рисунке справа, где большие молекулы (синие) отрываются первыми, а более мелкие молекулы (красные) — позже.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 


Ионный обмен

Ионообменная хроматография делится на два типа — анионообменники и катиониты.Существует много различных типов фрагментов, которые используются от слабо до очень сильно заряженных, что позволяет огромному диапазону молекул взаимодействовать.

В отличие от гель-фильтрационной хроматографии здесь белки напрямую взаимодействуют со смолой. Таким образом, обычно колонку уравновешивают в буферном растворе для установления постоянного pH в колонке, затем загружают белковую смесь, при которой все или некоторые белки взаимодействуют со смолой в зависимости от их собственного заряда.Буфер продолжают наносить до тех пор, пока не будут смыты все белки, не взаимодействующие со смолой. В этот момент обычно к колонке применяется градиент возрастающей концентрации соли (нарушающий ионное и водородное связывание) в буфере, что позволяет сначала высвобождать наиболее слабо взаимодействующие белки, за которыми следуют более сильно и, наконец, наиболее сильно взаимодействующие белки. Этого также можно добиться, изменив рН буфера, наносимого на колонку.

Анионит

Анионообменник означает, что он удаляет анионы из белковой смеси, поэтому смола должна быть украшена положительно заряженными фрагментами.Перед началом элюирования все положительно и незаряженные белки пройдут через колонку. Когда вы начинаете элюирование, сначала вы удаляете слабоотрицательные белки (например, -1 заряд), затем более сильно отрицательный заряд (-2) и, наконец, наиболее отрицательно заряженные белки (-3).

Катионит

Совершенно противоположен катиониту — здесь катионы удаляются из белкового раствора, поэтому смола должна быть заряжена отрицательно. Опять же, до начала элюирования все отрицательные и незаряженные белки будут падать через колонку.Когда вы начинаете элюирование, сначала вы удаляете слабоположительные белки (например, +1 заряд), затем те, которые имеют более сильный положительный заряд (+2), и, наконец, наиболее положительно заряженные белки (+3).

 


Близость

Аффинная хроматография требует, чтобы вы знали что-то конкретное о вашем белке — чтобы он имел специфическую метку, встроенную в последовательность, чтобы он связывал NAD+, вы знали лиганд, который он связывал, или чтобы у вас было специфическое моноклональное антитело, которое взаимодействует с вашим белком.Для этого типа хроматографии ваша смола украшена антителом, NAD+ или двухвалентным металлом (самая популярная сконструированная метка — это метка 6xHis — 6 остатков His на N- или C-концах белка). Смола колонки снова предварительно уравновешивается в соответствующем буфере перед загрузкой образца белка. Ожидается, что будет взаимодействовать только интересующий белок. Как только все невзаимодействующие белки будут удалены из колонки, ваш белок можно элюировать, изменив pH, добавив соль, добавив хелатор металлов или лиганд в высокой концентрации.

 

вернуться наверх | предыдущая страница | следующая страница

Упаковка колонок и подготовка к аффинной хроматографии антител

Очистка сефарозных сред с протеином G и протеином А

После очистки среду следует регенерировать следующим образом:

  1. После элюирования промыть 2–3 колоночными объемами элюирующего буфера.
  2. Немедленно повторно уравновесить путем промывания 2–3 объемами колонки буфера для связывания.


Безразборная очистка

Если наблюдается увеличение противодавления, среду следует очистить. В некоторых случаях такие вещества, как денатурированные белки или липиды, не элюируются в процессе регенерации.

Для удаления осажденных или денатурированных белков:

  1. Среду промывают двумя объемами колонки 6 М гидрохлорида гуанидина.
  2. Немедленно промыть не менее чем 5 объемами колонки буфера для связывания.

Для удаления прочно связанных гидрофобных белков, липопротеинов и липидов:

  1. Промыть неионогенным моющим средством, например, 0,1% Triton X-100 при 37 °C в течение 1 мин.
  2. Немедленно промыть не менее чем 5 колоночными объемами стерильного буфера для связывания.
    а) Можно также промыть колонку 70% этанолом и оставить на 12 часов.

После обработки промыть не менее чем 5 колоночными объемами буфера для связывания.


Обратный поток может повысить эффективность процедуры безразборной очистки.После очистки хранить в 20% этаноле.

Промывка 70% этанолом увеличивает противодавление. Используйте более низкую скорость потока при очистке 70% этанолом.

Очистка носителя MabSelect

Все носители MabSelect можно очищать с помощью следующих процедур:

Для удаления осажденных или денатурированных веществ:

  1. Промойте среду двумя объемами колонки 50 мМ гидроксида натрия в 500 мМ сульфата натрия, или 50 мМ гидроксида натрия в 1 М хлориде натрия, или 100 мМ фосфата натрия, или 6 М гуанидина гидрохлорида в 10 мМ гидроксида натрия.Время контакта: не менее 10 мин.
  2. Немедленно промыть не менее чем 5 колоночными объемами стерильного отфильтрованного буфера для связывания при рН от 7,0 до 8,0.

MabSelect SuRe и MabSelect SuRe LX устойчивы к щелочам, что позволяет использовать более концентрированные растворы гидроксида натрия:

  1. Промывка 3 объемами колонки буфера для связывания.
  2. Промыть не менее чем двумя объемами колонки от 100 мМ до 500 мМ гидроксида натрия. Время контакта: от 10 до 15 мин.
  3. Немедленно промыть не менее чем 5 колоночными объемами стерильного и отфильтрованного связывающего буфера с рН 7.от 0 до 8,0.

Для удаления прочно связанных гидрофобных белков, липопротеинов и липидов:

  1. Промыть 2 объемами колонки неионогенного моющего средства (например, 0,1% раствор).
  2. Немедленно промыть не менее чем 5 колоночными объемами стерильного отфильтрованного буфера для связывания при рН от 7,0 до 8,0.
    а) В качестве альтернативы промыть 3-4 колоночными объемами 70% этанола или 30% 2-пропанола. Немедленно промыть не менее чем 5 колоночными объемами стерильного отфильтрованного связывающего буфера с рН 7.от 0 до 8,0. Применяйте увеличивающиеся градиенты, чтобы избежать образования пузырьков воздуха при использовании высоких концентраций органических растворителей.

Промывка 70% этанолом и 30% 2-пропанолом увеличивает противодавление. Используйте более низкую скорость потока при очистке 70% этанолом или 30% 2-пропанолом.

Обессоливание и замена буфера для аффинной хроматографии антител

PD MidiTrap™ G-25 предназначен для удобного обессоливания и замены буфера пробы белка объемом от 0,5 до 1,0 мл ( Рисунок 2.13 ). Колонки предварительно заполнены средой Sephadex™ G-25, средой для ЭХ, которая позволяет эффективно удалять низкомолекулярные вещества из белков с молекулярной массой > 5000. Эти колонки представляют собой прекрасную альтернативу колонкам PD MiniTrap™ G-25 благодаря увеличенная вместимость образца.

Для большей гибкости продукт имеет два альтернативных протокола нанесения: с использованием гравитации или центрифугирования. Гравитационный протокол позволяет проводить простую параллельную очистку нескольких образцов без необходимости использования системы очистки.В соответствии с протоколом центрифугирования образцы обрабатывают в стандартной центрифуге с минимальным разбавлением элюируемого образца.

Каждая упаковка PD MidiTrap™ G-25 содержит 50 предварительно упакованных колонок и четыре адаптера, которые необходимы при использовании протокола центрифугирования.

Протокол центрифугирования

Буфер
Уравновешивающий буфер
: Подходит для приложения

Процедура обессоливания

1.Снимите верхнюю крышку и слейте раствор для хранения колонки.
2. Снимите верхний фильтр с помощью щипцов. Снимите нижнюю крышку.
3. Поместите PD MidiTrap™ G-25 в пробирку для сбора 50 мл и подсоедините прилагаемый адаптер колонки к верхней части пробирки.
4. Заполните колонку уравновешивающим буфером и дайте уравновешивающему буферу полностью войти в слой набивки. Повторите и откажитесь от потока.
5. Снова заполните колонку буфером для уравновешивания и центрифугируйте при 1000 x g в течение 2 мин, после чего выбросьте поток.

Для обеспечения оптимальных результатов очень важно уравновесить колонку 15 мл уравновешивающего буфера (этапы 4 и 5), чтобы полностью удалить раствор для хранения.

6. Медленно добавьте от 0,75 до 1,0 мл образца в середину уплотненного слоя.
7. Поместите PD MidiTrap™ G-25 в новую пробирку для сбора 50 мл.
8. Элюировать центрифугированием при 1000 g в течение 2 мин и собрать элюат.

Для обессоливания больших объемов проб используйте колонки HiTrap ® и HiPrep™, таблица 2.8.

Восстановление зависит от типа белка. Как правило, восстановление находится в диапазоне от 70% до 90%. Концентрация образца может улучшить восстановление. Производительность извлечения и обессоливания выше при использовании гравитационного потока по сравнению с центрифугированием.

Одноразовые обессоливающие колонны PD-10

Колонки для обессоливания PD-10

предназначены для удобного обессоливания и замены буфера пробы белка объемом от 1,0 до 2,5 мл. Колонки предварительно заполнены средой Sephadex™ G-25, средой для SEC, которая позволяет эффективно удалять низкомолекулярные вещества из белков с молекулярной массой > 5000.Эти колонки представляют собой отличную альтернативу колонкам PD MidiTrap™ G-25 благодаря увеличенному объему пробы.

Для большей гибкости продукт имеет два альтернативных протокола нанесения: с использованием гравитации или центрифугирования. Гравитационный протокол позволяет проводить простую параллельную очистку нескольких образцов без необходимости использования системы очистки. Используя протокол центрифугирования, образцы обрабатывают в стандартной центрифуге с минимальным разбавлением элюированного образца.

Каждая упаковка колонок обессоливания PD-10 содержит 30 предварительно упакованных колонок. Для упрощения использования колонн для обессоливания PD-10 с гравиметрическим протоколом можно использовать буферный резервуар LabMate PD-10. Используя буферный резервуар, промывочный и уравновешивающий буферы можно применять за один этап.

Типичное разделение показано на Рис. 2.14. Хотя на рисунке показано типичное обессоливание альбумина, это ожидаемый результат для обессоливания антител.

Что такое буферы и почему они важны? Хроматография Сегодня

Контроль над переменными в эксперименте или анализе является важным элементом обеспечения точности и воспроизводимости анализа.Есть много переменных, которые вам, возможно, придется учитывать во время анализа, как химических, так и физических. Например, такой переменной, как температура, можно управлять с помощью духовки или водяной бани.

При добавлении небольшого количества образца к растворителю вы можете вызвать химические изменения, такие как изменение pH. Это может привести к дальнейшим изменениям, таким как изменения растворимости и осаждение образца. Хотя это может раздражать в стакане — представьте, что это происходит в хроматографической колонке.Итак, как мы можем контролировать такую ​​переменную, как рН?

Что такое буфер?

Буфер — это просто то, что сопротивляется изменениям, а буферный раствор — это раствор, который сопротивляется изменению pH раствора при добавлении небольших количеств кислоты или щелочи. Так, например, в ВЭЖХ, если добавление образца к подвижной фазе может привести к изменению pH, в подвижную фазу можно добавить буфер, чтобы противостоять изменениям pH, что дает аналитику контроль над pH.

Как они работают?

Ионы в растворе, которые вызывают изменение pH, представляют собой ионы водорода (H + ) или ионы гидроксида (OH ).Добавление H + увеличивает концентрацию ионов водорода, что снижает pH; OH объединяются с H + в воде, образуя раствор, удаляя ионы водорода, и, таким образом, повышая pH. Буферный раствор должен противостоять этим изменениям.

Существуют две основные формы буферного раствора: кислый буфер и щелочной буфер. Хотя разные буферы работают немного по-разному, процесс очень похож. Кислый буфер содержит слабую кислоту (ГК) и сопряженное с ней основание (А ), щелочной буфер наоборот.В растворе оба вещества находятся в равновесии, давая:

HA + H 2 O ↔ H 3 O + + A

Если к раствору добавить кислоту (H + или H 3 O + ), равновесие сместится влево, чтобы удалить лишние ионы водорода. При добавлении щелочи происходит обратное. В обоих случаях добавленный реагент эффективно удаляется, поскольку равновесие изменяется, а рН меняется очень незначительно. Это пример действия принципа Ле Шателье.

Хроматография и pH

Существует несколько способов изменения pH подвижной фазы. Возможно, наиболее очевидным является случай, когда производится инъекция и смесь образца и подвижной фазы, особенно если pH образца значительно отличается от pH подвижной фазы. Подвижная фаза также может поглощать углекислый газ при стоянии, что делает ее более кислой, подобно океану, поглощающему CO 2 из атмосферы.

Значение pH

важно в хроматографии, поскольку время удерживания компонентов пробы может зависеть от pH.При изменении pH время удерживания изменится, что значительно усложнит анализ. Для получения дополнительной информации в этой области см. статью, в которой подчеркивается важность буферов: Контроль селективности на колонках Zwitterionic HILIC путем регулировки pH и буфера.

Источник изображения: Сцепка поездов

Обзор диализа, обессоливания, замены буфера и концентрации белка | Термо Фишер Сайентифик

В контексте исследований в области белков и протеомики подготовка и очистка образцов относится к эклектичному набору методов, направленных на создание извлеченных или очищенных образцов белков, пригодных для длительного хранения или совместимых с последующими приложениями.Диализ, диафильтрация и гель-фильтрация (обессоливание) являются наиболее широко применимыми методами пробоподготовки. Эти методы основаны на хорошо известных принципах исключения размера и использовались в лабораторных исследованиях в течение многих десятилетий. Достижения в области качества материалов и конструкций, используемых для изготовления устройств для диализа, диафильтрации и обессоливания, идут в ногу с изменениями в масштабах, совершенствовании и удобстве, которых требуют современные исследовательские эксперименты.


Введение

Исторически механическое разрушение использовалось для лизиса клеток и тканей; однако совсем недавно были разработаны растворы на основе детергентов для эффективного лизиса клеток и обеспечения возможности разделения субклеточных структур без физического разрушения.В процессе подготовки образца белка многие детергенты, соли и другие молекулы, используемые или образующиеся во время экстракции белка или последующей очистки, могут оказывать неблагоприятное воздействие на функцию или стабильность белка или мешать последующим приложениям; поэтому может потребоваться удалить или уменьшить количество этих загрязнителей с помощью одного или нескольких методов очистки от белков. Выбор конкретного метода очистки белка зависит от типа и объема образца, характеристик белка (нативный или рекомбинантный) и предлагаемых последующих приложений, которые могут включать кристаллографию, масс-спектрометрию, мечение белков и другие приложения.

Общий рабочий процесс экстракции белка.  Протокол экстракции общего белка из клеток млекопитающих состоит из культивирования и сбора клеток, помещения образца пипеткой в ​​чистые микроцентрифужные пробирки и немедленного помещения на лед. Затем пробирку центрифугируют для осаждения клеток и отсасывают надосадочную жидкость. После физического разрушения клеток или добавления буфера для лизиса клеток проводят инкубацию на льду. Наконец, образцы центрифугируют для сбора супернатанта, который содержит общие клеточные белки.

 


Технический справочник по очистке белков

Узнайте больше о том, как обессоливать, буферизировать, концентрировать и/или удалять загрязнения из образцов белков с помощью различных инструментов Thermo Scientific для биологии белков, из этого 48-страничного руководства.

  • Надежный диализ образцов белка с использованием диализных кассет и устройств Slide-A-Lyzer
  • Быстрое обессоление образцов с высоким извлечением белка с использованием колонок и планшетов для обессоливания Zebaspin образцы белка быстро с использованием белковых концентраторов Pierce

Диализ

Диализ — это классический метод разделения, который облегчает удаление небольших нежелательных соединений из макромолекул в растворе путем селективной диффузии через полупроницаемую мембрану.Отсечка по молекулярной массе (MWCO) мембраны определяется размером ее пор. Образец и буферный раствор (называемый диализатом, обычно в 200–500 раз превышающий объем образца) помещают на противоположные стороны мембраны. Молекулы пробы, размер которых превышает размер пор мембраны, удерживаются на стороне пробы мембраны, но небольшие молекулы свободно диффундируют через мембрану и достигают равновесной концентрации со всем объемом диализата. Таким образом, концентрация мелких загрязняющих веществ в образце может быть снижена до приемлемого или незначительного уровня.

Как работают диализные мембраны. Диализная мембрана представляет собой полупроницаемую пленку (обычно лист регенерированной целлюлозы), содержащую поры различного размера. Молекулы большего размера, чем поры, не могут пройти через мембрану, но маленькие молекулы могут сделать это свободно. Таким образом, диализ можно использовать для очистки или замены буфера для образцов, содержащих макромолекулы.


Посмотрите это видео, чтобы узнать больше о белковом диализе


Обессоливание и замена буфера

Обессоливание относится к удалению солей из образца, в то время как замена буфера относится к замене одного набора буферных солей другим набором.Обе цели легко достигаются с помощью эксклюзионной хроматографии (ЭХ), также называемой гель-фильтрационной хроматографией. Обессоливание проводят, сначала уравновешивая хроматографическую колонку водой. Замена буфера, однако, выполняется путем предварительного уравновешивания смолой колонки с буфером, в котором должен оказаться образец. В обоих случаях компоненты буфера, переносящие образец в колонку, будут заменены раствором, которым колонка предварительно заполнена. уравновешенный.

Как обессоление, так и замена буфера являются процессами разделения, основанными на гель-фильтрации, также известной как хроматография на молекулярном сите.В этом методе раствор, содержащий макромолекулы, пропускают через колонку, заполненную пористой смолой. При правильном подборе макромолекулы будут слишком большими, чтобы проникнуть в поры смолы, и быстро пройдут через колонку. Напротив, буферные соли и другие небольшие молекулы будут попадать в поры смолы, замедляя скорость их миграции через слой смолы. Это уменьшение скорости потока приводит к тому, что более быстрые макромолекулы отделяются от более медленных и меньших молекул.Собирая отдельные фракции по мере их выхода из колонки, интересующая макромолекула может быть извлечена отдельно от малых молекул, которые позже покидают колонку.

Поскольку раствор, несущий образец в колонку, вытесняет раствор, в котором уравновешивается смола, макромолекулы, выходящие из колонки, переносятся в уравновешивающий буфер. Исходный буфер остается в смоле, отсюда и термин «замена буфера».


Посмотрите это короткое видео, чтобы узнать больше об обессоливании образцов белка.

Существует ряд имеющихся в продаже вариантов обессоливающих устройств.Например, продукты Thermo Scientific Zeba содержат смолы с исключительными свойствами обессоливания и извлечения белка. Доступны несколько форматов колонок Zeba для обработки образцов объемом от 2 мкл до 4 мл.

По сравнению с альтернативными продуктами, спиновые обессоливающие колонки Zeba от Thermo Scientific обеспечивают высокое извлечение белка и минимальное разбавление образца в более широком диапазоне концентраций и объемов образца. Колонки для обессоливания Zeba Spin , 10 мл (MWCO 7K) и колонки GE PD-10 использовались для обессоливания 1.5, 2,5 и 3,5 мл образцов БСА с концентрацией 0,04, 0,2 и 1 мг/мл. Обессоливание проводили в соответствии с протоколами, рекомендованными производителями, а выделение белка анализировали с помощью SDS-PAGE. Для каждого геля для электрофореза аликвоту исходного образца, равную 1 мкг BSA, загружали на дорожку 1 в качестве контроля нагрузки; все остальные обессоленные образцы загружали в гель в том же объеме, что и контрольную загрузку. Различия в интенсивности между дорожками являются комбинацией извлечения белка и разбавления образца, вызванного обессоливанием.Наибольшие различия в восстановлении и концентрации были отмечены в выделенной области.

Диафильтрация, аналогичная диализу, использует полупроницаемую мембрану для отделения макромолекул от низкомолекулярных соединений. В отличие от диализа, который основан на пассивной диффузии, диафильтрация включает проталкивание растворов через мембрану под давлением (например, обратный осмос, картриджи для стерилизации наконечников шприцев) или центрифугирование. В продаже имеется множество различных типов белковых концентраторов.

Во время диафильтрации как вода (растворитель), так и низкомолекулярные растворенные вещества проталкиваются через мембранный фильтр, где они собираются на другой стороне. Макромолекулы остаются на стороне образца мембраны, где они концентрируются до меньшего объема, когда вода вытесняется через мембрану на противоположную сторону. Следовательно, типичные устройства для диафильтрации, включающие центрифугирование, называются концентраторами, и этот метод используется в основном для концентрирования образцов, а не для замены буфера.

Сравнение извлечения белка с использованием концентраторов различных поставщиков. Растворы образцов белков центрифугировали в концентраторах белков Thermo Scientific и концентраторах других поставщиков в соответствии с инструкциями производителя (20 мл (4700 x г )). Образцы центрифугировали до более чем 15-30-кратного уменьшения объема образца; концентрацию белка измеряли по абсорбции при A280.


Посмотрите это видео, чтобы узнать больше о белковых концентраторах


Атмосферные осадки

Обычные методы анализа белков зависят от измеримого развития окраски в результате химических реакций или взаимодействий реагентов для анализа с функциональными группами белка. Однако развитие окраски и точное измерение белка даже самыми популярными методами анализа чувствительны к конкретным мешающим веществам, которые могут присутствовать в образцах.Например, большинство моющих средств мешают точному количественному определению белка с использованием анализов на основе красителя Кумасси, а восстановители мешают анализу белка BCA. Один из методов, используемых для удаления мешающих веществ, заключается в селективном осаждении белков с использованием трихлоруксусной кислоты (ТХУ) или ацетона. Раствор, содержащий мешающее вещество, удаляют, а затем белок повторно растворяют в совместимом с анализом буфере. Имеющиеся в продаже наборы упрощают предварительную обработку образцов для анализа белков.Небольшие молекулы можно отделить от крупных белков в образце путем осаждения ацетонитрилом. При использовании в сочетании с 96-луночными центрифужными фильтровальными планшетами этот метод идеально подходит для одновременной обработки большого количества образцов.

Протокол удаления веществ, мешающих колориметрическому анализу белков.  Реагентный набор Thermo Scientific Compat-Able Protein Assay Preparation Regent Set в четыре этапа удаляет соли, детергенты, восстановители и другие вещества из образцов белка, чтобы устранить влияние на результаты анализа белка.Этот набор реагентов обеспечивает более стабильные результаты по сравнению с самодельными реагентами для осаждения ТХУ или ацетоном.


Ионообменная хроматография

Другим общим методом очистки или обогащения белков является ионообменная хроматография. В ионообменной хроматографии образец пропускают через заряженную колонку. Заряженные группы на поверхности белка взаимодействуют с противоположно заряженными группами, иммобилизованными на ионообменном носителе. Ионообменные свойства основаны на изоэлектрической точке (pI) белка.Когда белок находится в буфере с pH выше, чем его pI, белок будет иметь отрицательный суммарный заряд и будет связываться с положительно заряженной подложкой или анионообменной средой. Когда буфер имеет pH ниже pI белка, белок будет иметь положительный суммарный заряд и связываться с отрицательно заряженной подложкой или катионообменной средой. Изменение pH буфера для связывания позволит элюировать интересующий связанный белок. Текущие протоколы в науке о белках (1990). доп. 8.4, Джон Вили и сыновья, Inc., содержит подробное обсуждение

Очистка белков с помощью ионообменной (IEX) хроматографии.  Эта форма хроматографии разделяет белки на основе обратимого взаимодействия между заряженным белком и противоположно заряженной хроматографической средой, также называемой смолой , и обеспечивает разделение от среднего до высокого разрешения и высокую емкость загрузки образца. Белки-мишени концентрируются, когда они связываются с хроматографической средой при низкой ионной силе и дифференциально элюируются в очищенной, концентрированной форме за счет увеличения концентрации соли или изменения рН в градиенте.

Аффинная хроматография

Аффинную очистку можно использовать для очистки молекул определенного типа (положительный отбор) или для удаления определенного вида загрязняющих веществ (отрицательный отбор). Оба метода часто включают буферный обмен. Аффинная очистка включает разделение молекул в растворе (подвижная фаза) на основе различий в связывающем взаимодействии с лигандом, иммобилизованным путем прикрепления к неподвижной опоре (твердая фаза). Носителем или матрицей в аффинной очистке является любой материал, к которому ковалентно присоединен биоспецифический лиганд.Как правило, материал, используемый в качестве аффинной матрицы, нерастворим в системе, в которой находится молекула-мишень. Обычно, но не всегда, нерастворимая матрица представляет собой твердое вещество. Сотни веществ были описаны и использованы в качестве аффинных матриц, включая агарозу, целлюлозу, декстран, полиакриламид, латекс и стекло с регулируемыми порами. Полезными аффинными носителями являются носители с высоким отношением площади поверхности к объему, химическими группами, которые легко модифицируются для ковалентного присоединения лигандов, минимальными свойствами неспецифического связывания, хорошими характеристиками текучести и механической и химической стабильностью.

Аффинная хроматография (АС).  Аффинная хроматография основана на обратимом взаимодействии между целевым белком или группой белков и специфическим лигандом, иммобилизованным на хроматографической смоле. Этот процесс отличается исключительной селективностью и обеспечивает высокое разрешение при емкости загрузки образца от средней до высокой. Исследуемый белок прочно связывается со смолой в условиях, способствующих специфическому связыванию с лигандом, а несвязанные загрязнения смываются.Затем связанный белок извлекают в высокоочищенной форме путем изменения условий в пользу элюирования. Условия элюирования могут быть специфическими, например, при использовании конкурентного лиганда, или неспецифическими, например, при изменении pH, ионной силы или полярности. Целевой белок элюируется в очищенной и концентрированной форме.


Очистка образца для электрофореза

Разделение и анализ белков с помощью электрофореза в денатурирующем полиакриламидном геле (SDS-PAGE) – обычная лабораторная процедура.Однако многие вещества мешают анализу SDS-PAGE. Доступные в продаже продукты помогают ускорить обработку образцов для анализа SDS-PAGE образцов, содержащих мешающие вещества. Многие из них способны быстро удалять широкий спектр соединений, включая высокие концентрации солей, гуанидин, мочевину и неионогенные детергенты. Набор для подготовки проб SDS-PAGE от Thermo Scientific содержит запатентованную смолу, которая связывает белки в присутствии органической фазы. Любые мешающие загрязнения смываются, а белки затем элюируются в буфере, совместимом с анализом белков BCA, что позволяет количественно определить часть обработанного образца.

Удаление детергентов увеличивает разрешение разделения белков. Содержащие детергент, мембранные (m) и растворимые (s) белковые фракции, полученные в результате экстракции с помощью набора Thermo Scientific Mem-PER (номер детали 89826), разделяли с помощью SDS-PAGE с предварительной обработкой SDS-PAGE Sample и без нее. Подготовительный комплект. Изображение представляет собой хемилюминесцентный вестерн-блот субъединицы 4 цитохромоксидазы (ЦОГ 4). Образцы, обработанные набором, удаляют детергент, мешающий электрофорезу, сохраняя при этом относительные уровни белка исходных образцов.


Уокер Дж. М. (2009 г.). Справочник по белковым протоколам. Третье издание. Спрингер-Верлаг Нью-Йорк, ООО.

Асенджо Дж.А., Эндрюс Б.А. (2009) Очистка белков с помощью хроматографии: выбор типа, моделирование и оптимизация рабочих условий. Дж Мол Признать. 22(2):65-76.

Обессоливающие колонны | Цитива

Обессоливание и замена буфера

Обессоливание относится к отделению растворимых макромолекул, таких как белки и нуклеиновые кислоты, от солей и других малых молекул.Замена буфера — это замена буферных систем соответствующими, чтобы обеспечить эффективную последующую обработку или использование в конечном приложении, таком как анализ. На основе методов гель-фильтрационной хроматографии одна и та же смола может использоваться для обеих целей. Замена буфера и обессоление включают восстановление макромолекулярных компонентов образцов в буфере, используемом для уравновешивания матрицы гель-фильтрации перед загрузкой образца.

Общие области применения обессоливания и замены буфера в исследованиях и производстве биологических препаратов включают:

  • Удаление солей из образцов белка
  • Удаление невключенных нуклеотидов или фенола из нуклеиновых кислот
  • Удаление избытка меченых или сшивающих реагентов из конъюгированных белков

Перенос буфера в обессоливающей колонне подготавливает образцы для последующих применений, таких как:

Принципы обессоливания и буферного обмена

Методы замены буфера и обессоливания используют предел исключения и отсечение по молекулярной массе (MWCO) для эффективного разделения молекул.Молекулы меньшего размера, чем MWCO, могут диффундировать в поры смолы, в то время как большие молекулы остаются в пустом объеме обессоливающей колонны.

Хроматографические колонки имеют достаточную длину и объем, что позволяет отделять большие молекулы от солей и малых молекул. Чтобы обеспечить элюирование молекул-мишеней в пустом объеме, заполните обессоливающие колонки смолами, имеющими крошечные поры. Для типичных применений буферной замены и обессоливания требуются смолы с рейтингом MWCO от 5 до 10 кДа.В других приложениях, таких как разделение пептидов, используются смолы с более высокими пределами исключения.

Часто задаваемые вопросы о колоннах обессоливания

Ниже приведены ответы на некоторые часто задаваемые вопросы об обессоливающих колоннах.

Для чего нужны обессоливающие колонны?

Колонки для обессоливания

можно использовать с белками и нуклеиновыми кислотами. Они позволяют быстро и легко очищать биомолекулы от более мелких молекул и солей. В исследовательских лабораториях одноразовые колонки часто используются для небольших объемов проб.Одним из применений является удаление избытка нуклеотидов и ферментов после ферментативной реакции с последующей экстракцией фенолом.

Как вы используете колонну обессоливания?

При использовании обессоливающей колонки вы можете выделить крупную интересующую молекулу в буфере, используемом для предварительного уравновешивания матрицы гель-фильтрации. В исследовательских лабораториях распространены спин-колонки, которые разделяют центрифугированием. Другой вариант — использовать гравитационные колонны, иногда называемые капельными колоннами. Для биофармацевтических приложений обычно используются автоматизированная система хроматографии и соответствующая колонка.

В чем разница между обессоливающим обменом буфера и диализом?

Замена буфера для обессоливания и диализ разделены в зависимости от размера и полезны в аналогичных случаях. Однако гель-фильтрация занимает всего несколько минут и быстрее, чем многочасовые методы диализа. Замена буфера для обессоливания позволяет удалить загрязнители из образцов относительно небольшого объема. Для диализа образец должен быть помещен внутрь трубки или кассеты. Иногда требуется несколько замен буфера в контейнере, в котором находится диализная установка.

Как вращать колонну обессоливания?

Вы можете вращать колонны обессоливания, используя стандартное центрифугирование или микроцентрифугу. Спин-колонки доступны в различных размерах для разных объемов проб.

Что такое гель-фильтрация?

Гель-фильтрация — это метод эксклюзионной хроматографии (SEC), который позволяет разделять компоненты на основе их различий в молекулярном весе или размере.

Как оптимизировать обессоливание белка?

В этой статье предлагаются некоторые советы по обессоливанию белков.

Буфер для подготовки колонок Thermo Scientific MBP для очистки Pierce IgM

Описание

Набор

Thermo Scientific™ Pierce IgM Purification Kit представляет собой простую в использовании аффинную матрицу и буферную систему для очистки IgM из асцитной жидкости мышей; в этом методе используется иммобилизованный маннан-связывающий белок, который связывается с IgM в буферах, входящих в комплект.

Pierce MBP Agarose представляет собой очищенный маннан-связывающий белок (также называемый маннозо-связывающим лектином, MBL), иммобилизованный на 4% гранулированной агарозе.При использовании с оптимизированной буферной системой, основанной на связывании, зависящем от температуры и кальция, эта смола обеспечивает специфическую аффинную очистку мышиных IgM из асцитной жидкости и других концентрированных образцов. Смола и необходимые буферы доступны по отдельности или в комплекте в полном наборе для очистки IgM, содержащем предварительно упакованную 5 мл колонку MBP Agarose.

Особенности:

  • Иммобилизованный MBP – аффинная система на основе маннан-связывающего белка (MBP) позволяет проводить специфическую очистку IgM мыши из асцитной жидкости или частичное выделение IgM человека из сыворотки

  • 0 – Набор для очистки IgM включает предварительно упакованную колонку MBP и готовые к использованию буферы для удобной очистки как минимум 1.5 мг IgM из образцов асцита объемом 0,5 мл на использование колонки

  • Мягкие условия – неденатурирующие, почти нейтральные буферные условия обеспечивают восстановление функциональных антител не менее 10 раз без значительного снижения связывающей способности

Включает:

Набор содержит колонку с агарозой MBP 5 мл, буфер для подготовки колонки, буферы для связывания и элюирования IgM и удлинитель колонки

.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.