Реле рэс22 параметры: РЭС22 РФ4.523.023-05.02 (12В), Реле электромагнитное

Есть потребность?
Получите лучшую цену

Картирование эффектов стимуляции моторной коры на соматосенсорные ретрансляционные нейроны в таламусе крысы: прямые ответы и афферентная модуляция

Ключевые слова

VPL

Thalamus

Сенсорная модуляция

MI cortex

Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

Авторские права © 1990 Издано Elsevier Inc. Синапс с ретрансляционными клетками, нацеленными на среднюю височную область в пульвинарных и латеральных коленчатых ядрах

Abstract

Продолжаются значительные дебаты относительно таламических входов в среднюю височную область (MT) зрительной коры, которые обходят первичную зрительную кору (V1) и роль, которую они могут играть в остаточной зрительной способности после поражения V1.Предполагается, что две специфические ретиноталамические проекции на область MT проходят через медиальную часть нижнего легочного ядра (PIm) и кониоцеллюлярные слои дорсального латерального коленчатого ядра (LGN). Хотя ряд исследований продемонстрировал входы сетчатки в области таламуса, где наблюдались реле к области MT, связь между терминалами сетчатки и ретинальными клетками области MT не была установлена. Здесь мы исследовали прямые ретино-реципиентные области пульвинарного ядра мартышек ( Callithrix jacchus ) и LGN после бинокулярных инъекций антероградного индикатора, а также релейные клетки области MT в этих ядрах путем инъекции ретроградного индикатора в область MT.Было показано, что афференты сетчатки синапсируются с релейными клетками области МТ, что продемонстрировано совместной локализацией с синаптофизином синаптофизина с мембранным белком пресинаптических везикул. Мы также установили наличие прямых синапов афферентов сетчатки на ретинальных клетках области MT в пределах PIm, а также в кониоцеллюлярных слоях K1 и K3 LGN, тем самым подтверждая существование двух дисинаптических путей от сетчатки к области MT, которые обходят V1. .

Ключевые слова: примат, таламус, экстрастриарные области, нейрональная трассировка, V1, синапс, синаптофизин, кальций-связывающий белок

Введение

Согласно современным представлениям, доминирующий источник визуального ввода в среднюю височную область (MT , V5), экстрастриатная область «дорсального потока», происходит от первичной зрительной коры (V1), в частности, через магноклеточный ретиногенно-кортикальный путь (Born and Bradley, 2005).Однако есть также свидетельства более ранних физиологических исследований, что область MT получает негеникулостриатный вход (Beckers and Zeki, 1995).

На основании анатомических исследований два дисинаптических ретиноталамических пути были предложены для проецирования в область МТ у приматов. Один ретранслируется через медиальную часть нижнего легочного ядра (PIm) (например, сова-обезьяна, Lin and Kaas, 1980; белка и макака-резус, Cusick et al., 1993; макака, Adams et al., 2000), которая является реципиентом прямых проекций сетчатки (например,грамм. макака, Cowey et al., 1994; О’Брайен и др., 2001). Второй ретранслирует через кониоцеллюлярные слои LGN (например, сова-обезьяна, Stepniewska et al., 1999; макака, Sincich et al., 2004; Nassi and Callaway, 2006), которая является реципиентом прямого входа в сетчатку у приматов (например, macaque, Conley and Fitzpatrick, 1989; мартышка, Szmajda et al., 2008). Однако на сегодняшний день не существует доказательств прямой синаптической связи двух путей элементов.

Эти ретиноталамокортикальные пути к области МТ могут быть важными драйверами / модуляторами зрительного восприятия (Laycock et al., 2007), а также с учетом остаточной активности, наблюдаемой в отсутствие V1 у ряда видов, включая человека (макаки, ​​Rodman et al., 1989; Girard et al., 1992; мартышки, Rosa et al., 2000; человек, Бридж и др., 2008). Кроме того, была выдвинута гипотеза, что моносинаптическая ретрансляция через таламус в область MT может быть ответственна за раннее созревание этой области и ее «первичный» статус (Sincich et al., 2004; Bourne and Rosa, 2006).

Целью настоящего исследования было установить, существует ли прямая синаптическая связь между ретинофугальными и зональными ретрансляционными проекциями MT в пульвинарном ядре и LGN мартышек из Нового Света.Наш основной результат свидетельствует о том, что существуют небольшие, но четко определенные области синаптической совместной локализации с релейными клетками, меченными областью MT, как в PIm, так и в кониоцеллюлярных слоях LGN, демонстрируя, что область MT может принимать информацию сетчатки через две дисинаптические проекции. которые обходят V1.

Материалы и методы

Животные

В настоящем исследовании использовались пять взрослых мартышек ( Callithrix jacchus ) массой ~ 350 г. Всем животным вводили флуоресцентный ретроградный индикатор в область МТ левого полушария.Трем животным вводили бинокулярные флуоресцентные инъекции антероградного индикатора, а двум оставшимся животным вводили только инъекции в глаз, противоположный области инъекции МТ. Животных размещали в семейных группах (12: 12-часовой цикл свет / темнота, температура 31 ° C, влажность 65%). Все эксперименты проводились в соответствии с Австралийским кодексом правил ухода за животными и их использования в научных целях и были одобрены Комитетом по этике животных Университета Монаша, который также следил за благополучием животных.

Подготовка к операции и инъекции индикаторов

Животных сначала анестезировали внутримышечными (в / м) инъекциями альфаксалона (12 мг / кг ^-1 ) и диазепама (3,0 мг / кг ^-1 ). Антибиотик (прокаин пенициллин 25 мг / кг ^-1 , в / м) вводили перед тем, как животных помещали в стереотаксическую рамку на термостатируемой грелке для поддержания внутренней температуры тела на уровне 38 ° C. Анестезия поддерживалась изофлураном (1-2% в 0.5 л мин ⁻¹ медицинский кислород). Уровни кислорода в крови, частоту сердечных сокращений и температуру постоянно контролировали на протяжении всего эксперимента (Surgivet ^® Advisor ^® Vital Signs Monitor, SurgiVet ^® Smiths Medical North America, Waukesha, WI, США). Все операции проводились в асептических условиях.

Внутриглазные инъекции

Циклоплегию вызывали одной каплей фенилэфрина гидрохлорида (10%), а затем одной каплей глазных капель антибиотика (0.5% хлорамфеникол) через 2 минуты в каждый глаз. Стеклянная микропипетка, прикрепленная к микрошприцу Hamilton на 10 мкл (Scientific Glass Engineering, Мельбурн, Австралия), заполненному субъединицей b холерного токсина (CTb), конъюгированной с флуоресцентным индикатором (правый глаз, все случаи: 8 мкл 1% Alexa Fluor 488; левый глаз) , три случая: для инъекции использовали 8 мкл 1% Alexa Fluor 594; оба от Molecular Probes, Юджин, Орегон, США). CTb в основном используется как ретроградный индикатор в головном мозге (Conte et al., 2009), но успешно используется в качестве антероградного индикатора для идентификации ретинофугальных проекций (Angelucci et al., 1996; Huberman et al., 2002). Глазное яблоко слегка поворачивали в нос, чтобы обнажить склеру, и соединительную ткань в месте инъекции удаляли, пока не стали видны кровеносные сосуды. Трейсер вводили за зубчатой ​​воронкой в ​​камеру стекловидного тела, чтобы захватить ганглиозные клетки сетчатки. Скорость инъекции составляла ~ 2 мкл мин ^-1 , и микрошприц удерживали на месте еще 5 минут, чтобы индикатор мог диффундировать от места инъекции. Утечку индикатора и прозрачность передней камеры глаза контролировали с помощью хирургического микроскопа.

Кортикальные инъекции

Местный анестетик (бупивикаин, 0,1 мл на место инъекции) вводили в височную мышцу перед трепанацией черепа над хвостовой височной долей левого полушария. После резекции твердой мозговой оболочки использовали ретроградный флуоресцентный индикатор Fast Blue (Polysciences, Inc., Уоррингтон, Пенсильвания, США), который маркирует цитоплазму клеток и очень мелкие гранулы, которые имеют большую интенсивность, чем окружающая цитоплазма, придавая точечный вид ( Bentivoglio et al., 1980; Condé, 1987), вводили непосредственно в кору (область MT) либо в виде кристалла (диаметром ∼200 мкм) с помощью тупой вольфрамовой проволоки в четырех случаях, либо вводили в виде раствора (2%, 0,5–1 мкл, Polysciences, Inc.), используя микрошприц для одного случая. Для инъекции микрошприц закрепляли на моторном микроприводе (Narishige, Tokyo, Japan) и продвигали в кору на глубину 0,5–1,0 мм в плоскости, касательной к коре. Размещение инъекций руководствовалось стереотаксическими координатами, полученными в ходе предыдущих исследований зрительной коры мартышек (Rosa and Elston, 1998), и были приняты меры, чтобы не повлиять на белое вещество ниже, что было подтверждено на более позднем этапе гистопатологией. (см. рисунок).Точное расположение инъекции по отношению к кортикальным слоям и границам ареалов позже было оценено гистологическими методами. Затем кору покрывали кусочком стерильной рассасывающейся желатиновой пленки (Gelfilm, Pharmacia & Upjohn Inc, Бриджуотер, Нью-Джерси, США), кусок кости, удаленный во время трепанации черепа, и височную мышцу прикрепляли тканевым клеем (Vetbond ™, 3M, Сент-Пол, Миннесота, США) и зашивают кожу головы. Животным вводили подкожно (п / к) физиологический раствор глюкозы, а также анальгетик (карпрофен, 4 мг кг ^-1 , с.c .; бупренорфин, 0,01 мг кг ^-1 , в / м) и дексаметазон (0,3 мг кг ^-1 , в / м), для предотвращения отека мозга.

Коронковые срезы, окрашенные миелином, позволяют идентифицировать зону МТ и обеспечивают точное размещение инъекций Fast Blue . (A) NM53 A0,2–1,5 мм, кристаллическая вставка. (B) NM55 A0,6–1,0 мм, инъекция микропипеткой. (C) NM58 A0,6–1,0 мм, кристаллическая вставка. Эти фотомонтажи подтверждают правильность размещения Fast Blue в кортикальной области МТ во всех трех случаях, а также подтверждают, что введение инъекции / кристалла не препятствует белому веществу.Расположение мест инъекций, нанесенное на боковую поверхность области MT для каждого изученного случая, можно увидеть на вставке, показывая различное топографическое расположение каждого из них. LS, боковая борозда; STS, верхняя височная борозда; L, боковой; V, вентрально. Масштабная линейка = 3 мм.

Тканевый препарат

После 7-дневного периода выживания животным была введена передозировка анестетика пентобарбитона натрия (100 мг кг ^-1 ) и проведена транскардиальная перфузия 0,1 М гепаринизированным фосфатным буфером (PB; pH 7.2) с последующим добавлением 4% параформальдегида в 0,1 М PB. Ткани головного мозга немедленно удаляли и фиксировали в течение 24 часов в 4% параформальдегиде в 0,1 М PB, содержащем 10% сахарозы. Криозащита была достигнута путем последовательного переноса ткани через растворы 20% и 30% сахарозы в 0,1 М PB перед тем, как ее поместили на платформу для взвешивания и поместили в жидкий азот для замораживания. Мозг хранили при -80 ° C до дальнейшей обработки. Мозг оставляли целым и с помощью криостата вырезали пять серий коронарных срезов толщиной 40 мкм.Две серии собирали сразу из 0,1 М PB и закрывали покровным стеклом, используя среду для фиксации флуоресценции Dako (Dako A / S, Glostrup, Дания) для микроскопического исследования флуоресцентного мечения. Одна из этих серий была окрашена через 1 неделю на субстанцию ​​Ниссля. Срезы для окрашивания на цитохромоксидазу (CO) собирали в 0,1 M PB и немедленно обрабатывали, срезы, зарезервированные для иммуногистохимии, хранили при -20 ° C в растворе криопротектора (50% 0,05 M PB, 30% этиленгликоль, 20% глицерин). и пятую серию срезов помещали в 4% формалин по крайней мере на 4 недели перед окрашиванием на миелин.

Иммуногистохимия

Иммуногистохимические реакции с использованием антител против нефосфорилированного нейрофиламента (NNF) и кальций-связывающих белков кальбиндин-D28k и парвальбумин были использованы для разграничения субъядер пульвинарного ядра, слоев пограничной области MTN. Затем эти данные были оцифрованы с помощью MDPlot (v 5.2, Accustage) и использованы для создания трехмерной модели. Срезы также были флуоресцентно помечены одиночными антителами против нейрональных ядер (NeuN), чтобы определить, был ли индикатор Fast Blue специфически локализован в области ретрансляционных клеток MT в PIm.В LGN и PIm монокулярно инъецированного животного синаптофизин использовали для идентификации экспрессии пресинаптических везикул, колокализованных в терминалях сетчатки. Тот же протокол (описанный ниже) применялся для всех антител, за исключением NeuN и синаптофизина, которые не включали обработку, блокирующую эндогенную пероксидазу, и были покрыты средой для усиления флуоресценции Dako после промываний после инкубации во вторичном антителе. Концентрации блокирующих растворов, первичных и вторичных антител для каждого антитела приведены в таблице.Свободно плавающие срезы промывали 0,1 M PB в течение 20 минут, а затем 15 минут промывали 0,1 M натрий-фосфатным буфером (PBS; Dulbecco A, Oxoid, Basingstoke, UK), содержащим 0,3% Triton X-100 (PBS-TX ; BDH, Пул, Великобритания). После 30-минутной обработки 0,3% перекисью водорода в 50% метиловом спирте, содержащем PBS, срезы промывали в PBS (2 × 10 мин), предварительно инкубировали в соответствующем блокирующем растворе в течение 1 часа и переносили без промывки в раствор первичных антител. (подробности см. в таблице). После инкубации в течение 16–18 ч при 4 ° C срезы промывали (3 × 10 мин) Твин-20 (Sigma, St.Louis, MO, USA) в PBS, инкубировали со вторичным антителом (подробности см. В таблице) в PBS в течение еще 1 ч, затем промывали PBS (3 × 10 мин). После обработки авидин-биотиновой пероксидазой хрена (1: 200; Amersham Pharmacia Biotech, Little Chalfont, UK) в PBS в течение 1 ч иммунореактивность была выявлена ​​с использованием хромогена с усиленным металлом, 3,3-диаминобензидина (DAB) и стабильного пероксида. буфер (Pierce Biotechnology, Рокфорд, Иллинойс, США; время реакции 3–6 мин). Если не указано иное, все инкубации проводились при комнатной температуре при осторожном перемешивании.Затем срезы обезвоживали в серии градуированных спиртов, обезжиривали в ксилоле и покрывали DPX (BDH).

Таблица 1

Концентрация блокирующих растворов, первичных и вторичных антител, используемых в иммуногистохимии .

Отрицательный (отсутствие первичных антител) и положительный контроли выполняли рутинно.Отсутствие первичного антитела привело к полной потере иммунореактивности (данные не показаны). Для положительных контролей иммунореактивности с кальбиндин-D28k и парвальбумином морфология и распределение клеток, экспрессирующих кальбиндин-D28k и парвальбумин, сравнивали с иммуномечением, ранее описанным Jones (2007) в пульвинарном ядре приматов Нового Света. Для положительного контроля NNF морфология и распределение иммунореактивности NNF сравнивали с иммуномечением, ранее описанным в наших собственных исследованиях на мартышках (Bourne and Rosa, 2006; Bourne et al., 2007).

Гистология

Срезы, соседние с теми, которые использовались для иммуномечения, были окрашены на миелин и CO. Для окрашивания миелина использовали модификацию метода импрегнации Gallyas серебром (Gallyas, 1979) для срезов, закрепленных на предметных стеклах. Обработку реакционной способности CO проводили на свободно плавающих секциях с использованием метода Wong-Riley (Wong-Riley, 1979). Затем срезы обезвоживали в серии градуированных спиртов, обезжиривали в ксилоле и покрывали DPX (BDH). Для окрашивания вещества по Нисслю использовали 0,1% раствор крезилового фиолетового; Сдвижные секции реагировали до тех пор, пока слой 6 не стал отличаться от других слоев.

Сбор данных и изображений

Флуоресцентно меченые срезы исследовали с использованием эпифлуоресцентного микроскопа Zeiss Axioplan 2. Меченые нейроны и терминалы сетчатки идентифицировали с использованием 20х или 40х сухих объективов, и их местоположения отображали с помощью системы оцифровки (MDPlot3, Accustage, Shoreview, MN, США). Нефлуоресцентные срезы исследовали под светлопольным микроскопом с визуализирующим микроскопом Zeiss Axioplan. Микрофотографии (1300 × 1030 dpi) были получены с помощью Zeiss 2.Объективы Plan-Neofluar 5x и 5x, полученные в виде цифровых изображений с помощью цифровой камеры Zeiss AxioCam, подключенной к программному обеспечению AxioVision (v. 4.2; Zeiss). Изображения были обрезаны и заданы по размеру с помощью Adobe Photoshop 11 и Illustrator 14. Зона МТ была идентифицирована в соседних окрашенных миелином срезах, и ее местоположение разграничено на микрофотографиях с использованием контрольных точек, таких как соответствующие кровеносные сосуды по всей коре головного мозга.

Идентификация и совместная локализация синапсов сетчатки с помеченными площадными ретрансляционными клетками МТ с помощью конфокальной микроскопии

Подтверждение синапсов афферентов сетчатки и ретинальных ретинальных клеток в пульвинарном и коленчатом ядрах было достигнуто с помощью лазерной сканирующей конфокальной микроскопии и статистического анализа полученных изображений .Эти клетки были визуализированы на инвертированном конфокальном микроскопе Nikon C1 с использованием масляной иммерсионной линзы Plan Apochromat 100x, 1.4NA, последовательного возбуждения 408, 488 и 561 нм и детектирования через окна излучения 432–467, 500–530 и 567– 642 нм соответственно, чтобы ограничить перекрестные помехи и просачивание, и программное обеспечение NIS Elements (Nikon, Токио, Япония). Были получены стопки оптических секций толщиной 0,3 мкм, расположенные над и под ячейкой. Результирующий размер вокселя составлял 130 нм × 130 нм × 300 нм, и все изображения были оставлены в градациях серого для анализа совместной локализации и впоследствии были окрашены в псевдоцвет для иллюстрации совместной локализации.Деконволюция использовалась для уменьшения фона и извлечения статистически надежной, релевантной информации (Wouterlood et al., 2002a, b) из z-стеков, которые были деконволюции с использованием коммерчески доступного программного обеспечения AutoQuant X (vX2.1.1, MediaCybernetics, Inc). Совместная локализация синаптофизина в аксонах сетчатки была продемонстрирована с использованием модуля совместной локализации программного обеспечения Imaris (v6.3.1, Bitplane) для расчета коэффициента Пирсона, который измеряет силу линейной зависимости между значениями серого цвета пикселей интенсивности флуоресценции пар зеленого и красного изображений ( Болт и Кордельер, 2006).График разброса значений интенсивности двух каналов относительно друг друга в ситуации полной колокализации приведет к появлению облака точек с центром вдоль прямой линии, разброс которых количественно определяется коэффициентом Пирсона. Коэффициент Пирсона, равный 1, указывает на полную совместную локализацию, значение нуля означает отсутствие корреляции, а значение -1 означает отрицательную корреляцию. Гликопротеин-синаптофизин синаптических везикул расположен на конце волокна сетчатки и, следовательно, будет только частично колокализоваться с афферентным сетчаткой, а диаграмма рассеяния будет формировать полуоднородное облако, представляющее пониженный коэффициент Пирсона.Bolte и Cordelières (2006) предполагают, что средние коэффициенты не позволяют делать выводы относительно колокализации, и, используя их случай частичной колокализации в качестве ориентира, был выбран коэффициент Пирсона более 0,6, чтобы указать на частичную колокализацию в этом исследовании. Изображения в стеке z были замаскированы, так что единственными частями изображения, используемыми для анализа колокализации, были воксели, содержащие волокна сетчатки, а все остальные воксели за пределами этой области игнорировались.Для замаскированных изображений автоматически устанавливались пороговые значения в обоих каналах на основе алгоритма, разработанного Costes et al. (2004). Подход Костеса оценивает вероятность (значение P ) коэффициента Пирсона, исключая случайную колокализацию пикселей, и предполагает, что коэффициент Пирсона, рассчитанный для немаскированных областей, представляет собой истинную колокализацию, когда значение P > 95%. получается. В этом исследовании во всех проиллюстрированных случаях коэффициент Пирсона был больше 0.6 и значение P > 95%.

Трехмерная реконструкция

Трехмерная (3D) модель пульвинарного ядра была построена с использованием набора программ, известных под общим названием IMOD (обработка изображений, моделирование и отображение). IMOD был разработан Boulder Laboratory и Regents of the University of Colorado для трехмерной реконструкции изображений, полученных с помощью электронной микроскопии (http://bio3d.colorado.edu/imod/). Для создания 3D-модели были сделаны микрофотографии последовательных срезов серий, окрашенных кальбиндином-D28k-, CO- и миелином.Микрофотографии чередовались с диаграммами MDPlot, которые включали флуоресцентно помеченные клетки / концевые поля из двух картированных серий для получения стопки изображений в плоскости z, с помощью которых можно было реконструировать мозг. Отдельные изображения были выровнены друг с другом локально, а затем преобразованы для глобального выравнивания с помощью программы «midas». Затем программа «3Dmod» использовалась для отслеживания интересующих областей, создания контуров, которые использовались для визуализации поверхности. Для визуализации поверхности конструкции IMOD создает треугольную сетку / кожу вокруг контуров, нарисованных с использованием алгоритма, который минимизирует общую площадь треугольников, используемых для соединения контуров.После того, как рендеринг ядра пульвинара и поверхностей PIm был завершен, изображения TIF реконструированной модели были сделаны с интервалом 2,4 градуса, в то время как модель вращалась (150 кадров за один оборот), чтобы сделать 10-секундный фильм со скоростью 15 кадров в секунду с использованием MATLAB. (R14 v7.1, The Mathworks, Inc, дополнительные материалы).

Результаты

Демаркация ядер таламуса и кортикальной области MT

Мы сначала подтвердили идентичность областей, представляющих интерес для этого анатомического исследования, в частности, подобластей пульвинарного ядра и LGN и экстрастриатной области коры MT, используя серию гистохимические и иммуногистологические окрашивания для каждого из случаев.

Пульвинарное ядро ​​

Из серии использованных гистологических и иммуногистохимических красителей иммуноокрашивание кальбиндин-D28k оказалось наиболее полезным для разграничения субядер нижних пульвинаров (PI), которые были помечены в соответствии с номенклатурой Stepniewska et al. (2000). На рисунке А иммуноокрашивание на кальбиндин-D28k выявило область в форме полумесяца, начинающуюся от каудального полюса пульвинарного ядра, расширяющуюся кпереди за каудальный конец LGN и деленную пополам кортикотектальным трактом (плечо верхнего колликулуса; bsc), который без иммуноокрашивания.Эта область была ПИМ. Изгиб вокруг латеральной стороны PIm был центромедиальной частью PI (PIcm) с высокой иммунореактивностью по отношению к кальбиндин-D28k (нейропил и клетки; рис. A). Клетки в PIm, PIcm и задней части PI (PIp) экспрессируют парвальбумин в порядке, комплементарном кальбиндин-D28k, с высокой иммунореактивностью в PIm и меньшей в PIcm и PIp (Рисунок B).

Иммуногистохимическое и гистологическое окрашивание пульвинарного ядра мартышки позволяет провести демаркацию субъядер .Корональные срезы на аналогичном уровне AP ( A, B : A 2,5 мм и C, D : A 3,0 мм) левого полушария пульвинарного ядра ( A, B : CJ59, C, D : NM32 ) обработаны различными гистологическими и иммуногистохимическими методами. Были включены демаркации, где их можно было идентифицировать с каждым пятном. (A) Участок пульвинарного ядра прореагировал с антителом к ​​кальбиндин-D28k, демонстрируя отсутствие иммунореактивности в PIm, окруженном латерально более интенсивно окрашенным (клетки и нейропиль) PIcm.Медиально расположенный PIp имеет светлый нейропиль и темные клетки, которые менее плотно окрашены, чем PIcm. Вентролатерально от PIcm находится PIcl, который имеет более темный нейропиль и редкие мелкие темные клетки. Латерально по отношению к PIcl и PIcm находится PL, большая часть которого слабо окрашивает нейропиль и клетки, за исключением дорсомедиальной части, которая имеет немного увеличенное окрашивание в клетках. Вставка: в PL, PIcl и PIcm также присутствуют большие интенсивно окрашенные клетки, большинство из которых находится вентрально. Дорсальнее PI и PL лежит PM с умеренным окрашиванием нейропиля и мелких темных клеток. (B) Участок пульвинарного ядра, прилегающий к (A) , прореагировал на парвальбумин, показывая образец реакции, комплементарный наблюдаемому для кальбиндина-D28k. PIm более сильно иммуноокрашен, чем PIcm и PIp. Из-за темноты иммунного окрашивания нейропиля можно легко увидеть плечо верхнего бугорка, рассекающего ядро ​​пульвинара пополам. (C) Часть пульвинарного ядра прореагировала с антителом к ​​NNF, показывая умеренное иммуноокрашивание PIm, отсутствие иммуноокрашивания в PIcm и очень легкое иммуноокрашивание NNF PM.Нейропил был иммуноокрашен в PIcl и был немного темнее в PL (вентролатеральная часть PL наиболее темная). Вставка: экспрессия нейрофиламентов в перикарионе и дендритах крупных темных NNF-иммунопозитивных клеток в PL, PIcl и PIcm. (D) Срез пульвинарного ядра, окрашенного на цитохромоксидазу, с темным окрашиванием PIm без реактивности в плече верхнего бугорка, аналогично не содержащей антиген парвальбуминовой области плеча верхнего бугорка в (B) .Все четыре протокола использовались для разграничения подразделений пульвинарного ядра с целью оцифровки и наложения афферентов сетчатки и ретинальных МТ-клеток. L, боковой; V, вентральный; масштабная линейка = 500 мкм, вставная масштабная линейка = 10 мкм.

NNF-иммунореактивность выявила умеренное иммуноокрашивание в PIm (Рисунок C). Только более темную окрашивающуюся вентральную часть PIm можно было различить при окрашивании CO (Рисунок D; сравните с Рисунок A). Другие более крупные подразделения пульвинарного ядра (медиальное, PM и, латеральное, PL) также были различимы с помощью этих серий гистологических и иммуногистохимических окрашиваний (рисунок).

Боковое коленчатое ядро ​​

У мартышек LGN имеет другой паттерн расслоения и связности по сравнению с таковым у обезьян Старого Света (Kaas et al., 1978; Spatz, 1978; White et al., 1998; Szmajda et al. ., 2008). У мартышек LGN имеет два магноклеточных слоя, два парвоцеллюлярных слоя и четыре кониоцеллюлярных слоя вдоль его дорсовентральной оси. На срезе, окрашенном тельцами Ниссля на рисунке (Рисунок A; 4,5 мм кпереди от интерауральной оси), различимы все магноцеллюлярные, парвоцеллюлярные и кониоцеллюлярные слои, а также крупные клеточные тела магноцеллюлярных слоев (два вентральных слоя; рисунок A). отчетливо отличается от более мелких клеток в парвоцеллюлярном и кониоцеллюлярном слоях.NNF-иммунореактивность в LGN выявила более плотное мечение как нейропиля, так и клеточных тел в магноцеллюлярных слоях (рис. B), тогда как парвоцеллюлярные слои были почти лишены какого-либо иммуноокрашивания. Иммуноокрашивание Calbindin-D28k разграничило два больших кониоцеллюлярных слоя (K1 и K3, рисунок C). Все три антигена и гистологические окраски использовались для определения точной ламинарной демаркации LGN.

Микрофотографии соседних коронарных срезов LGN мартышки, обработанные различными гистологическими и иммуногистохимическими красителями, позволяют провести демаркацию межклеточного, парвоцеллюлярного и кониоцеллюлярного слоев . (A) Срез, окрашенный крезиловым фиолетовым (тельца Ниссля), выявляющий большие клетки магноцеллюлярных слоев (MI и ME) и более мелкие клетки в двух парвоцеллюлярных слоях (PI и PE). (B) Иммуноокрашивание на NNF показывает увеличение реактивности как в клетках, так и в нейропиле в магноклеточных слоях по сравнению с парвоцеллюлярными слоями, что делает их четко различимыми. Как при окрашивании субстанцией Ниссля, так и при окрашивании NNF трудно различить дискретные кониоцеллюлярные (K1-4) слои, но окрашивание антителом к ​​кальбиндин-D28k (C) выявляет эти слои.Врезка: кальбиндин-D28k-иммунореактивная клетка в слое K3 LGN. Все три протокола использовались для разграничения ламинарных границ в LGN с целью оцифровки и наложения афферентов сетчатки и ретинальных клеток MT. L, боковой; V, вентральный; масштабная линейка = 500 мкм, вставная масштабная линейка = 10 мкм.

Средняя височная область

Расположенная на латеральном берегу кортикальной поверхности дорсальнее верхней височной борозды и каудовентрально по отношению к латеральной борозде, зона MT наиболее очевидна при окрашивании на миелин и NNF.Окрашивание миелином более плотное в инфрагранулярных слоях по сравнению с окружающими областями, и аналогичным образом наблюдается сильное увеличение плотности иммунореактивности NNF в слоях 3 и 5, включая сильное мечение в цитоплазме клеток и более незначительное увеличение плотности иммуноокрашенных. нейропил. Как окрашивание миелина, так и иммуномечение NNF использовались для подтверждения дорсальной и вентральной границ области MT и определения точности места инъекции в каждом из случаев (рисунок). Последовательные реконструкции позволили провести демаркацию переднезадней / дорсовентральной протяженности каждого места инъекции (рисунок, вставка) в пределах области MT и исключили возможность проникновения индикатора в соседние сателлиты и столкновения с белым веществом.

Проекции сетчатки и площади MT-ретрансляционные клетки в пульвинарном ядре и LGN

Для идентификации ретинофугальных путей к таламическим ядрам животным вводили инъекции антеро- / ретроградного нейронального индикатора CTb в глаза с идентификацией терминалей сетчатки. в подобластях пульвинарного ядра и LGN. В каждый глаз вводили CTb, конъюгированный с разным флуорофором (правый глаз, Alexa Fluor 488; левый глаз, Alexa Fluor 594). Чтобы установить проекции таламо-MT от LGN и пульвинарного ядра, тем же животным вводили ретроградный индикатор Fast Blue в область MT.

Ядро пульвинара

Вход сетчатки в ядро ​​пульвинара был редким и в основном ограничивался PIm, совпадающим с релейными клетками, проецируемыми в область МТ. Терминальные поля сетчатки, связанные с помеченными участками МТ-ретрансляционных клеток, имели тонкие аксоны и небольшие варикозные узлы по длине, напоминающие бусинки на веревочке (Случай NM53; Рисунок A).

Типичные примеры морфологии целевых терминальных полей сетчатки контралатерального глаза, видимые в медиальной части нижнего легочного ядра (PIm) (A) и LGN (слой K1) (B) левого полушария .Терминальные поля сетчатки, видимые в PIm, имеют тонкие аксоны с варикозными узлами небольшого размера (наконечники стрелок), напоминающие бусинки на нитке. В слое K1 LGN терминальные поля имеют толстые аксоны с большим варикозным расширением вен (стрелки), а также аксоны среднего калибра с хорошо расположенными средними варикозными венами (стрелки). Масштабная линейка = 5 мкм для (A) и масштабная линейка = 10 мкм для (B) .

Рисунок суммирует схему маркировки для контралатерального входа сетчатки (случай NM55; рисунок, зеленые точки) и области ретрансляционных клеток MT в ядре пульвинара (рисунок, синие треугольники).На фигурах и зеленые точки представляют существование предполагаемых терминалов, меченных CTb, которые были идентифицированы по наличию варикозного расширения вен вдоль и / или на концах меченых волокон. Контралатеральный вход в сетчатку наблюдался вдоль всей дорсовентральной оси PIm. По центру вдоль переднезадней оси терминалы сетчатки разделялись на дорсальный и вентральный отделы, причем дорсальная группа близка к сопоставлению PIm с более медиальным отделом пульвинарного ядра, PIp (A2,1 мм). На этом передне-заднем уровне и более спереди терминалы также наблюдались в окружающих подразделах PIp, PIcm и центрально-латеральной части PI (PIcl).На рисунке показан только контралатеральный вход, но наблюдался очень небольшой ипсилатеральный вход. Ретрансляционные клетки Area MT, ретроградно помеченные Fast Blue (рисунок; синие треугольники), наблюдались внутри пульвинарного ядра, где они были ограничены главным образом PIm. В случае NM58 в пульвинарном ядре было обнаружено в общей сложности 211 клеточных тел, меченных Fast Blue, причем 93% этих клеток располагались в PIm (таблица), а оставшиеся 7% были разделены между PIcm и PL (таблица) в сторону передняя часть ядра.Основной кластер релейных клеток MT в PIm оставался за пределами вентральной границы PIm и располагался ближе к границе PIcm. На рисунке показана трехмерная реконструкция ядра пульвинара (оранжевый) и положение как контралатеральных афферентов сетчатки (зеленые точки), так и ретинальных клеток области MT (окрашены в красный цвет для повышенной видимости) в пределах PIm (серый), просматриваемых в четырех разных плоскостях.

Распределение афферентных окончаний сетчатки и меченых релейных МТ-клеток в пульвинарном ядре левого полушария .Оцифрованные линейные рисунки пульвинарного ядра и его подразделений на коронарных срезах (случай NM55; интервал 200 мкм), демонстрирующие распределение области MT, ретроградно помеченных клеточных тел (синие треугольники) и контралатеральных терминалей сетчатки (зеленые точки), идентифицированных как варикозное расширение вен вдоль помеченных аксонов. Ретрансляционные клетки Area MT в основном сгруппированы в PIm вдали от его вентральной границы и ближе к PIcm. Вход в сетчатку, хотя и редкий, также был ограничен в основном PIm, с двумя отдельными зонами терминалей, наблюдаемыми в дорсальной и вентральной областях PIm.Срезы представлены последовательно вдоль переднезадней оси, начиная с самого заднего конца (A 1,3 мм) до самого переднего разреза (A 2,7 мм). Смежные срезы, иммуноокрашенные на кальбиндин-D28k, использовали для определения границ пульвинарных субъядер. L, боковой; V, вентральный; масштабная линейка = 1 мм.

Трехмерная модель пульвинарного ядра (левое полушарие), построенная на основе оцифрованных линейных рисунков (случай NM55; интервал 200 мкм), демонстрирующая целостное распределение афферентных окончаний сетчатки и ретинальных ретинальных клеток .В субъядре PIm (серый) пульвинарного ядра (оранжевый) легко наблюдать распределение ретроградных меченых ретинальных МТ-клеток (красный) и контралатеральных окончаний сетчатки (идентифицированных как варикоз вдоль меченых аксонов, зеленый). Трехмерная перспектива позволяет улучшить идентификацию разреженного входа в сетчатку и совместную локализацию с ретинальными клетками области MT, особенно в дорсомедиальной части PIm. 3D-модель поворачивается против часовой стрелки в горизонтальной плоскости, т.е. смотрит на модель сверху вниз. .

Эта реконструкция из серийных срезов позволила получить морфометрические данные Необходимо определить размеры пульвинарного ядра, конкретные ядра и области связи.Отрендеренный фильм позволил получить целостное представление о пульвинарном ядре и ясно продемонстрировал кластеризацию проекций ретинопульвино-МТ в PIm по отношению к размерам PIm и пульвинарного ядра (см. Дополнительные материалы). Некоторые CTb-меченые точки, по-видимому, не колокализуются с синаптофизином (рисунок), что мы интерпретируем как отражение присутствия меченных CTb аксонов сетчатки в поперечном сечении, а не на уровне терминального поля.

Конфокальные микрофотографии трех площадных ретинальных клеток MT в пульвинарном ядре левого полушария (PIm), окруженных терминалями сетчатки из контралатеральных афферентов сетчатки, совместно локализованных с синаптофизином .В PIm контралатеральные терминалы сетчатки (зеленые) синапсы на клеточные тела помеченных Fast Blue области MT ретрансляционных клеток, что подтверждено совместной локализацией с синаптофизином (красный), что приводит к перекрыванию (желтый) точек. Было видно, что перекрывающиеся точки концентрируются на одном конце клетки (ячейка 1) и окружают тело клетки. В этом примере область MT левого полушария была помечена Fast Blue, а правый глаз — CTb-AF ₄₈₈ . Значения в правом верхнем углу объединенных изображений указывают коэффициент Пирсона для синаптофизина и контралатерального входа сетчатки, рассчитанный методом Костеса (см. Материалы и методы).Объединенное изображение показывает только наложение антероградной метки и иммунофлуоресценции синаптофизина, чтобы лучше визуализировать их совместную локализацию. Масштабная линейка = 5 мкм. Вставки: 3-кратное увеличение выделенной области, обведенной маленькой рамкой на изображении FB каждой ячейки. Масштабная линейка = 2 мкм.

Боковое коленчатое ядро ​​

Внутри LGN афференты сетчатки были ограничены определенными слоями в соответствии с их ипси- или контралатеральными связями. Как парвоцеллюлярный, так и межклеточный внутренние слои были реципиентами ипсилатерального входа сетчатки, где наблюдались терминалы сетчатки, меченные CTb-Alexa Fluor 594 (Случай NM58; рисунок, красный), тогда как в парвоцеллюлярном и магноклеточном внешних слоях CTb-Alexa Fluor 488- обозначенные терминалы сетчатки были очевидны (рисунок, зеленый).Бинокулярное мечение было обнаружено в кониоцеллюлярных слоях K3 и K1 (рисунок, белый). Типичные терминальные поля сетчатки, видимые в кониоцеллюлярных слоях (Случай NM53; Рисунок B), имели большие бутоны, расположенные близко друг к другу вдоль толстых аксонов, а также аксоны среднего калибра с хорошо разнесенными варикозными узлами среднего размера. В каждом из четырех случаев маркировка CTb наблюдалась по всей ретинотопной протяженности LGN (White et al., 1998), что указывает на поглощение метки большой частью ганглиозных клеток сетчатки после внутриглазной инъекции.Площадь ретрансляционных клеток MT внутри LGN (рисунок, синие треугольники) наблюдалась в основном в слое K1 (58%, таблица), в основном в задней части ядра. Несколько клеток также наблюдались в слое K3 (32%, таблица), а также единичные клетки во внутреннем магноцеллюлярном и парвоцеллюлярном слоях. Интересно отметить, что после однократной инъекции в область MT было более чем в 10 раз больше ретроградного мечения в PIm по сравнению со всеми слоями LGN вместе взятыми (таблица).

Распределение помеченных областей MT ретрансляционных ячеек по слоям левого LGN .Оцифрованные линейные рисунки LGN и его слоев в коронарных срезах (случай NM58; интервал 200 мкм), демонстрирующие распределение ипсилатеральных (темно-красный) и контралатеральных (светло-зеленый) терминальных полей в магноцеллюлярном, парвоцеллюлярном и кониоцеллюлярном слоях (белый) в В дополнение к области МТ-ретрансляционных клеток (синие треугольники), видимой в основном в медиальных отделах LGN и в кониоцеллюлярных слоях (K1 и K3). Срезы представлены последовательно вдоль переднезадней оси максимум от заднего (A 3.9 мм) до самого переднего отдела (A 5,1 мм). Переднезадний уровень 4.1 воспроизводится в правом нижнем углу, чтобы проиллюстрировать образец маркировки, наблюдаемый в LGN, используемом для создания линейных рисунков. Соседние срезы, прореагировавшие на кальбиндин-D28k, NNF и вещество Ниссля, использовали для разграничения пластинок LGN. L, боковой; V, вентральный; масштабная линейка = 500 мкм.

Синапс ретинальных афферентов и ретинальных MT-ретрансляционных клеток

Было подтверждено, что профиль индикатора Fast Blue (рисунок, ячейка 1 и ячейка 2) включает ретроградно меченые тела нейрональных клеток с антителом к ​​ядру нейронов, NeuN.В том же разделе мы наблюдали совместную локализацию с бутоноподобными терминалами контралатеральной сетчатки, которые окружали ретрансляционные клетки области MT. Наложение отдельных изображений подтвердило, что бутоноподобные терминалы афферентов сетчатки образуют кольцо по периферии ретрансляционной клетки области МТ. Кроме того, мы подтвердили отсутствие других нейрональных клеток в непосредственной близости от меченых окончаний сетчатки путем иммуномечения NeuN во всех исследованных случаях (см. Рисунок). Используя конфокальную микроскопию, мы смогли дополнительно продемонстрировать совместную локализацию контралатеральных терминалей сетчатки с областью МТ-проецирующей клетки (см. Рисунок, ячейка 3).На конфокальном изображении можно видеть, что контралатеральные терминалы сетчатки находятся в контакте и находятся в той же плоскости, что и релейная ячейка МТ области.

Признаки контралатеральных афферентных окончаний сетчатки вокруг области МТ-ретрансляционных клеток в медиальной части нижнего легковинного ядра (PIm) . Используя стандартную эпифлуоресцентную микроскопию, мы демонстрируем две репрезентативные клетки (Клетка 1 и Клетка 2) из ​​разных срезов, чтобы выявить существование площадных ретрансляционных МТ клеток в PIm пульвинарного ядра, которые подтверждены как клеточные тела путем сопоставления с нейрон-специфическими клетками. ядерное окрашивание NeuN [псевдоцветный зеленый для лучшей видимости перекрытия с маркировкой Fast Blue (FB)].Затем наблюдали, что эти клеточные тела совместно локализованы с терминалами контралатеральных афферентов сетчатки, помеченных CTb-AF ₄₈₈ (псевдоцветный красный), окружающих периферию клеточных тел. Большие стрелки указывают на ячейку ретрансляции MT, окруженную «бутоноподобными» терминалами. Маленькие стрелки указывают на проходящие аксоны сетчатки проксимальнее к релейным клеткам области MT, репрезентативным для типа аксонального волокна, наблюдаемого в PIm (тонкий аксон с небольшими варикозными расширениями). Используя конфокальную микроскопию, мы можем дополнительно продемонстрировать совместную локализацию контралатеральных терминалей сетчатки с областью МТ-проецирующей клетки (ячейка 3).Масштабная линейка ячейки 1 и 2 = 5 мкм, масштабная шкала ячейки 3 = 10 мкм.

Используя эту парадигму, мы могли убедиться, что терминалы сетчатки действительно синапсируют с ретрансляционными клетками MT, а не с соседними клетками. Чтобы подтвердить, что окружающие афференты сетчатки формируют синапсы на релейные клетки области MT в PIm и кониоцеллюлярных слоях LGN, мы использовали пресинаптический маркер синаптофизин (рисунки и). В ряде исследований это антитело использовалось в качестве маркера окончаний аксонов в центральной нервной системе, а также для идентификации и количественной оценки синапсов (Calhoun et al., 1996; Сильвер и Страйкер, 2000; Dessem et al., 2007; Hohensee et al., 2008). Синапс ретинального афферента на ретинальную клетку области MT в кониоцеллюлярных слоях LGN и PIm был определен с помощью соответствующих вокселей в красном и зеленом каналах, имеющих коэффициент Пирсона более 0,60, как определено методом Костеса с P . -значение больше 95% (см. Материалы и методы). Это указывает на то, что перекрытие (желтый), показанное на фигурах, на самом деле является истинной колокализацией и представляет собой синапс, образованный окончанием сетчатки.Наблюдался ряд примеров зональных ретинальных MT-клеток, окруженных контралатеральным входом сетчатки с синаптофизин-иммунореактивными бутонами, особенно в вентральной части PIm (рисунок), где и афференты сетчатки, и локальные ретинальные MT-клетки были наиболее многочисленными (рисунок), а также в кониоцеллюлярные слои ЛГН (рисунок). Вход сетчатки в релейные клетки области MT в PIm был более тесно связан с телом ретинальных ретинальных клеток MT, тогда как терминальные поля сетчатки кониоцеллюлярных слоев K1 и K3, по-видимому, находились в проксимальной части аксона, меченного CTb, рядом с телом клетки ( стрелки рисунок).

Конфокальные микрофотографии двух ретрансляционных клеток MT из слоев K1 и K3 левого полушария LGN, связанных с контралатеральным входом сетчатки, локализованных с синаптофизином . Синие изображения соответствуют маркированным Fast Blue (FB) ретинальным МТ-клеткам, входу сетчатки из правого глаза, помеченному CTb-AF ₄₈₈ , а красные изображения — синаптофизину. Правые панели — это объединенные изображения (FB + CTb-AF ₄₈₈ + синаптофизин). Бутоны большого и среднего размера колокализованы (стрелки) с синаптофизином проксимальнее FB-меченых клеток.Клетка 1 имеет большой бутон, посылающий тонкий аксон (маленькая стрелка) к телу клетки. Из верхнего правого угла ячейки 2 видно, что аксоны движутся к области тела ретрансляционной клетки МТ, где они синапсируют. Значения в правом верхнем углу объединенного изображения указывают коэффициент Пирсона для синаптофизина и контралатерального входа сетчатки, рассчитанный методом Костеса (см. Материалы и методы). Объединенное изображение показывает только наложение антероградной метки и иммунофлуоресценции синаптофизина, чтобы лучше визуализировать их совместную локализацию.Масштабная линейка = 5 мкм. Вставки: 3-кратное увеличение выделенной области, обведенной маленькой рамкой на изображении FB каждой ячейки. Масштабная линейка = 2 мкм.

Обсуждение

Несмотря на продолжающиеся исследования, подтверждение существования дисинаптических ретиноталамических путей к области MT независимо от geniculostriate пути было сорвано из-за неспособности продемонстрировать синапсы между клетками конкретных компонентов путей. Концепция двух параллельных зрительных систем была первоначально разработана Даймондом и его коллегами (Снайдер и Даймонд, 1968), которые удалили полосатую кору древесной землеройки и впоследствии предполагали, что путь к зрительной височной коре, параллельный коленчатому пути, способный опосредовать зрительную связь. дискриминация при отсутствии стриарной коры должна существовать.Позже они идентифицировали путь от поверхностных слоев верхнего бугорка к ядру пульвинара, а оттуда к экстрастриатной коре головного мозга (Harting et al., 1973a, b). Позднее этот путь был обнаружен у серой белки (Robson, Hall, 1977), обезьяны галаго (Glendenning et al., 1975), обезьяны-белки (Mathers, 1971; Cusick et al., 1993; Stepniewska et al., 2000). ), мартышек (Dick et al., 1991; Stepniewska et al., 2000), обезьян-сов (Lin and Kaas, 1979, 1980) и обезьян-макак (Benevento, Fallon, 1975; Benevento, Standage, 1983; Stepniewska et al. ., 2000). Мы хотели бы добавить к этой концепции, что существуют также два других пути; пути ретинопульвинара-МТ и ретиногеникулята-МТ. Предыдущие исследования установили наличие моносинаптических путей от сетчатки к ядру пульвинара у белки (Major et al., 2003), бурозубки (Hubel, 1975; Ohno et al., 1975; Somogyi et al., 1981) , кошка (Berman and Jones, 1977), Matteau et al., 2003), макака (O’Brien et al., 2001) и человек (Sadun et al., 1986) или из пульвинарного ядра / LGN в область MT ( е.грамм. Дик и др., 1991; Sincich et al., 2004). Однако в отсутствие прямых доказательств наличия синапсов роль этих предполагаемых путей остается предположительной. Вместо того, чтобы использовать традиционную методологию электронной микроскопии, это исследование использовало использование конфокальной микроскопии в сочетании с пресинаптическим маркером и статистическим анализом изображений для проверки наличия синаптической связи. В отличие от электронной микроскопии, этот метод позволяет анализировать большое количество окончаний аксонов и всю популяцию ретроградно меченых ретроградных МТ-клеток по всему PIm.Кроме того, он позволяет проводить трехмерный анализ синаптических связей с ретинальными ретинальными клетками — особенность, которая сыграла важную роль в различении между контактом и прохождением меченых волокон и устранением ложноположительных контактов в данном исследовании. В сопоставительном исследовании электронной и конфокальной микроскопии Hohensee et al. (2008) обнаружили, что 83% предполагаемых синапсов в конфокальных изображениях на самом деле были настоящими синапсами. Таким образом, мы теперь предоставляем первые доказательства существования синапсов между афферентами сетчатки и релейными МТ клетками у мартышек обезьяны.Кроме того, мы идентифицируем специфические субъядра и зоны внутри пульвинарного ядра (PIm) и LGN (K1 и K3 lamina), где афференты сетчатки и синапсы ретинальных ретинальных клеток.

Путь ретинопульвино-MT

Существование ретинореципиентной зоны в PIm взрослой мартышки согласуется с доказательствами прямого участия сетчатки в PIm у павиана (Campos-Ortega et al., 1970) и макака ( Campos-Ortega et al., 1970; Mizuno et al., 1982; Itaya and Van Hoesen, 1983; Cowey et al., 1994; O’Brien et al., 2001), а также латеральному задне-пульвинарному комплексу кошки (Itoh et al., 1983; Boire et al., 2004), хотя вентральная и дорсальная ретинореципиентные зоны в передней PIm не наблюдались. конкретно определено в этих исследованиях. Однако это говорит о том, что у видов млекопитающих есть много общего. Ранее не было описания проекций сетчатки на ядро ​​пульвинара мартышки, хотя входы в сетчатку были описаны в интраламинарном и супрахиазматическом ядрах (Costa et al., 1999; Кавальканте и др., 2005). Большинство входов сетчатки в PIm было контралатеральным, что согласуется с предыдущими данными у макак (Campos-Ortega et al., 1970; Mizuno et al., 1982; Itaya and Van Hoesen, 1983; Cowey et al., 1994) и кошка (Itoh et al., 1983; Boire et al., 2004). Однако морфология афферентных окончаний сетчатки была описана только в пульвинарном ядре кошки (Matteau et al., 2003; Boire et al., 2004) и имела сходную морфологию (небольшие варикозные узлы на тонких аксонах) с наблюдаемыми в настоящее время. учиться.

Area MT-меченные ретрансляционные клетки преимущественно ограничивались PIm, бедным кальбиндин-D28k, с лишь несколькими клетками в окружающих субъядрах PI, такими как PIcm и PIp. Плотные выступы от PIm к области MT и несколько от окружающих субъядер, PIcm и PIp, также были описаны у макак (Standage and Benevento, 1983; Cusick et al., 1993; Adams et al., 2000), белка ( Cusick et al., 1993; Stepniewska et al., 2000), совы (Lin, Kaas, 1980) и мартышки (Spatz, 1975; Dick et al., 1991; Каас и Лион, 2007). До сих пор не было доказательств того, что зона ретино-реципиента совпадает с релейными клетками области MT в PIm.

Путь ретиногеникуло-MT

Большинство локализованных в LGN ретиногенетических MT-клеток локализованы в кониоцеллюлярных слоях K1 и K3, причем K1 обладает большей частью. Предыдущее исследование мартышек, проведенное Dick et al. (1991) сообщили о нескольких клетках только в слое K3 после инъекции МТ в область. Клетки из кониоцеллюлярных слоев, выступающие в область MT, также наблюдались у макак (Horton, 1984; Stepniewska et al., 1999; Sincich et al., 2004; Nassi and Callaway, 2006), хотя и не всеми группами (Yoshida, Benevento, 1981; Benevento, Standage, 1982; Sorenson and Rodman, 1999). Это несоответствие между исследованиями, вероятно, связано с используемой парадигмой и индикатором. У мартышек Szmajda et al. (2008) недавно заметили, что ганглиозные клетки с относительно большими рецептивными полями проецируются преимущественно в кониоклеточные слои и что доминирующий вход широкого поля в слой K3 состоит из ганглиозных клеток, чувствительных к короткой длине волны или сигнальных «синим» конусом.Наше открытие разреженного поступления от K3 в область MT согласуется с тем фактом, что входы конуса коротковолновой чувствительности в область MT незначительны (Saito et al., 1989; Seidemann et al., 1999; Riecanskú et al., 2005). Проекции области MT из кониоцеллюлярных слоев LGN также были обнаружены у др. Приматов, где было продемонстрировано, что кониоцеллюлярные нейроны, проецирующиеся в область MT, не являются бифуркацией V1-проецирующих аксонов (Sincich et al., 2004). Кроме того, было постулировано, что эти нейроны, вероятно, предоставляют информацию, необходимую для управления областью МТ в отсутствие V1 (Hendry and Reid, 2000; Sincich et al., 2004; Вакалопулос, 2005; Bridge et al., 2008). Терминалы сетчатки (см. Результаты) были, однако, плохо разветвлены, особенно вокруг релейных клеток MT, как было ранее описано у макак (Conley and Fitzpatrick, 1989), которые отличались от терминалей сетчатки в PIm.

Организационная иерархия таламических реле

Sherman and Guillery (1996) предположили, что LGN действует как реле первого порядка, а ядро ​​пульвинара — как реле более высокого порядка. Порядок реле определяется источником входного сигнала драйвера, который устанавливает рецептивные поля ячеек реле, при этом все другие типы входных сигналов считаются модулирующими.Релейные клетки LGN получают входные данные драйвера от подкорковых афферентов (сетчатка), а затем передают первый визуальный вход в кору (V1), тогда как ядро ​​пульвинара получает входные данные драйвера от слоя 5 коры. В текущем случае входы сетчатки в ядро ​​пульвинара будут рассматриваться как модуляторы. Однако сетчатка является подкорковым источником сенсорных афферентов, и, судя по свидетельствам, представленным в этом исследовании, вход через PIm также будет представлять собой реле первого порядка, отправляющее конкретную информацию в кору (область MT).Возможно, ядро ​​пульвинара представляет собой комбинацию релейных цепей первого и более высокого порядка (Sherman, 2007), при этом PIm действует больше как реле первого порядка, а окружающие его подразделения — как релейные центры более высокого порядка. Подтверждающие доказательства этого включают, например, сходство нейрохимической архитектуры PIm с другими «первичными» ретрансляционными ядрами таламуса, такими как вентропо-заднее ядро ​​и LGN (Cusick et al., 1993). Тот факт, что пульвинарные субъядра, прилегающие к PIm (PIp и PIcm), получают непрямой вход в сетчатку через верхний бугорок, предполагает разные функциональные роли (Stepniewska et al., 2000; Степневская, 2004). Однако факт остается фактом: вполне вероятно, что эти вторичные пути менее доминируют, чем ретиногеникулостриатный путь, по крайней мере, у взрослых животных.

Относительный вклад пульвинарного ядра и LGN в область MT

Интересно то, что синапсы ретинальных афферентов на ретинальных нейронах MT области PIm могут быть обнаружены на телах клеток, тогда как они могут быть обнаружены только на проксимальных дендритах в LGN. . Хотя обычно возбуждающие синапсы образуются на постсинаптических дендритах, аксосоматические синапсы из ганглиозных клеток сетчатки, как было обнаружено, существуют в межгеникулярной створке крысы (Juhl et al., 2007). Учитывая, что проксимальный синапс будет гораздо более эффективным при воздействии на постсинаптический нейрон для создания потенциала действия, чем дистальный синапс, наличие аксосоматических синапсов может указывать на большее значение PIm для проекции MT области по сравнению с проекцией LGN на MT области. Хотя клетки, меченные Fast Blue, в ядре пульвинара и LGN были количественно определены только у одного животного, ретроградное мечение в PIm было более чем в 10 раз больше по сравнению со всеми слоями LGN, объединенными в результате однократной инъекции в область MT.Это может также указывать на то, что ядро ​​пульвинара может иметь более высокую степень влияния, чем LGN, на область MT.

Доказательства роли дисинаптических путей к области MT, которые обходят V1

Удаление V1 нарушает упорядоченные проекции, которые распространяются от полосатой коры к области MT, заставляя замолчать все корковые области, полагающиеся на ввод полосатых желез и, следовательно, на ввод драйвера со слоя 5 к пульвинарному ядру. Устойчивость восприятия движения у людей со «слепым зрением» (Barbur et al., 1993; Стериг и Коуи, 1997; Зеки и Фитче, 1998; Bridge et al., 2008) указывает на то, что зона MT является кортикальным субстратом для остаточного зрения после удаления V1, что также было продемонстрировано на животных. Фактически, исследования на ряде взрослых приматов, отличных от человека, продемонстрировали, что некоторые клетки области MT продолжают отвечать (хотя часто с более слабыми ответами и увеличенной латентностью) на движущиеся стимулы после удаления входного сигнала V1 (Rodman et al., 1989; Girard et al. др., 1992; Роза и др., 2000; Аззопарди и др., 2003). Поэтому было высказано предположение, что альтернативные таламокортикальные выступы, которые обходят V1, ответственны за остаточную способность области MT реагировать после инактивации области V1 (например, макака, Rodman et al., 1989; Girard et al., 1992; мартышка, Rosa et al. др., 2000; человек, Бридж и др., 2008). Исследования краткосрочных и долгосрочных поражений V1 у анестезированных сов и мартышек показали полное отсутствие реакции в соответствующей ретинотопной зоне в области MT (Kaas and Krubitzer, 1992; Collins et al., 2003, 2005). Однако наша прямая демонстрация существования этих путей у взрослых мартышек обеспечивает вероятный нервный субстрат для электрофизиологических ответов в области MT после абляции V1, что ранее было продемонстрировано на мартышках Rosa et al. (2000). Кроме того, удаление V1 в раннем возрасте сопровождается относительной сохранностью потери зрения по сравнению с тем же поражением у взрослых (Moore et al., 1996; Gross et al., 2004). Возможно, это явление связано с представлением сравнительно более надежного входа сетчатки в ядро ​​пульвинара, как это ранее наблюдалось у котят после абляции области 17/18 (Labar et al., 1981; Payne et al., 1993) и сохранение специфических клеточных субпопуляций (calbindin-D28k-иммунопозитивные) в дегенерированной зоне LGN, которые могут проецироваться в область MT (Rodman et al., 2001). Это свидетельство может указывать на ввод драйвера в область MT из пульвинарного ядра и LGN в течение раннего периода жизни, который изменяется после критического периода.

Сокращения

CO, цитохромоксидаза; CTb, субъединица b холерного токсина; K1-4, кониоцеллюлярные слои LGN; LGN, латеральное коленчатое ядро; МТ — средняя височная область зрительной коры; NeuN, ядра нейронов; NNF, нефосфорилированный нейрофиламент; PA, переднее легочное ядро; PB, фосфатный буфер; PBS, фосфатно-солевой буфер; PIcl, центрально-боковая часть нижнего легочного ядра; PIcm, центромедиальная часть нижнего легочного ядра; PIm, медиальная часть нижнего легочного ядра; PIp, задняя часть нижнего легочного ядра; PL — латеральное пульвинарное ядро; PM, медиальное пульвинарное ядро; V1, первичная зрительная кора

(PDF) Ретрансляторное кадрирование как устойчивый подход

Keesstra S, Pereira P, Novara A, Brevik EC, Azorin-Molina C, Parras-

Alcántara L, Jordán A, Cerdà A (2016a) Влияние методов управления почвами

на эрозию почвы в абрикосовых садах.Sci Total Environ

551-552: 357–366. doi: 10.16 / j.scitotenv.2016.01.182

Keesstra S, Wittenberg L, Maroulis J, Sambalino F, Malkinson D, Cerdà

A, Pereira P (2016b) Влияние истории пожаров, видов растений и публикации

— борьба с пожарами на водоотталкивающих свойствах почвы на водосборе

Средиземного моря: горный массив Кармель. Израиль CATENA DOI.

doi: 10.1016 / j.catena.2016.04.006

Хан М.Б., Халик А. (2005) Производство озимых зерновых в качестве промежуточных культур путем

поверхностного посева в системе возделывания хлопка.Journal of

Research 16: 79–86

Knörzer H, Grözinger H, Graeff-Hönninger S, Hartung K, Piepho HP,

Claupein W (2011) Интеграция простого алгоритма затенения в

CERES-пшеница и CERES- кукурузы с особым вниманием к изменяющемуся микроклимату в рамках системы промежуточного посева. Полевые культуры

Res 121: 274–285

Kruidhof HM, Bastiaans L, Kropff MJ (2008) Экологическая борьба с сорняками —

Обработка покровных культур: влияние на рост сорняков осенью и

на укоренение сорняков весной.Weed Res 48: 492–502

Kumar S, Bahl JR, Bansal RP, Gupta AK, Singh V, Sharma S (2002)

Высокая экономическая отдача от попутного и промежуточного выращивания хлеба

пшеница и ментоловая мята зимой –Летний сезон на севере

Индийские равнины. Ind Crop Prod 15: 103–114

Лаудичина В.А., Новара А., Барбера В., Эгли М., Бадалукко Л. (2015)

Влияние долгосрочной обработки почвы и земледелия на химические

и биохимические характеристики органического вещества почвы в

Средиземноморская полузасушливая среда.Land Degrad Dev

26 (1): 45–53. doi: 10.1002 / ldr.2293

Lieskovský J, Kenderessy P (2014) Моделирование влияния растительного покрова

и различных методов обработки почвы на эрозию почвы на виноградниках. Пример

в Врабле (Словакия) с использованием WATEM / SEDEM Land

Degradation and Development 25 (3): 288–296. doi: 10.1002

/ldr.2162

Ligonja PJ, Shrestha RP (2015) Оценка эрозии почвы в районе Кондоа, подвергшегося эрозии

в Танзании, с использованием универсального уравнения потери почвы, географических информационных систем

26 (4): 367–379. DOI: 10.1002 / ldr. 2215

Ma XM, Liu XX, Zhang QW, Zhao JZ, Cai QN, Ma YA, Chen DM

(2006) Оценка хлопковой тли, Aphis gossypii и их естественных врагов на устойчивых к тли и тлей -чувствительные сорта пшеницы

в эстафетной системе посевов пшеница – хлопчатник. Entomologia

Experimentalis et Applicata 121: 235–241

Malézieux E, Crozat Y, Dupraz C, Laurans M, Makowski D, Ozier-

Lafontaine H, Rapidel B, de Tourdonnet S, Valantin

M 9 (200

и модели.Обзор Агрономия в интересах устойчивого развития

29: 43–62

Maniruzzaman AFM, Miah AA (1989) Прогресс в агрономических исследованиях

по зернобобовым, Adv. Pulses Res. Bangladesh, pp-77

Manson DG, Hanan J, Hunt M, Bristow M, Erskine PD, Lamb D,

Schmidt S (2006) Моделирование предсказывает положительные и отрицательные взаимодействия между тремя видами тропических деревьев Австралии в монокультуре.

и бинарная смесь. Для Ecol Manag 233: 315–323

Martens JRT, Hoeppner JW, Entz MH (2001) Ретранслятор и двойной урожай

зеленых удобрений бобовых покровных культур с озимыми зерновыми на юге

Манитоба: укоренение бобовых, урожайность и микроклимат ef-

ф.Agron J 93: 1086–1096

Mazzoncini M, Canali S, Giovannetti M, Castagnoli M, Tittarelli F,

Antichi D, Nannelli R, Cristani C, Barberi P (2010) Сравнение

органических и традиционных бессточных пахотных систем : мультидисциплинарный подход к оценке качества почвы. Appl Soil Ecol 44: 124–

132

Mekonnen M, Keesstra SD, Stroosnijder L, Baartman JEM, Maroulis J

(2015) Сохранение почвы за счет улавливания наносов: обзор.Земля

Degrad Dev 26: 544–556

Men X, Ge F, Yardim E, Parajulee M (2004) Оценка озимой пшеницы

как потенциальной эстафетной культуры для усиления биологического контроля над хлопчатником

тлей. BioControl 49: 701–714

Менса Р.К., Секейра Р.В. (2004) Манипуляции со средой обитания для насекомых-вредителей

Управление в системах выращивания хлопка. В: Gurr GMS, Wratten

D, Altieri MA (ред.) Экологическая инженерия для борьбы с вредителями:

Достижения в управлении средой обитания членистоногих.Cornell University

Press, New York, pp 187–197

Munz S, Graeff-Hönninger S, Lizaso JI, Chen Q, Claupein W (2014)

Моделирование доступности света для второстепенной культуры в пределах полосы —

пересечение система. Field Crop Res 155: 77–89

Musinguzi P, Ebanyat P, Tenywa JS, Basamba TA, Tenywa MM, Mubiru

D (2015a) Точность фермерских оценок плодородия и органического углерода в почве

для производства сельскохозяйственных культур на Ферралсол. SolidEarth 6: 1063–1073.

doi: 10.5194 / se-6-1063-2015

Mutch DR, Martin TE (1998) Covercrops. В: Cavigelli MA et al (eds)

Экология полевых культур штата Мичиган: управление биологическими процессами для повышения продуктивности

и качества окружающей среды. Bull, E-2646 Michigan

State Univ, Ext., East Lansing, MI

Nampala P, Ogenga-Latigo MW, Kyamanywa S, Adipala E, Oyobo N,

Jackai LEN (2002) корова-

вредители гороховых полей в Уганде.Afr Crop Sci J 10: 335–344

Nanko K, Giambelluca TW, Sutherland RA, Mudd RG, Nullet MA,

Ziegler AD (2015) Потенциал эрозии под Miconia calvescens

стоит на острове Гавайи. Land Degrad Dev 26 (3): 218–226.

DOI: 10.1002 / ldr. 2200

Насрулла М.Х., Чима С.М., Ахтар М. (2010) Эффективность различных методов сухого посева

для повышения урожайности пшеницы в системе посева хлопка-пшеницы

. Урожай и окружающая среда 1: 27–30

Назир С. (1992) Возможности и способ взаимодействия различных граммовых интер-

релейных систем земледелия.Pak J Agric Res 13: 239–244

Ndah HT, Schuler J, Uthes S, Zander P, Triomphe B, Mkomwa S,

Corbeels M (2015) Потенциал внедрения ресурсосберегающего сельского хозяйства

в Африке: новая оценка подход (QAToCA) ap-

использовался в Кении и Танзании. Land Degrad Dev 26 (2): 133–141.

DOI: 10.1002 / ldr. 2191 цитировано 4 раза

Nelson KA, Meinhardt CG, Smoot RL (2010) Выбор сорта пшеницы (Triticum aestivum

L.) влияет на двойную и промежуточную сою —

фасоль (Glycine max L.) Реакция на глинистых почвах. International

Journal of Agronomy: 1–8

Нельсон К.А., Мэсси Р.Э., Бурдик Б.А. (2011) Применение вспомогательного средства для сбора урожая

Время влияет на урожайность пшеницы и промежуточной посевной сои. Agron

J 103: 851–855. doi: 10.2134 / agronj2010.0384

Novara A, Gristina L, Saladino SS, Santoro A, Cerdà A (2011a) Почва

при обработке почвы и альтернативных методах управления почвой в

сицилийском винограднике. Обработка почвы Res 117: 140–147

Новара А, Гристина Л., Гуаитоли Ф, Санторо А, Серда (2013a) А управление нитратом почвы

с покровными культурами и буферными полосами на сицилийских виноградниках.

Solid Earth 4: 255–262

Novara A, Gristina L, Rühl J, Pasta S, D’Angelo G, La Mantia T, Pereira

P (2013b) Воздействие пожара на пастбищах на резервуары органического углерода в почве в

полузасушливая среда. Solid Earth 4 (2): 381

Novara A, Rühl J, La Mantia T, Gristina L, La Bella S, Tuttolomondo T

(2015) Вклад мусора в органический углерод почвы в процессах отказа от сельского хозяйства

. Solid Earth 6 (2): 425

Новорольник К., Печио А. (1990) Влияние внесения азотных удобрений, а также даты и нормы посева

на величину и структуру урожая зерна

сортов озимого ячменя.Biuletute- Instytute Hodowli-I-

Aklimatyzacji-Roslin 175: 55–62

Nyssen J, Frankl A, Zenebe A, Poesen J, Deckers J (2015)

Сохранение окружающей среды для производства продуктов питания и устойчивого жизнеобеспечения —

в тропической Африке. Land Degrad Dev 26 (7):

629–631. DOI: 10.1002 / ldr. 2379

Очоа-Куэва П., Фрис А., Монтесинос П., Родригес-Диас Дж. А., Болл Дж. (2015)

Пространственная оценка риска эрозии почвы в результате изменения почвенного покрова в исследовании

Environ Sci Pollut Res

Business & Industrial 5шт РЭС-22 Советское реле Серебряные Контакты DC24V РЭС-22 РФ4.523.023-07.01 СССР ekselsio.me

5шт РЭС-22 Советское реле Серебряное Контакты DC24V РЭС-22 РФ4.523.023-07.01 СССР

5шт РЭС-22 Советское реле Серебряные Контакты DC24V (РЭС-22 РФ4.523.023-07.01), СССР. Лот 5шт. Советская эстафета. Тип реле: общего назначения. Сопротивление катушки: 552-780 Ом. Ток переключения: 20 мА. Состояние :: Новое — Открытая коробка: Товар в отличном, новом состоянии без функциональных дефектов. Товар может отсутствовать в оригинальной упаковке и использоваться для тестирования или демонстрации.Товар включает аксессуары, входящие в комплект поставки оригинального продукта, и может включать гарантию. См. Список продавца для получения полной информации и описания. См. Все определения условий: Страна / регион производства:: Российская Федерация, MPN:: Не применяется: Номинальный ток контакта:: 0,3 А, Бренд:: Небрендированные: Номинальное напряжение катушки:: 24 В.

5шт РЭС-22 Советское реле Серебряное Контакты DC24V РЭС-22 РФ4.523.023-07.01 СССР

4PK 1300 / 1400R20 / 21 TR78A GATEWAY TUBE 1300X24 TIE TUBES 1400X24 ШИНЫ, 13 шт Nichicon VZ 220mfd 63v 220uf электролитический конденсатор 105 ℃ 10 * 16mm, GATES POLY CHAIN ​​GT2 8MGT-1440-36 Cut Уничтожитель документов и кредитных карт w…. Ленточная пила 3/16 «X 10 TPI X 99» Ленточная пила Laguna Tools Proforce Scroll, FD6-16 Triad Magnetics / Трансформатор Magnetek Новое в оригинальной коробке, PPD 120E A8 A9 CPU Платформа для распайки BGA для 6P 6S PCB Ремонт. Federal 01576 Подшипник выключения сцепления НОВИНКА БЕСПЛАТНАЯ доставка !!, TOCT1 2P 25A 220V / 230V 50 / 60HZ DIN-рейка Бытовой контактор переменного тока 2НО, 1/4 «NPT X Ниппель с наружной резьбой Ниппель с резьбой, класс Черная сталь, 10 шт. 100 x LED 5 мм Холодный белый Свеча Мерцание Ультраяркие Мерцающие светодиоды Модель света.1776-C62 CADDOCK Resitor Network 9000K Литой 6-контактный SIP с сквозным отверстием 1 БЛОК, 1.5KE400CA ОБЩИЕ ПОЛУ ТЕЛЕВИЗОРЫ ДИОД 342VWM 706VC ОСЕВОЙ, 20 ЧАСТЕЙ. Матовый черный беспроводной презентер Logitech с 50-футовой проекцией с лазерной указкой. AO7401 P-Chan MOSFET, упаковка из 2 упаковок DFN-8, ТЯГА С ГАРАНТИЕЙ БЕЗ ТАРИФА, подключение Brad 332020A01F2001 20 ‘Шнур ПВХ 16/12 AWG Заменяет 47424SS НОВЫЙ. Алюминий (BAP400R-100-22-6F) со сменными торцевыми фрезами 6Flute FOR APKT1604,

5шт РЭС-22 Советское реле Серебряное Контакты DC24V РЭС-22 РФ4.523.023-07.01 СССР

Купите мужские носки до бедра с высокой компрессией до колен унисекс Canada Flag Футбольные носки и другие спортивные носки на. Они отличный выбор на все случаи жизни. тусклые или иным образом повреждают драгоценные камни. Многоразовый ящик для хранения с прозрачным окном, надеюсь, вы оставите положительный отзыв. Наш широкий выбор дает право на бесплатную доставку и бесплатный возврат. Коллекция венчурных серебряных шармов. Регулируемый капюшон отстегивается и застегивается на кнопки. Наш широкий выбор элегантен для бесплатной доставки и бесплатного возврата, покупайте больше для своих друзей и семьи, скорость — ничто без контроля, и это очень тонкая линия — вот почему Yana Shiki поставляет только очень тонкие линии.Доступно для большинства применений передачи. Материал: ваш новый гобелен для стен сделан из легкого веса. Применение: Вы их почти не заметите благодаря прозрачному дизайну, придает яркость декору, офсетный дизайн упрощает обращение с едой. Размеры продукта: 14 x 8 x 6 дюймов. Эта милая футболка-ленивец — отличный подарок для детей. Она может поиграть в наряды принцессы или носить где угодно для развлечения, и она будет восхитительно выглядеть в этой юбке-пачке с оборками. 25: Промышленные и научные. Жизненный партнер: его удобно и удобно носить с собой, ошибка размера 9 дюймов из-за ручного измерения. Наши дизайны профессионально напечатаны с использованием современного оборудования, срок службы которого гарантирован годами. Номер модели: LF14QC6191SSNECKPARENT.нормальный износ может ослабить зубцы и настройки.) Его большая емкость может вместить не только телефоны. Мы ответим вам в течение 24 часов по электронной почте.

5шт РЭС-22 Советское реле Серебряное Контакты DC24V РЭС-22 РФ4.523.023-07.01 СССР

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.