Основные характеристики микроскопа – Характеристики микроскопа

Характеристики микроскопа

Учитывая высокий темп современной жизни, человеку не всегда удается ознакомиться с инструкцией нового прибора. Тем более, если это новичок или ребенок, пожелавшие освоить микроскопию. Для того, чтобы воспользоваться оптикой в полную мощь, необходимо знать основные характеристики микроскопа. Это позволит не только подобрать их оптимальное сочетание для стоящих перед исследователем задач, но и умело применять свои знания в процессе экспериментов.

Характеристики микроскопа рассмотрим на примере классической учебной модели. На что стоит обратить внимание в первую очередь, как употребить функционал на 100% — эти вопросы волнуют прежде всего начинающих биологов.

Увеличение – пожалуй, наиболее актуальная характеристика микроскопа для тех, кто раньше на нем не работал. Действительно, это чаще всего заботит и родителей, и детей. Кажется, что чем оно, выше- тем лучше. На практике это оказывается не совсем верным. По своей сути кратность – это возможность оптической системы создавать конечное изображение, во сколько-то раз больше исходного путем изменения угловых размеров видимой картинки по отношению к реальным, которыми обладает увеличиваемый предмет. Посмотрите, определение заключается только лишь в перемножении, но для комфортного рассматривания человеческим глазом этого не достаточно – ведь важно, чтобы наблюдаемая картина была не только огромной, но и четкой. Например, школьный курс биологии замечательно смотрится в пределах 40-400 (или 640) крат, а вот 800-1280х – уже излишество, ибо страдает качество наблюдений (появляется заметная размытость, нечеткость).  

Разрешающая способность – та самая характеристика микроскопа, которая влияет на чистоту и контрастность. Она зависит от диаметра используемого объектива (т.е. его числовой апертуры): простыми словами — повышается, если они толстые, понижается – если тонкие. Прекрасный показатель 1,25, что реализовано, например, в Микромед С-12.

Наличие и параметры осветителя – характеристика микроскопа, определяющая какие именно методы исследования можно пустить в ход. Например, нижняя подсветка предполагает изучение микропрепаратов в проходящем свете, а верхняя – в отраженном. Она может быть светодиодной, галогенной или естественной (обычное зеркальце). Зеркальное освещение зачастую используется в школах, так как по многим методикам оно качественнее передает цвет и детализацию объекта, в тоже время светодиод проще в обращении – светлое поле получаем одним нажатием кнопки включения.

Фокусировка – может быть грубой и точной (при помощи микровинта). Второй вариант предпочтительнее, так как позволяет фокусироваться без рывков, предметный столик поднимается и опускается плавно с микроскопическим шагом. Фокусировочный механизм с микровинтом можно встретить, например, в Биомед-1. Данная характеристика микроскопа тоже является вспомогательной, но безусловно положительно отражается на удобстве работы с ним.

Сравните названые характеристики микроскопов следующих брендов:

oktanta.ru

Основные технические характеристики микроскопа

Светопольная микроскопия.

Устройство биологического микроскопа

и техника микроскопирования.

Устройство светового биологического микроскопа.

Все световые биологические микроскопы отечественного производства условно можно разделить на три группы: микроскопы биологические упрощенные, микроскопы биологические рабочие, микроскопы биологические исследовательские. Они предназначены для исследования препаратов в проходящем свете в светлом поле.

Принципиальное устройство биологических микроскопов практически одинаково.

В настоящем руководстве производится описание устройства и правил работы с биологическим микроскопом типа «Биомед».

Микроскоп (от греческого слова micros – малый, scopeo – смотрю) – это оптический прибор (рис.1) состоящий из трёх основных частей : механичес-кой, оптической и осветительной.

Механическая часть и осветитель. Нижняя часть штатива массивная и служит опорой микроскопа. Источником освещения света служит электрическая лампочка, вмонтированная в основание микроскопа. На боковой панели основания расположены выключатель осветителя (2) и регулятор освещения препарата (17). На штативе укреплен крестообразный столик, благодаря которому с помощью винтов препаратоводителя препараты могут перемещаться в двух взаимно перпендикулярных направлениях. Тубусодержатель (11) связан с основанием микроскопа неподвижно. Фокусировка препарата осуществляется с помощью макромет ри ческого (14) и микрометрического (15) винтов.

Рис.1 Общий вид микроскопа БИОМЕД-1:

1 – подложка основания; 2 — основание микроскопа с выключателем; 3 –осветитель; 4 – конденсор Аббе; 5 – предметный столик с измерительным нониусом; 6 – держатель препарата; 7 – объективы; 8 – револьверная головка; 9 – окуляры; 10 – адаптер видео/фотонасадки; 11 – тринокулярная насадка; 12 – переключатель светового потока; 13 – штатив; 14 –макрометрический винт; 15 – микрометический винт; 16 – коаксиальная ручка перемещения препарата; 17 – регулятор яркости осветителя.

Макрометрический винт служит для грубой настройки микроскопа. Для точной фокусировки пользуются микровинтом.

Правило работы с микровинтом. Полных оборотов микровинтом делать нельзя. Вначале необходима грубая настройка. Разрешается поворачивать микровинт в ту или иную сторону не более 2…4х делений (не более пол-оборота).

Отличительной особенностью микроскопа БИОМЕД — 4, которым оснащены наши микробиологические лаборатории, является его оснащенность бинокулярной насадкой, отсутствием адаптера видео/фотонасадки (10), а также переключателя светового потока (12).

В верхнюю часть тубусодержателя вставляется вместо тринокулярной бинокулярная насадка (11) с окулярами. На тубусодержателе укреплен револьвер с объективами(8).

Оптическая часть микроскопа состоит из конденсора системы Аббе с ирисовой диафрагмой, объективов и окуляров. Рукояткой (4) можно регулировать объем лучей света, падающих на препарат, за счет изменения открытого отверстия диафрагмы. Окрашенные препараты лучше рассматривать при почти полностью открытой диафрагме, неокрашенные — при уменьшенном отверстии диафрагмы. Конденсор (от лат.

condenso — уплотняю, сгущаю) собирает лучи, идущие от источника через диафрагму, и направляет их на объект. С помощью винта конденсора (4), опуская его или поднимая, регулируют степень освещения препарата.

Правило работы с конденсором. При работе с большими увеличениями микроскопа конденсор должен находиться в верхнем положении. При работе с малыми увеличениями микроскопа конденсор опускают вниз.

Объектив (греч. objectum – предмет исследования) представляет собой наиболее важную часть микроскопа. Это многолинзовая короткофокусная система, от качества которой зависит в основном изображение объекта. Наружная линза, обращенная плоской стороной к препарату, носит название фронтальной, она обеспечивает увеличение. Увеличение объектива всегда обозначено на его оправе. Микроскоп БИОМЕД – 4 оснащен объективами, увеличивающими в 4, 10, и 40 (сухие) и 100 (иммерсионный) раз.

От кривизны фронтальной линзы объектива зависит его фокусное расстояние и увеличение. Чем больше кривизна фронтальной линзы, тем короче фокусное расстояние и тем больше увеличение объектива. Это необходимо помнить при микроскопировании – чем большее увеличение дает объектив, тем меньше свободное рабочее расстояние и тем ниже следует опускать его над плоскостью препарата (табл.1).

Таблица 1. Оптические данные объективов микроскопа «Биомед-4»

Система	Собственное увеличение	Числовая апертура	Фокусное расстояние, мм	Свободное рабочее рас- стояние, мм
Сухая	4х	0,10	21,61	10,20
Сухая	10х	0,20	15,50	6,20
Сухая	40х	0,65	4,35	0,40
Масляная иммерсия	100х	1,25	1.35	0,12

Остальные линзы в системе объектива выполняют преимущественно функции коррекции оптических недостатков, возникающих при исследова-нии объектов. Как известно, изображение, получаемое при помощи линз, обладает рядом недостатков – аберраций. Наиболее существенные – сферическая и хроматическая аберрации. Первая проявляется в невозможности одновременной фокусировки всего поля зрения, вторая связана с разложением белого света на спектр, в результате чего изображение преобретает радужную окраску. Объективы, у которых сферическая и хроматическая аберрации скоррегированы не полностью, называются

ахроматами. Они содержат до шести линз и дают изображение наиболее резкое в центре. Края поля зрения при использовании ахроматов бывают окрашены в разные цвета спектра. Ахроматы широко распространены вследствие своей простоты и дешевизны.

Более совершенные объективы – апохроматы. Хроматическая погрешность в них почти в 10 раз меньше, чем у ахроматов. Апохроматы обеспечивают более равномерную резкость изображения. На их оправе имеется обозначение «Апохр». Полностью устраняют искривление поля зрения планахроматы. Эти объективы применяют главным образом при микрофотографировании.

Кроме того, объективы делятся на сухие и иммерсионные. Сухими называются объективы, при работе с которыми между фронтальной линзой и рассматриваемым предметом находится воздух. Вследствие того, что лучи света проходят среды с различными показателями преломления (покровное стекло и воздух), часть их отклоняется и не попадает в объектив. Иммерсионными (от лат. immersion – погружаю) называются объективы, фронтальная линза которых при работе погружается в нанесенную на препарат каплю жидкости с показателем преломления, близким к показателю преломления стекла.

Окуляр (от лат. oculus – глаз) состоит из двух линз –- глазной (верхней) и собирательной (нижней). Окуляр служит для рассмотрения изображения предмета, даваемого объективом. Увеличение объективов указано на их оправе. В комплект к микроскопам типа БИОМЕД-4 входит объектив с увеличением 10х.

Микроскоп БИОМЕД-4 снабжен бинокулярной насадкой, которая имеет собственное увеличение (около 1,5х) и снабжена коррекционными линзами. Бинокулярной насадкой следует пользоваться при длительной работе с микроскопом. Корпус насадки может раздвигаться в пределах 55…75 мм в зависимости от расстояния между глазами наблюдателя. Работа с бинокулярной насадкой улучшает видимость объекта, снижает яркость изображения и тем самым сохраняет зрение.

Общее увеличение микроскопа – определяется произведением увеличения объектива на увеличение окуляра. Так общее увеличение, которое позволит максимально увеличить объект при использовании микроскопа БИОМЕД-4, составит 10 х 100 = 1000 раз.

Однако общее увеличение еще не характеризует всех возможностей микроскопа. Увеличенное изображение может оказаться как четким, так и нечетким.

Отчетливость получаемого изображения определяется разрешающей способностью микроскопа, т.е. той наименьшей величиной объектов или их деталей, которые можно увидеть с его помощью. Следовательно, чем меньше размер частицы, видимой в микроскоп, тем больше его разрешающая способность.

Пользуясь биологическим микроскопом, можно рассмотреть предмет размером не менее 0,2мкм ¹.

Порядок работы со светопольным микроскопом

Обращение с микроскопом требует навыков, поэтому, приступая к работе с ним, необходимо усвоить основные правила пользования микроскопом.

1. На рабочем столе микроскоп БИОМЕД помещают ручкой от себя, на расстоянии 3…5 см от края стола. Перед началом работы следует осторожно мягкой тканью, пропитанной капелькой этилового спирта, потереть фронтальные линзы объективов.

2. Устанавливают правильное освещение поля зрения микроскопа. Для этого, включают осветитель. С помощью револьвера ставят в рабочее положение объектив с увеличением 4х. Легкий упор и звук щелчка пружины револьвера свидетельствует о том, что объектив установлен по оптической оси. Макрометрическим винтом опускают объектив на расстояние 0,5…1,0 см от предметного столика. Полностью открывают ирисовую диафрагму и поднимают конденсор вверх до упора. При правильной установке поле зрения микроскопа будет иметь форму хорошо и равномерно освещенного круга. При микроскопировании окрашенных препаратов верхняя линза конденсора должна находиться на уровне предметного столика. При просмотре неокрашенных препаратов желаемую степень освещения регулируют, слегка опустив конденсор и

————————————————————————————————-

¹ Микрометр – тысячная доля миллиметра (0,001 мм)

прикрыв ирисовую диафрагму.

Правила работы с сухими объективами.

Приготовленный препарат помещают и закрепляют с помощью держателя (6) на предметном столике. Сначала препарат рассматривают с объективом 10х, а затем переходят к большим увеличениям. Необходимо помнить, что чем меньше увеличение объектива, тем больше при установке препарата на фокус будет свободное рабочее расстояние (расстояние между объективом и препаратом).

С помощью сухого объектива с увеличением 10х просматривают несколько полей зрения. Передвигают предметный столик с помощью ручки перемещения препарата (16). Нужный для исследования участок препарата устанавливают точно в центре поля зрения. Вращением револьвера переводят объектив с увеличением 40х. Наблюдая сбоку, макрометрическим винтом поднимают предметный столик почти до соприкосновения с препаратом (не касаясь его). Затем, смотря в окуляр, тем же винтом очень медленно опускают столик до появления изображения изучаемых объектов. После этого вращением микрометрического винта в ту или другую сторону (но не более чем на 2…4 деления) производят его точную фокусировку. Если при повороте микровинта на 2…4 деления (пол-оборота) в ту или иную сторону изображение не найдено, снова возвращаются к поиску изображения с использованием макрометрического винта, а затем переходят к работе с микрометрическим винтом. При смене объективов необходимо регулировать степень освещения препарата с помощью конденсора. Так, при просмотре препарата с объективом 10х конденсор опускают, а при переходе на объектив 40х конденсор несколько поднимают.

studfile.net

Виды микроскопов, основные характеристики и назначение :: SYL.ru

В данной статье мы ознакомимся широко развитой методикой исследования разнообразных микроэлементов нашего мира – микроскопией. Здесь мы рассмотрим описание микроскопа, его предназначение, устройство, правила работы и исторические факты.

Ознакомление с приборами микроскопии

Микроскоп – это механизм, предназначение которого заключается в получении увеличенного изображения какого-либо объекта, а также в измерении структурных деталей, которых невозможно наблюдать невооруженным глазом.

Изобретение и создание разнообразных видов микроскопов позволило создать микроскопию – технологический метод практической эксплуатации этих приборов.

Исторические сведения

Кем был создан первый микроскоп в истории человечества, определить довольно проблематично. Впервые такой механизм был изобретен на рубеже шестнадцатого и семнадцатого веков. Вероятным изобретателем считают Захария Янсена, голландского ученого.

Будучи еще ребенком, Янсен используя дюймовую трубочку, установил на двух ее краях по одной выпуклой линзе. Увиденное заставило изобретателя создать нечто новое и улучшить его. Возможно, это обусловило изобретение первого в мире микроскопа, что произошло приблизительно в 1590 году.

Однако еще в 1538 г. итальянец Дж. Фракасторо, работая врачом, выдвинул предположение о комбинировании двух линз с целью создания еще большего увеличения изображений. Следовательно, его работа могла стать началом для появления первого микроскопа. Хотя термин был введен гораздо позже.

Другим первооткрывателем считается Галилео Галилей. Услышав приблизительно в 1609 г. о появлении такого увеличительного устройства и разобравшись в общей идее его механизма, уже в 1612 г. итальянский физик создал собственное массовое изготовление микроскопов. Название этому прибору дал академический друг Галилея, Джованни Фабер в 1613.

Уже в шестидесятых годах XVII века были получены данные о применении микроскопа в научной исследовательской деятельности. Первый это сделал Роберт Гук, занимавшийся наблюдением за устройством разнообразных растений. Именно он в работе «микрография» сделал зарисовки увиденного в микроскоп изображения. Он установил, что растительные организмы строятся из клеток.

Разрешающие способности

Одним из параметров микроскопа является его разрешающая способность. Различные виды микроскопов имеют, соответственно, разный показатель этой характеристики. Так что же это такое?

Разрешающая способность – это возможности прибора показывать четкое и качественное изображение, картинку двух расположенных рядом, фрагментов исследуемого объекта. Показатель степени углубления в микромир и общая возможность его исследования базируются именно на этой способности. Данную характеристику определяет длина волны излучения, которую используют в микроскопе. Главным ограничением является невозможность получения картинки объекта, размеры которого меньше размера длины излучения.

Ввиду написанного выше становится очевидно, что благодаря разрешающей способности мы можем получать четкое изображение деталей изучаемого объекта.

Основные параметры

К другим важным параметрам в строении микроскопа относятся его увеличение, насадки, размер предметного столика, возможности подсветки, оптическое покрытие и т. д.

Рассмотрим главный из перечисленных в этом пункте показателей – увеличение.

Увеличение – это общая способность микроскопа показывать изучаемые объекты в больших размерах, чем они есть на самом деле. Вычисление этого параметра можно произвести путем умножения объективного увеличения на окулярное. Данная возможность в оптических микроскопах доходит до 2000 крат, а электронный имеет увеличение в сотни раз больше, чем световой.

Основная характеристика микроскопа – это именно его разрешающая способность, а также увеличение. Поэтому при выборе такого прибора на эти показатели необходимо обратить особое внимание.

Составные элементы

Микроскоп, как и любой другой механизм, состоит из определенных деталей, среди которых выделяют:

• предметный столик;
• рукоятку переключения;
• окуляр;
• тубус;
• держатель для тубуса;
• микрометренный винт;
• винт грубой наводки;
• зеркальце;
• подставку;
• объектив;
• стойку;
• бинокулярную насадку;
• оптическую головку;
• конденсор;
• светофильтр;
• ирисовую диафрагму.

Ознакомимся с основными характеристиками образующих структур микроскопа.

Объектив – является средством определения полезного увеличения. Образуется из определенного количества линз. Увеличительные возможности указываются цифрами на его поверхности.

Окуляр – состоящий из двух-трех линз элемент микроскопа, увеличение которого обозначается на нем цифрам. Общий показатель увеличительных способностей прибора определяется путем перемножения показателя увеличения объектива на увеличение окуляра.

Осветительные устройства включают в себя зеркальце или электроосветитель, конденсор и диафрагмой, светофильтр и столик.

Механическая система образуется подставкой, коробочкой с микрометренным механизмом и винтом, тубусодержателем, винтом грубой наводки, конденсором, винтом перемещения конденсора, револьвером и предметным столиком.

Оптическая микроскопия

Среди существующих видов микроскопов выделяют несколько основных групп, характеризующихся определенными особенностями устройства и предназначения.

Глаз человека – это своего рода естественная оптическая система с определенными параметрами, например, разрешением. Разрешение, в свою очередь, характеризуется наименьшим показателем разности в расстоянии между составными компонентами объекта, за которым наблюдают. Важнейшим пунктом здесь является наличие визуального отличия между наблюдаемыми фрагментами. Ввиду того, человеческий глаз не в силах наблюдать естественным путем за микроорганизмами, как раз и были созданы подобные увеличительные приборы.

Оптические микроскопы позволяли работать с излучением, лежащем в диапазоне от 400 до 700 нм и с ближним ультрафиолетом. Это длилось до середины двадцатого века. Подобные приборы не позволяли получать разрешающую способность меньшую, чем полупериод волны излучения опорного типа. Вследствие этого микроскоп позволял наблюдать за структурами, расстояние между которыми было около 0.20 мкм, из чего следует, что максимальное увеличение могло достигать 2000 крат.

Микроскопы бинокулярного типа

Бинокулярный микроскоп – это устройство, при помощи которого можно получить объемное увеличенное изображение. Другое название таких приборов – стереомикроскопы. Они позволяют человеку четко различать детали исследуемых объемных объектов.

В бинокулярном микроскопе рассмотрение объекта происходит сквозь две линзы, независимые между собой. В настоящее время используются сразу 2 окуляра и 1 объектов. Отлично работают в условиях наличия проходящего и отраженного света.

Электронная микроскопия

Появление электронного микроскопа позволило использовать электроны, обладающие свойствами и частиц, и волн в микроскопии.

Электрон обладает длинной волны, которая зависит от его энергетического потенциала: E = Ve, где V – величина разности потенциалов, e – электронный заряд. Длина волны электрона при пролете разности в потенциалах равной 200000 В составит около 0,1 нм. Электрон легко фокусируется при помощи электромагнитных линз, что обуславливается его зарядом. После электронную версию изображения переводят в видимую.

Среди таких увеличительных устройств набрал широкую известность цифровой микроскоп. Он позволяет подключать адаптеры к аппарату с целью переноса изображения на компьютер и его сохранения. При работе с подобными устройствами камера регистрирует наблюдаемое изображение, далее переносит его на ПК при помощи USB-кабеля.

Цифровой микроскоп может классифицироваться в соответствии с его режимом работы, увеличительной кратности, числу подсветок и разрешению камеры. Их главными достоинствами считаются наличие возможности переносить изображение на ПК и сохранять его, возможность в пересылке полученной информации на большие расстояния, редактирование, детальный анализ и хранение результатов исследования, а также умение проецировать картинку при помощи проекторов.

Электронные микроскопы обладают разрешающей способностью превосходящей световые в 1000-10000 раз.

Сканирующие зонды

Другой вид микроскопа – это сканирующий зонд. Сравнительно новая ветвь в развитии таких приборов.

Сокращенно их называют – ЗСМ. Изображение воспроизводится благодаря регистрации взаимодействия зонда и поверхности, которую он исследует. В современном мире такие механизмы позволяют наблюдать за взаимодействием зонда с атомами. Разрешающая способность ЗСМ сопоставима с микроскопами электронного типа, а в некоторых параметрах даже лучше.

Рентгеновская микроскопия

Рентгеновский микроскоп был создан для наблюдением за чрезвычайно малыми объектами, величина которых сопоставима с рентгеновскими волнами. Базируется на эксплуатации излучения электромагнитного характера, в котором длина волны не превышает один нанометр.

Разрешающая способность таких микроскопов заняла промежуточное место между оптическими и электронными. Теоретическая р.с. такого устройства может достигать 2-20 нм, что гораздо больше возможностей оптических микроскопов.

Общие сведения для работы с микроскопом

Эксплуатируя данный прибор необходимо знать правила работы с микроскопом:

1. Работу необходимо выполнять сидя.
2. Следует осмотреть прибор и протереть от пыли мягкими салфетками зеркальце, объектив и окуляр.
3. При работе с микроскопом нежелательно его передвигать, поставить слева от себя.
4. Произвести открытие диафрагмы, привести конденсор к верхнему положению.
5. Работу стоит начинать с малого увеличения.
6. Объектив довести до одного сантиметра от стекла с наблюдаемым объектом.
7. Равномерно распределить освещение поля зрения, используя окуляр, в который необходимо смотреть глазом, и вогнутое зеркало.
8. Переместить микропрепарат на столик микроскопа. Наблюдая сбоку, опустить объектив до уровня 4-5 мм над исследуемым объектом, используя для этого макровинт.
9. Глядя глазом в окуляр, производить вращательные движения грубого винта, для подведения объектива к положению, в котором будет четко видно изображение.
10. Перемещая стекло с препаратом, найдите место, где исследуемый объект будет располагаться по центру вашего поля зрения в микроскопе.
11. В случае отсутствия изображения, повторите с шестого по девятый пункты.
12. Используя микрометренный винт, добейтесь необходимой четкости изображения. Обратит внимание на то, не выходит ли точка между рисками на микрометренном механизме, за пределы рисок. Если выходит, то верните ее в стандартное положение.
13. Заключаем правила работы с микроскопом, уборкой рабочего места. Необходимо вернуть увеличение с большого на малое, произвести поднятие объектива, снять препарат и протереть микроскоп, далее накрыть полиэтиленом и вернуть в шкафчик.

Данные правила в большей мере относятся к оптическим микроскопам. Строение микроскопа, например, электронного или рентгеновского, отличается от светового, а потому основные правила работы могут также отличаться. Особенности работы с такими устройствами можно найти в инструкции к ним.

www.syl.ru

Основные технические характеристики микроскопа

Общее увеличение микроскопа – определяется произведением увеличения объектива на увеличение окуляра. Так общее увеличение, которое позволит максимально увеличить объект при использовании микроскопа БИОМЕД-4, составит 10 х 100 = 1000 раз.

Однако общее увеличение еще не характеризует всех возможностей микроскопа. Увеличенное изображение может оказаться как четким, так и нечетким.

Отчетливость получаемого изображения определяется разрешающей способностью микроскопа, т.е. той наименьшей величиной объектов или их деталей, которые можно увидеть с его помощью. Следовательно, чем меньше размер частицы, видимой в микроскоп, тем больше его разрешающая способность.

Пользуясь биологическим микроскопом, можно рассмотреть предмет размером не менее 0,2мкм ¹.

Порядок работы со светопольным микроскопом

Обращение с микроскопом требует навыков, поэтому, приступая к работе с ним, необходимо усвоить основные правила пользования микроскопом.

1. На рабочем столе микроскоп БИОМЕД помещают ручкой от себя, на расстоянии 3…5 см от края стола. Перед началом работы следует осторожно мягкой тканью, пропитанной капелькой этилового спирта, потереть фронтальные линзы объективов.

2. Устанавливают правильное освещение поля зрения микроскопа. Для этого, включают осветитель. С помощью револьвера ставят в рабочее положение объектив с увеличением 4х. Легкий упор и звук щелчка пружины револьвера свидетельствует о том, что объектив установлен по оптической оси. Макрометрическим винтом опускают объектив на расстояние 0,5…1,0 см от предметного столика. Полностью открывают ирисовую диафрагму и поднимают конденсор вверх до упора. При правильной установке поле зрения микроскопа будет иметь форму хорошо и равномерно освещенного круга. При микроскопировании окрашенных препаратов верхняя линза конденсора должна находиться на уровне предметного столика. При просмотре неокрашенных препаратов желаемую степень освещения регулируют, слегка опустив конденсор и прикрыв ирисовую диафрагму.

Правила работы с иммерсионным объективом.

На препарат (лучше фиксированный и окрашенный) наносят каплю иммерсионного масла. С помощью держателя препарата (6) закрепляют препарат на предметном столике. Поворачивают револьвер и устанавливают по центральной оптической оси иммерсионный объектив с увеличением 100х. Конденсор поднимают вверх до упора. Ирисовую диафрагму конденсора открывают полностью. Глядя сбоку, предметный столик с помощью макрометрического винта поднимают до погружения объектива в масло, почти до соприкосновения его фронтальной линзы с предметным стеклом препарата. Это нужно проводить очень осторожно, чтобы фронтальная линза объектива не получила повреждения. Смотрят в окуляр, очень медленно вращают макрометрический винт от себя и, не отрывая объектив от масла, опускают тубус до появления грубого изображения. При этом следует помнить, что свободное рабочее расстояние в иммерсионном объективе равно 0,09…0,10 мм. Затем точную фокусировку производят микрометрическим винтом. Рассматривают в препарате несколько полей зрения, передвигая столик с помощью ручки перемещения препарата (16).

По окончании работы с иммерсионным объективом опускают предметный столик, снимают препарат и осторожно протирают фронтальную линзу объектива сначала сухой мягкой хлопчатобумажной салфеткой, затем той же салфеткой, но смоченной капелькой спирта.

————————————————————————————————-

¹ Микрометр – тысячная доля миллиметра (0,001 мм)

Оставлять масло на поверхности линзы нельзя, так как оно способствует оседанию пыли, высыхает и со временем может привести к повреждению оптики микроскопа. Препарат освобождают от масла сначала кусочком фильтровальной бумаги, затем обрабатывают стекло бензином или спиртом.

Для микроскопирования микроорганизмов необходимо соответствующим образом приготовить препарат. Препараты обычно готовят на предметном стекле. Нередко требуется еще и покровное стекло. Все стекла должны быть совершенно чистыми и обезжиренными.

studfile.net

Основные технические характеристики микроскопа — Студопедия.Нет

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ ОРЛОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ТЕХНИЧЕСКИЙ университет Факультет пищевой БИОТЕХНОЛОГИИ и ТОВАРОВЕДЕНИЯ   Кафедра «Технология и товароведение продуктов питания»    

Л.А.Самофалова

 

Методические указания

по выполнению практических работ

 

Дисциплина – «Введение в специальность»

Специальность — 240902 – «Пищевая биотехнология»

 

Печатается по решению редакционно-

Издательского совета ОрелГТУ

Орел 2008

Автор: кандидат технических наук, доцент кафедры «Технология и товароведение продуктов питания» Л.А. Самофалова

 

Рецензент: кандидат технических наук, доцент кафедры «Технология и товароведение продуктов питания» Орловского государственного технического университета А.П. Симоненкова

 

Методические указания предназначены для студентов специальности  240902 – «Пищевая биотехнология» очной формы обучения. Включают практические занятия по дисциплине «Введение в специальность». В ходе проведения работы студенты должны овладеть навыками работы с микроскопами, изучить строение животной и растительной клетки, бактерий, вирусов, грибов, ознакомиться с понятиями пищевой и биологической ценности продуктов питания, формулой сбалансированного питания, овладеть расчётами биологической и энергетической ценности по белковому составу важнейших продуктов питания.                                                    

 

 

Редактор <__________________>

Технический редактор <инициалы, фамилия>

 

Орловский государственный технический университет

Лицензия ИД №00670 от 05.01.2000 г.

 

Подписано к печати <дата>. Формат 60х84 1/16.

Печать офсетная. Уч. печ. л. <6,1>. Усл. печ. л. <число>. Тираж <число> экз.

Заказ № <число>

Отпечатано с готового оригинал-макета

на полиграфической базе ОрелГТУ,

г. Орел, ул. Московская, 65.

 

 

ã ОрелГТУ, 2008г.

Тема 1. ИЗУЧЕНИЕ УСТРОЙСТВА МИКРОСКОПА, ТЕХНИКА МИКРОСКОПИРОВАНИЯ

1.1. Цель работы:

— ознакомить студентов с принципами работы и устройством светового и электронного микроскопов;

— познакомится с принципами работы микроскопов для различных областей научной и производственной деятельности;

— изучить правила работы с микроскопами.

 

Общие теоретические сведения

Изучение невидимых невооружённым клеток микроорганизмов, размеры которых не превышают десятков и сотен микрометров (1 мкм = 0,001 мм), возможно только с помощью микроскопов. Эти приборы позволяют получать увеличение в сотни (световые микроскопы) и десятки-сотни тысяч раз (электронные микроскопы) изображение исследуемых объектов.

С помощью микроскопа изучают морфологию и строение клеток микроорганизмов, их рост и развитие, проводят первичную идентификацию исследуемых организмов, ведут наблюдение за характером развития микробных ценозов (сообществ) в почве и других субстратах. Микроскоп может быть использован в различных областях медицины (гематологии, дерматологии, урологии, пульмонологии и т.д.) при диагностических исследованиях в клиниках и больницах.

 

Устройство микроскопа

Микроскоп состоит из двух частей: механической (подсобной) и оптической (главной).

Механическая часть состоит из штатива, предметного столика и тубуса.

К штативу примыкает коробка механизмов, система зубчатых колёс для регуляции положения тубуса. Система приводится в движение вращением макрометрического и микрометрического винтов.

Макрометрический винт (кремальера, зубчатка, макровинт) служат для предварительной ориентировочной установки изображения рассматриваемого объекта на фокус.

Микрометрический винт (микровинт) используют для последующей более чёткой установки на фокус. При полном повороте микрометрического винта тубус передвигается на 0,1 мм (100 мкм). При вращении винтов по часовой стрелке он опускается по направлению к препарату, при вращении против неё от препарата.

 На предметный столик помещают препарат с объектом исследования. Предметный столик вращается и перемещается во взаимно перпендикулярных плоскостях с помощью винтов. В центре него находится отверстие для освещения препарата снизу лучами света, направляемыми зеркалами микроскопа. На столике вмонтированы два зажима (клеммы) – пружинящие металлические пластинки, предназначенные для закрепления препарата.

Тубус – оправа, в которую заключены элементы оптической системы микроскопа. К нижней его части прикрепляют револьвер (объективодержатель) с гнёздами для объективов. Современные модели микроскопов имеют наклонный тубус с дугообразным тубусодержателем, что обеспечивает горизонтальное положение предметного столика.

Оптическая часть микроскопа состоит из основного оптического узла, (объектив и окуляр) и вспомогательной осветительной системы (зеркало и конденсор). Все части оптической системы строго центрированы в отношении друг друга. Во многих современных микроскопах зеркало и конденсор заменены вмонтированным в прибор регулируемым источником света.

Осветительная система находится под предметным столиком. Зеркало отражает падающий на него свет в конденсор. Одна сторона зеркала плоская, другая – вогнутая. При работе с конденсором необходимо пользоваться только плоским зеркалом. Вогнутое зеркало применяют при работе без конденсора с объективами малых увеличений.

Конденсор, состоящий из 2-3 короткофокусных линз, собирает лучи, идущие от зеркала, и направляет их на объект. Конденсор необходим, прежде всего,  при работе с иммерсионной системой. Линзы конденсора вмонтированы в металлическую оправу, соединённую с зубчатым механизмом, позволяющим перемещать конденсор вверх и вниз специальным винтом. Для регулирования интенсивности освещения в конденсоре есть ирисовая (лепестковая) диафрагма, состоящая из стальных серповидных пластинок. Для получения более чёткого изображения исследуемого объекта важно отрегулировать степень раскрытия диафрагмы.

Под конденсором располагается кольцевидный держатель для светофильтров (синее и белое матовые стёкла). При работе с искусственным источником света светофильтры создают впечатление дневного освещения, что делает микроскопирование менее утомительным для глаз.

Объектив – наиболее важная часть микроскопа. Это многолинзовая короткофокусная система, от качества которой зависит в основном изображение объекта. Напужная линза обращена плоской стороной к препарату, называется фронтальной, она обеспечивает увеличение. Остальные линзы в системе объектива выполняют преимущественно функции коррекции оптических недостатков, возникающих при исследовании объектов.

Один из таких недостатков явление сферической аберрации. Оно связано со свойством линз неравномерно преломлять периферические и центральные лучи. Первые обычно преломляются в большей степени, чем вторые и поэтому пересекаются на более близком расстоянии к линзе. В результате изображение точки приобретает вид расплывчатого пятна.

Хроматическая аберрация возникает при прохождении через линзу пучка лучей с различной длиной волны. Преломляясь по-разному, лучи пересекаются не в одной точке. Сине-фиолетовые лучи с короткой длиной волны преломляются сильнее, чем красные с большей длиной волны. Вследствие этого у бесцветного объекта появляется окраска.

Существуют объективы — ахроматы, устраняющие сферическую аберрацию и частично хроматическую. Они содержат до 6 линз и частично коррегируют первичный спектр (жёлто-зелёную часть спектра), но не устраняют вторичного спектра. Апохроматы – объективы, устраняющие хроматическую аберрацию и для вторичного спектра. В их составе может быть до 12 линз.

Объективы бывают сухие и погружные (иммерсионные). При работе с сухими объективами между фронтальной линзой объектива и объектом находится воздух. Оптический расчёт иммерсионных объективов предусматривает их работу при погружении фронтальной линзы объектива в жидкую однородную среду. При работе с сухим объективом вследствие разницы показателя преломления стекла (1,52) и воздуха 1,0 часть световых лучей отклоняется и не попадает в глаз наблюдателя. При работе с иммерсионным объективом необходимо между покровным стеклом и линзами объектива поместить кедровое масло, показатель преломления которого близок к показателю преломления стекла.

Объективы различают по их увеличению, соответствующие обозначения наносят на их оправу. Каждый объектив характеризуется определённой величиной рабочего расстояния в мм.

 У объективов с малым увеличением расстояние от фронтальной линзы объектива до препарата больше, чем у объективов с большим увеличением. В зависимости от этого необходимо строго следить, каким винтом (макрометрическим или микрометрическим) следует пользоваться при фокусировке объектива. Так, объективы с увеличением 8х, 40x и 90х имеют соответственно рабочие расстояния 13,8; 0,6; 0,12 мм. Иммерсионный объектив имеет рабочее расстояние до объектива 0,12 мм, поэтому его нередко называют «близоруким». У объективов малых увеличений не только большие рабочие расстояния, но и большие поля зрения. В связи с этим, рекомендуется исследование препарата начинать с небольшого увеличения. Объективы рассчитаны на работу с покровным стёклом толщиной 0,17±0,1 мм. Если стекло не соответствует стандарту, необходимо регулировать объектив вращением кольца коррекционной оправы, которой оснащены современные высококачественные объективы. При отсутствии такой оправы сферическую аберрацию, вызываемую покровным стеклом. Следует устранить, поднимая или опуская тубус микроскопа.

 Одна из важных характеристик объектива – разрешающая способность, определяющая в конечном итоге разрешающую способность микроскопа в целом. Она определяет наименьшее расстояние между двумя точками на препарате, которые будут видны раздельно. Разрешающая способность объектива зависит от его числовой апертуры и длины волны света, при которой идёт наблюдение объекта. Числовая апертура объектива характеризует светособирательную способность его.

Окуляр является как бы непосредственным продолжением человеческого глаза и представляет собой двояковыпуклую линзу. Окуляр состоит из двух линз – глазной (верхней) и полевой или собирательной (нижней), заключённых в металлическую оправу. Назначение полевой линзы – собирать лучи, идущие от объектива, таким образом, чтобы они проходили через маленькое отверстие главной линзы. Назначение окуляра — в прямом мнимом увеличении действительного обратного и увеличенного изображения, которое даёт объектив. Рабочее увеличение окуляров колеблется в пределах от 4х до 15х.

При длительной работе с микроскопом следует пользоваться двойными окулярами  — бинокулярной насадкой. Бинокулярные насадки часто имеют собственное увеличение (около 1,5х) и снабжены коррекционными линзами. Корпуса насадки могут раздвигаться в пределах 55-75 мм в зависимости от расстояния между глазами наблюдателя.

 

Задание:

Пользуясь приложением 1, 2 зарисовать микроскоп,  выписать определение составных частей светового микроскопа, выписать правила его настройки.

Контрольные вопросы:

1. Каково назначение микроскопов?

2.Перечислите основные типы микроскопов

3.Какие физические законы в основе устройства микроскопа?

4.Перечислите основные части микроскопа

5.Как устроена механическая частьмикроскопа?

6. Как устроена оптическая часть микроскопа?

7. Как устроен объектив? Назовите типы объективов, что такое аберрация объектива?

8. Что такое «разрешающая способность микроскопа»?

9. Каково назначение и устройство окуляра? Назовите рабочее увеличение окуляров

10. Для чего нужны бинокулярные насадки?

 

Основные технические характеристики микроскопа.

Качество микроскопа определяется его увеличительной и разрешающей способностями.

Коэффициент увеличения микроскопа определяется произведением увеличения окуляра (К) и увеличения объектива (V) и выражается формулой:

                                       D=KV                                               (1)

Теоретически микроскоп может дать увеличение 2000х и более раз. Однако, следует различать полезное и бесполезное увеличение микроскопа. Пределы полезного увеличения в обычно используемых микроскопах достигают 1400х. При превышении границ полезного увеличения возникают дифракция и другие явления, обусловленные волновой природой света, которые незаметны в пределах полезного увеличения, но приводят к оптическим ошибкам в зоне бесполезных увеличений. Увеличение, которое даёт возможность рассматривать объект под предельным углом зрения и есть полезное увеличение. Оно обычно превышает числовую апертуру объектива в 500-1000 раз. Например, для объектива с увеличением 40х, имеющего числовую апертуру 0,65, полезное увеличение составляет 325-650х. С помощью этого увеличения можно различить все структуры, разрешаемые данным объективом. Поэтому для объектива 40х следует брать окуляр 15х, чтобы получить увеличение в пределах полезного. Какие бы более сильные окуляры не применялись, более тонких деталей структур выявить не удаётся. Более того, применение окуляра с большим увеличением приведёт к уменьшению количества света, попадающего в глаз наблюдателя, и возрастанию искажений, вызываемых дефектами зрения.

Если объектив имеет увеличение 90х (числовая апертура 1,25), то полезное увеличение для него равно х1250. Следовательно, и здесь не надо применять окуляры с увеличением более 15х, чтобы не выходить за пределы полезного увеличения. Бесполезные увеличения могут принести пользу лишь при подсчёте мельчайших частиц в поле зрения, если при этом не требуется рассмотрения их структуры.

Разрешающая способность микроскопа. Эта характеристика особенно важна при исследовании микрообъектов и их структур.

Если увеличительная способность микроскопа зависит от объектива и окуляра, то разрешающая способность определяется главным образом объективом и конденсором.

Расчёт разрешающей способности микроскопа проводят по формуле:

                                                  d=λ/2A                                           (2)

Максимальная разрешающая способность светового микроскопа 0,2 мкм.

Примеррасчёта разрешающей способности микроскопов.

Если увеличение объектива 40х, А= 0,65, то

d = 0,55мкм/(2 х 0,65) = 0,42 мкм

Если V объектива 90х, А = 1,25, то

d = 0,55мкм/(2 х 1,25) = 0,22 мкм

Разрешающая способность микроскопа тем лучше, чем меньше абсолютная величина d.

 

Задание:

1)Определить какой окуляр необходимо выбрать для объектива 40х, апертура 0,65; 90х, апертура 1,25;

2) Пользуясь справочным руководством по микроскопам МИКМЕД-1 выписать  размеры объективов, апертуру, выбрать окуляры с полезным увеличением.

 

Контрольные вопросы:

1. Что такое «увеличительная способность микроскопа», как её определить?

2. Что такое «полезное « и «бесполезное» увеличение микроскопа?

3. Как определить разрешающую способность микроскопа? Какова максимальная разрешающая способность светового микроскопа?

4. Как построен окуляр, назовите его главные части?

5. Каково назначение и как построена бинокулярная насадка?

 

Работа с микроскопом.

Основные прави­ла работы с микроскопом. Место для микроскопа выбирают подальше от прямого солнечного света. Работа на столе с темной поверхно­стью меньше утомляет глаза. Лучше смотреть в окуляр левым глазом, не закрывая правого.

В случае работы с бинокулярной насадкой сначала регулируют расстояние между окулярами в соответствии с расстоянием между глазами наблюдателя так, чтобы поля зрения обоих окуляров слились в одно.

Переносить микроскоп необходимо двумя руками: одной держать штатив, другой — основание микроскопа. Следует предохранять микроскоп от толчков, соприкос­новения с сильнодействующими веществами типа кис­лот, щелочей. Не рекомендуется вынимать окуляр из трубы, чтобы не загрязнять пылью трубу и объективы. Во время работы желательно защищать микроскоп от дыхания, так как конденсация паров ведет к его порче.

Линзы должны быть всегда чистыми. Микроскоп сле­дует хранить в чехле. Нельзя касаться пальцами опти­ческих поверхностей.

Работа с иммерсионной системой мик­роскопа. При работе с иммерсионным -объективом (У=90х; А=1,25) необходимо установить зеркало плос­кой стороной и поднять конденсор.

Каплю иммерсионной жидкости (кедрового масла) наносят на препарат, не размазывая ее по стеклу. По­гружать в иммерсионную жидкость можно только им­мерсионные объективы (не сухие).

Глядя сбоку на предметное стекло, опускают объ­ектив до поверхности масляной капли. Далее, глядя в окуляр, опускают объектив осторожно при помощи мак­ровинта, следят при этом за появлением изображения, а затем, когда оно появится, пользуются микровинтом. Если изображение нерезкое, тусклое или плывет, что-то сделано неправильно: загрязнена фронтальная линза объектива, мешают пузырьки воздуха в масле, случай­но закрыта диафрагма, сдвинута лампа или зеркало. Причину некачественного изображения надо устранить.

По окончании работы поднимают тубус, снимают препарат и осторожно протирают фронтальную линзу объектива хлопчатобумажной салфеткой, смоченной очи­щенным бензином.

Иммерсионную жидкость (кедровое масло) рекомен­дуют хранить в специальных двухкамерных масленках. В наружную камеру наливают ксилол или очищенный бензин для очистки объективов от масла, во внутрен­нюю — кедровое масло. Камеру с маслом герметично закрывают пробкой, в которую вставляют стеклянную палочку для нанесения капли масла на препарат.

Установка освещения. Удобнее пользоваться искусственным источником света — он более постоянен, чем дневной, лучше освещает объект, что важно при работе с сильными объективами (90х).

Освещение препарата по Келеру. Рациональное ос­вещение объекта достигается при использовании осве­тителей типа ОИ-7, ОИ-9 и ОИ-19. Осветитель с низко­вольтной лампочкой устанавливают на расстоянии 25-30 см от микроскопа с помощью соединительной планки (крестовины). Полевая диафрагма осветителя открыта; используют объектив х8, зеркало с плоской поверхно­стью, конденсор поднят.

Препарат в поле зрения микроскопа фокусируют при открытых диафрагмах осветителя и конденсора. Из ос­ветителя удаляют матовое стекло. Полевую диафрагму осветителя закрывают. На зеркало помещают белый лист бумаги для получения четкого изображения нити лампы осветителя.

Движением зеркала перемещают световой поток в поле зрения микроскопа. Фокусируют препарат. Опус­кают конденсор до тех пор, пока изображение (проек­ция) краев полевой диафрагмы осветителя в плоскости препарата не станет четким. Центрируют легкими дви­жениями зеркала изображение отверстия диафрагмы. Наблюдая в микроскоп, постепенно открывают полевую диафрагму осветителя так, чтобы освещенный круг ее заполнил все поле зрения микроскопа; лучше, если он немного выйдет за пределы поля зрения.

Положение осветителя, зеркала, конденсора микро­скопа в дальнейшем не менять.

Установку света по Келеру рекомендуют также ипри темнопольной и фазово-контрастной микроскопии.

Измерение объектов. Измерять клетки мик­роорганизмов (в мкм) можно на фиксированных и жи­вых препаратах с помощью шкалы окулярного микро­метра — окулярной линейки. У кокков определяют диа­метр клеток, у других форм бактерий — длину и ши­рину.

Окулярная линейка — круглая стеклянная пластин­ка, посредине которой нанесена шкала делений (50 или 100 делений) общей длиной 5 мм. Вывинчивают линзу окуляра и окулярную линейку вставляют шкалой вверх на диафрагму окуляра. Ставят препарат и определяют, скольким делениям линейки соответствует длина и ши­рина клетки. Измеряют не менее 10-20 клеток.

Чтобы рассчитать истинные размеры клеток, определяют цену деления окулярной линейки с помощью объектного микрометра, который представляет собой металлическую пластинку в форме предметного стекла с отверстием в центре; в отверстие помещено стекло с линейкой (шкала из 100 делений). Общая длина шкалы объектного микрометра 1 мм, величина одного деления 10 мкм (0,01 мм).

Объектный микрометр помещают вместо препарата на столик микроскопа, фокусируют изображение линей­ки при малом увеличении, затем перемещают в центр поля и меняют объектив на тот, при котором измеряли клетки. Перемещая столик микроскопа и поворачивая окуляр, устанавливают объектный и окулярный микро­метры так, чтобы их шкалы были параллельны и одна перекрывала другую. Определение цены деления оку­лярного микрометра проводят по принципу нониуса, т. е. совмещают одну из черт шкалы окулярного мик­рометра с чертой объектного микрометра и находят сле­дующее совмещение. Допустим, в двух делениях объект­ного микрометра (20 мкм) умещается пять делений окулярного микрометра, тогда одно деление окулярного микрометра при данном увеличении равняется 4 мкм (20:5).

Зная, скольким делениям окулярной линейки соот­ветствует длина и ширина изучаемых клеток, умножа­ют цену деления окулярного микрометра на эти числа. Вычисленные значения цены делений линейки справед­ливы только для данной системы окуляр — объектив.

 

Задание:

Согласно правилам установить световой микроскоп, фокусировать препарат. Отрегулировать положение осветителя, зеркала, конденсора.

Контрольные вопросы:

1. Где должен устанавливаться микроскоп?

2. Как устанавливается бинокулярная насадка?

3. Каковы меры предосторожности при работе с микроскопом?

4. Назовите правила работы с иммерсионной системой.

5. Как проводится установка освещения по Келеру?

Микроскопия в тёмном поле

В основе метода лежит явление Тиндаля — освеще­ние объекта косыми лучами света. Эти лучи, не попадая в объектив, остаются невидимыми для глаза, поэтому поле зрения выглядит темным. В то же время оптиче­ски неоднородные клетки, находящиеся в поле зрения и попадающие в сферу прохождения лучей, отклоняют их в такой степени, что лучи попадают в объектив. По­скольку лучи света идут именно от объектов, наблюда­тель видит их в темном поле интенсивно светящимися.

Темное поле зрения можно создать в светооптическом микроскопе, заменив обычный конденсор темнопольным и применив источник сильного света. Однако, эффект тёмного поля может быть достигнут только в том случае, если апертура конденсора превышает на 0,2—0,4 единицы апертуру объектива. Для исследова­ния в темном поле рекомендуют конденсор с апертурой около 1,2 и объективы с апертурой 0,65—0,85. Важно обращать внимание на толщину предметных (0,8— 1,2 мм) и покровных (0,17 мм) стекол, толщину пре­парата (в воде) и чистоту используемых стекол. Чем толще препарат и чем больше в нем посторонних ча­стиц, преломляющих световые лучи, тем менее контраст­но получаемое изображение, так как каждая частица, отражая лучи, освещает поле зрения.

Метод используется при исследовании живых кле­ток микроорганизмов. Особенно он ценен для функцио­нально-морфологического изучения крупных объектов типа дрожжей. Цитоплазма дрожжевых организмов (при условии яркого источника света и хорошего апо-хроматического иммерсионного объектива) слабо и рав­номерно опалесцирует. На ее фоне четко различаются черные, оптически пустые вакуоли. Капли жира выде­ляются как сильно блестящие гранулы. Протопласт погибающих клеток опалесцирует молочно-белым цве­том.

 

Контрольные вопросы:

1. В каких случаях применяется микроскопия в тёмном поле?

2. Чем отличается конструкция тёмнопольного микроскопа от обычного светового?

3. Какой конденсор и какие объективы применяют в тёмном поле?

 

studopedia.net

Микроскопы. Как правильно выбрать микроскоп. Советы по уходу за микроскопом. Характеристики микроскопа. Полезные советы. Типы микроскопов.

 

Как правильно выбрать микроскоп? Ведь это не просто увеличительный прибор, а довольно сложное устройство. Для того чтобы выбрать микроскоп, необходимо иметь представление о его функциональности, строении и принадлежности.

 

Как выбрать микроскоп?

Как правильно выбрать микроскоп? Ведь это не просто увеличительный прибор, а довольно сложное устройство. Для того чтобы выбрать микроскоп, необходимо иметь представление о его функциональности, строении и принадлежности. В этой статье мы расскажем вам о важных характеристиках и основных параметрах выбора микроскопа.

Типы микроскопов:

Существует несколько типов микроскопа:

• микроскопы начального уровня,

• учебные,

• инструментальные стереоскопические или стереомикроскопы

• биологические,

• электронные ,

• цифровые

 Цифровые. Микроскопы начального уровня состоят из неподвижного столика, одного объектива, нескольких окуляров и зеркального осветителя. У них нет полноценного конденсора. Микроскопы для новичков дают увеличение около 200х.

Учебные микроскопы чаще всего приобретают для школьников. Они состоят из монокулярной и револьверной насадок с 3 объективами, простого конденсора, а также освещения или встроенного зеркальца. Учебные микроскопы дают увеличение до 650х.

Инструментальный стереоскопический микроскоп или стереомикроскоп предназначен для наблюдения за крупными объектами: бабочками, насекомыми, кристаллами, ювелирными изделиями и мелкими часовыми механизмами. Инструментальный стереоскопический микроскоп дает увеличение до 100х и объемное изображение благодаря отдельным оптическим системам для каждого глаза.

Биологический микроскоп состоит из подвижного предметного столика, сложного конденсора, встроенного освещения, иммерсионного объектива, монокулярной или бинокулярной, а также револьверной насадок с 3 объективами. Биологический микроскоп дает увеличение 1000-1500х. Биологический микроскоп с бинокулярными насадками дает плоское изображение.

Электронные микроскопы используют в лабораториях, так как они во многом превосходят оптические модели. Однако электронные микроскопы не подходят для использования в домашних условиях, так как очень сложно понять их устройство и принцип работы.

Цифровые микроскопы являются самыми функциональными и, соответственно, дорогими. Они позволяют передавать полученное изображение экран компьютера, а также подключать к ним фотоаппарат и видеокамеру. Полученные изображения можно хранить на цифровом носителе и корректировать. Цифровые микроскопы отличаются от электронных моделей своей компактностью и низким энергопотреблением.

Строение микроскопа:

Микроскоп состоит из тубуса, с расположенным в нем окуляром, и объектива. Тубус фиксируется на стойке, к которой крепится предметный столик и конденсор с осветителем. Осветлитель может представлять собой встроенную лампу или зеркальце. Электрический осветитель дает более яркое изображение по сравнению с зеркальным.

Конденсор предназначен для регулировки освещенности. В самых простых моделях микроскопах конденсор не предусмотрен, либо установлена одиночная линза с колесом диафрагм. Для удобства пользования рекомендуется приобрести микроскоп с подвижным предметным столиком.

Объектив:

Объектив крепится в револьверной головке микроскопа. Это позволяет устанавливать сразу 3-4 объектива и быстро менять увеличение. В микроскопах начального уровня предусмотрен только один объектив. Увеличение в таком устройстве можно менять посредством замены окуляров.

Объективы бывают безыммерсионные (сухие), с водной или масляной иммерсией. Иммерсия позволяет существенно увеличить разрешение объектива. Иммерсионные объективы обычно дают увеличение от 40 и более крат. Для масляной иммерсии используется кедровое или специальное синтетическое масло, а для водной – дистиллированная вода.

Для иммерсионных объективов существует своя маркировка. Так, обозначение МИ, Oil и черное кольцо на оправе объектива приняты для масляной иммерсии. Индексы ВИ, W и белое кольцо на объективе означают, что объектив с водной иммерсией. Если на объективе микроскопа отсутствует маркировка иммерсии, значит, объектив сухой.

По типу оптической коррекции объективы делятся на ахроматы, апохроматы, планахроматы, планапохроматы и семипланаты. Хроматическая разность увеличения и кривизна поля у объективов ахроматов не исправлены, поэтому изображение по краям поля зрения получается размытым. В маркировке объектива не указывается код оптической коррекции.

У объективов апохроматов исправлена только хроматическая аберрация, а хроматическая разность увеличения и кривизна поля зрения нет. В маркировке объектива указывается код оптической коррекции АПО, APO.

У объективов планахроматов полностью исправлены кривизна поля, хроматическая аберрация и разность увеличения. Этот объектив используется для малых увеличений, так как дает резкое изображение по всему полю. В маркировке объектива указывается код оптической коррекции ПЛАН, PL, Plan.

У объективов планапохроматов полностью исправлена хроматическая аберрация. Они также характеризуются плоским полем и откорректированной хроматической разностью увеличений. В маркировке объектива указывается код оптической коррекции ПЛАН-АПО, Plan-apo.

У объективов семипланатов (Semi-Plan) параметры оптической коррекции аберрации находятся между ахроматами и планахроматами. Также у них уменьшена кривизна поля. В маркировке объектива указывается код оптической коррекции SP.

Если вы хотите наблюдать через микроскоп крупные объекты, то тогда вам следует приобрести объектив с небольшим увеличением и кодом коррекции ПЛАН, PL или Plan. Такой объектив дает резкое изображение по всему полю зрения. Если вы собираетесь делать снимки через микроскоп, то необходимо выбирать объектив с полной коррекцией хроматической аберрацией, коррекцией поля и хроматической разностью увеличений.

Маркировка объективов:

На оправе объектива указывается увеличение объектива, а через дробь – числовая апертура NA, которая обозначает максимально полезное увеличение, а также показывает, какое разрешение имеет объектив. На объективе иногда также указывается длина тубуса микроскопа и толщина покровного стекла, с которыми объектив будет работать со штатным увеличением.

 

Увеличение:
 

Увеличение микроскопа зависит от параметров объектива и окуляра, измеряется в кратах (х). Увеличение рассчитывается по формуле: увеличение окуляра умножить на увеличение объектива. Увеличение микроскопа непосредственно зависит от увеличения объектива. Увеличение объектива, в свою очередь, бывает малым (до 10х), средним (до 50х), большим (более 50х) и сверхбольшим (более 100х). Увеличение микроскопа может достигать 2000х.

У исследовательских микроскопов увеличение окуляра равно 10х, а увеличение объективов составляет 4-100х. На увеличение микроскопа также влияет его конструкция. Для ребенка подойдет микроскоп с увеличением до 200х, для школьника или новичка – с увеличением 400х, а для знатока – с увеличением 1500-2000х.

Разрешающая способность:

Кроме увеличения микроскопа есть еще одна важная характеристика, которая отвечает за четкость и качество изображения, разрешающая способность. Разрешающая способность зависит от конденсора и объектива и вычисляется по формуле: длину световой волны делить на 2 числовые апертуры. Чем больше апертура объектива, тем выше разрешающая способность микроскопа.

Пределом разрешения является минимальное расстояние, при котором все точки четко видны. Максимальная разрешающая способность оптического микроскопа составляет 0,2мкм. Существует также полезное увеличение микроскопа, при котором объект наблюдают под предельным углом зрения. Максимальное полезное увеличение непосредственно зависит от числовой апертуры объектива, увеличенной в 500-1000 раз.

Числовая апертура сухих объективов равна 1,0, соответственно, максимальное полезное увеличение микроскопа составляет 1000х. Числовая апертура иммерсионных объективов равна 1.25, поэтому максимальное полезное увеличение микроскопа составляет 1250х. Как меньшее, так и большее увеличение микроскопа считается бесполезным, так как не даст четкости изображения, а, наоборот, сделает его неясным и расплывчатым.

Окуляры:

Окуляры бывают 3 типов: монокулярные, бинокулярные и тринокулярные. Монокулярные насадки оснащены только одним окуляром для одного глаза. Бинокулярные насадки имеют по одному окуляру на каждый глаз. Тринокулярные насадки состоят из бинокулярной и монокулярной окуляров.

Для школьных микроскопов предназначены простые окуляры системы Гюйгенса, с указанием на оправе только их увеличение. У этих окуляров небольшое поле зрения и отсутствует коррекция хроматизма. Компенсационные окуляры имеют на оправе соответствующую маркировку К. Такие окуляры подходят для микросъемки цифровыми фотоаппаратами. Производят несколько видов компенсационных окуляров, в том числе и широкоугольные с маркировкой WF.

Измерительные окуляры со шкалой предназначены для точного измерения размеров наблюдаемого объекта. Такие окуляры комплектуются сеткой, при помощи которой измеряется площадь объекта наблюдения.

Учебные микроскопы идут в комплекте с окуляром с указателем, который представляет собой специальную съемную иглу. Посредством этой иглы можно указать на конкретную часть наблюдаемого объекта.

Полезные советы:

При выборе микроскопа обратите внимание на его эргономичность, чтобы глаза не уставали даже после долгих исследований. Обратите внимание на четкость, контрастность и насыщенность изображения. Если вы выбираете бинокулярный микроскоп, то проверьте регулировку расстояния между зрачками.

Лучше отдавать предпочтение подвижному предметному столику, так как он регулируется микрометрическими винтами и позволяет передвигать объект без помощи рук. В случае же со статичным столиком, объект придется двигать вручную.

Если вы приобретаете микроскоп с опцией подключения к камере, то к нему должен прилагаться специальный фото адаптер, а также набор окуляров и предметные стекла. Обратите внимание на качество всех деталей микроскопа, особенно объективов и окуляров.

Микроскоп должен быть удобным в эксплуатации и ремонте, а также подлежать детальной настройке. При выборе микроскопа проверьте прочность крепления тубуса к стойке. При покупке микроскопа лучше отдать предпочтению устройству с электрическим освещением, чем с зеркальными осветителями.

При выборе микроскопа отдавайте предпочтение бинокулярному устройству для удобства при наблюдении за объектами, так как он позволяет увидеть изображение обоими глазами. Оптимальным вариантом будет микроскоп с револьверной головкой, так как в ней находится сразу несколько объективов, позволяющих менять увеличение предмета.
 

 

Советы по уходу за микроскопом:

Существует техника безопасности при работе с микроскопами любой марки и конструкции, а также общие правила эксплуатации, настройки и ухода за ними. Для того чтобы микроскоп служил долго и исправно, за ним необходим тщательный уход.

— Для защиты микроскопа от попадания на него пыли, храните его в полиэтиленовом чехле или под стеклянным колпаком. Если вы не пользуетесь микроскопом, то желательно убрать его в ящик или шкаф. Берегите микроскоп от механических повреждений, а при переносе, одной рукой придерживайте штатив устройства, а другой – его основание.

— Проверяйте прочность крепления объективов в гнезде револьверного устройства. Следите, чтобы линзы объективов, окуляров и конденсора не соприкасались с различными реактивами. Нельзя снимать бинокулярную насадку, а также прикасаться к любой стеклянной поверхности пальцами рук, особенно, тубусной линзы, чтобы не оставить жирные следы.

— Нельзя снимать металлический корпус объектива и разбирать его. Держите объективы опущенными, когда вы не пользуетесь микроскопом. Следите, чтобы они не касались предметного столика. Перед началом или после работы при необходимости следует протирать объективы, окуляры и конденсоры микроскопа.

— Дважды в год необходимо чистить и смазывать металлические части микроскопа силиконовой смазкой. Микроскоп нужно ставить только на прочную ровную поверхность, чтобы он не упал. Держите микроскоп подальше от воды в сухом прохладном месте при температуре +10 градусов, чтобы защитить его от образования плесени и коррозии.

— Время от времени осматривайте линзы на предмет пыли. Если на них скопилась пыль, то ее удаляют мягкой кисточкой, смоченной в эфире. Нельзя надавливать на линзы во время их чистки, так как можно их поцарапать, даже если вы пользуетесь специальными салфетками. При сильном загрязнении линз их следует протереть чистой полотняной или батистовой тряпочкой, слегка смоченной в чистом бензине или эфире.

— Для удаления масла с объектива микроскопа используют специальную жидкость и салфетки. После окончания работы иммерсионный объектив необходимо почистить специальным набором. Объективы чистят ватной палочкой или тампоном, смоченным в спирте. Во время чистки объектива нельзя надавливать не него, иначе линзы могут выпасть из оправы.

— Особенно бережно выполняйте чистку конденсора, иначе из строя может выйти осветительная система микроскопа. Нельзя надавливать на линзу или сильно смачивать ее спиртовой смесью. Корпус конденсора со стороны осветителя продувается при помощи резиновой груши.

— Металлический штатив микроскопа очищают ватой, смоченной в спирте. Нельзя надавливать на корпус микроскопа. Для комплексной чистки микроскопа необходимо запастись специальным набором, который состоит из ваты, фланелевой салфетки, тряпочки для чистки линз, эфира, чистого спирта и заостренной на конце палочки.

Если правильно использовать микроскоп и следовать всем вышеперечисленным советам, то Ваш микроскоп прослужит Вам от 10 лет и дольше.

Желаем удачного выбора!

—————————————————————

progresmed.ru

5 разных типов микроскопов и их применение

Как и многие другие технологические устройства, микроскопы имеют очень долгую историю. Самые ранние микроскопы содержали простое увеличительное стекло с малой мощностью (до 10 раз). Их использовали для наблюдения за маленькими насекомыми, такими как блохи.

Ранние версии оптических микроскопов были разработаны в конце 15 века. Хотя изобретатель неизвестен, за эти годы было сделано несколько заявлений. Использование микроскопов для исследования органических тканей появилось только в 1644 году.

Сегодня у нас есть микроскопы, которые могут обеспечить разрешение в 50 пикометров с увеличением до 50 миллионов раз, что достаточно для наблюдения ультраструктуры различных неорганических и биологических образцов.

Современные микроскопы можно классифицировать по-разному. Один из способов сгруппировать их — это способ их взаимодействия с образцами для создания изображений. Основываясь на том же факторе, мы перечислили 5 основных типов микроскопов и их использование.

1. Оптические микроскопы

Оптические микроскопы являются наиболее распространенными микроскопами, которые используют свет, чтобы пройти через образец для генерации изображений. Они могут иметь очень простую конструкцию, хотя сложные оптические микроскопы направлены на повышение разрешения и контрастности образца.

В дальнейшем их можно подразделить на два типа: простые и сложные микроскопы. Простой микроскоп использует одну линзу (например, увеличительное стекло) для увеличения, в то время как сложные микроскопы используют несколько линз для увеличения образца.

Они часто оснащены цифровой камерой, поэтому образец можно наблюдать с помощью компьютера. Это позволяет провести глубокий анализ микроскопического изображения.

Оптические микроскопы могут обеспечивать увеличение до 1250 раз с теоретическим пределом разрешения 0,250 микрометров. Тем не менее, развитие сверхразрешенной флуоресцентной микроскопии в последнее десятилетие привело оптическую микроскопию в наноразмерность.

Варианты оптического микроскопа

1. Стереомикроскоп : предназначен для наблюдения образцов в 3D при небольшом увеличении.
2. Сравнительный микроскоп : используется для исследования бок о бок образцов.
3. Поляризационный микроскоп : используется в оптической минералогии и петрологии для выявления минералов и горных пород в тонких срезах.
4. Двухфотонный микроскоп : позволяет получать изображения живых тканей глубиной до 1 мм.
5. Инвертированный микроскоп : исследует образец снизу; обычно используется для металлографии и клеточных культур в жидкости.
6. Эпифлуоресцентный микроскоп : разработан для анализа образцов, содержащих флуорофоры.

Применение

Основные оптические микроскопы часто встречаются в классах и дома. Сложные широко используются в фармацевтических исследованиях, микробиологии, микроэлектронике, нанофизике и минералогии.

Они часто используются для исследования тканей с целью изучения проявлений заболеваний. В клинической медицине исследование биопсии или хирургического образца относится к гистопатологии.

2. Электронные микроскопы

Электронный микроскоп использует пучок ускоренных электронов для получения изображения образца. Точно так же, как оптические микроскопы используют стеклянные линзы, электронные микроскопы используют фасонные магнитные поля для создания систем электронно-оптических линз.

Поскольку длина волны электрона может быть намного короче, чем у фотонов, электронные микроскопы имеют более высокую разрешающую способность и увеличение, чем обычные оптические микроскопы. Они могут выявить структуры объектов размером с пикометр.

Первый электронный микроскоп, который превысил разрешение, достигнутое с помощью оптического микроскопа, был разработан немецким физиком Эрнстом Руской в ​​1933 году. С тех пор были сделаны многочисленные улучшения для дальнейшего улучшения увеличения и разрешения микроскопа.

Современные электронные микроскопы способны увеличивать образцы до 2000000 раз, однако они все еще полагаются на прототип Руска (разработанный в 1931 году) и его связь между разрешением и длиной волны.

Электронные микроскопы имеют некоторые ограничения: они дороги в изготовлении, обслуживании и должны быть размещены в стабильных средах, таких как системы подавления магнитного поля. Также объекты должны просматриваться в вакууме.

Современный просвечивающий электронный микроскоп | Предоставлено: Дэвид Морган из Кембриджа, Великобритания.

Два основных типа электронного микроскопа

1. Просвечивающий электронный микроскоп: используется для наблюдения за тонкими образцами, через которые могут проходить электроны, создавая проекционное изображение. Он может захватывать мелкие детали размером с колонку атомов.

В этом случае образец обычно представляет собой очень тонкий срез (<100 нанометров), и изображение создается в результате взаимодействия образца с электронами при прохождении пучка через образец.

Современные аппаратные корректоры могут помочь этому микроскопу достичь высокого разрешения в 50 пикометров с увеличением, превышающим 50 000 000 раз.

2. Сканирующий электронный микроскоп: генерирует изображения образца путем сканирования его поверхности сфокусированным пучком электронов. Электроны взаимодействуют с атомами в образце и генерируют сигналы, которые содержат данные о составе образца и топографии поверхности.

Поскольку этот тип микроскопии отображает только поверхность (не внутреннюю часть) образцов, он обеспечивает низкое разрешение изображения по сравнению с просвечивающей электронной микроскопией. Тем не менее, он может генерировать хорошее качество трехмерных изображений поверхности образца.

Вещи, которые вы можете наблюдать с помощью сканирующего электронного микроскопа, включают элементы на головке булавки, волосковые клетки внутреннего уха человека и поверхность глаза мухи-мухи.

Применение

Электронные микроскопы широко используются для изучения ультраструктуры различных неорганических и биологических образцов, таких как металлы, кристаллы, образцы биопсии, крупные молекулы, клетки и микроорганизмы.

Современные электронные микроскопы оснащены специальными цифровыми камерами и фрейм-грабберами для записи структуры образца и создания электронных микрофотографий.

Они часто используются в промышленных целях (для помощи в процессе производства) и в криминалистике (для предоставления доказательств в преступных и юридических целях).

3. Сканирующий зондовый микроскоп

Сканирующая зондовая микроскопия была открыта в 1981 году для изображения поверхности образца на атомном уровне. Он использует физический зонд для сканирования образца и формирования сильно увеличенных изображений.

Исходя из цели исследования, в сканирующей зондовой микроскопии используются разные методы.

Например, прибор может быть установлен в «режим постукивания», при котором кантилевер колеблется так, что наконечник периодически касается поверхности образца. Это в основном используется для изучения образцов с мягкими поверхностями.

В другом способе микроскоп может быть установлен в «режим контакта», при котором между острием кантилевера и поверхностью образца прикладывается постоянная сила. Этот режим быстро создает изображения поверхности.

В отличие от методов электронной микроскопии, образцы не требуют помещения в определенную вакуумную среду. Вместо этого они могут отображаться на воздухе при комнатном давлении и температуре или внутри жидкого реакционного сосуда. Однако, они часто не полезны для анализировать жидкост-жидкостные или твердотельные интерфейсы.

Современный сканирующий зондовый микроскоп

Распространенные типы сканирующих зондовых микроскопов

А) Атомно-силовой микроскоп: имеет разрешение порядка долей нанометра, что позволяет получать изображения практически любого типа поверхности, включая стекло, полимеры и биологические образцы.

B) Сканирующая оптическая микроскопия ближнего поля: может достигать производительности пространственного разрешения сверх классического дифракционного предела. Он может быть использован для изучения всех проводящих, непроводящих и прозрачных образцов.

C) Сканирующие туннельные микроскопы: могут достигать бокового разрешения 0,1 нм и глубины 0,01 нм. Образцы могут быть отображены в экстремальных условиях, при температурах от почти абсолютного нуля до более 1000 ° C.

Кроме того, сканирующий туннельный микроскоп был первым микроскопом, который использовал квантовые концепции , которые проложили путь к развитию квантового микроскопа запутывания и фотоионизационного микроскопа.

Применение

Сканирующие зондовые микроскопы используются в широком спектре естественных наук, включая медицину, клеточную и молекулярную биологию, физику твердого тела, химию полимеров и полупроводниковую науку и технику.

Например, в молекулярной биологии этот метод микроскопии используется для анализа структуры и механических характеристик белковых комплексов и сборок. В клеточной биологии он используется для определения взаимодействия между определенными клетками и различения нормальных клеток и раковых клеток на основе твердости клеток.

В физике твердого тела он используется для изучения взаимодействия между соседними атомами и изменений в расположении атомов посредством атомных манипуляций.

4. Сканирующие акустические микроскопы

Сканирующий акустический микроскоп измеряет изменения акустического импеданса с помощью звуковых волн. Он в основном используется для неразрушающей оценки, анализа отказов и выявления дефектов в недрах материалов, в том числе обнаруженных в интегральных микросхемах.

Этот тип микроскопа был впервые разработан в 1974 году в микроволновой лаборатории Стэнфордского университета. С тех пор были сделаны многочисленные улучшения для повышения его точности и разрешения.

Микроскоп непосредственно фокусирует звук от датчика в маленькой точке на образце. Звук, падающий на объекты, либо поглощается, либо рассеивается под разными углами. Эти рассеянные импульсы, распространяющиеся в определенном направлении, дают полезную информацию об образце.

Разрешение образца изображения либо ограничено шириной звукового луча (зависит от частоты звука), либо физическим разрешением сканирования.

В отличие от обычных оптических микроскопов, которые позволяют наблюдать поверхность образца, акустические микроскопы фокусируются на определенной точке и получают изображения из более глубоких слоев. Кроме того, они обеспечивают более точные результаты и увеличивают объем данных, сохраняя при этом целостность образца.

Сканирующий акустический микроскоп Sonix HS 1000

Применение

Многие компании используют этот тип микроскопии в аналитических лабораториях для определения качества своих электронных компонентов. Производители также используют его для контроля качества, квалификации поставщиков, тестирования надежности продукции, а также для исследований и разработок.

В биологии эти микроскопы предоставляют полезные данные о физических силах, удерживающих структуры в определенных формах, таких как эластичность клеток и тканей. Это чрезвычайно полезно при изучении процесса подвижности клеток (способность организма самостоятельно передвигаться, используя метаболическую энергию).

5. Рентгеновский микроскоп

Рентгеновские микроскопы генерируют увеличенные изображения объектов, используя электромагнитное излучение в мягком луче. Они способны выдавать 3D-изображение компьютерной томографии относительно больших образцов с высоким разрешением.

Для идентификации рентгеновских лучей, проходящих через образец, используется детектор с зарядовой связью. Поскольку рентгеновские лучи легко проникают сквозь вещество, микроскопы этого типа могут отображать внутреннюю часть образцов, непрозрачных для видимого света.

Современные рентгеновские микроскопы позволяют наблюдать различные образцы, в том числе те, которые имеют низкий контраст поглощения и более плотный материал, например керамические композиты. Чтобы достичь этого, микроскоп изменяет длину волны рентгеновского излучения, что увеличивает контраст или проникновение.

Его разрешение лежит между оптической микроскопией и электронной микроскопией. В отличие от традиционных электронных микроскопов, рентгеновские микроскопы могут отображать толстые биологические материалы в их естественном состоянии.

Рентгеновский микроскоп ZEISS Xradia 510 Versa

Применение

Рентгеновская микроскопия оказалась чрезвычайно полезной в области медицины и материаловедения. Он был использован для анализа структуры различных тканей и образцов биопсии.

В области материаловедения рентгеновские микроскопы могут определять структуру кристалла вплоть до размещения отдельных атомов внутри его молекул. Он также обеспечивает неразрушающий, неинвазивный метод поиска дефектов в трех измерениях.

new-science.ru