Кс133А маркировка: КС133А стекло, Стабилитрон кремниевый малой мощности, СЗТП

Содержание

Стабилитрон КС133А, 2С133А


Стабилитрон КС133А — сплавной, кремниевый, малой мощности. Основное назначение — стабилизация напряжения 3,3 В. Имеет диапазон тока стабилизации от 3 до 80 мА.

2С133А имеет металлостеклянный корпус с гибкими выводами. Тип стабилитрона написан на его корпусе, который является анодом (положительным выводом). Его масса около 1 г.

КС133А имеет стеклянный корпус и гибкие выводы.Тип и полярность (цоколёвка) прибора обозначаются при помощи условной маркировки. Со стороны катода находится кольцевая полоска голубого цвета, а со стороны анода — белого. Масса — около 0,3 г.


Электрические параметры КС133А, 2С133А

Напряжение стабилизации при Iст = 10 мА
При Т = +25°C 2,97…3,63 В
При Т = -60°C 3…4,1 В
При Т = +125°C 2,6.
..3,7 В
Временна´я нестабильность напряжения стабилизации ±1%
Постоянное прямое напряжение при Iпр = 50 мА, не более 1 В
Постоянный обратный ток при Uобр = 0,7 Uст для 2С133А, не более 1 мА
Дифференциальное сопротивление, не более
При Iст = 10 мА и Т = +25°C: 65 Ом
При Iст = 10 мА, Т = -60 и +125°C: 85 Ом
При Iст = 3 мА: 180 Ом

Предельные характеристики стабилитрона КС133А, 2С133А

Минимальный ток стабилизации:
3 мА
Максимальный ток стабилизации:
При Т ≤ +50°C 80 мА
При Т = +125°C 27 мА
Рассеиваемая мощность:
При Т ≤ +50°C 300 мВт
При Т = +125°C 100 мВт
Рабочая температура: -60. ..+125°C

Стабилитрон КС133 — DataSheet

Корпус стабилитрона КС133

Описание

Стабилитроны кремниевые, сплавные, малой мощности. Предназначены для стабилизации номинального напряжения 3,3…6,8 В в диапазоне токов стабилизации 3…81 мА.

2C133A, 2C139A, 2С147А, 2С156А, 2С168А выпускаются в металлостеклянном корпусе с гибкими выводами. Тип прибора приводится на
корпусе; корпус в рабочем режиме служит положительным электродом (анодом). Масса стабилитронов не более 1 г.

КС133А, КС139А, КС147А, KC156A, КС168А выпускаются в стеклянном корпусе с гибкими выводами. Для обозначения типа и полярности стабилитрона используется условная маркировка — голубая кольцевая полоса со стороны катодного вывода и разноцветные кольцевые полосы по сторонам анодного вывода, КС133А — белая, КС139А — зеленая, КС147А —серая, КС156А —оранжевая, KC168A — красная.  Для КС133Г оранжевая кольцевая полоса со стороны катодного вывода, серая метка возле катодного вывода и желтая возле анодного. В режиме стабилизации напряжения полярность включения стабилитрона обратная. Масса стабилитронов не более 0,3 г.

 

Характеристики стабилитрона КС133
Обозначение Значение для: Ед. изм.
КС133А КС133Г КС133Д-1
 Аналог 1N5588B 1N5588B
Uст мин. 2.95 3.1 В
ном. 3.3 3.3
макс.
3.65 3.5
при Iст 10 5 мА
αUст -0.11 0.075 %/°C
δUст ±1.5 %
Uпр  (при Iпр, мА) 1 (50)
180 (3)
В
rст (при Iст, мА) 65 (10) 150 (5) 1400 Ом
Iст мин. 3 1 0.25 мА
макс. 81 37.5 15.2
Pпp 0.3 0.125 0.05 Вт
T -60…+125 -60…+125 -60…+125 °C
  • Uст — Напряжение стабилизации.
  • αUст — Температурный коэффициент напряжения стабилизации.
  • δUст — Временная нестабильность напряжения стабилизации.
  • Uпр — Постоянное прямое напряжение.
  • Iпр — Постоянный прямой ток.
  • rст — Дифференциальное сопротивление стабилитрона.
  • Iст — Ток стабилизации.
  • Pпp — Прямая рассеиваемая мощность.
  • T — Температура окружающей среды.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Стабилитрон КС133А

Количество драгоценных металлов в стабилитроне КС133А согласно документации производителя. Справочник массы и наименований ценных металлов в советских стабилитронах КС133А.

Стабилитрон КС133А количество содержания драгоценных металлов:
Золото: 0,00008 грамм.
Серебро: 0 грамм.
Платина: 0 грамм.
Палладий: 0 грамм.
Согласно данным: .

Справочник содержания ценных металлов из другого источника:
Стабилитрон КС133А 0,00008 0 0 0 троп. Стабилитрон КС133А 0,00008 0 0 0 эксп. Стабилитрон КС133А 0,00014 0 0 0 Из справочника Связь-Инвест

Стабилитроны КС133А теория

Полупроводниковый стабилитрон, или диод Зенера — полупроводниковый диод, работающий при обратном смещении в режиме пробоя. До наступления пробоя через стабилитрон протекают незначительные токи утечки, а его сопротивление весьма высоко. При наступлении пробоя ток через стабилитрон резко возрастает, а его дифференциальное сопротивление падает до величины, составляющей для различных приборов от долей Ома до сотен Ом. Поэтому в режиме пробоя напряжение на стабилитроне поддерживается с заданной точностью в широком диапазоне обратных токов.

 

Прежде всего, не следует забывать, что стабилитрон работает только в цепях постоянного тока. Напряжение на стабилитрон подают в обратной полярности, то есть на анод стабилитрона будет подан минус “-“. При таком включении стабилитрона через него протекает обратный ток (I обр) от выпрямителя. Напряжение с выхода выпрямителя может изменяться, будет изменяться и обратный ток, а напряжение на стабилитроне и на нагрузке останется неизменным, то есть стабильным. На следующем рисунке показана вольт-амперная характеристика стабилитрона.

Основное назначение стабилитронов — стабилизация напряжения. Серийные стабилитроны изготавливаются на напряжения от 1,8 В до 400 В. Интегральные стабилитроны со скрытой структурой на напряжение около 7 В являются самыми точными и стабильными твердотельными источниками опорного напряжения: лучшие их образцы приближаются по совокупности показателей к нормальному элементу Вестона. Особый тип стабилитронов, высоковольтные лавинные диоды («подавители переходных импульсных помех», «суппрессоры», «TVS-диоды») применяется для защиты электроаппаратуры от перенапряжений.

Стабилитроны КС133А Принцип действия

Советские и импортные стабилитроны

Полупроводниковый стабилитрон — это диод, предназначенный для работы в режиме пробоя на обратной ветви вольт-амперной характеристики. В диоде, к которому приложено обратное, или запирающее, напряжение, возможны три механизма пробоя: туннельный пробой, лавинный пробой и пробой вследствие тепловой неустойчивости — разрушительного саморазогрева токами утечки. Тепловой пробой наблюдается в выпрямительных диодах, особенно германиевых, а для кремниевых стабилитронов он не критичен. Стабилитроны проектируются и изготавливаются таким образом, что либо туннельный, либо лавинный пробой, либо оба эти явления вместе возникают задолго до того, как в кристалле диода возникнут предпосылки к тепловому пробою. Серийные стабилитроны изготавливаются из кремния, известны также перспективные разработки стабилитронов из карбида кремния и арсенида галлия.

Первую модель электрического пробоя предложил в 1933 году Кларенс Зенер, в то время работавший в Бристольском университете. Его «Теория электического пробоя в твёрдых диэлектриках» была опубликована летом 1934 года. В 1954 году Кеннет Маккей из Bell Labs установил, что предложеный Зенером туннельный механизм действует только при напряжениях пробоя до примерно 5,5 В, а при бо́льших напряжениях преобладает лавинный механизм. Напряжение пробоя стабилитрона определяется концентрациями акцепторов и доноров и профилем легирования области p-n-перехода. Чем выше концентрации примесей и чем больше их градиент в переходе, тем больше напряжённость электрического поля в области пространственного заряда при равном обратном напряжении, и тем меньше обратное напряжение, при котором возникает пробой:

Туннельный, или зенеровский, пробой возникает в полупроводнике только тогда, когда напряжённость электрического поля в p-n-переходе достигает уровня в 106 В/см. Такие уровни напряжённости возможны только в высоколегированных диодах (структурах p+-n+-типа проводимости) с напряжением пробоя не более шестикратной ширины запрещённой зоны (6 EG ≈ 6,7 В), при этом в диапазоне от 4 EG до 6 EG (4,5…6,7 В) туннельный пробой сосуществует с лавинным, а при напряжении пробоя менее 4 EG (≈4,5 В) полностью вытесняет его. С ростом температуры перехода ширина запрещённой зоны, а вместе с ней и напряжение пробоя, уменьшается: низковольтные стабилитроны с преобладанием туннельного пробоя имеют отрицательный температурный коэффициент напряжения (ТКН).

В диодах с меньшими уровнями легирования, или меньшими градиентами легирующих примесей, и, как следствие, бо́льшими напряжениями пробоя наблюдается лавинный механизм пробоя. Он возникает при концентрациях примесей, примерно соответствующих напряжению пробоя в 4 EG (≈4,5 В), а при напряжениях пробоя выше 4 EG (≈7,2 В) полностью вытесняет туннельный механизм. Напряжение, при котором возникает лавинный пробой, с ростом температуры возрастает, а наибольшая величина ТКН пробоя наблюдается в низколегированных, относительно высоковольтных, переходах.

Механизм пробоя конкретного образца можно определить грубо — по напряжению стабилизации, и точно — по знаку его температурного коэффициента. В «серой зоне» (см. рисунок), в которой конкурируют оба механизма пробоя, ТКН может быть определён только опытным путём. Источники расходятся в точных оценках ширины этой зоны: С. М. Зи указывает «от 4 EG до 6 EG» (4,5…6,7 В), авторы словаря «Электроника» — «от 5 до 7 В»8, Линден Харрисон — «от 3 до 8 В»26, Ирвинг Готтлиб проводит верхнюю границу по уровню 10 В9. Низковольтные лавинные диоды (LVA) на напряжения от 4 до 10 В — исключение из правила: в них действует только лавинный механизм.

Оптимальная совокупность характеристик стабилитрона достигается в середине «серой зоны», при напряжении стабилизации около 6 В. Дело не столько в том, что благодаря взаимной компенсации ТКН туннельного и лавинного механизмов эти стабилитроны относительно термостабильны, а в том, что они имеют наименьший технологический разброс напряжения стабилизации и наименьшее, при прочих равных условиях, дифференциальное сопротивление. Наихудшая совокупность характеристик — высокий уровень шума, большой разброс напряжений стабилизации, высокое дифференциальное сопротивление — свойственна низковольтным стабилитронам на 3,3—4,7 В.


Область применения стабилитрона КС133А

Основная область применения стабилитрона — стабилизация постоянного напряжения источников питания. В простейшей схеме линейного параметрического стабилизатора стабилитрон выступает одновременно и источником опорного напряжения, и силовым регулирующим элементом. В более сложных схемах стабилитрону отводится только функция источника опорного напряжения, а регулирующим элементом служит внешний силовой транзистор.

Прецизионные термокомпенсированные стабилитроны и стабилитроны со скрытой структурой широко применяются в качестве дискретных и интегральных источников опорного напряжения (ИОН), в том числе в наиболее требовательных к стабильности напряжения схемах измерительных аналого-цифровых преобразователей. C середины 1970-х годов и по сей день (2012 год) стабилитроны со скрытой структурой являются наиболее точными и стабильными твердотельными ИОН. Точностные показатели лабораторных эталонов напряжения на специально отобранных интегральных стабилитронах приближаются к показателям нормального элемента Вестона.

Особые импульсные лавинные стабилитроны («подавители переходных импульсных помех», «суппрессоры», «TVS-диоды») применяются для защиты электроаппаратуры от перенапряжений, вызываемых разрядами молний и статического электричества, а также от выбросов напряжения на индуктивных нагрузках. Такие приборы номинальной мощностью 1 Вт выдерживают импульсы тока в десятки и сотни ампер намного лучше, чем «обычные» пятидесятиваттные силовые стабилитроны. Для защиты входов электроизмерительных приборов и затворов полевых транзисторов используются обычные маломощные стабилитроны. В современных «умных» МДП-транзисторах защитные стабилитроны выполняются на одном кристалле с силовым транзистором.

Маркировка стабилитронов КС133А

Маркировка стабилитронов

 

Есть информация о стабилитроне КС133А – высылайте ее нам, мы ее разместим на этом сайте посвященному утилизации, аффинажу и переработке драгоценных и ценных металлов.

Фото Стабилитрон КС133А:

Предназначение Стабилитрон КС133А.

Характеристики Стабилитрон КС133А:

Купить или продать а также цены на Стабилитрон КС133А (стоимость, купить, продать):

Отзыв о стабилитроне КС133А вы можете в комментариях ниже:

Цветовая маркировка Стабилитронов

Стабилитрон Маркировка на катоде Маркировка на аноде
КС133А Голубая кольцевая полоса Белая кольцевая полоса
КС139А То же Зеленая кольцевая полоса
КС147А —//— Серая кольцевая полоса
КС156А Голубая кольцевая полоса Оранжевая кольцевая полоса
КС168А То же Красная кольцевая полоса
2С133Б 2 белые точки
2С139Б 2 черные точки
2С147Б 2 желтые точки
2С156Б 2 зеленые точки
2С168Б 2 голубые точки
2С133В Оранжевая кольцевая полоса
и желтая метка на торце
Желтая метка на торце
То же
2С133Г Оранжевая кольцевая полоса
и серая метка на торце
—//—
2С147В Зеленая кольцевая полоса
и желтая метка на торце
—//—
2С147Г Зеленая кольцевая полоса
и серая метка на торце
—//—
2С156В Красная кольцевая полоса
и желтая метка на торце
—//—
2С156Г Красная кольцевая полоса
и серая метка на торце
—//—
2С175Ж Голубая метка и белая
полоса
—//—
2С182Ж Голубая метка и желтая
полоса
—//—
2С191Ж Голубая метка и голубая
полоса
—//—
2С210Ж Голубая метка и зеленая
полоса
—//—
2С211Ж Голубая метка и синяя
полоса
—//—
2С212Ж Голубая метка и оранжевая
полоса
—//—
2С213Ж Голубая метка и черная
полоса
—//—
2С215Ж Голубая метка и белая
полоса
Черная полоса
2С216Ж Голубая метка и желтая
полоса
Черная полоса
2С218Ж Голубая метка и голубая
полоса
Черная полоса
2С220Ж Голубая метка и зеленая
полоса
Черная полоса
2С222Ж Голубая метка и синяя
полоса
Черная полоса
2С224Ж Голубая метка и оранжевая
полоса
Черная полоса

Стабилитронов

КС126А

красное широкое + фиолетовое узкое + белое узкое кольца

КС126Б

оранжевое широкое + чёрное узкое + белое узкое кольца

КС126В

оранжевое широкое + оранжевое узкое + белое узкое кольца

КС126Г

оранжевое широкое + белое узкое + белое узкое кольца

КС126Д

жёлтое широкое + фиолетовое узкое + белое узкое кольца

КС126Е

зелёное широкое + голубое узкое + белое узкое кольца

КС126Ж

голубое широкое + красное узкое + белое узкое кольца

КС126И

голубое широкое + серое узкое + белое узкое кольца

КС126К

фиолетовое широкое + зелёное узкое + белое узкое кольца

КС126Л

серое широкое + красное узкое + белое узкое кольца

КС126М

белое широкое + коричневое узкое + белое узкое кольца

КС126А

черное кольцо

КС126Б

черное кольцо

КС126В

черное кольцо

КС126Г

черное кольцо

КС126Д

черное кольцо

КС126Е

черное кольцо

КС126Ж

черное кольцо

КС126И

черное кольцо

КС126К

черное кольцо

КС126Л

черное кольцо

КС126М

черное кольцо

Предельные эксплуатационные данные

 

Постоянное обратное напряжение при температуре
от — 60 до 100 °С……………………………………………………40В

Средний выпрямленный или прямой ток

при τИМП < 10 мкс и амплитуде импульса 1,5 А, при τИМП > 10 мкс и амплитуде импульса 1 А не более:

при температуре от — 60 до 35 °С………..……………………240 мА

Прямой средний ток при длительности импульса 10 мкс и амплитуде 2А: при 35°С….…………………………………..………160 мА

С133А, 2С139А, 2С147А, 2С156А, 2С168А, КС133А, КС139А, КС147А, КС156А, КС168А

Стабилитроны кремниевые, сплавные, малой мощности. Пред­назначены для стабилизации номинального напряжения 3,3…6,8 В в диапазоне токов стабилизации 3…81 мА.

2С133А, 2С139А, 2С147А, 2С156А, 2С168А выпускаются в металлостеклянном корпусе с гибкими выводами. Тип прибора приводится на корпусе; корпус в рабочем режиме служит по­ложи­тельным электродом (анодом).

Масса стабилитронов не более 1г.

КС133А, КС139А, КС147А, КС156А, КС168А выпускаются в стеклянном корпусе с гибкими выводами. Для обозначения типа и полярности стабилитрона используется условная мар­кировка — голубая кольцевая полоса со стороны катодного вывода и разно­цветные кольцевые полосы по сторонам анод­ного вывода: КС133А — белая, КС139А — зеленая, КС147А — серая, КС156А — оран­жевая, КС 168А — красная. В режиме стабилизации напряжения полярность включения стабилитро­на обратная.

Масса стабилитронов не более 0,3 г.

Электрические параметры

Напряжение стабилизации при IСТ = 10 мА:

Т =+25 °С:

2С133А, КС133А ……………………………………………. 2,97…3,3…3,63 В

2С139А, КС139А ……………………………………………. 3,51…3,9…4,29 В

2С147А, КС147А ……………………………………………. 4,23…4,7…5,17 В

2С156А, КС156А……………………………………………. 5,04…5,б….6,18 В

2С168А, КС168А ……………………………………………. 6,12…6,8…7,48 В

Температурный коэффициент напряжения ста­билизации

при Т= — 60…+ 125 °С:

2С133А, КС133А…………………………………………………… -0,11%/°С…0

2С139А, КС139А ………………………………………………….. -0,10%/°С…0

2С147А, КС 147А……………………………………………. .. -0,09…0,01%/°С

2С156А, КС 156А ……………………………………………………… ±0,05%/Т

2С168А, КС168А ………………………………………………………. ±006%/°С

Временная нестабильность напряжения стаби­лизации

2С133А, 2С139А, 2С147А, 2С156А, 2С168А………………………. ±1%

Время выхода на режим 2С133А, 2С139А, 2С147А, 2С156А, 2С168А:

при измерении UСТ……………………………………………………………………………………….. 5* с

при измерении UСТ точно …………………………………………… 10* мин

Постоянное прямое напряжение при IПР = 50 мА,

не более …………………………………………………………………………………..1В

Постоянный обратный ток при UОБР =0,7∙UСТ

для 2С133А, 2С139А, 2С147А, 2С156А, не более…………………1* мА

Предельные эксплуатационные данные

Минимальный ток стабилизации ………………………………………….3 мА

Максимальный ток стабилизации: при Т < +50 °С:

2С133А,КС133А …………………………………………………………….. 81 мА

2С139А, КС139А ……………………………………………………………. 70 мА

2С147А, КС147А ……………………………………………………………. 58 мА

2С156А, КС156А ……………………………………………………………. 55 мА

2С168А, КС168А ……………………………………………………………. 45 мА

при Т = +125 °С:

2С133А, КС133А ……………………………………………………………. 27 мА

2С139А, КС139А ……………………………………………………………. 23 мА

2С147А, КС147А ……………………………………………………………. 19 мА

2С156А, КС156А ……………………………………………………………. 18 мА

2С168А, КС168А …………………………………………………………… 15 мА

Рассеиваемая мощность:

при Т < +50 °С …………………………………………………………….. 300 мВт

при T = +125 °С …………………………………………………………… 100 мВт

Температура окружающей среды …………………………. — 60…+125 °С

 

С133В, 2С133Г, 2С147В, 2С147Г, 2С156В,


Узнать еще:

РАДИОСВАЛКА: Цветовая маркировка отечественных стабилитронов

ДИОД

МАРКИРОВКА

2С108А белая полоса со стороны анода
2С133А
КС133А
2С133Б
белая полоса со стороны катода и черная полоса со стороны анода
голубая полоса со стороны катода и белая полоса со стороны анода
маркируется двумя белыми точками
2С139А
КС139А
2С139Б
зеленая полоса со стороны катода и черная полоса со стороны анода
зеленая полоса со стороны катода и белая полоса со стороны анода
маркируется двумя черными точками
2С147А
КС147А
2С147Б
черная полоса со стороны анода
серая полоса со стороны катода и белая полоса со стороны анода
маркируется двумя желтыми точками
2С156А
КС156А
2С156Б
оранжевая полоса со стороны катода и черная полоса со стороны анода
оранжевая полоса со стороны катода и белая полоса со стороны анода
маркируется двумя зелеными точками
2С168А
КС168А
2С168Б
красная полоса со стороны катода и черная полоса со стороны анода
красная полоса со стороны катода и белая полоса со стороны анода
маркируется двумя голубыми точками
2С175Ж
КС175Ж
2С175Ц
голубая метка и белая полоса со стороны катода
маркируется серым корпусом и белой полосой со стороны анода
белая полоса со стороны анода и желтая полоса и белая метка со стороны катода
2С182Ж
КС182Ж
2С182Ц
голубая метка и желтая полоса со стороны катода
маркируется серым корпусом и желтой полосой со стороны анода
красная полоса со стороны анода и желтая полоса и белая метка со стороны катода
2С191Ж
КС191Ж
2С191Ц
голубая метка и красная полоса со стороны катода
маркируется серым корпусом и красной полосой со стороны анода
голубая полоса со стороны анода и желтая полоса и белая метка со стороны катода
2С210Ж
КС210Ж
2С210Ц
голубая метка и зеленая полоса со стороны катода
маркируется серым корпусом и зеленой полосой со стороны анода
зеленая полоса со стороны анода и желтая полоса и белая метка со стороны катода
2С211Ж
КС211Ж
КС211Ц
голубая метка и синяя полоса со стороны катода
маркируется серым корпусом и синей полосой со стороны анода
синяя полоса со стороны анода и желтая полоса и белая метка со стороны катода
2С212Ж
КС212Ж
2С212Ц
голубая метка и оранжевая полоса со стороны катода
маркируется серым корпусом и черной полосой со стороны анода
оранжевая полоса со стороны анода и желтая полоса и белая метка со стороны катода
2С213Ж 
КС213Ж
голубая метка и черная полоса со стороны катода
маркируется серым корпусом и голубой полосой со стороны анода
2С215Ж
КС215Ж
голубая метка и белая полоса со стороны катода и черная полоса со стороны анода
маркируется черным корпусом и белой полосой со стороны анода
2С216Ж
КС216Ж
голубая метка и желтая полоса со стороны катода и черная полоса со стороны анода
маркируется черным корпусом и желтой полосой со стороны анода
2С218Ж
КС218Ж
голубая метка и красная полоса со стороны катода и черная полоса со стороны анода
маркируется черным корпусом и красной полосой со стороны анода
2С220Ж
КС220Ж
голубая метка и зеленая полоса со стороны катода и черная полоса со стороны анода
маркируется черным корпусом и зеленой полосой со стороны анода
2С222Ж
КС222Ж
голубая метка и синяя полоса со стороны катода и черная полоса со стороны анода
маркируется черным корпусом и синей полосой со стороны анода
2С224Ж
КС224Ж
голубая метка и оранжевая полоса со стороны катода и черная полоса со стороны анода
маркируется черным корпусом и голубой полосой со стороны анода
КС405А красная полоса со стороны катода и черная полоса со стороны анода
КС406А
КС406Б
серая полоса со стороны катода и белая полоса со стороны анода
белая полоса со стороны катода и оранжевая полоса со стороны анода
КС407А
КС407Б
КС407В
КС407Г
КС407Д
голубая полоса со стороны катода и черная полоса со стороны анода
голубая полоса со стороны катода и оранжевая полоса со стороны анода
голубая полоса со стороны катода и желтая полоса со стороны анода
голубая полоса со стороны катода и зеленая полоса со стороны анода
голубая полоса со стороны катода и серая полоса со стороны анода
2С411А
2С411Б
маркируется широкой черной полосой
маркируется широкой и узкой черными полосами
КС412А серая полоса со стороны катода и голубая полоса со стороны анода
КС413Б зеленая полоса и желтая метка со стороны катода
КС415А красная полоса со стороны анода
КС417А
КС417Б
КС417В
КС417Г
КС417Д
КС417Е
КС417Ж
полосы серого и белого цвета со стороны анода
полосы белого и черного цвета со стороны анода
полосы белого и зеленого цвета со стороны анода
полосы белого и синего цвета со стороны анода
полосы белого и желтого цвета со стороны анода
полосы белого и серого цвета со стороны анода
полосы черного и белого цвета со стороны анода
КС508А
КС508Б
КС508В
КС508Г
КС508Д
оранжевая полоса со стороны катода и зеленая полоса со стороны анода
желтая полоса со стороны катода и белая полоса со стороны анода
красная полоса со стороны катода и белая полоса со стороны анода
голубая полоса со стороны катода и белая полоса со стороны анода
зеленая полоса со стороны катода и белая полоса со стороны анода
КС509А
КС509Б
КС509В
голубая полоса со стороны катода и красная полоса со стороны анода
голубая полоса со стороны катода и желтая полоса со стороны анода
голубая полоса со стороны катода и зеленая полоса со стороны анода
2С516А
2С516Б
2С516Б
маркируется узкой черной полосой
маркируется двумя узкими черными полосами
маркируется тремя узкими черными полосами
КС528А
КС528Б
КС528В
КС528Г
КС528Д
КС528Е
КС528Ж
КС528И
КС528К
КС528Л
КС528М
КС528Н
КС528П
КС528Р
КС528С
КС528Т
КС528У
КС528Ф
КС528Х
КС528Ц
полосы серого и черного цвета со стороны анода 
полосы черного и зеленого цвета со стороны анода
полосы черного и синего цвета со стороны анода
полосы черного и желтого цвета со стороны анода
полосы черного и серого цвета со стороны анода ?
полосы зеленого и белого цвета со стороны анода
полосы зеленого и черного цвета со стороны анода
полосы серого и зеленого цвета со стороны анода
полосы зеленого и синего цвета со стороны анода
полосы зеленого и желтого цвета со стороны анода
полосы зеленого и серого цвета со стороны анода
полосы синего и белого цвета со стороны анода
полосы синего и черного цвета со стороны анода
полосы синего и зеленого цвета со стороны анода ?
полосы серого и синего цвета со стороны анода
полосы синего и желтого цвета со стороны анода
полосы синего и серого цвета ?
полосы желтого и белого цвета со стороны анода
полосы желтого и черного цвета со стороны анода ?
полосы желтого и зеленого цвета со стороны анода ?

Дифференциальный вклад Shal и Shaker в токи K + в нейронах грибовидного тела дрозофилы

J Neurosci. 2 марта 2005 г .; 25 (9): 2348–2358.

1 Departamento de Genética del Desarrollo y Fisiología Molecular, Instituto de Biotecnología, Национальный автономный университет Мексики, Куэрнавака, Морелос 62210, Мексика, и 2

0006 Centro de Estudicia 18 июня; Пересмотрено 27 декабря 2004 г .; Принята к печати 20 января 2005 г.

Copyright © 2005 Society for Neuroscience 0270-6474 / 05 / 252348-11.00 / 0Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.

Abstract

Shaker, зависимый от напряжения канал K + , обогащен грибовидными телами (MB), локусом обонятельного обучения у Drosophila . Известно, что мутации в локусе shaker изменяют возбудимость, высвобождение нейромедиаторов, синаптическую пластичность и обонятельное обучение. Однако прямая связь шейкерных каналов с физиологией внутренних нейронов МБ (MBN) не была задокументирована.Мы обнаружили, что транскрипты для shab , shaw , shaker и shal , среди которых только шейкер и Shal, как сообщается, кодируют токи A-типа, присутствуют в MB. Электрофизиологические данные показали, что отсутствие функциональных шейкерных каналов изменяет распределение напряжений полуинактивации ( В, i1 / 2 ) в MBN, указывая на сегрегацию шейкерных каналов только на подмножество (~ 28%) их сомата. В соответствии с этим представлением мы обнаружили, что примерно пятая часть MBN, лишенных функциональных шейкерных каналов, демонстрирует резко замедленное время инактивации выходящего тока и уменьшенные амплитуды пикового тока.Более того, в то время как все MBN были чувствительны к 4-аминопиридину, неспецифическому блокатору тока A-типа, подмножество нейронов (~ 24%) показало небольшую чувствительность к Shal-специфическому токсину. Это подмножество нейронов, отображающих нечувствительные к токсинам внешние токи, имело более деполяризованные значения V i1 / 2 , относящиеся к каналам Shaker. Наши находки предоставляют первые прямые доказательства того, что измененная функция канала Shaker нарушает физиологию MBN у Drosophila . К нашему удивлению, экспериментальные данные также показывают, что шейкер-каналы разделяются на незначительную часть нейрональных соматических клеток МБ (20-30%), и что каналы Shal вносят вклад в соматический ток A-типа в большинстве МБН.

Ключевые слова: обучение, память, грибовидные тела, шейкер, каналы K + , Drosophila

Введение

Обонятельное обучение у Drosophila melanogaster зависит от структурной и физиологической целостности грибовидных тел (МБ) (Роман и Дэвис, 2001). В мозге плодовой мушки МБ представляют собой специфические структуры, состоящие из ~ 2500 внутренних нейронов МБ или клеток Кеньона, которые получают входные данные от обонятельных и других органов чувств и отправляют выходные данные в премоторные области мозга (Stocker, 1994; Ito et al., 1998). Следовательно, МБ подходят для интеграции сенсорного опыта, чтобы вызвать новое поведение в соответствии с предыдущим опытом. Химическая абляция или мутации, которые изменяют структуру МБ, приводят к потере ассоциативного обонятельного обучения (Heisenberg et al., 1985; de Belle and Heisenberg, 1994). Гены, необходимые для ассоциативного обонятельного обучения, преимущественно экспрессируются в MB (Роман и Дэвис, 2001). Хотя важная информация была получена в результате поведенческих и молекулярных исследований обонятельного обучения у Drosophila , физиологические основы этого процесса в мозге мух по существу неизвестны.Доступная информация о физиологических свойствах МБН была получена в основном из исследований либо на остро диссоциированных нейронах, либо в первичной культуре (Wright and Zhong, 1995; Delgado et al., 1998).

Ранние доказательства того, что ионные каналы имеют отношение к ассоциативному обонятельному обучению у плодовой мушки, были предоставлены Cowan и Siegel (1986), которые обнаружили, что этот процесс недостаточен у мутанта shaker . Шейкер ген кодирует зависимые от напряжения K + -селективные каналы (VDKC), которые посредством альтернативного сплайсинга вызывают либо быстро инактивирующие токи A-типа, либо неинактивирующие токи, оба из которых блокируются 4-аминопиридином ( 4-AP) (Iverson et al., 1988; Timpe et al., 1988; Айверсон и Руди, 1990; Stocker et al., 1990). Иммуногистохимические исследования показали, что шейкер-каналы преимущественно экспрессируются в нейропиле MB (Schwarz et al., 1990; Rogero et al., 1997), предполагая, что они играют важную роль в физиологии MB. Каналы встряхивания важны для реполяризации мембраны, а отсутствие функции встряхивания влияет на возбудимость, высвобождение нейромедиаторов и синаптическую пластичность (Jan et al., 1977; Tanouye et al., 1981; Delgado et al., 1994).

Хотя доступная информация подтверждает роль Shaker в функции MB, у нас отсутствуют прямые доказательства, документирующие физиологические корреляты с дефектом shaker в MBNs Drosophila . Здесь мы воспользовались преимуществом линии мухи-энхансера-детектора, экспрессирующей зеленый флуоресцентный белок (GFP) в МБ Drosophila , и объединили обратную транскриптазу (RT) -PCR, записи патч-кламп, а также генетические и фармакологические исследования для определения идентичности. VDKC, работающих в MB, и для оценки вклада шейкерных каналов в проводимость A-типа.Полученные результаты показывают следующее: (1) MB экспрессируют четыре гена, кодирующие VDKC, среди которых только shaker и shal кодируют токи A-типа; (2) каналы Shal вносят основной вклад в соматический ток A-типа в МБ; (3) шейкер-каналы проводят ток A-типа в ~ 25% диссоциированных МБН; и (4) отсутствие функциональных каналов встряхивания значительно изменяет профиль тока K + для целых клеток шейкера , экспрессирующего MBN.

Материалы и методы

Мухи. Трансгенный штамм 7A2-Gal4 был получен с использованием стандартных процедур переноса гена Drosophila (Rubin and Spradling, 1983; Pirrotta, 1988). Конструкция 7A2 была создана путем клонирования фрагмента размером 10 т.п.н., который включает сайт инициации транскрипции гена бесплодия ( fru ), в вектор pPTGAL (Sharma et al., 2002). Этот фрагмент фланкирован сайтами Sal I и был клонирован в сайт Bam HI pPTGAL, который стал совместимым после реакции заполнения 2 п.н. (подробную карту конструкции см. В дополнительных материалах на сайте www.jneurosci.org). Характер экспрессии наблюдали после скрещивания полученных трансгенных линий мух с вышестоящими линиями трансгенных мух с активирующей последовательностью (UAS) -GFP, и 7A2 был выбран из-за его способности управлять обогащенной экспрессией Gal4 в MB на нескольких стадиях развития (). Экспрессия 7A2 не коррелировала с эндогенной экспрессией fru . Для дополнительных экспериментов блуждающие личинки-самцы третьей стадии были получены от скрещивания самцов гомозиготной линии 7A2-Gal4 и самок, гомозиготных по трансгену UAS-GFP во второй хромосоме ( w 1118 ; p [ w (+ mC) = UAS-EGFP] 5a.2; Блумингтонский фондовый центр, Блумингтон, Индиана). Дополнительная информация о линиях, использованных в этом исследовании, представлена ​​в дополнительном материале (доступном на сайте www.jneurosci.org). Для мутантного генотипа shaker вставка GFP на второй хромосоме была перенесена на фон sh KS133 , а самки sh KS133 ; UAS-GFP были использованы для спаривания. sh KS133 представляет собой антиморфный аллель, в котором замена валина на остаток аспартата в фильтре селективности дает непроводящий белок (Lichtinghagen et al., 1990) (см.).

нейронов GFP + в линии 7A2-Gal4 / UAS-GFP идентифицируют MBN in vivo, и in vitro. A , Взрослый мозг препарировали в PBS, фиксировали в 4% параформальдегиде и слегка выравнивали покровным стеклом. Слева показано светлопольное изображение всей оправы, а справа — конфокальная проекция максимальной интенсивности того же препарата. Головной мозг ориентирован передней стороной вверх и дорсальной вверху. B , Личиночный мозг обрабатывали так же, как и мозг взрослого человека, и устанавливали его брюшным ганглием вниз. Слева — светлопольное изображение, справа — конфокальная проекция. Масштабирование такое же, как в A . На вставке — больший увеличенный вид мозга личинки. Окрашивали две доли, выступающие дорсально (стрелки) и две медиально выступающие доли (наконечники стрелок). Также отмечены нейроны в par intercerebralis (звездочкой). C , В остро диссоциированном мозге личинок MBN идентифицируются как маленькие нейроны GFP + (стрелка). Изображение слева представляет собой вид в светлом поле диссоциированного мозга 7A2-Gal4 / UAS-GFP в течение 12 часов после посева. Изображение справа показывает то же поле при эпифлуоресцентном освещении и просматривается через фильтры FITC.

Shal доминирует, инактивируя исходящий ток K + в MBN Drosophila . A , K + токи, зарегистрированные от вентрального латерального продольного волокна 6 сегментов A2 и A3 блуждающих личинок третьей возрастной стадии wt или sh KS133 , вызванные протоколом напряжения, показанным ниже.Приращение напряжения составляло 10 мВ. Каждая кривая представляет средние токи от шести разных мышц в четырех разных препаратах (для wt ) или средние токи от 18 различных мышц от 11 разных личинок (для sh KS133 ). sh KS133 в мышцах отсутствует заметный инактивирующий внешний ток, создаваемый шейкерными каналами. B , Верхние кривые представляют собой типичные контрольные выходящие токи, зарегистрированные от остро диссоциированных MBN wt , вызванные протоколом напряжения, показанным ниже.Приращение напряжения составляло 10 мВ. Удерживающий потенциал составлял -70 мВ. Деполяризующим импульсам предшествовал предымпульс длительностью 1 с до -100 мВ. На нижнем графике показаны графики среднего значения I-V (нормализованные по емкости ячейки) пикового тока (•), неинактивирующего тока, зарегистрированного после 80 мс начала деполяризации (), и пикового тока, когда внутренний KCl был заменен эквимолярным CsCl (○). Дополнительные сведения о решениях для записи см. В разделе «Материалы и методы». Каждая точка представляет собой среднее значение 17 нейронов (для записей KCl) или восьми нейронов (для записей CsCl).На вставке показаны средние текущие следы восьми последовательных нейронов, зарегистрированных с помощью KCl или CsCl в пипетке. Значения калибровки указаны вверху. C , Верхние следы представляют собой типичные выходящие токи, зарегистрированные от остро диссоциированных sh KS133 MBN, вызванные тем же протоколом напряжения, что и в B . Калибровочные значения имеют те же размеры, что и в B . На нижнем графике показана средняя пиковая плотность тока, из которой вычтена устойчивая составляющая, из 33 wt и 33 sh KS133 нейронов.Значения составляют 624 ± 67 и 533 ± 56 пА / пФ соответственно.

Анализ RT-PCR. От 15 до 18 головного мозга личинок препарировали в PBS и удаляли вентральные ганглии и имагинальные диски. Нейрональная ткань была рассредоточена согласно исследованию Wu et al. (1983). Доли головного мозга инкубировали в течение 25 мин в 1 мл PBS, содержащего трипсин (0,0125%, тип III; Sigma, Сент-Луис, Миссури) при 37 ° C. После двух промывок в среде Schneider Drosophila (Invitrogen, Carlsbad, CA) с добавлением 20% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки (Invitrogen) и 50 мкг / мл гентамицина (Invitrogen) ткань ресуспендировали в 180 мкл модифицированного Drosophila определенная среда (DDM) (O’Dowd, 1995).Трипсинизированная ткань пропускалась 50 раз через кончик скошенной пипетки. После достижения диссоциации клеток суспензию помещали на многолуночное предметное стекло и проверяли на наличие кластеров клеток GFP + (см.). От четырех до пяти кластеров помещали в пипетку с пластырем со сломанным концом (см.), Помещали в пробирку Eppendorf (Eppendorf Scientific, Westbury, NY) и обрабатывали для синтеза кДНК с использованием набора Cell-to-cDNA (Ambion, Austin, TX) согласно инструкции производителя. Всего 2 мкл раствора кДНК использовали в качестве матрицы для каждой ПЦР.Праймеры 5′-GCCGAAGAGGAGGATA-3 ‘и 5′-CTGGCAAATATGGACAAC-3’ использовали для амплификации области 535 п.н., общей для всех известных альтернативных транскриптов гена shaker . Праймеры 5′-AAGCACGAATGCCTCACC-3 ‘и 5′-GAAGACAAGGAAGCCCAGTT-3’ были сконструированы для амплификации фрагмента 666 п.н. транскриптов shal . Праймеры 5′-GCAGCATTGTCTCCTTCCATC-3 ‘и 5′-TCTCCATCACGCCTCCCTC-3’ использовали для амплификации области длиной 651 п.н. длинной изоформы shab и области 560 п.н. короткой изоформы.Праймеры 5′-GACTATTGGCGTGGTTTCGG-3 ‘и 5′-GAAGTCGTTGTGCGGATTGG-3’ использовали для амплификации транскриптов shaw (562 п.н.). Повторно амплифицировали всего 2 мкл каждой ПЦР, снижая температуру отжига на 5 ° C. Продукты ПЦР очищали и секвенировали для проверки их молекулярной идентичности. Отрицательные контроли обрабатывались одинаково, но обратная транскриптаза не включалась в реакцию RT. В этих условиях продуктов ПЦР не наблюдалось.

Грибные тельца экспрессируют транскрипты для каналов shaker, shal, shab и shaw .Кластеры клеток GFP +, полученные из МБ, извлеченных в результате распространения личиночного мозга, использовали для получения кДНК. Один из этих кластеров показан до ( A ) и после ( B ), когда он был помещен в пипетку со сломанным наконечником. В левом столбце показаны изображения в ярком поле, а в правом столбце показаны те же поля при эпифлуоресцентном освещении и просматриваемые через фильтры FITC. C , кДНК, полученную из четырех-пяти кластеров клеток GFP +, подвергали двойному циклу ПЦР, и ожидаемые продукты были разделены в 1.5% -ный гель -агароза, окрашенный бромистым этидием. M — маркер молекулярной массы в п.н. Интенсивность полос в геле не является количественной.

Экспрессия рекомбинантных каналов Shal дрозофилы. Стадия VI Xenopus ооциты получали, как описано ранее (Espinosa et al., 1999). МРНК Shal была синтезирована in vitro из клона dshal 2 (подарок Л. Салкоффа, Вашингтонский университет, Сент-Луис, Миссури) и инъецирована (50 нл) в ооциты в концентрации ∼ 1 нг / нл.Ооциты инкубировали при 18 ° C в течение 6 дней в ND-96 (в мм: NaCl 96, 2 KCl, 1,8 CaCl 2 , 1 MgCl 2 , 5 пируват натрия, 5 HEPES, pH 7,6) солевом растворе, содержащем 50 мкг / мл гентамицина перед электрофизиологическим исследованием. Токи регистрировали в ND-96 при ~ 20 ° C с помощью двухэлектродного усилителя фиксации напряжения (GeneClamp 500B; Axon Instruments, Юнион-Сити, Калифорния). Электроды имели сопротивление 0,4-0,9 МОм при заполнении 3 м KCl. Токи утечки вычитали с использованием протокола P / 4, данные фильтровали на частоте 1 кГц и собирали на частоте 5 кГц.

Записи мышц личинки. Вентрально-латеральное продольное волокно 6 сегментов А2 и А3 блуждающих личинок третьего возраста использовалось во всех экспериментах (Bate, 1993). Личиночный препарат был идентичен описанному ранее (Ян, Январь, 1976). Личинок вскрывали и держали в гемолимфоподобном 3 физиологическом растворе (Stewart et al., 1994) до электрофизиологического исследования. Этот раствор был разработан для повышения морфологической и физиологической стабильности мышц Drosophila при комнатной температуре.К + токи личиночных мышц регистрировали с использованием метода двухэлектродного фиксирования напряжения при удерживающем потенциале -65 мВ. Чтобы устранить входящие токи Ca 2+ , а также внешние токи, зависимые от Ca 2+ , во время экспериментов солевой раствор, не содержащий Ca 2+ , омывал мышцы. Этот раствор содержал следующее (в мм): 130 NaCl, 5 KCl, 18 MgCl 2 , 36 сахароза, 0,5 EGTA, 5 HEPES, pH 7,2. Высокая концентрация Mg 2+ использовалась для обхода проблем, связанных с изменением потенциала поверхности мышц и увеличением утечки через мембрану, вызванной раствором, не содержащим Ca 2+ (Wu and Haugland, 1985).Токи фильтровались на 2 кГц и оцифровывались на 10 кГц. Использовали усилитель с фиксацией напряжения Warner OC-725 (Warner Instruments, Hamden, CT) или Dagan CA-1 (Dagan, Minneapolis, MN). Линейные компоненты вызванных токов были вычтены в оперативном режиме с использованием протокола P / 4. Электроды заполняли 3 м KCl. Сопротивления наконечников электродов напряжения и тока находились в диапазоне 10-20 МОм и 5-10 МОм соответственно.

МБ нейрональный препарат для электрофизиологических записей. Диссоциированные нейроны личинок были получены обработкой головного мозга личинок точно так, как описано выше (анализ ОТ-ПЦР), за исключением того, что диссоциированные клетки помещали на два 12-миллиметровых покровных стекла (Bellco Glass, Vineland, NJ), расположенные в чашке Петри, и оставляли для них. отстояться в течение 1 ч, прежде чем заливать чашку 2 мл DDM. Перед электрофизиологическим исследованием клетки выдерживали при 23-24 ° C в течение 2-24 ч. MBN были идентифицированы на покровном стекле как мелкие клетки GFP + (). Подсчет не менее 10 случайных полей в пяти независимых культурах дал в среднем 4.6 ± 0,6% GFP + MBN, что сопоставимо с предыдущими оценками, полученными в независимых исследованиях, проведенных с различными трансгенными линиями, экспрессирующими репортерный ген в МБ (Wright and Zhong, 1995; Delgado et al., 1998; Su and O’Dowd, 2003) и с долей МБН в ЦНС (Ito et al., 1998). Визуальный осмотр 183 клеток GFP + с разрешением 1 мкм показал модальный размер 5 мкм. Емкость ячейки составляла в среднем 0,42 ± 0,01 пФ ( n = 116). Предполагая сферическую форму и удельную емкость ячейки 1 мкФ / см 2 , средняя емкость ячейки соответствует диаметру 3.6 мкм. Обе оценки хорошо согласуются с документально подтвержденным размером Drosophila, MBNs, in vivo, (3,9 мкм) (Wang et al., 2001).

Электрофизиологические записи нейронов. Покровное стекло, содержащее клетки, помещали в записывающую камеру, установленную на инвертированном микроскопе, снабженном эпифлуоресценцией, и в камеру заливали внешний солевой раствор, состоящий из следующего (в мм): 140 NaCl, 3 KCl, 1 CaCl 2 , 4 MgCl 2 , 5 HEPES, pH 7.2, с NaOH (осмолярность 290-292). Эксперименты проводились при комнатной температуре (22-25 ° C). Патч-пипетки были отполированы и заполнены внутренним раствором, состоящим из следующего (в мм): 140 KCl, 2 MgCl 2 , 0,1 CaCl 2 , 1,1 EGTA, 10 HEPES, pH 7,2, с КОН (осмолярность 288 -290; сопротивления 4-7 МОм). Чтобы заблокировать VDKC, в ​​некоторых экспериментах KCl в пипеточном растворе заменяли на эквимолярную концентрацию CsCl, и в таких случаях pH доводили до pH 7.2 с CsOH. Потенциалы перехода были устранены непосредственно перед установлением высокопрочного уплотнения, а емкость пипетки была компенсирована до достижения конфигурации цельной ячейки. Во время сеанса записи клетки поддерживали при удерживающем потенциале -70 мВ. Емкость ячейки определяли путем интегрирования среднего тока, вызванного пятью последовательными гиперполяризационными импульсами 5 мВ. Компенсация последовательного сопротивления использовалась при 60-70%. Эксперименты, в которых входное сопротивление было <1.0 ГОм или последовательное сопротивление более 30 МОм отбрасывались. Таким образом, ошибка фиксации при регистрации наибольших полученных токов (∼780 пА) составила <3,3 мВ. 4-AP был приобретен у Sigma, разбавлен до соответствующей концентрации в физиологическом растворе для наружного применения и перелит в записывающую камеру. Фриксотоксин-2 (PaTx2; Alomone Labs, Иерусалим, Израиль) хранили замороженным в течение <2 месяцев в виде 10-кратных исходных аликвот и размораживали непосредственно перед использованием. После разведения в соответствующем регистрирующем растворе токсин наносили в ванну на камеру для записи мышц или ооцитов или вводили под давлением (~ 10 фунтов на квадратный дюйм) непосредственно в сому зажатого нейрона.PaTx2 доставляли из пипетки диаметром ~ 5 мкм, подключенной к Picospritzer II (General Valve Corporation, Fair-field, NJ), расположенной ~ 20 мкм от целевого нейрона. Учитывался только визуально подтвержденный выброс токсина.

Сбор и анализ данных. Клетки фиксировали по напряжению с помощью усилителя Axopatch 200 (Axon Instruments). За исключением емкостных токов, которые фильтровались с частотой 10 кГц и оцифровывались с частотой 100 кГц, сигналы фильтровались нижними частотами с частотой 5 кГц, а интервал дискретизации был установлен на 40 мкс / точку.Точки данных были получены и дополнительно проанализированы с помощью программного обеспечения pClamp6. Входное сопротивление оценивалось перед каждой парадигмой напряжения с использованием шага гиперполяризующего напряжения 30 мВ от удерживающего потенциала. Затем рассчитанное входное сопротивление использовалось для линейного вычитания утечек из всех записей. Если не указано иное, мембрану выдерживали при -100 мВ в течение 1 с перед любым протоколом напряжения, чтобы удалить инактивацию из инактивирующих компонентов тока.

Данные стационарной инактивации были получены с протоколом предымпульса длительностью 1 с в диапазоне от -100 до -20 мВ с шагом 5 или 10 мВ.Ток, оставшийся после предымпульса, вызывал скачком до +40 мВ. Пиковый ток был нанесен на график как функция предымпульсного потенциала ( В, , , p ), и полученные точки были подогнаны к единому распределению Больцмана. Чтобы избежать изменений рабочего диапазона напряжения VDKC, вызванных конфигурацией целых клеток (Baker and Salkoff, 1990; Hardie, 1991), все представленные здесь стационарные данные были получены в течение 2 минут после установления записи для всей клетки. режим.

В нашем анализе постоянных времени инактивации фаза затухания тока, вызванного деполяризующим импульсом длительностью 80 мс, до +40 мВ была подобрана к сумме экспоненциальных членов плюс базовая линия.Оптимальное количество коэффициентов было определено с достоверностью 99,9% согласно теории вложенных моделей (Horn, 1987).

Данные представлены как среднее ± SEM, если не указано иное. Различия считались статистически значимыми, когда p <0,05.

Результаты

Анализ RT-PCR зависимых от напряжения каналов K

+ в грибовидных телах

Ток, подобный шейкеру, был постулирован как главный компонент тока A-типа в MBN медоносных пчел в первичной культуре ( Pelz et al., 1999). Присутствие токов A-типа очевидно в записях patch-clip от Drosophila, MBNs остро диссоциированных (Wright and Zhong, 1995) и в первичной культуре (Delgado et al., 1998). Однако идентичность ионных каналов, вносящих вклад в ток A-типа MBN Drosophila , не была определена.

Мы провели поиск транскриптов, кодирующих VDKC в МБ, с помощью RT-PCR и обнаружили экспрессию shaker, shal, shab и shaw ().Этот результат предполагает, что либо шейкер , либо shal могут кодировать соматический ток A-типа в MBN. Чтобы решить эту проблему, мы исследовали свойства инактивации выходящих наружу токов K + в этих остро диссоциированных нейронах у контрольных мух wt и мутанта shaker с использованием записи целых клеток.

Свойства токов А-типа в нейронах грибовидного тела

Мутантная линия shaker была получена путем скрещивания гомозиготных самцов w 1118 / y; 7A2-Gal4 с гомозиготными sh KS133- ; UAS Самки GFP.Только потомство мужского пола (обозначенное sh KS133 ) использовалось для электрофизиологических записей и сравнивалось с контрольными мужскими нейронами wt ( w 1118 / год; 7A2-Gal4 / UAS-GFP). Аллель sh KS133 является идеальной моделью для исследования вклада Shaker в токи A-типа, поскольку он кодирует нефункциональный белок, который, хотя и экспрессируется, не может проводить ионы (Lichtinghagen et al., 1990). Мы проверили фенотип наших линий путем регистрации VDKCs в личиночной вентролатеральной мышце 6, где Shaker обеспечивает весь компонент тока A-типа (Wu and Haugland, 1985).в документах, контролирующих мышцы, выражен сильный ток A-типа. Напротив, ток типа А отсутствовал в линии sh KS133 . Затем мы зарегистрировали выходящие токи в остро диссоциированных МБН. Эти клетки были идентифицированы как маленькие (диаметр ~ 5 мкм) клетки GFP + () (дополнительную информацию см. В разделе «Материалы и методы»). Предварительный скрининг таких клеток показал наличие устойчивых инактивирующих исходящих токов во всех 17 протестированных нейронах. Репрезентативная запись показана в.Такие межклеточные токи переносятся ионами K + , поскольку они отсутствовали, когда Cs + заменяли K + во внутреннем растворе (вставка) и полностью блокировались смесью 4-AP (2,5- 10 мМ) и хинидин (100 мкМ) (данные не показаны). В нижней части показаны средние токи, вызываемые деполяризационными импульсами от -60 до +40 мВ с шагом 10 мВ на пике (закрашенные кружки), в конце деполяризующего импульса (перевернутые треугольники) и в экспериментах, в которых K + был заменен на Cs + во внутреннем решении (белые кружки).Относительный вклад неинактивирующего компонента, оставшегося в конце деполяризующего импульса, варьировался от нейрона к нейрону в пределах от 0 до 78 пА при +40 мВ. В среднем он составлял 60 ± 10 пА / пФ при нормировании по емкости ячейки и представлял лишь незначительную часть плотности тока (9%). Поскольку нас интересовало только исследование свойств инактивирующих выходных токов, при дополнительном анализе был вычтен вклад неинактивирующей составляющей выходного тока.Все протестированные МБН не имели внутренних токов. Это было подтверждено в исследованиях, в которых Cs + заменил внутренний K + , условие, которое должно увеличить выраженность входящих токов Na + — и Ca 2+ (вставка). Сходные результаты были получены Wright and Zhong (1995) и Delgado et al. (1998). Следовательно, все записи выходящих токов, переносимых K + , проводились в отсутствие блокаторов каналов Na + — или Ca 2+ .

При +40 мВ, wt исходящие токи, нормированные на емкость ячейки, в среднем составили 624 ± 67 пА / пФ ( n = 33) (, внизу). Подобно результатам, полученным в другой трансгенной линии, экспрессирующей lacZ в MBN (Wright and Zhong, 1995), диапазон пиковой плотности внешнего тока был широким, простираясь от 180 до 1917 пА / пФ.

Когда мы сравнили записи от wt и sh KS133 MBN, мы были удивлены, обнаружив, что генетическое удаление функциональных шейкерных каналов не привело к резкому изменению профиля тока всей клетки или значительному снижению плотность тока.Верхние кривые представляют собой типичные токи целой клетки, полученные от нейрона sh KS133 ; они визуально неотличимы от элемента управления (). На нижнем графике показаны средние значения пиковой плотности тока при +40 мВ, полученные для 33 wt нейронов и 33 sh KS133 нейронов. Shaker Клоны кодируют либо выпрямитель с задержкой (Iverson, Rudy, 1990; Stocker et al., 1990), либо быстро активирующий и инактивирующий ток (Iverson et al., 1988; Timpe et al., 1988) при экспрессии в ооцитах Xenopus . В эмбриональных нейронах Drosophila , остановленных в делении клеток, неинактивирующие токи приписывались каналам Shaker (Saito et al., 1993). Однако в большинстве клеток Drosophila , включая личиночные мышцы (Wu and Haugland, 1985), куколочные нейроны (Baker and Salkoff, 1990) и кукольные фоторецепторы (Hardie, 1991), были описаны токи Shaker A-типа. Поскольку неинактивирующий ток, зарегистрированный из MBN, оставался в присутствии блокирующего шейкер 4-AP (см. Ниже), мы пришли к выводу, что любые эффекты мутации в локусе shaker будут в основном влиять на пиковый ток.Однако пиковая плотность выходящего тока уменьшилась всего на 15% в sh KS133 по сравнению с wt , а разница амплитуд тока не была значимой при p <0,05 ( sh KS133 , 533 ± 56 пА / пФ; wt , 624 ± 67 пА / пФ; односторонний тест Стьюдента t ). Этот результат, по-видимому, указывает на то, что Shaker вносит лишь незначительный вклад в соматические токи A-типа в MBNs у Drosophila . Альтернативно, возможно, что соматические шейкер-каналы могут быть разделены на подмножество этих нейронов.В дополнительной работе мы провели фармакологические и биофизические исследования, чтобы различить эти две альтернативы.

Сравнение блокады токов A-типа специфическим токсином Shal и блокатором тока A-типа 4-AP

В самой экономной схеме, если шейкер не проводит соматический ток A-типа в Drosophila MBNs, Shal делает. Чтобы подтвердить эту гипотезу, мы проанализировали блокирующий эффект Shal-специфического токсина PaTx2 (Alomone Labs) на весь клеточный ток wt MBN.PaTx2 специфически блокирует VDKC млекопитающих Kv4.2 и Kv4.3 (Diochot et al., 1999) со значением IC 50 650 нм (технический лист Alomone Labs). Каналы Kv4.2 и Kv4.3 гомологичны гену shal Drosophila и дают ток A-типа в гетерологичных системах (Diochot et al., 1999). Хотя документально подтверждено, что PaTx2 не блокирует shaker -подобных каналов млекопитающих, экспрессируемых в ооцитах Xenopus (Diochot et al., 1999), токсин не был протестирован на каналах Drosophila Shal или Shaker.Поэтому мы решили проанализировать блокаду PaTx2 на рекомбинантных каналах Drosophila Shal (dShal), экспрессируемых в ооцитах Xenopus и каналах Drosophila Shaker, зарегистрированных в личиночных мышцах. Верхние кривые показывают рекомбинантный ток dShal K + , экспрессируемый в ооцитах Xenopus до и после воздействия 1 мкм PaTx2. Средняя блокада составила 70 ± 2% ( n = 4) (). На нижних графиках показан ток Shaker A-типа, записанный от личиночных мышц при том же потенциале.В этом случае ясно, что PaTx2 не повлиял на амплитуду переходного тока ().

A-тип K + токи MBN по-разному чувствительны к Shal-специфическому токсину. Специфичность PaTx2 тестировалась на рекомбинантных каналах dShal, экспрессируемых в ооцитах Xenopus , и в токах шейкер, регистрируемых в вентрально-латеральных продольных мышцах личинок третьего возраста. A , Наложенный контроль и токи, подвергнутые воздействию PaTx2, зарегистрированы из ооцитов, экспрессирующих Shal (вверху) и мышечных волокон (внизу).PaTx2 (1 мкм) удалял значительную часть токов dShal, но не блокировал в значительной степени каналы мышечного шейкера. B , Наложенные следы токов K + до и после воздействия 1 мкм PaTx2, записанные с двух разных MBN. В чувствительной к токсину клетке (верхние линии) заблокированный компонент представляет собой быстро активирующийся и быстро дезактивирующий ток. Зарегистрированный внизу нейрон был практически нечувствителен к токсину. Значения калибровки имеют те же размеры, что и на верхних графиках. C , Сводка результатов, описанных в A ( n = 4, как для рекомбинантного dShal, так и для каналов мышечного шейкера) и B ( n = 41). На вставке показан процент блокирования 1 мкм PaTx2 пикового тока, зарегистрированного в диссоциированных MBN, как функция времени после нанесения покрытия (в часах). Линия указывает самую низкую блокаду, достигаемую 4-AP. D , На верхнем графике показаны наложенные следы тока K + , записанные с MBN до и после воздействия 2.5 мм 4-АП, общий блокиратор токов типа А. Калибровочные размеры такие же, как у B . Нижний график показывает эффективность блокады 4-AP и PaTx2 в каждой тестируемой ячейке. Степень блокады 4-AP была довольно равномерной (55 ± 3%), тогда как блокада PaTx2 была шире, сильнее и почти равнялась блокаде 4-AP примерно в двух третях выборки. Хотя каждый MBN экспрессирует примерно одинаковое количество 4-AP-чувствительного внешнего тока, компонент, вносимый Shal, чувствительный к PaTx2, относительно слаб в подмножестве нейронов.

В 76% протестированных сетей MBN PaTx2 блокировал быстро дезактивирующуюся составляющую исходящего тока (верхние кривые). Степень блокады в среднем составляла 45 ± 3% ( n = 41) (), и этот эффект был отменен после вымывания токсина. Вышеупомянутый результат привел нас к выводу, что shal функционально экспрессируется в сомах этих нейронов, где он вносит значительный вклад в ток A-типа. Кроме того, проверка степени блокады выходящих токов с помощью PaTx2 в 41 MBN показала, что не все нейроны были одинаково чувствительны к токсину (сравните верхние и нижние кривые).Фактически, в 10 нейронах токсин практически не влиял на амплитуду пикового тока (внизу). Это наблюдение привело нас к подозрению о наличии подмножества MBN, в которых экспрессия Shal может быть менее заметной или даже отсутствовать. Поэтому мы сравнили степень PaTx2-опосредованной блокады токов A-типа с блокадой, производимой 4-AP, блокатором каналов K + для токов Shaker и Shal (Iverson et al., 1988; Wei et al., 1990). (верхние кривые) показывает типичный пример блокирующего эффекта 4-AP на выходной ток в сетях MBN.Нижний график показывает, что, в отличие от PaTx2, протяженность блока 4-AP была довольно однородной (средний блок, 55 ± 3%; n = 26), показывая, что внешний ток, чувствительный к 4-AP, вносит больший вклад. или менее равномерно по отношению к инактивирующему току в этих ячейках. Более того, в подмножестве PaTx2-чувствительных MBN (31 из 41) степень блокирования 4-AP и PaTx2 была одинаковой (55 ± 3 против 55 ± 2%, соответственно). Таким образом, мы заключаем, что в таких нейронах соматический ток типа A в основном обеспечивается Shal.На этом основании следует, что подмножество нейронов, которые были относительно устойчивы к PaTx2, но в которых ток A-типа блокировался 4-AP, представляет собой подмножество нейронов, в которых в соматическом токе A-типа преобладают Шейкер.

Анализ установившейся инактивации исходящих токов в нейронах грибовидного тела

В дополнительной работе мы проанализировали биофизические свойства исходящих токов в МБН. Сначала мы сосредоточились на установившейся инактивации, которая для простоты была смоделирована с помощью одного распределения Больцмана.Этот анализ на выборке из 46 wt и 37 sh KS133 MBN дал среднее значение напряжения инактивации ( В, i1 / 2 ), которые существенно не различались ( wt , -76,4 ± 4,6 мВ; sh KS133 , -77,0 ± 2,7 мВ; ± SD). Однако мы отметили, что диапазон значений V i1 / 2 в wt был шире (от -83,0 до -66,0 мВ), чем в sh KS133 (-83.От 0 до -71,0 мВ), а тестовое сравнение F ​​ SD двух образцов показало, что при p <0,005 они значительно различались. Более того, стационарные кривые инактивации в wt разделены на две группы: одна со значениями В, i1 / 2 более отрицательными, чем -75 мВ, а другая — со значениями В, i1 / 2 , более положительными, чем — 72 мВ (). Это впечатление усилилось, когда мы проверили частотное распределение данных V, i1 / 2 , сгруппировав нейроны в соответствии с их значениями V i1 / 2 с использованием интервалов 1 мВ ().Как видно, распределение убедительно свидетельствует о том, что образец wt разделяется на две группы: одна с В i1 / 2 ≈ -79 мВ и другая с более деполяризованной В i1 / 2 ≈- 70 мВ. Тест χ 2 показал, что одной функции Гаусса, построенной с использованием экспериментально полученного математического среднего и значений SD, недостаточно для учета распределения измерений V i1 / 2 (, сплошная линия).Напротив, распределение было хорошо подогнано двумя функциями Гаусса (прерывистая линия), давая В i1 / 2 = -78,0 мВ для основного компонента распределения, который составлял 72% выборки, и -70,0 мВ. для второстепенного компонента. Для полноты предлагается распределение данных V i1 / 2 в wt кумулятивно, чтобы дополнительно задокументировать грубое отклонение от нормального распределения. Непрерывная линия, соединяющая экспериментальные данные, была оценена с использованием параметров, полученных в результате подгонки двух гауссовых распределений к данным.

Канал встряхивателя добавляет деполяризованный компонент к току инактивации всей клетки. A , Данные стационарной инактивации для 46 wt нейронов были получены путем измерения пикового тока, вызванного деполяризующим импульсом до +40 мВ (вставка) после кондиционирующих предымпульсов (Vp), указанных на оси x . . Данные были нормализованы по максимальному току, и единичное распределение Больцмана использовалось для соответствия экспериментальным данным. Среднее значение напряжения установившейся инактивации ( В, i1 / 2 ) составило в среднем -76.4 ± 4,6 мВ (± стандартное отклонение). B , Гистограмма, показывающая, что wt, MBN можно разделить на две группы в соответствии с их V, i1 / 2 . Размер бина 1 мВ. Сплошной линией изображена функция Гаусса, построенная с использованием среднего математического и стандартного отклонений, полученных из экспериментальных данных. Пунктирная линия показывает наилучшее соответствие по Гауссу. Оптимизация дала следующие значения: В i1 / 2 = -78,0 мВ для основного компонента (72% выборки) и В i1 / 2 = -70.0 мВ для второстепенного компонента. C , Данные стационарной инактивации от 37 sh KS133 нейронов были получены и проанализированы точно так, как описано выше. В i1 / 2 в среднем -77,0 ± 2,7 мВ (± стандартное отклонение). D , Гистограмма V i1 / 2 для sh KS133 нейронов была построена, как описано выше. Функция Гаусса, описываемая эмпирическим средним значением V i1 / 2 и ее SD, показана сплошной линией. E , Распределение V i1 / 2 в нейронах wt и sh KS133 показано кумулятивным образом. Непрерывные линии — это распределения Больцмана, построенные с параметрами, полученными в результате подгонки гауссовых распределений к данным в формате. В то время как sh KS133 близко соответствует единственному распределению Гаусса, выборка wt сильно отличается. На вставке: значения wt V i1 / 2 (в милливольтах) как функция времени культивирования (в часах).Линия показывает -73 мВ. F ​​ , Чувствительность токов к PaTx2 ( n = 20) и 4-AP ( n = 16) представлена ​​как функция V i1 / 2 . Пунктирной линией обозначена средняя блокада 4-АП (56 ± 3%). Калибровка: A , C , 100 пА, 20 мс.

Разделение нейронов на две популяции не было очевидным в выборке sh KS133 , которая распределялась вокруг среднего значения V i1 / 2 = -77.0 ± 2,7 мВ (). изображает график частотного распределения значений V i1 / 2 в sh KS133 . Линия, соединяющая экспериментальные столбики, представляет собой распределение Гаусса, построенное со средним значением и параметрами SD, полученными из всей выборки, чтобы подтвердить, что аппроксимация дает хорошую оценку свойств совокупности. В, распределение данных V, i1 / 2 в нейронах sh KS133 также представлено в совокупности, чтобы подчеркнуть соответствие нормальному распределению.Обратите внимание, что в sh KS133 распределение достигает 95% кумулятивной инактивации при -73 мВ. Напротив, в wt значительная часть (~ 30%) нейронов имела значения V i1 / 2 более деполяризованные, чем -73 мВ (). Таким образом, анализ данных стационарной инактивации показал присутствие двух популяций нейронов в образце wt : основная (∼72%), показывающая значения V, i1 / 2 примерно -78 мВ и второстепенный, отображающий более деполяризованные значения V i1 / 2 .Это последнее подмножество нейронов отсутствует в sh KS133 . Важно отметить, что процент нейронов, для которых внешние токи инактивированы при более деполяризованных напряжениях (∼28%), аналогичен проценту нейронов, которые отображали нечувствительные к PaTx2 внешние токи (24%) () и предполагались в предыдущем раздел, чтобы представить подмножество, в котором шейкер является основным источником соматического тока A-типа. Таким образом, шейкер вносит устойчивый к PaTx2 ток A-типа, который инактивируется при более деполяризованных напряжениях в подмножестве соматальных нейронов MB у мух wt .

Далее мы исследовали эту гипотезу, проанализировав свойства инактивации в устойчивом состоянии подгрупп MBN, показывающих либо чувствительность, либо устойчивость к PaTx2. Если ток, устойчивый к токсинам, был внесен Shaker, та же подгруппа нейронов, демонстрирующих сопротивление, также должна показывать деполяризованные значения V i1 / 2 . В 20 клетках, показанных на нижней панели, гига-уплотнения сохранялись достаточно долго (> 4 мин) для оценки как инактивации в стационарном состоянии, так и блокады токсином.Пустые кружки на графике показывают, что в 16 из этих нейронов степень блокировки PaTx2 составляла ≥40%, и эти нейроны имели более отрицательное значение на V, i1 / 2 , чем -75 мВ. Четыре нейрона, в которых токсин мало влиял на амплитуду пикового тока, демонстрировали более деполяризованные напряжения полуинактивации. Этот результат хорошо согласуется с идеей о том, что шейкер разделяется на небольшое подмножество нейрональных сомат MB, где он вносит устойчивый к PaTx2 ток A-типа, который инактивируется при более деполяризованных напряжениях.Чтобы завершить аргумент, треугольники на графике в документе указывают на то, что протяженность текущего блока A-типа посредством 4-AP была довольно равномерной в наборе нейронов, которые отображали широкий диапазон значений V i1 / 2 .

Наблюдение, что шейкер разделяется на подмножество диссоциированных MBN у мух wt , также можно объяснить зависящим от времени производством и транспортировкой новых каналов для процессов роста и созревания, поскольку нейроны восстанавливаются после аксотомии, выполненной во время процедуры диссоциации. .В этом случае чувствительность к токсину и инактивация в устойчивом состоянии будут изменяться во время культивирования, а устойчивость к PaTx2 и деполяризованным значениям V i1 / 2 должны отделяться от более старых нейронов. Как видно на вставках к рисункам и, это не так, что делает это альтернативное объяснение маловероятным.

Shaker нейрональные сомы не имеют быстро инактивирующего внешнего тока

Результаты в предыдущих разделах свидетельствуют о том, что клетки в MB экспрессируют транскрипты для четырех типов VDKC, и показывают, что шейкер вносит вклад в соматический ток A-типа только в подмножестве внутренних нейронов.В дополнительных экспериментах мы поставили под сомнение это последнее понятие, проанализировав кинетику инактивации выходящего тока. Внешние токи в MBNs, подвергнутых острой диссоциации (Wright and Zhong, 1995), или в первичной культуре (Delgado et al., 1998), демонстрируют быструю и медленную инактивацию. Каналы Shaker и Shal, зарегистрированные в нейронах личинок (Tsunoda, Salkoff, 1995b) и куколок (Baker and Salkoff, 1990), как известно, кодируют токи A-типа, время инактивации которых составляет менее 15 мс при напряжениях выше +20 мВ. Таким образом, как шейкер, так и Shal могут включать в себя быстро отключающуюся составляющую внешнего тока, наблюдаемую в MBN.Следовательно, если соматические шейкер-каналы разделяются на определенное подмножество нейронов, в которых Shal вносит незначительный вклад или не вносит никакого вклада, те нейроны, происходящие от мутанта sh KS133 , лишенные функциональных шейкерных каналов, должны не иметь быстрого компонента инактивации внешнего тока.

Мы проанализировали инактивацию выходящего тока, используя вложенную модель, чтобы установить минимальное количество экспоненциальных компонентов, которые лучше всего учитывают ход инактивации во времени (Horn, 1987).показаны репрезентативные примеры токов wt и sh KS133 , для которых была проанализирована кинетика инактивации. Улучшение коэффициента корреляции ( r ) при увеличении количества членов в сумме экспонент показано в. Анализ показывает, что для учета инактивации внешнего тока достаточно не более двух экспоненциальных составляющих (). Более того, в 58 из 60 wt нейронов (97%) инактивация выходящего тока лучше объяснялась двумя экспоненциальными компонентами ().В этом большинстве нейронов постоянная времени для быстрого компонента инактивации в среднем составляла 4,6 ± 0,3 мс, а для медленного компонента — 22,0 ± 2,0 мс. Константы времени для каждого отдельного нейрона, для которого кинетика инактивации была подогнана с помощью двух экспонент, отображаются на левой панели. На быстрый компонент приходилось 66% амплитуды пикового тока. В двух нейронах wt , в которых одна экспонента лучше всего соответствовала динамике инактивации, постоянная времени составляла 22.0 и 21,0 мс соответственно.

Шейкер способствует быстрому отключению тока в подмножестве сетей MBN. A , переходные токи K + от четырех различных ячеек wt и четырех разных ячеек sh KS133 показаны с подобранными кривыми, наложенными на кривые тока. Кривые были подобраны с использованием одинарной или двойной экспоненциальной функции плюс базовая линия. Минимальное количество экспоненциальных компонентов, необходимых для учета динамики инактивации выходящего тока, было определено статистически в соответствии с теорией вложенных моделей (см. Материалы и методы).Калибровка: (по всем графикам) 100 пА, 20 мс. B , Улучшение коэффициента корреляции ( r ) показано как функция приращения членов в подогнанных экспоненциальных функциях трасс, показанных в A . Некоторые из нейронов wt и sh KS133 уже хорошо соответствовали одной экспоненциальной (▪, •, □, ○), тогда как другие требовали двух членов (▴, ▾, ▵, ▿). Символы относятся к токам в A . C , Распределение анализируемых нейронов wt ( n = 60) и sh KS133 ( n = 61) в соответствии с количеством экспоненциальных членов для адекватной подгонки. В то время как 97% нейронов wt требовалось две экспоненты для учета кинетики инактивации тока всей клетки, только 80% sh KS133 инактивировались по двойной экспоненте. Разница статистически значима ( p <0.005; χ 2 тест). D , Распределение быстрых и медленных постоянных времени для МБН 58 wt и 49 sh KS133 , кинетика инактивации которых описывалась двумя экспонентами. Квадраты на правой панели показывают распределение 12 нейронов sh KS133 , инактивирующихся вдоль одной экспоненты. E , Левые следы показывают примеры токов sh KS133 K + , инактивирующихся вдоль одинарной (вверху) или двойной (внизу) экспоненты до и после воздействия 1 мкм PaTx2.Только токи, представляющие быстро инактивирующий компонент, были чувствительны к токсину. На правой панели показаны результаты, полученные в 22 нейронах sh KS133 . Только четыре из них (темные кружки) показали одноэкспоненциальный ток и были немного чувствительны к PaTx2.

Образец sh KS133 содержал значительно большее количество нейронов, в которых временной ход инактивации хорошо описывался одной экспонентой (12 из 61; p <0.005; χ 2 тест) (). В этих нейронах постоянная времени инактивации в среднем составляла 19,0 ± 2,0 мс, а диапазон постоянных времени инактивации показан на правой панели. В пределах ошибки это значение равно постоянной времени компонента медленной инактивации в wt (22,0 ± 2,0 мс) и значительно медленнее, чем компонент быстрой инактивации (4,6 ± 0,3 мс) в образце wt ( p < 0,0005, односторонний тест Стьюдента t ). Важно отметить, что плотность пикового тока MBN без быстрого компонента инактивации в sh KS133 (432 ± 82 пА / пФ; n = 12) была ниже среднего пикового тока в wt нейронах (602 ± 46 пА / пФ; n = 60).Эта разница (28%) незначительна ( p = 0,056; односторонний критерий Стьюдента t ). Приведенный выше анализ показывает, что в sh KS133 имеется значительная часть MBN, демонстрирующих одноэкспоненциальную инактивацию, в которой пиковые токи наружу уменьшаются по сравнению с теми, которые демонстрируют двухэкспоненциальную инактивацию, а также пиковыми выходными токами в wt. нейронов из этой области мозга. Эти наблюдения согласуются с гипотезой о том, что шейкер-каналы кодируют быстро инактивирующийся исходящий ток, который отделяет до 20-30% нейрональных соматов MB, в которых он вносит примерно одну треть пиковой плотности тока.Примечательно, что второстепенная подгруппа нейронов sh KS133 , отображающих токи K + , инактивирующиеся по одной экспоненте, была лишь слабо блокирована Shal-специфичным PaTx2 (блокада, <23%) (, левые верхние кривые и темные кружки) , указывая на то, что их ток проходит в основном через другой набор каналов. Это свидетельствует о существовании подмножества MBN, которые выражают несколько (если вообще есть) быстро инактивируемых каналов Shal. У мух wt и эта подгруппа нейронов экспрессирует Shaker в качестве основного соматического компонента тока A-типа.

В том большинстве нейронов (∼76%) из sh KS133 особей, демонстрирующих двойную экспоненциальную инактивацию, постоянная времени для быстрого и медленного компонентов составляла в среднем 5,7 ± 0,5 и 27,0 ± 2,0 мс соответственно, а для быстрого компонент составлял 64% от пиковой плотности тока. Постоянные времени для каждого отдельного нейрона sh KS133 , для которого кинетика инактивации была подогнана с помощью двух экспонент, отображаются на правой панели. В этом подмножестве нейронов sh KS133 плотность пикового тока (595 ± 48 пА / пФ; n = 49) почти равна плотности пикового тока в популяции нейронов wt .Они будут представлять то большинство MBN, в которых Shal несет единоличную ответственность за перенос соматического быстро инактивирующего тока A-типа. В нейронах sh KS133 , демонстрирующих двухэкспоненциальный ток, быстро инактивирующийся ток был удален применением Shal-специфического токсина PaTx2 (нижние левые кривые и перевернутые треугольники) ( n = 18) в количество, сравнимое с PaTx2-чувствительным током wt нейронов ().

Медленно инактивирующий ток может кодироваться Shab

Медленно инактивирующийся ток, который остался после воздействия 4-AP (), напоминает ток, о котором ранее сообщалось в культивируемых нейронах личинок (Solc and Aldrich, 1988), эмбриональных мышечных трубках (Zagotta et al., 1988), личиночные синаптические бутоны типа III (Martinez-Padron, Ferrus, 1997) и фоторецепторы (Hardie, 1991). Этот ток был обозначен как K D и, возможно, кодируется кодом shab (Tsunoda and Salkoff, 1995a, b). Хотя мы не пытались однозначно идентифицировать молекулярную природу резистентного к 4-AP тока в MBN, и он инактивируется быстрее, чем K D , мы считаем, что Shab действительно является его основным источником. Поскольку этот ток устойчив к 4-AP и удаляется хинидином (данные не показаны) и присутствует в генотипе shaker KS133 , маловероятно, что он кодируется Shal или Shaker.Кроме того, хотя транскриптов shaw также были обнаружены в препарате МБ для экспериментов ОТ-ПЦР, маловероятно, что наши записи содержат ток, проводимый Шоу. Каналы Шоу, зарегистрированные в эмбриональных нейронах или экспрессируемые в ооцитах, имеют чрезвычайно низкую чувствительность к напряжению и, по-видимому, функционируют как ток утечки (Wei et al., 1990; Tsunoda and Salkoff, 1995b). Эти токи были бы исключены из нашего анализа, потому что мы линейно вычитали все трассы в соответствии с расчетным входным сопротивлением ячеек.Кроме того, медленно инактивирующийся ток был устойчив к 4-AP (), но нативные и рекомбинантные каналы Шоу очень чувствительны к блокаде 4-AP (Wei et al., 1990; Tsunoda and Salkoff, 1995b).

Обсуждение

Ионные каналы, экспрессируемые в плазматической мембране нейронов, определяют их возбудимость (Hille, 2001). Всего в геноме Drosophila было идентифицировано 145 последовательностей, кодирующих субъединицы α и дополнительных ионных каналов (Littleton and Ganetzky, 2000). Из этого репертуара каждый нейрон экспрессирует набор ионных каналов, которые наделяют его особыми свойствами возбудимости (Mandel, 1992; Serodio and Rudy, 1998; Hille, 2001).

MBN необходимы для обонятельного обучения и сохранения у Drosophila (Roman and Davis, 2001). Хотя выделить МБ Drosophila еще невозможно из-за небольшой области мозга, которую они занимают, трансгенные линии, экспрессирующие β-галактозидазу или GFP, преимущественно во внутренних нейронах, позволили их идентифицировать в дисперсиях всего мозга (Wright and Zhong, 1995). ; Delgado et al., 1998; Su and O’Dowd, 2003). Важно отметить, что экспрессия этих белков, по-видимому, не изменяет свойства токов, до сих пор зарегистрированных в меченых нейронах (Wright and Zhong, 1995; Su and O’Dowd, 2003).Здесь мы использовали меченные GFP MBN, выделенные из мозга личинок, чтобы охарактеризовать их VDKC.

Обонятельное обучение не предназначено для взрослых. Личинки Drosophila способны к обонятельному обучению (Aceves-Piña and Quinn, 1979), что требует целостности MB (Heisenberg et al., 1985). Мутация в гене dunce , экспрессируемая как в нейропиле личинок, так и в нейропиле взрослых особей (Nighorn et al., 1991), нарушает процесс обучения на обеих стадиях (Aceves-Piña and Quinn, 1979). Более того, при надлежащем обучении взрослые мухи могут вспомнить, чему их учили в качестве личинок (Tully et al., 1994), даже несмотря на то, что перестройки аксонов происходят во время метаморфоза (Armstrong et al., 1998; Lee et al., 1999). Среди нескольких молекулярных маркеров MB (Nighorn et al., 1991; Crittenden et al., 1998), общая картина окрашивания Shaker сохраняется в мозге личинок и взрослых особей (Rogero et al., 1997). Некоторые из этих белков участвуют в обонятельном обучении и памяти (Dubnau and Tully, 1998; Roman and Davis, 2001). Таким образом, есть веские основания полагать, что МБ выполняют одни и те же обучающие функции у личинок и у взрослых особей.

Наши результаты показывают, что клетки в MB экспрессируют четыре гена, кодирующие VDKC. Поскольку изолированные кластеры клеток, используемые в ОТ-ПЦР, содержат нейроны и глию, вероятно, в соотношении 10: 1 (Klambt et al., 2001), мы не можем определить, какой тип клеток отвечает за сигнал. Тем не менее, эти данные согласуются с нашими электрофизиологическими результатами и подтверждают следующие выводы: Shal является основным проводником тока соматического A-типа в MBN, соматические шейкер-каналы разделяют до 20-30% диссоциированных MBN и отсутствие функциональных шейкер-каналов. значительно изменяет профиль тока всей клетки этого подмножества нейронов.

В Drosophila , продукте гена shal (Wei et al., 1990; Covarrubias et al., 1991) и нескольких вариантов сплайсинга shaker (Iverson et al., 1988; Timpe et al., al., 1988) продуцируют токи A-типа при экспрессии в ооцитах Xenopus . Shab действует как выпрямитель с задержкой, а Shaw действует как канал утечки (Wei et al., 1990; Covarrubias et al., 1991; Tsunoda and Salkoff, 1995a, b). У позвоночных Kv-канал, образованный только α-субъединицей, который проводит устойчивый ток, может вести себя как канал A-типа, когда с ним связана вспомогательная β-субъединица (Pongs et al., 1999). Однако единственная β-субъединица Drosophila (Littleton and Ganetzky, 2000), Hyperkinetic (Hk), лишена инактивирующего шарикового домена субъединицы β1 позвоночных и неспособна восстановить быструю инактивацию мутантного канала Shaker, в котором отсутствует N-тип. инактивация (Chouinard et al., 1995). Поскольку эксперименты по коэкспрессии Hk с shab и shaw отсутствуют, а инактивирующие варианты сплайсинга для этих генов не описаны, возможность того, что эти α-субъединицы проводят ток A-типа, не может быть исключена, но это кажется маловероятным. .

Поскольку во время электрофизиологического исследования диссоциированные МБН не развивались заметными нейритами (), мы регистрировали в основном каналы, экспрессируемые в мембране клеточного тела. Емкость ячейки составляла в среднем 0,42 ± 0,01 пФ, что соответствует сфере диаметром 3,6 мкм, принимая 1 мкФ / см 2 удельной емкости. Этот размер примерно такой же, как сообщается для нейрональных сомат MB в интактном мозге (3,9 мкм) (Wang et al., 2001). Таким образом, мы исключаем возможность значительного вклада аксонального тока в наши зарегистрированные данные.Мы не исключаем возможности того, что экспрессия ионных каналов в аксонах нейронов МБ может отличаться от той, о которой мы сообщаем здесь. Фактически, шейкер, по-видимому, вносил основной вклад в ток A-типа, зарегистрированный от диссоциированных пчелами MBN, которые развили аксональные и дендритные ветвления (Pelz et al., 1999).

В нашей системе Shal, по-видимому, является основным текущим участником A-типа. Это можно рассматривать как обычную нейронную стратегию, потому что в нескольких экспериментальных моделях (включая Drosophila, эмбриональные, личиночные и куколочные нейроны) каналы Shal лежат в основе соматического тока (Solc et al., 1987; Бейкер и Салкофф, 1990; Цунода и Салкофф, 1995b; Song et al., 1998; Баро и др., 2000). В sh, , , KS133, ячеек, инактивируя исходящие токи, полуинактивируют примерно при -77 мВ. С момента первого описания токи A-типа, активируемые при гиперполяризованном напряжении, были предложены для функциональной роли в определении межспайковых интервалов (Connor and Stevens, 1971). В Drosophila эмбриональных нейронах 4-AP увеличивает частоту возбуждения и сокращает латентный период до появления спайков (Zhao and Wu, 1997).Генетические исследования показали, что эффект 4-AP на паттерн возбуждения нейронов нейронов Drosophila происходит из-за блокады Шала (Tsunoda and Salkoff, 1995b). Таким образом, вероятно, что Shal определяет возможности частотного кодирования MBN.

Три морфологические категории MBNs, ассоциированные с пятью наборами долей, были описаны ранее (Crittenden et al., 1998; Lee et al., 1999). Два типа нейронов разветвляются, давая начало вертикальной и средней доле (α / β и α ′ / β ′ соответственно).Третий тип — медианная доля γ. Наши результаты показывают, что соматические шейкер-каналы функционально экспрессируются в ограниченном подмножестве нейронов, которое составляет ~ 25% нейронов GFP +. Это значение является нижним пределом; возможно, мы пропустили небольшие шейкеры в оставшихся ячейках. Остается установить, представляет ли эта экспрессирующая шейкер подгруппа нейронов один из трех ранее идентифицированных морфологических классов. В экспериментах по гибридизации in situ не удалось идентифицировать какой-либо предпочтительный паттерн экспрессии транскриптов shaker внутри взрослых MBN (Pongs et al., 1988; Tseng-Crank et al., 1991), и они не были обнаружены в мозге личинок, возможно, из-за очень низких уровней экспрессии (Tseng-Crank et al., 1991). Однако сообщалось о дифференциальном распределении среди трех подтипов MBN для других белков, связанных с обучением и памятью мух, включая метаботропные аминовые рецепторы, цАМФ-родственные ферменты и белки адгезии (Crittenden et al., 1998). Различная экспрессия белка в подмножествах MBN, безусловно, подразумевает функциональное разнообразие. В нескольких исследованиях рассматривалась и поддерживалась эта гипотеза путем выборочного изменения или нарушения определенных долей (O’Dell et al., 1995; Зарс и др., 2000; Макгуайр и др., 2001; Паскуаль и Прейт, 2001). Поскольку мутация в локусе shaker нарушает обонятельное кондиционирование (Cowan and Siegel, 1986), ее нейрональная сегрегация может выявить соответствующие цепи для этого поведения.

Экспрессия встряхивателя в подмножестве соматических клеток нейронов МБ оказывает большое влияние на текущие свойства всей клетки. В этом подмножестве нейронов шейкер вносит основной вклад в быстро инактивируемый исходящий ток (τ ≈ 5 мс), сдвигая их инактивацию в стационарном состоянии примерно на +10 мВ.Этот вклад является физиологически значимым, потому что, как указано выше, мутант shaker плохо работал в протоколе обонятельного обучения, основанном на MB (Cowan and Siegel, 1986). Каналы шейкера реполяризуют потенциал действия, а мутации в локусе shaker вызывают нарушение работы нервной системы (Tanouye et al., 1981). Отсутствие шейкерной функции приводило к аномальному высвобождению базального нейромедиатора (Jan et al., 1977) и подавляло развитие синаптической пластичности (Delgado et al., 1994). Это могло быть частью поведенческого фенотипа мутантов shaker . Зарегистрированные здесь шейкер-зависимые токи выделяются, потому что они инактивируют на ~ 30 мВ более отрицательные, чем те, о которых сообщалось в исследованиях экспрессии в мышцах или ооцитах (Wu and Haugland, 1985; Wei et al., 1990). Сходные гиперполяризованные V i1 / 2 сообщаются для соматических шейкерных каналов в фоторецепторах Drosophila (Hardie, 1991). В этих клетках инактивация шейкерных каналов обеспечивает мембрану повышенное усиление, что приводит к усилению отношения сигнал / шум для градиентных сигналов напряжения (Niven et al., 2003). Работа Niven et al. (2003) приводят доказательства того, что отсутствие шейкерных каналов изменяет кодирующие возможности фоторецепторов. Дополнительная работа должна установить, каким образом шейкер помогает формировать электрофизиологические свойства МБН.

Модуляция ионных каналов в контексте обучения и памяти имеет большое значение (Byrne and Kandel, 1996). PKA-зависимое фосфорилирование шейкерных каналов по С-концевой консенсусной последовательности, встречающееся во всех функционально протестированных клонах, индуцирует увеличение скорости инактивации (Drain et al., 1994). Метаболизм цАМФ является центральным для клеточных процессов, которые лежат в основе обучения и памяти у Drosophila (Dubnau and Tully, 1998; Roman and Davis, 2001), и кажется вероятным, что каналы Shaker регулируются этим сигнальным каскадом. Wright и Zhong (1995) сообщили, что подмножество MBN экспрессирует быстро инактивирующий ток, который подавляется проницаемыми аналогами цАМФ. Сравнительный анализ модуляции нейронов wt и shaker должен помочь определить, вносит ли шейкер вклад в этот компонент.

Таким образом, наши результаты приводят к мнению, что, хотя MBN Drosophila экспрессируют более двух типов транскриптов VDKC, каналы Shal и Shaker разделяются на разные соматы нейронов и что, что удивительно, отсутствуют функциональные каналы Shaker, которые изменяют обонятельное обучение. , изменяет электрофизиологический профиль только незначительной подгруппы МБН.

Сноски

Эта работа была поддержана Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologia (CONACYT) и Dirección General de Asuntos del Personal Académico к А.D. and E.R. и Медицинский институт Говарда Хьюза — P.L. Г.Г. является докторантом CONACYT и Dirección General de Estudios de Posgrado. Благодарим Х. Альварадо, А. Саралеги, Р. Эрнандеса и Э. Лопеса за техническую поддержку; L. Salkoff за любезно предоставленные плазмиды, содержащие клон dshal ; F. Tejedor для первоначально использовавшихся шнуров; Р. Феликсу и К. Вуду за комментарии к рукописи; и О. Пантоха за оборудование для регистрации рекомбинантного dShal.

Для корреспонденции А.Дарсон, Departamento de Genética del Desarrollo y Fisiología Molecular, Instituto de Biotecnología, Universidad Nacional Autónoma de México, Avenida Universidad 2001, Cuernavaca, Morelos 62210, México. Эл. Почта: [email protected]

Авторские права © 2005 Общество нейробиологии 0270-6474 / 05 / 252348-11 $ 15.00 / 0

Ссылки

  • Асевес-Пинья Э.О., Куинн WG (1979) Обучение у нормальных и мутантных личинок Drosophila . Наука 206: 93-96. [PubMed] [Google Scholar]
  • Armstrong JD, de Belle JS, Wang Z, Kaiser K (1998) Метаморфоза грибовидных тел: крупномасштабные перестройки нейронных субстратов для ассоциативного обучения и памяти у Drosophila Learn Mem 5: 102-114.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Baker K, Salkoff L (1990) Ген Drosophila Shaker кодирует отличительный ток K + в подмножестве нейронов. Нейрон 4: 129-140. [PubMed] [Google Scholar]
  • Baro DJ, Ayali A, French L, Scholz NL, Labenia J, Lanning CC, Graubard K, Harris-Warrick RM (2000) Молекулярные основы генерации двигательных паттернов: дифференциальное нацеливание shal и шейкер в пилорической моторной системе.J Neurosci 20: 6619-6630. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Bate M (1993) Мезодерма и ее производные. В: Развитие Drosophila melanogaster (Bate M, Martínez Arias A, eds), pp 1013-1090. Плейнвью, штат Нью-Йорк: CHSL.
  • Бирн Дж. Х., Кандел Э. Р. (1996) Пересмотр пресинаптической фасилитации: состояние и временная зависимость. J Neurosci 16: 425-435. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Chouinard SW, Wilson GF, Schlimgen AK, Ganetzky B (1995) Бета-субъединица калиевого канала, связанная с суперсемейством альдокеторедуктазы, кодируется гиперкинетическим локусом дрозофилы .Proc Natl Acad Sci USA 92: 6763-6767. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Connor JA, Stevens CF (1971) Прогнозирование поведения повторяющихся срабатываний на основе данных фиксации напряжения на изолированной соме нейрона. J Physiol (Лондон) 213: 31-53. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Коваррубиас М., Вей А., Салкофф Л. (1991) Шейкер, Шал, Шаб и Шоу выражают независимые текущие системы K + . Нейрон 7: 763-773. [PubMed] [Google Scholar]
  • Cowan TM, Siegel RW (1986) Drosophila Мутации , которые изменяют ионную проводимость, нарушают приобретение и сохранение условной реакции избегания запаха.J Neurogenet 3: 187-201. [PubMed] [Google Scholar]
  • Crittenden JR, Skoulakis EM, Han KA, Kalderon D, Davis RL (1998) Трехчастная структура грибовидного тела, выявленная с помощью антигенных маркеров. Learn Mem 5: 38-51. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • de Belle JS, Heisenberg M (1994) Ассоциативное обучение запаху у Drosophila отменено путем химического удаления грибовидных тел. Наука 263: 692-695. [PubMed] [Google Scholar]
  • Delgado R, Latorre R, Labarca P (1994) Shaker мутанты не обладают пост-тетанической потенциацией на моторных концевых пластинах.Eur J Neurosci 6: 1160-1166. [PubMed] [Google Scholar]
  • Delgado R, Davis R, Bono MR, Latorre R, Labarca P (1998) Внешние токи в нейронах личинок Drosophila : dunce не имеет поддерживаемого компонента внешнего тока, подавляемого с помощью цАМФ. J Neurosci 18: 1399-1407. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Diochot S, Drici MD, Moinier D, Fink M, Lazdunski M (1999) Влияние phrixotoxins на семейство Kv4 калиевых каналов и последствия для роли Ito1 в сердечной деятельности электрогенез.Br J Pharmacol 126: 251-263. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Drain P, Dubin AE, Aldrich RW (1994) Регулирование инактивации канала Shaker K + , блокируемое цАМФ-зависимой протеинкиназой. Нейрон 12: 1097-1109. [PubMed] [Google Scholar]
  • Дубнау Дж., Талли Т. (1998) Открытие гена в Drosophila : новые идеи для обучения и памяти. Анну Рев Neurosci 21: 407-444. [PubMed] [Google Scholar]
  • Espinosa F, Lopez-Gonzalez I, Serrano CJ, Gasque G, de la Vega-Beltran JL, Trevino CL, Darszon A (1999) Блокаторы анионных каналов по-разному влияют на Ca 2+ Т-типа токов сперматогенных клеток мыши, токи альфа 1E, экспрессированные в ооцитах Xenopus , и акросомная реакция сперматозоидов.Дев Жене 25: 103-114. [PubMed] [Google Scholar]
  • Hardie RC (1991) Чувствительные к напряжению калиевые каналы в фоторецепторах Drosophila . J Neurosci 11: 3079-3095. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Гейзенберг М., Борст А., Вагнер С., Байерс Д. (1985) Мутанты грибовидного тела дрозофилы отстают в обонятельном обучении. J Neurogenet 2: 1-30. [PubMed] [Google Scholar]
  • Hille B (2001) Ионные каналы возбудимых мембран, Эд 3. Сандерленд, Массачусетс: Sinauer.
  • Хорн Р. (1987) Статистические методы распознавания моделей. Приложения к кинетике стробирования и проникновению в канал рецептора ацетилхолина. Биофиз J 51: 255-263. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Ito K, Suzuki K, Estes P, Ramaswami M, Yamamoto D, Strausfeld NJ (1998) Организация внешних нейронов и их влияние на функциональные роли грибовидных тел in Drosophila melanogaster Meigen. Learn Mem 5: 52-77. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Iverson LE, Rudy B (1990) Роль дивергентных амино- и карбоксильных доменов в свойствах инактивации калиевых каналов, полученных из гена Shaker Drosophila J Neurosci 10: 2903-2916.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Iverson LE, Tanouye MA, Lester HA, Davidson N, Rudy B (1988) Калиевые каналы A-типа, экспрессируемые с кДНК локуса Shaker . Proc Natl Acad Sci USA 85: 5723-5727. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Jan LY, Jan YN (1976) Свойства личиночного нервно-мышечного соединения в Drosophila melanogaster J Physiol (Лондон) 262: 189-214. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Jan YN, Jan LY, Dennis MJ (1977) Две мутации синаптической передачи в Drosophila Proc R Soc Lond B Biol Sci 198: 87-108.[PubMed] [Google Scholar]
  • Klambt C, Hummel T, Granderath S, Schimmelpfeng K (2001) Развитие глиальных клеток в Drosophila Int J Dev Neurosci 19: 373-378. [PubMed] [Google Scholar]
  • Lee T, Lee A, Luo L (1999) Развитие грибовидных тел Drosophila : последовательное создание трех разных типов нейронов из нейробласта. Разработка 126: 4065-4076. [PubMed] [Google Scholar]
  • Lichtinghagen R, Stocker M, Wittka R, Boheim G, Stuhmer W., Ferrus A, Pongs O (1990) Молекулярные основы измененной возбудимости у мутантов Shaker Drosophila melanogaster EMBO J 9: 4399-4407.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Littleton JT, Ganetzky B (2000) Ионные каналы и синаптическая организация: анализ генома Drosophila . Нейрон 26: 35-43. [PubMed] [Google Scholar]
  • Mandel G (1992) Тканевая экспрессия потенциалочувствительного натриевого канала. J Membr Biol 125: 193-205. [PubMed] [Google Scholar]
  • Martinez-Padron M, Ferrus A (1997) Пресинаптические записи от Drosophila : корреляция макроскопических и одноканальных токов K + .J Neurosci 17: 3412-3424. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • McGuire SE, Le PT, Davis RL (2001) Роль передачи сигналов грибовидного тела Drosophila в обонятельной памяти. Наука 293: 1330-1333. [PubMed] [Google Scholar]
  • Nighorn A, Healy MJ, Davis RL (1991) Циклическая фосфодиэстераза AMP, кодируемая геном Drosophila dunce , сконцентрирована в нейропиле грибовидного тела. Нейрон 6: 455-467. [PubMed] [Google Scholar]
  • Niven JE, Vahasoyrinki M, Kauranen M, Hardie RC, Juusola M, Weckstrom M (2003) Вклад каналов Shaker K + в информационную емкость фоторецепторов Drosophila .Природа 421: 630-634. [PubMed] [Google Scholar]
  • O’Dell KM, Armstrong JD, Yang MY, Kaiser K (1995) Функциональное рассечение грибовидных тел Drosophila путем селективной феминизации генетически определенных субкомпартментов. Нейрон 15: 55-61. [PubMed] [Google Scholar]
  • O’Dowd DK (1995) Управляемые по напряжению токи и возбуждающие свойства эмбриональных нейронов Drosophila , выращенных в среде с определенным химическим составом. J Neurobiol 27: 113-126. [PubMed] [Google Scholar]
  • Pascual A, Preat T (2001) Локализация долговременной памяти в грибовидном теле Drosophila .Наука 294: 1115-1117. [PubMed] [Google Scholar]
  • Pelz C, Jander J, Rosenboom H, Hammer M, Menzel R (1999) I A в клетках Кеньона грибовидного тела медоносных пчел напоминает вибрационные токи: кинетика, модуляция K + и моделирование. J Нейрофизиол 81: 1749-1759. [PubMed] [Google Scholar]
  • Pirrotta V (1988) Векторы для P-опосредованной трансформации в Drosophila Биотехнологии 10: 437-456. [PubMed] [Google Scholar]
  • Pongs O, Kecskemethy N, Muller R, Krah-Jentgens I, Baumann A, Kiltz HH, Canal I, Llamazares S, Ferrus A (1988) Shaker кодирует семейство предполагаемых калиевых каналов белки нервной системы Drosophila EMBO J 7: 1087-1096.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Pongs O, Leicher T., Berger M, Roeper J, Bahring R, Wray D, Giese KP, Silva AJ, Storm JF (1999) Функциональные и молекулярные аспекты напряжения. стробированные K + канальные бета-субъединицы. Энн Нью-Йорк Академия наук 868: 344-355. [PubMed] [Google Scholar]
  • Rogero O, Hammerle B, Tejedor FJ (1997) Разнообразная экспрессия и распределение калиевых каналов Shaker во время развития нервной системы Drosophila . J Neurosci 17: 5108-5118.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Роман Г., Дэвис Р.Л. (2001) Молекулярная биология и анатомия Drosophila обонятельного ассоциативного обучения. BioEssays 23: 571-581. [PubMed] [Google Scholar]
  • Rubin GM, Spradling AC (1983) Векторы для опосредованного P-элемента переноса генов в Drosophila Нуклеиновые кислоты Res 11: 6341-6351. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Saito M, Zhao ML, Wu CF (1993) Нерегулярная активность гигантских нейронов от мутантов Shaker предполагает, что локус Shaker может кодировать не-A-тип K + канальных субъединиц в Drosophila Энн Нью-Йорк Академия наук 707: 392-395.[PubMed] [Google Scholar]
  • Schwarz TL, Papazian DM, Carretto RC, Jan YN, Jan LY (1990) Иммунологическая характеристика компонентов канала K + из локуса Shaker и дифференциальное распределение вариантов сплайсинга в Drosophila Нейрон 4: 119-127. [PubMed] [Google Scholar]
  • Серодио П., Руди Б. (1998) Дифференциальная экспрессия субъединиц канала Kv4 K + , опосредующих подпороговые переходные токи K + (A-тип) в мозге крысы.J Нейрофизиол 79: 1081-1091. [PubMed] [Google Scholar]
  • Sharma Y, Cheung U, Larsen EW, Eberl DF (2002) PPTGAL, удобный вектор P-элемента Gal4 для тестирования экспрессии фрагментов энхансера в Drosophila Бытие 34: 115-118. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Solc CK, Aldrich RW (1988) Управляемые напряжением калиевые каналы в нейронах ЦНС личинок Drosophila J Neurosci 8: 2556-2570. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Solc CK, Zagotta WN, Aldrich RW (1987) Одноканальный и генетический анализ выявил два различных калиевых канала A-типа в Drosophila Наука 236: 1094-1098.[PubMed] [Google Scholar]
  • Song WJ, Tkatch T, Baranauskas G, Ichinohe N, Kitai ST, Surmeier DJ (1998) Активированные соматодендритной деполяризацией калиевые токи в неостриатальных холинергических интернейронах крыс преимущественно относятся к типу A и могут быть приписаны коэкспрессии субъединиц Kv4.2 и Kv4.1. J Neurosci 18: 3124-3137. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Stewart BA, Atwood HL, Renger JJ, Wang J, Wu CF (1994) Повышенная стабильность нервно-мышечных препаратов личинок Drosophila в гемолимфоподобных физиологических растворах.J Comp Physiol [A] 175: 179-191. [PubMed] [Google Scholar]
  • Stocker M, Stuhmer W., Wittka R, Wang X, Muller R, Ferrus A, Pongs O (1990). Транскрипты альтернативного Shaker экспрессируют либо быстро инактивирующие, либо не инактивирующие каналы K + . Proc Natl Acad Sci USA 87: 8903-8907. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Stocker RF (1994) Организация хемосенсорной системы у Drosophila melanogaster : обзор. Клеточная ткань Res 275: 3-26.[PubMed] [Google Scholar]
  • Su H, O’Dowd DK (2003) Быстрые синаптические токи в грибовидных тельцах Drosophila Kenyon опосредуются чувствительными к альфа-бунгаротоксину никотиновыми рецепторами ацетилхолина и чувствительными к пикротоксину рецепторами ГАМК. J Neurosci 23: 9246-9253. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Tanouye MA, Ferrus A, Fujita SC (1981) Аномальный потенциал действия, связанный с локусом комплекса Shaker Drosophila Proc Natl Acad Sci USA 78: 6548-6552.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Timpe LC, Schwarz TL, Tempel BL, Papazian DM, Jan YN, Jan LY (1988) Экспрессия функциональных калиевых каналов из кДНК Shaker в ооцитах Xenopus . Природа 331: 143-145. [PubMed] [Google Scholar]
  • Tseng-Crank J, Pollock JA, Hayashi I., Tanouye MA (1991) Экспрессия генов ионных каналов в Drosophila J Neurogenet 7: 229-239. [PubMed] [Google Scholar]
  • Tsunoda S, Salkoff L (1995a) Главный выпрямитель с задержкой в ​​нейронах и мышцах Drosophila, кодируется Shab.J Neurosci 15: 5209-5221. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Tsunoda S, Salkoff L (1995b) Генетический анализ нейронов дрозофилы : Shal, Shaw и Shab кодируют большинство эмбриональных калиевых потоков. J Neurosci 15: 1741-1754.15. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Tully T, Cambiazo V, Kruse L (1994) Память через метаморфоз у нормальных и мутантных Drosophila J Neurosci 14: 68-74. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Wang Y, Wright NJ, Guo H, Xie Z, Svoboda K, Malinow R, Smith DP, Zhong Y (2001) Генетические манипуляции с распределенной нейронной активностью, вызванной запахом в грибовидном теле Drosophila .Нейрон 29: 267-276. [PubMed] [Google Scholar]
  • Wei A, Covarrubias M, Butler A, Baker K, Pak M, Salkoff L (1990) K + современное разнообразие продуцируется расширенным семейством генов, сохраненным у Drosophila и мыши. Наука 248: 599-603. [PubMed] [Google Scholar]
  • Wright NJ, Zhong Y (1995) Характеристика токов K + и цАМФ-зависимой модуляции в культивируемых нейронах грибовидного тельца Drosophila , идентифицированных по экспрессии lacZ .J Neurosci 15: 1025-1034. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Wu CF, Haugland FN (1985) Анализ напряжения мембранных токов в мышечных волокнах личинок Drosophila : изменение калиевых токов у мутантов Shaker . J Neurosci 5: 2626-2640. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Wu CF, Suzuki N, Poo MM (1983) Диссоциированные нейроны от нормальной и мутантной центральной нервной системы личинок Drosophila в культуре клеток.J Neurosci 3: 1888-1899. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Zagotta WN, Brainard MS, Aldrich RW (1988) Одноканальный анализ четырех различных классов калиевых каналов в мышцах Drosophila . J Neurosci 8: 4765-4779. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
  • Zars T, Fischer M, Schulz R, Heisenberg M (2000) Локализация кратковременной памяти в Drosophila Наука 288: 672-675. [PubMed] [Google Scholar]
  • Zhao ML, Wu CF (1997) Изменения в частотном кодировании и зависимости активности возбудимости в культивируемых нейронах мутантов памяти Drosophila .J Neurosci 17: 2187-2199. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

W7 влияние на I max в WT и Sh KS133 I max (pA / pF)

Context 1

… все эксперименты, токи были записывались на одной и той же ячейке до и после применения препарата. Нанесение 2,5 M W7 на фоторецепторные клетки WT привело к снижению на 62% максимальной плотности тока I K (I max), тогда как воздействие 25 M W7 привело к почти полному ингибированию I K (рис.2 А, С; Таблица 1). Действие W7 наступало через 1-2 мин, и эффект достигал устойчивого состояния в течение 5-7 мин. …

Контекст 2

… начало действия W7 было через 1-2 минуты, а эффект достигал устойчивого состояния в течение 5-7 минут. Сходные результаты были получены, когда I K был переупорядочен изолированно у мутанта Sh K S133, с 55% ингибированием плотности тока I K при 2,5 M W7 и почти полным подавлением I K при воздействии 25 M W7 (Таблица 1). Нормализованная проводимость активации указывает на небольшой отрицательный сдвиг V 50 в присутствии 2.5 M W7 (5,6 и 7 мВ при измерении в WT и Sh K S133, соответственно) (рис. 2C, D; таблица 2). …

Контекст 3

… влияние W7 на I A может быть немного переоценено из-за незначительного вклада увеличения I K. При 2,5 M W7 плотность тока на пике I A существенно не изменилась, она уменьшилась на 10% (рис. 3; таблица 1). При 25 M W7 максимальный I A был существенно снижен (на 67%). …

Контекст 4

… Установившаяся инактивация I K в WT () и Sh K S133 (f).Параметры подгонки Больцмана см. В таблице 2. D (слева), кривая плотности тока / напряжения I A представлена ​​(таблица 1). I A характеризуется (фитинг Больцмана, измеренный при пиковом выходном токе, предполагая обратный потенциал V K 85 мВ) I max 92,3 7,8 пА / пФ (n 11). …

Контекст 5

… кривых были аппроксимированы распределениями Больцмана. Подробные сведения о подгонке значений см. В таблицах 1 и 2. Параметры активации и инактивации, определенные в отсутствие или в присутствии W7, были подобраны с помощью единого распределения Больцмана (см.1) и суммируется с помощью V 50 (мВ) и наклона (мВ / е-кратный) зависимости от напряжения. …

KMC Powersports KS133 MESA LITE

Механическая обработка

Матовая бронза

Матовый черный

Нет в наличии

Код товара: KS133 MESA LITE

Позвоните, если хотите уточнить размер колес перед покупкой.Магазин шин Chihuahua не несет ответственности за неправильный размер обода из-за предоставленных неточных данных или из-за нестандартных дополнений к транспортным средствам (например, лифтов).

Варианты

Размер Диаметр обода Ширина обода Расположение болтов Смещение обода Обратный зазор Центральное отверстие Допустимая нагрузка Покрытие Цена
15X6 15.00 6,00 4X156 38 5,00 115,10 566 Обработка

Нет в наличии

15X6 15,00 6,00 4X156 38 5,00 115,10 566 матовая бронза

Нет в наличии

15X6 15.00 6,00 4X156 38 5,00 115,10 566 Черный матовый

Нет в наличии

15X6 15,00 6,00 4X137 38 5,00 96,00 566 Обработано

Нет в наличии

15X6 15.00 6,00 4X137 38 5,00 96,00 566 Матовая бронза

Нет в наличии

15X6 15,00 6,00 4X137 38 5,00 96,00 566 Черный матовый

Нет в наличии

Колеса KMC | KS13356044638 | KS133 MESA LITE 15X6 4X156 38 Офсетная матовая бронза

AllSearch By Diesel — GM DURAMAX —— 20-UP 6.6 л L5P —— 17-19 6,6 л L5P —— 11-16 6,6 л LML —— 07,5-10 6,6 л LMM —— 06-07 6,6 л LBZ —— 04.5-05 6.6L LLY —— 01-04 6.6L LB7 —— Colorado / Canyon 16+ 2.8L —— Pre-01 6.5L GM Diesel — DODGE CUMMINS —— 19-UP 6,7 л —— 13-18 6,7 л —— 10-12 6,7 л —— 07,5-09 6,7 л- —— 04,5-07 5,9 л —— 03-04,5 5,9 л —— 98,5-02 24 В 5,9 л —— 94-98 5,9 л —— 89-93 5,9 л —— 14-Up 3,0 л EcoDiesel — FORD POWERSTROKE —— 20-UP 6,7 л —— 17-19 6,7 л —— 11-16 6,7 л —— 08-10 6,4 л —— 03-07 6.0L —— 99-03 7.3L —— 94-97 7.3L —— Ford F-150 18-19 3.0L Powerstroke —— Ford Excursion 00-05 Дизель —— Pre 94 Ford IDIPerformance — Воздухозаборники | Интеркулеры —— Воздухозаборники холодного воздуха —— Впускные колена и коллекторы —— Интеркулеры | Трубопровод | Пыльники —— Сепараторы —— Пластины резонатора —— Впускные нагреватели и детали —— Проставки корпуса дроссельной заслонки —— Уловители —— — Предварительные фильтры —— Наборы для очистки —— Сменные фильтры — Тюнеры | Чипсы | Мониторы —— Тюнеры EzLynk —— Live-тюнеры EFI —— Цифровые мониторы —— Аксессуары | Кабели —— Бустеры чувствительности дроссельной заслонки —— Калибраторы спидометра — Выхлоп | Глушители | Наконечники —— Турбо-задний одинарный —— Задний одинарный DPF —— Задний одинарный CAT —— Выхлопные насадки —— Пусковые трубы —— Сменные дизельные сажевые фильтры —— Верхние трубы —— Выхлоп задней оси —— Двойные турбины сзади —— Двойные двойные фильтры DPF —— Двойные двойные вентили CAT — —- Каталитические преобразователи —— Выхлопные компоненты —— Выхлопные коллекторы —— Выхлопные коллекторы —— Выхлопные тормоза —— Хвостовые трубы —- — Штабели и комплекты штабелей —— Глушители —— Трубы удаления глушителя —— Y-образные трубы —— Теплозащитный экран —— Аксессуары для выхлопных газов — 50 государственных продуктов — Решения системы рециркуляции выхлопных газов —— Охладители системы рециркуляции выхлопных газов — Топливная система | Форсунки | Насосы —— Подъемные насосы —— Форсунки —— Форсунки —— Форсунки —— Форсунки —— Топливные насосы — —- Пружины регулятора —— Соединительные трубки —— Нагнетательные клапаны | Держатели —— Регулируемый возврат —— Системы фильтрации —— Инструменты для топливной системы —— Присадки —— Топливная рампа —— Топливный стержень- —— Топливная пластина —— Топливные поддоны —— Детали топливной системы —— Электроника впрыска — Силовые агрегаты — Пакеты VP44 — Коробки передач —- — Приводные ремни —— Коробка передач —— Комплекты трансмиссии —— Преобразователи крутящего момента —— Механическая коробка передач —— Поддоны трансмиссии —— Ремонтные линии трансмиссии —— Контроллеры трансмиссии —— Корпус клапана —— Комплект переключения передач —— Гибкая пластина —— Раздаточная коробка —— Валы —— Вспомогательные охладители —— Скобы раздаточной коробки —— Детали трансмиссии —— Кронштейны, рычаги и кабели —— Одеяла трансмиссии —— Ретрансляторы — Турбины | Нагнетатели —— Одиночные турбины —— Составные турбины —— Турбины низкого давления —— Запасные турбины —— Суперкомпрессоры —— Контроллеры наддува & Клапаны увеличения —— Форсунки —— Клапаны продувки —— Детали для восстановления турбонагнетателя —— Аксессуары для турбонагнетателей —— Трубопроводы турбонагнетателя —- — Турбо-колеса —— Wastegates —— Турбо-теплозащитные кожухи и одеяла — Дифференциал | Трансмиссия —— Крышки дифференциала —— Комплекты для восстановления дифференциала —— Шаровые шарниры —— Комплекты свободного вращения —— Posi-Lock —— — Оси и осевые подшипники —— Приводные валы и компоненты —— Кольцо и шестерня —— Основные установочные комплекты —— Локеры —— Ступицы — — Картер —— Мелкие детали и уплотнения —— Масло дифференциала — Компоненты двигателя —— Кулачки —— Шпильки головки —— Кривошип Шкив —— Поршни и штоки —— Прокладки головки —— Толкатели —— Стартеры и генераторы —— Головки —— Масляные колпачки —— Масляный радиатор —— Масляный поддон —— Пружины клапана —— Комплект для ремонта двигателя —— Свечи накаливания —— Зажигание — —- Свечи зажигания —— Детали привода ГРМ —— Крышки клапанов —— Переключатели высокого холостого хода и служебные выключатели —— Детали блока двигателя —— Фитинги и Уплотнения —— Ремень —— Ремни —— Крепления двигателя —— KDP Fix —— Электрические —— Гармонические демпферы — Вода Мет | Закись азота — Система охлаждения —— Резервуары охлаждающей жидкости —— Радиаторы —— Водяные насосы —— Электрические вентиляторы —— Комплекты байпаса охлаждающей жидкости — — Комплекты фильтров охлаждающей жидкости —— Охлаждающие шланги и трубы —— Датчики —— Термостаты — OEM | Техническое обслуживание —— Детализация и очистка —— Присадки —— Фильтры трансмиссии —— Масляные фильтры —— Топливные фильтры —— Воздушные фильтры OEM —— Жидкости —— Прокладка, уплотнительные кольца и уплотнения — Двигатели с ящиками — Производственные компоненты —— Фланцевые узлы с V-образной полосой —— Системы зажима VanJen —— Фитинги и шланги —— Прямые трубки — Продукция AgriPower — Продукция Big Rig Внешний вид — Подвеска, подъемники и рулевое управление —— Радиальные рычаги —— Радиусные стержни | Пластины —— Рулевые редукторы | Насосы —— Комплекты подъема —— Подъемники кузова —— Комплекты выравнивания —— Комплекты опускания —— Рычаги управления —— Амортизаторы и стойки —— Скобы рулевого механизма —— Компоненты рулевого управления —— Поперечные поперечины и концевые звенья —— Рычаги Pitman и холостые рычаги —— Радиусные рычаги UTV — — Тяги —— Стабилизаторы рулевого управления —— Шаровые шарниры —— Втулки —— Сумки для помощников —— Амортизаторы —— Листовые рессоры —— Задние блоки —— Тяговые балки —— Скобы —— Защитные пластины —— Подъемные аксессуары —— Гусеницы- —— Подшипники ступиц — Балки, подножки и подножки Nerf —— Подножки с усилителем —— Балки и подножки Nerf —— Подножки и подножки —- — Аксессуары Step — Бамперы —— Передние бамперы —— Задние бамперы —— Поддоны —— Аксессуары для бампера — Топливные баки —— — Запасные топливные баки в средней части судна —— Заправка и перекачка топливных баков —— Вспомогательные топливные баки —— Аксессуары для топливных баков — Покрывала и аксессуары —— Кровать Покрывала —— Удлинители кровати —— Поручни кровати —— Слайды кровати —— Коврики кровати —— — Ящики для инструментов —— Управление грузом — Расширители крыльев — Мягкие верхние части — Жесткие верхние части — Бронежилеты и защита — Двери — Зажимы | Монтажные решения — Материалы для детализации и чистки — Тормоза —— Тормозные магистрали —— Тормозные колодки —— Комплекты для модернизации тормозов —— Роторы —— — Суппорты — Крыши — Решетки —— Крышки решетки для холодной погоды —— Светодиодные решетки —— Логотипы решеток —— Решетки бампера —— Решетки и вставки —— Решетки UTV — Рулонные решетки и клетки — Палатки | Навесы — Оконные шторы и козырьки — Ветровые стекла — Сцепные устройства и буксировка —— Сцепные устройства для приемника —— Сцепные устройства для пятого колеса —— Сцепные устройства с гибкой шеей —— Сцепное устройство Ступеньки —— Принадлежности для сцепного устройства —— Ремни —— Контроллеры тормозов прицепа —— Сцепные устройства —— Крышки сцепного устройства — Решетки радиатора и упоры- — Лючки и крышки топливных баков — Зеркала — Лебедки —— Лебедки —— Органы управления —— Лебедки —— Крюки, тросы и скобы —- — Чехлы для лебедок —— Крепления для лебедок — Багажники на крышу, лыжи и багаж —— Багажники на крышу —— Лыжные крепления —— Грузовые платформы — Рога- —— Воздушные рожки —— Переключатели —— Аппаратное обеспечение | Компрессоры — Воздушные компрессоры — Стойки для головной боли — Брызговики — Крышки для транспортных средств — Капоты — Защелки капота — Задние двери — Дефлекторы — Защитная пленка для покраски — Аксессуары для бездорожья — Внешний вид продукции — Подкрылки для колесных арок Внутри — Ремни — Радио — Рулевые колеса — Хранение — Манометры и блоки —— Манометры —— Пакеты манометров —— Столбы и блоки —— Цифровые датчики —— Аксессуары для датчиков — Выключатели и розетки — Монтажные решения — Напольные коврики — Поручни — Поручни — Сиденья & Крышки — Сейфы — Мобильная электроника — Переключатели — Аккумуляторы — Инструменты — Защитное снаряжение — Радар-детекторы — Товары для интерьера — Обогреватели кабиныОсвещение — Погонные огни- — светодиодные хлысты | Флаги — Юридические комплекты для улицы — Переключатели — Жгуты проводов — Рабочие фары — Головные фары — Задние фонари — Бамперные огни — Противотуманные фары — Светодиодные полосы — Внедорожные фонари —— Rock Lights —— Светодиодные фонари —— Галогенные фонари —— HID Lights — 3-е стоп-сигналы — Кабина и габаритные огни- — Световые крышки и линзы — Освещение кроватей — Внутреннее освещение — Светодиодные лампы — Галогенные лампы — Морское освещение — Крепления и проводка — Задние фонари — Фонари — — Осветительные аксессуары — Колеса UTV LightsWheels | Шины — Колеса —— Черные диски Rhino —— Колеса BMF —— Колеса KMC —— American Force —— Топливо Off-Road— —- RBP-Rolling Big Power —— Moto Metal —— Гоночные колеса Method —— Колеса DDC —— Враждебные колеса —— Колеса XD — Цепи шин | Шипы — Шины —— Rough Country —— Nitto Tire —— Mickey Thompson Tyres —— Toyo Tires —— Fury Off-Road— —- Покрышки Pro Comp —— Покрышки MAXXIS — Гайки-проушины — Инструменты для покрышек | Ремонт — гусеницы — проставки-адаптеры — датчики TPMS — ступичные подшипники — аксессуары для колес — Посуда и бренды KooziesBrands — 3D MAXpider — Крышки ДОСТУПА — Захватывающий дизайн пустыни — Адреналиновые характеристики — Индукция AEM — Aeromotive — AFE Power — Agricover — Air Dog- — Air Lift — Airaid — Тормоза Alcon — Производительность Alligator — AlphaRex — American Force Wheels — Исследования усилителей — Anzo USA — Аксессуары ARB 4×4 — Archoil— — Aries — ARP — Assualt Industries — ATI — ATS Diesel Performance — Attitude Performance Products — Шины Atturo — AutoMeter — Сцепные устройства для прицепов B&W — BackRack — Baja Конструкции — BAK Industries — Banks Power — BD Diesel — BDS Suspension — Beans Diesel Performance — BedRug — BedSlide — BellTech — Bestop — Bilstein — Black Rhino Wheels — BMF Wheels — Borgeson — BorgWarner — Borla — Bullseye Power — Bully Dog — Bushwacker — Откалиброванные решения для мощности — Calv ert Racing — Подвеска Carli — CARR — Carrillo — CAT — Настройка COBB — Cognito — Камеры Colt — Камеры Comp — Corbeau — Corsa Performance — Подвеска CST — Cummins — Curt — DANA — Danville Performance — Daystar — DDC Wheels — Detroit Locker — Deviant Race Parts — DiabloSport — Diamond Eye Performance- — Дизельные преобразователи мощности — Дизельный источник питания — DieselSite — Различные тенденции — Dorman — Dtech — DU-HA — Duramax Tuner — DV8 Offroad — Dynatrac— — Dynomite Diesel — Тормоза EBC — Производительность Edelbrock — Продукты Edge — EFI Live — Энергетическая подвеска — Характеристики Exergy — Extang — EZ LYNK — Fab Fours — FabTech — Falcon Performance Shocks — Топливные системы Fass — Fingers Pistons — Firepunk — Firestone — Fish Tuning — Продукты для повышения производительности флиса — Flex-a-lite — Flog Industries — Flowmaster — Fluidampr — Ford Racing Motorsports — Fox Shocks — Топливные колеса — Fuelab — Дизель Full Force — Подвеска с полным дросселем — Fury Off-Road — Fusion Bu mpers — Мост и шестерня G2 — Турбины Garrett — Настройка GDP — Сцепное устройство Gen-Y — Системы подвески силы грунта — Кулачки Hamilton — Тормоза Hawk — Продукция HeatShield — Hella — High Tech Turbo — Держатели Дизель — Враждебные колеса — Тюнеры HP — HS Motorsports — Фильтры HUBB — Лайнеры Husky — Hypertech — Icon Vehicle Dynamics — IIS — Промышленный впрыск — Injen — Irate Diesel — Isspro — Фильтры K&N — KC HiLites — Kelderman — Kibbetech — KING Shocks — Kleinn Automotive Air Horns- — KMC Wheels — Kryptonite — Light Force — Longhorn Fab Shop — MAG — Mag-Hytec — Выхлопные системы Magnaflow — Magnuson — Mahle — Maryland Performance Diesel- — Шины Maxxis — Выхлопная система MBRP — McGaughys — MCI — Mean Grean — Торговая автомобильная промышленность — Гоночные колеса Method — Микки Томпсон — Мишимото — Броня MOB — Moog — Светодиодное освещение Morimoto — Moto Metal — Motor Ops — Motul — N-Fab — Nitro Gear — Nitrous Express — Nitto Tire — Производство без ограничений — — PacBrake — Paramount Automotiv e — PDI Diesel — Pedal Commander — Рабочие компоненты рулевого управления — Poison Spyder — Power Hungry Performance — PPE — PPEI — Прецизионные турбокомпрессоры — Pro Comp — Pure Мощность дизеля — Pure Performance Racing — Впускные трубы толкателя — Putco — Pypes — QuietKat — Rancho — Трансмиссии Рэнди — Трансмиссии Randys — Редкие детали — RBP- Роллинг Big Power — RCD-Race Car Dynamics — ReadyLift — Recon — REV-X — Rigid Industries — Дорожная броня — Rock Krawler — Rockford Fosgate — Roll N Lock — Rough Country — Roush Performance — Royal Purple — Royalty Core — Rubicon Express — Rugged Liner — Russell Performance — Фильтры S&B — Танки S&B — Screamin Diesel Производительность — Производительность SCT — Sinister Diesel — Smarty — Smittybilt — Характеристики на снегу — SoCal Diesel — Сцепление южного изгиба — Spyder Industries — Дизель из нержавеющей стали — Стелс-характеристики Модули — Steed Speed ​​— Stoptech — Sulastic — Конвертеры SunCoast — Superchips — Superlift — Superwinch — Подвеска Maxx — Synergy Manufacturing — Решетки T-Rex — T-Rex Tech — Терафлекс — Thule — Танки Titan — Шины Toyo — Транспортный поток — TransGo — Truxedo — Турбонетика — TurboSmart — U.S Diesel Parts — Valair — Viair — Яркие характеристики — Victor Reinz — Производительность Volant — Voodoo Ride — Vulcan Performance — Продукция Wagler Competition — Walbro — Warn — WeatherTech — Wehrli Custom Fab — Wehrli Fab — Wide Open Perf — Колеса XD — Yukon Gear & Axle — Zone OffroadDeals

Дифференциальный вклад Shal и Shaker в токи K + в нейронах грибовидного тела дрозофилы

Рисунок 6.

Шейкер способствует быстрому отключению тока в подмножестве сетей MBN. A , переходные токи K + от четырех различных ячеек wt и четырех разных ячеек sh KS133 показаны с подобранными кривыми, наложенными на кривые тока. Кривые были подобраны с использованием одинарной или двойной экспоненциальной функции плюс базовая линия. Минимальное количество экспоненциальных компонентов, необходимых для учета динамики инактивации выходящего тока, было определено статистически в соответствии с теорией вложенных моделей (см. Материалы и методы).Калибровка: (по всем графикам) 100 пА, 20 мс. B , Улучшение коэффициента корреляции ( r ) показано как функция приращения членов в подогнанных экспоненциальных функциях трасс, показанных в A . Некоторые из нейронов wt и sh KS133 уже хорошо соответствовали одной экспоненциальной (▪, •, □, ○), тогда как другие требовали двух членов (▴, ▾, ▵, ▿). Символы относятся к токам в A . C , Распределение анализируемых нейронов wt ( n = 60) и sh KS133 ( n = 61) в соответствии с количеством экспоненциальных членов для адекватной подгонки. В то время как 97% нейронов wt требовалось две экспоненты для учета кинетики инактивации тока всей клетки, только 80% sh KS133 инактивировались по двойной экспоненте. Разница статистически значима ( p <0.005; χ 2 тест). D , Распределение быстрых и медленных постоянных времени для МБН 58 wt и 49 sh KS133 , кинетика инактивации которых описывалась двумя экспонентами. Квадраты на правой панели показывают распределение 12 нейронов sh KS133 , инактивирующихся вдоль одной экспоненты. E , Левые следы показывают примеры токов sh KS133 K + , инактивирующихся вдоль одинарной (вверху) или двойной (внизу) экспоненты до и после воздействия 1 мкм PaTx2.Только токи, представляющие быстро инактивирующий компонент, были чувствительны к токсину. На правой панели показаны результаты, полученные в 22 нейронах sh KS133 . Только четыре из них (темные кружки) показали одноэкспоненциальный ток и были немного чувствительны к PaTx2.

% PDF-1.3 % 37 0 объект > эндобдж xref 37 72 0000000016 00000 н. 0000001788 00000 н. 0000002387 00000 н. 0000002594 00000 н. 0000002864 00000 н. 0000003809 00000 н. 0000003898 00000 н. 0000003957 00000 н. 0000004831 00000 н. 0000004912 00000 н. 0000005200 00000 н. 0000006146 00000 п. 0000007091 00000 н. 0000008067 00000 н. 0000008362 00000 н. 0000008770 00000 н. 0000009446 00000 н. 0000009952 00000 н. 0000010203 00000 п. 0000011149 00000 п. 0000011428 00000 п. 0000012373 00000 п. 0000013318 00000 п. 0000013441 00000 п. 0000013953 00000 п. 0000014447 00000 п. 0000015393 00000 п. 0000016497 00000 п. 0000016732 00000 п. 0000016918 00000 п. 0000017355 00000 п. 0000017616 00000 п. 0000017638 00000 п. 0000027392 00000 н. 0000027414 00000 п. 0000031641 00000 п. 0000031663 00000 п. 0000037132 00000 п. 0000037154 00000 п. 0000042036 00000 п. 0000042058 00000 п. 0000045835 00000 п. 0000045857 00000 п. 0000053294 00000 п. 0000053802 00000 п. 0000054045 00000 п. 0000054272 00000 п. 0000055218 00000 п. 0000055523 00000 п. 0000056469 00000 п. 0000056799 00000 п. 0000057750 00000 п. 0000058295 00000 п. 0000058317 00000 п. 0000066230 00000 п. 0000066252 00000 п. 0000074708 00000 п. 0000080501 00000 п. 0000087306 00000 п. 00000 00000 п. 0000097845 00000 п. 0000100304 00000 н. 0000100434 00000 н. 0000100510 00000 н. 0000100587 00000 н. 0000100718 00000 н. 0000102995 00000 п. 0000104401 00000 п. 0000107797 00000 п. 0000108759 00000 н. 0000001843 00000 н. 0000002365 00000 н. трейлер ] >> startxref 0 %% EOF 38 0 объект > эндобдж 107 0 объект > ручей Hb«f«7f`g`0 Ȁ

Ядерный импорт Frizzled2-C импортином-β11 и α2 способствует постсинаптическому развитию

  • 1

    Jordan, B.А. и Крейц М.Р. Шаттл нуклеоцитоплазматического белка: прямой путь передачи сигналов от синапса к ядру. Trends Neurosci. 32 , 392–401 (2009).

    CAS Статья Google Scholar

  • 2

    Отис, К.О., Томпсон, К.Р. И Мартин, К. Импортин-опосредованный ядерный транспорт в нейронах. Curr. Opin. Neurobiol. 16 , 329–335 (2006).

    CAS Статья Google Scholar

  • 3

    Вайс, К.Нуклеоцитоплазматический транспорт: грузоперевозки через границу. Curr. Opin. Cell Biol. 14 , 328–335 (2002).

    CAS Статья Google Scholar

  • 4

    Перри Р. Б. и Файнзилбер М. Факторы ядерного транспорта в функции нейронов. Семин. Cell Dev. Биол. 20 , 600–606 (2009).

    CAS Статья Google Scholar

  • 5

    Томпсон, К.R. et al. Передача сигналов от синапса к ядру во время долговременной синаптической пластичности; роль классического активного пути ядерного импорта. Нейрон 44 , 997–1009 (2004).

    CAS Google Scholar

  • 6

    Ting, C.Y. и другие. Плитка аксонов r7 в зрительной системе Drosophila опосредуется как передачей сигнала активина в ядро, так и взаимным отталкиванием. Нейрон 56 , 793–806 (2007).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 7

    Salinas, P.C. & Zou, Y. Передача сигналов Wnt в сборке нейронных цепей. Анну. Rev. Neurosci. 31 , 339–358 (2008).

    CAS Статья Google Scholar

  • 8

    Cadigan, K.M. Передача сигналов Wnt-бета-катенина. Curr. Биол. 18 , R943 – R947 (2008 г.).

    CAS Статья Google Scholar

  • 9

    Лю Дж., Yamamoto, V. & Lu, W. Расщепление рецептора Wnt Ryk регулирует дифференцировку нейронов во время кортикального нейрогенеза. Dev. Ячейка 15 , 773–780 (2008).

    CAS Статья Google Scholar

  • 10

    Мэтью Д. и др. Передача сигналов бескрылыми в синапсах осуществляется посредством расщепления и ядерного импорта рецептора DFrizzled2. Наука 310 , 1344–1347 (2005).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 11

    Атаман, Б.и другие. Ядерный транспорт Drosophila Frizzled-2 во время развития синапсов требует белка PDZ dGRIP. Proc. Natl. Акад. Sci. США 103 , 7841–7846 (2006).

    CAS Статья Google Scholar

  • 12

    Атаман, Б. и др. Быстрые зависимые от активности модификации в синаптической структуре и функции нуждаются в двунаправленной передаче сигналов Wnt. Нейрон 57 , 705–718 (2008).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 13

    Miech, C., Pauer, H.U., He, X. & Schwarz, T.L. Пресинаптическая локальная передача сигналов с помощью канонического бескрылого пути регулирует развитие нервно-мышечного соединения Drosophila . J. Neurosci. 28 , 10875–10884 (2008).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 14

    Паккард, М.и другие. Drosophila Wnt, бескрылый, обеспечивает важный сигнал для пре- и постсинаптической дифференцировки. Ячейка 111 , 319–330 (2002).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 15

    Рубен М.Б., Йошихара М. и Кидокоро Ю. Ультраструктурные корреляты развития нервно-мышечных соединений. Внутр. Rev. Neurobiol. 43 , 69–92 (1999).

    CAS Статья Google Scholar

  • 16

    Хигаши-Ковтун, М.Э., Моска, Т.Дж., Дикман, Д.К., Майнерцхаген, И.А. И Шварц, Т. Импортин-бета11 регулирует синаптические фосфорилированные матери против декапентаплегии и тем самым влияет на синаптическое развитие и функцию в нервно-мышечном соединении Drosophila . J. Neurosci. 30 , 5253–5268 (2010).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 17

    Голдфарб, Д.С., Корбетт, А.Х., Мейсон, Д.А., Харреман, М. & Адам, С.А. Импортин альфа: многоцелевой ядерный транспортный рецептор. Trends Cell Biol. 14 , 505–514 (2004).

    CAS Статья Google Scholar

  • 18

    Chen, C.M. & Struhl, G. Бескрылая трансдукция с помощью белков Frizzled и Frizzled2 Drosophila . Развитие 126 , 5441–5452 (1999).

    CAS Google Scholar

  • 19

    Менон К.П., Эндрюс, С., Мурти, М., Гэвис, Е. J. Neurosci. 29 , 5558–5572 (2009).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 20

    Кантера, Р., Козлова, Т., Барильяс-Мюри, К. и Кафатос, Ф.С. На структуру и иннервацию мышц влияет потеря спинного мозга у плодовой мушки, Drosophila melanogaster . Мол. Клетка. Neurosci. 13 , 131–141 (1999).

    CAS Статья Google Scholar

  • 21

    Piddini, E., Marshall, F., Dubois, L., Hirst, E. & Vincent, J.P. Arrow (LRP6) и Frizzled2 сотрудничают для деградации Wingless в имагинальных дисках Drosophila . Развитие 132 , 5479–5489 (2005).

    CAS Статья Google Scholar

  • 22

    Ланге, А.и другие. Классические сигналы ядерной локализации: определение, функция и взаимодействие с импортином альфа. J. Biol. Chem. 282 , 5101–5105 (2007).

    CAS Статья Google Scholar

  • 23

    Роос, Дж., Хаммел, Т., Нг, Н., Кламбт, К. и Дэвис, Г.В. Drosophila Futsch регулирует организацию синаптических микротрубочек и необходим для синаптического роста. Нейрон 26 , 371–382 (2000).

    CAS Статья Google Scholar

  • 24

    Hummel, T., Krukkert, K., Roos, J., Davis, G. & Klambt, C. Drosophila Futsch / 22C10 представляет собой MAP1B-подобный белок, необходимый для развития дендритов и аксонов. Нейрон 26 , 357–370 (2000).

    CAS Статья Google Scholar

  • 25

    Lahey, T., Gorczyca, M., Jia, X.X. & Будник, В.Ген супрессора опухоли Drosophila dlg необходим для нормальной структуры синаптического бутона. Нейрон 13 , 823–835 (1994).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 26

    Маррус, С.Б. И ДиАнтонио, А. Предпочтительная локализация рецепторов глутамата напротив участков высокого пресинаптического высвобождения. Curr. Биол. 14 , 924–931 (2004).

    CAS Статья Google Scholar

  • 27

    Аберле, Х.и другие. желаемое за действительное кодирует рецептор BMP типа II, который регулирует синаптический рост у Drosophila . Нейрон 33 , 545–558 (2002).

    CAS Статья Google Scholar

  • 28

    Marqués, G. et al. Рецептор BMP типа II Drosophila регулирует морфологию и функцию нервно-мышечных синапсов. Нейрон 33 , 529–543 (2002).

    Артикул Google Scholar

  • 29

    Парнас, Д., Хагиги, А.П., Феттер, Р.Д., Ким, С.В. & Goodman, C.S.Регуляция постсинаптической структуры и локализации белка с помощью фактора обмена гуаниновых нуклеотидов Rho-типа dPix. Нейрон 32 , 415–424 (2001).

    CAS Статья Google Scholar

  • 30

    Zhang, Y. et al. Киназа PAR-1 фосфорилирует Dlg и регулирует его постсинаптическое нацеливание на нервно-мышечное соединение Drosophila . Нейрон 53 , 201–215 (2007).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 31

    Coyle, I.P. и другие. Nervous wreck, адаптерный белок Sh4, который взаимодействует с Wsp, регулирует синаптический рост у Drosophila . Нейрон 41 , 521–534 (2004).

    CAS Статья Google Scholar

  • 32

    Кумар В. и др. Синдапин способствует образованию постсинаптической мембранной системы в. Дрозофила. Мол. Биол. Ячейка 20 , 2254–2264 (2009).

    CAS Статья Google Scholar

  • 33

    Pielage, J., Fetter, R.D. & Davis, G.W. Постсинаптический каркас спектрина определяет размер активной зоны, расстояние и эффективность в нервно-мышечном соединении Drosophila . J. Cell Biol. 175 , 491–503 (2006).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 34

    Нимчинский, Э.А., Сабатини, Б. & Свобода, К. Строение и функция дендритных шипов. Анну. Rev. Physiol. 64 , 313–353 (2002).

    CAS Статья Google Scholar

  • 35

    Faeder, I.R. И Солпитер, М. Поглощение глутамата препаратом стимулированных нервных мышц насекомых. J. Cell Biol. 46 , 300–307 (1970).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 36

    Вонг, К., Karunanithi, S. & Atwood, H.L. Популяции квантовых единиц в нервно-мышечном соединении личинок Drosophila . J. Neurophysiol. 82 , 1497–1511 (1999).

    CAS Статья Google Scholar

  • 37

    Sigrist, S.J. и другие. Постсинаптическая трансляция влияет на эффективность и морфологию нервно-мышечных соединений. Природа 405 , 1062–1065 (2000).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 38

    Гуань, Б., Hartmann, B., Kho, Y.H., Gorczyca, M. & Budnik, V. Ген супрессора опухоли Drosophila , dlg , участвует в структурной пластичности глутаматергического синапса. Curr. Биол. 6 , 695–706 (1996).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 39

    Моска, Т.Дж., Каррильо, Р.А., Уайт, Б.Х. И Кешишиан, Х. Рассечение фенотипов синаптической возбудимости с помощью доминантно-отрицательной субъединицы канала Shaker K + . Proc. Natl. Акад. Sci. США 102 , 3477–3482 (2005).

    CAS Статья Google Scholar

  • 40

    Chen, K. & Featherstone, D.E. Discs-large (DLG) сгруппированы с помощью пресинаптической иннервации и регулируют состав субъединиц постсинаптического рецептора глутамата в Drosophila . BMC Biol. 3 , 1 (2005).

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 41

    Пак-Чанг, Э., Куршан, П.Т., Дикман, Д.К. И Шварц, Т. Кинезин Drosophila , необходимый для образования синаптических бутонов и транспорта синаптических пузырьков. Нац. Neurosci. 10 , 980–989 (2007).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 42

    Freedman, N.D. & Yamamoto, K.R. Импортин 7 и импортин альфа / импортин бета являются ядерными рецепторами импорта для рецептора глюкокортикоидов. Мол.Биол. Ячейка 15 , 2276–2286 (2004).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 43

    Giagtzoglou, N., Lin, Y.Q., Haueter, C. & Bellen, H.J. Importin 13 регулирует высвобождение нейротрансмиттера в нервно-мышечном соединении Drosophila . J. Neurosci. 29 , 5628–5639 (2009).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 44

    Вонг, Х.C. et al. Прямое связывание домена PDZ Disheveled с консервативной внутренней последовательностью в C-концевой области Frizzled. Мол. Ячейка 12 , 1251–1260 (2003).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 45

    Ахмад-Аннуар, А. и др. Передача сигналов через синапс: роль Wnt и Disheveled в пресинаптической сборке и высвобождении нейромедиаторов. J. Cell Biol. 174 , 127–139 (2006).

    CAS Статья PubMed Google Scholar

  • 46

    Ehebauer, M., Hayward, P. & Martinez-Arias, A. Notch сигнальный путь. Sci. СТКЕ 2006 , см7 (2006 г.).

    Артикул Google Scholar

  • 47

    Дэвис, E.K., Zou, Y. & Ghosh, A. Wnts, действуя посредством канонических и неканонических сигнальных путей, оказывают противоположные эффекты на формирование синапсов в гиппокампе. Neural Dev. 3 , 32 (2008).

    Артикул PubMed Google Scholar

  • 48

    Speese, S.

  • Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *