Кд 226. Диод КД226: характеристики, применение и роль в электронных схемах

Каковы основные характеристики диода КД226. Для чего применяется этот полупроводниковый прибор. Какую роль играет КД226 в электронных схемах. Как правильно использовать диод КД226 в различных устройствах.

Общая характеристика диода КД226

Диод КД226 относится к семейству кремниевых выпрямительных диодов средней мощности. Этот полупроводниковый прибор обладает следующими ключевыми характеристиками:

• Максимальное обратное напряжение: 100-800 В (в зависимости от модификации)
• Максимальный прямой ток: 1.7-2 А
• Максимальная рабочая частота: 35-50 кГц
• Прямое падение напряжения: 1.3-1.4 В при максимальном токе
• Обратный ток: не более 50 мкА
• Время обратного восстановления: 0.25 мкс

КД226 выпускается в пластмассовом корпусе с гибкими выводами. Масса диода не превышает 0.5 г. Диод маркируется цветным кольцом со стороны катода, цвет которого зависит от модификации.

Модификации диода КД226 и их отличия

Диод КД226 выпускается в нескольких модификациях, отличающихся максимальным обратным напряжением:

• КД226А — 100 В (оранжевое кольцо)
• КД226Б — 200 В (красное кольцо)
• КД226В — 400 В (зеленое кольцо)
• КД226Г — 600 В (желтое кольцо)
• КД226Д — 800 В (белое кольцо)
• КД226Е — 600 В (голубое кольцо)

Остальные параметры у всех модификаций практически идентичны. Выбор конкретной модификации зависит от требуемого обратного напряжения в схеме.

Основные области применения диода КД226

Благодаря своим характеристикам, диод КД226 нашел широкое применение в различных электронных устройствах и схемах:

• Выпрямители переменного тока в блоках питания
• Защита от обратного тока в цепях питания
• Преобразователи напряжения
• Ограничители напряжения
• Импульсные схемы
• Высокочастотные детекторы

КД226 часто используется в бытовой и промышленной электронике, радиоаппаратуре, системах автоматики и телекоммуникационном оборудовании.

Особенности применения диода КД226 в схемах

При использовании диода КД226 в электронных схемах следует учитывать несколько важных моментов:

1. Правильная ориентация диода в цепи — катод должен быть подключен к отрицательному потенциалу.
2. Соблюдение максимально допустимых значений тока и напряжения.
3. Обеспечение достаточного теплоотвода при работе на больших токах.
4. Учет падения напряжения на диоде (около 1.4 В) при расчете схем.
5. Использование защитных цепей при работе с индуктивной нагрузкой.

При правильном применении диод КД226 обеспечивает надежную и стабильную работу в различных электронных устройствах.

Преимущества и недостатки диода КД226

Как и любой электронный компонент, диод КД226 имеет свои сильные и слабые стороны:

Преимущества:

• Широкий диапазон рабочих напряжений (до 800 В)
• Достаточно высокий максимальный ток (до 2 А)
• Малое время обратного восстановления
• Низкая стоимость
• Доступность и распространенность

Недостатки:

• Относительно большое прямое падение напряжения
• Ограниченная рабочая частота (до 50 кГц)
• Чувствительность к перегреву
• Уступает современным диодам Шоттки по ряду параметров

Несмотря на определенные ограничения, диод КД226 остается популярным выбором для многих применений благодаря оптимальному сочетанию характеристик и стоимости.

Аналоги диода КД226 и их сравнение

На рынке существует ряд диодов, которые могут служить заменой КД226 в различных схемах:

• 1N4001-1N4007 — популярная серия выпрямительных диодов с похожими характеристиками
• 1N5400-1N5408 — диоды на большие токи (до 3 А)
• UF4001-UF4007 — ультрабыстрые диоды с меньшим временем восстановления
• BY255 — европейский аналог с близкими параметрами

При выборе замены следует тщательно сравнивать параметры диодов и учитывать особенности конкретной схемы. В некоторых случаях может потребоваться незначительная модификация схемы при использовании аналога.

Особенности монтажа и эксплуатации диода КД226

Для обеспечения надежной работы диода КД226 в электронных устройствах следует соблюдать ряд правил:

1. Пайка выводов должна производиться на расстоянии не менее 2 мм от корпуса диода.
2. Температура пайки не должна превышать 270°C, а время пайки — 5 секунд.
3. При монтаже необходимо исключить механические напряжения на выводах диода.
4. В мощных схемах рекомендуется использовать радиатор для отвода тепла.
5. Следует избегать превышения максимально допустимых параметров диода.

При соблюдении этих правил диод КД226 способен обеспечить длительный срок службы в различных электронных устройствах.

Перспективы применения диода КД226 в современной электронике

Несмотря на появление более современных полупроводниковых приборов, диод КД226 продолжает находить применение в электронике. Это обусловлено следующими факторами:

• Большой запас изделий на складах производителей и поставщиков
• Наличие огромного количества схем и устройств, разработанных с использованием КД226
• Низкая стоимость и доступность компонента
• Достаточные характеристики для многих типовых применений

Однако в новых разработках КД226 постепенно вытесняется более эффективными диодами, особенно в высокочастотных и высокомощных приложениях. Тем не менее, в ближайшие годы этот диод, вероятно, сохранит свою нишу в ремонте и обслуживании существующего оборудования.

Диод КД226 — DataSheet

Корпус диода КД226

 

Описание

Диоды кремниевые, диффузионные. Предназначены для преобразования переменного напряжения частотой до 35 кГц. Выпускаются

в пластмассовом корпусе с гибкими выводами. Маркируются цветным кольцом со стороны отрицательного вывода (катода): КД226А— оранжевым, КД226Б — красным, КД226В — зеленым, КД226Г —желтым, КД226Д — белым. Масса диода не более 0,5 г.

Пайка выводов диодов допускается не ближе 2 мм от корпуса при температуре не свыше +270 °С в течение 5 с.

Допускается последовательное (без шунтирования) соединение двух диодов одного типа; при этом суммарное обратное напряжение не
должно превышать 2U_{обр,макс}. При последовательном соединении большего числа диодов рекомендуется применять диоды одного типа и шунтировать каждый диод резистором с любым сопротивлением.

Допускается параллельное соединение диодов при условии, обеспечивающем исключение перегрузок любого параллельно подключенного
диода по максимально допустимому прямому току.

При работе диодов на емкостную нагрузку действующее значение тока через диод не должно превышать 1,57 I_{пр,ср,макс}.

 

Параметры диода КД226

Параметр	Обозначение	Маркировка	Значение	Ед. изм.
Аналог		КД226А	1N3359, BY259
		КД226Б	UT3020
		КД226В	1N487A
		КД226Г	SDA113E
		КД226Е	SDA113P
Максимальное постоянное обратное напряжение.	U o6p max, Uo6p и max	КД226А	100	В
		КД226Б	200
		КД226В	400
		КД226Г	600
		КД226Д	800
		КД226Е	600
Максимальный постоянный прямой ток.	Iпp max, Iпp ср max, I*пp и max	КД226А	1.7	А
		КД226Б	1.7
		КД226В	1.7
		КД226Г	1.7
		КД226Д	1.7
		КД226Е	2
Максимальная рабочая частота диода	fд max	КД226А	50	кГц
		КД226Б	50
		КД226В	50
		КД226Г	50
		КД226Д	50
		КД226Е	50
Постоянное прямое напряжение	Uпр не более (при Iпр, мА)	КД226А	1. 4 (1.7 А)	В
		КД226Б	1.4 (1.7 А)
		КД226В	1.4 (1.7 А)
		КД226Г	1.4 (1.7 А)
		КД226Д	1.3 (1 А)
		КД226Е	1.4 (1.7 А)
Постоянный обратный ток	Iобр не более (при Uобр, В)	КД226А	50 (100)	мкА
		КД226Б	50 (200)
		КД226В	50 (400)
		КД226Г	50 (600)
		КД226Д	50 (800)
		КД226Е	10 (600)
Время обратного восстановления — время переключения диода с заданного прямого тока на заданное обратное напряжение от момента прохождения тока через нулевое значение до момента достижения обратным током заданного значения	tвос, обр	КД226А	0. 25	мкс
		КД226Б	0.25
		КД226В	0.25
		КД226Г	0.25
		КД226Д	0.25
		КД226Е	0.25
Общая емкость	Сд (при Uобр, В)	КД226А	—	пФ
		КД226Б	—
		КД226В	—
		КД226Г	—
		КД226Д	—
		КД226Е	—

Описание значений со звездочками(*) смотрите в буквенных обозначениях параметров диодов.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter.

Цветовая маркировка импульсных и выпрямительных диодов. И основные характеристики.

тип диода	Inp. А	Up.в	цвет корпуса или метка	цветовая маркировка
				со стороны анода	со стороны катода
Д9Б	0.09	10		красное кольцо
Д9В	0.01	30		оранжевое кольцо
Д9Г	0. 03	30		желтое кольцо
Д9Д	0.03	30		белое кольцо
Д9Е	0.05	50		голубое кольцо
Д9Ж	0.01	100		зеленое кольцо
Д9И	0.03	30		два желтых кольца
Д9К	0. 06	30		два белых кольца
Д9Л	0.03	100		два зеленых кольца
Д9М	0.03	30		два голубых кольца
КД102А	0.1	250		зеленая точка
2Д102А	0.1	250		желтая точка
КД102Б	0. 1	300		синяя точка
2Д102Б	0.1	300		оранжевая точка
КД103А	0.1	50	черный торец	синяя точка
КД103Б	0.1	50	зеленый торец	желтая точка
КД105А	0.3	200		белое (желтое) кольцо
КД105Б	0. 3	400	зеленая точка	белое (желтое)
КД105В	0.3	600	красная точка	кольцо белое (желтое)кольцо
КД105Г	0.3	800	белая или желтая точка	белое (желтое) кольцо
КД208А	1.0	100	черная (зеленая, желтая) точка	белое (желтое) кольцо
КД209А	0. 7	400		черная (зеленая или желтая) точка
КД209А	0.7	400		красная полоса на торце
КД209Б	0.7	600	белая точка	черная (зеленая или желтая) точка
КД209Б	0.7	600	белая точка	красная полоса на торце
КД209В	0. 5	800	черная точка	черная (зеленая или желтая) точка
КД209В	0.5	800	черная точка	красная полоса на торце
КД209Г	0.2	1000	зеленая точка	черная (зеленая или желтая) точ.
КД209Г			зеленая точка	красная полоса на торце
КД221А	0. 7	100		голубая точка
КД221Б	0.5	200	белая точка	голубая точка
КД221В	0.3	400	черная точка	голубая точка
КД221Г	0.3	600	зеленая точка	голубая точка
КД226А	2	100			оранжевое кольцо
КД226Б	2	200			красное кольцо
КД226В	2	400			зеленое кольцо
КД226Г	2	600			желтое кольцо
КД226Д	2	800			белое кольцо
КД226Е	2	600			голубое кольцо
КД243А	1	50			фиолетовое кольцо
КД243Б	1	100			оранжевое кольцо
КД243В	1	200			красное кольцо
КД243Г	1	400			зеленое кольцо
КД243Д	1	600			желтое кольцо
КД243Е	1	800			белое кольцо
КД243Ж	1	1000			голубое кольцо
КД247А	1	50			2 фиолетовых кольца
КД247Б	1	100			2 оранжевых кольца
КД247В	1	200			два красных кольца
КД247Г	1	400			два зеленых кольца
КД247Д	1	600			два желтых кольца
КД247Е	1	800			два белых кольца
КД247Ж	1	1000			два голубых кольца
КД410А	0. 05	1000		красная точка
КД410Б	0.05	600		синяя точка
КД509А	0.1	50		уз.синее кольцо	широкое синее кольцо
2Д509А	0.1	50			широкое синее кольцо
КД510А	0.2	50		два зеленых узких кольца	широкое зеленое кольцо
2Д510А	0. 2	50		зеленая точка	широкое зеленое кольцо
КД521А	0.05	75		два синих узких кольца	широкое синее кольцо
КД521Б	0.05	50		два серых узких кольца	широкое серое кольцо
КД521В	0.05	30		два желтых узких кольца	широкое желтое кольцо
КД521Г	0. 05	120		два белых узких кольца	широкое белое кольцо
КД522А	0.1	30		черное широкое кольцо	черное узкое кольцо
КД522Б	0.1	50		черное широкое кольцо	два черных узких кольца
2Д522Б	0.1	50		черное широкое кольцо	черная точка
КД906 (А-Г)	0. 1	75… …50… 30	белая полоса у 4 вывода
2Д906А	0.2	75	белая пол. у 4 вывода +красная точ.
2Д906Б	0.2	50	белая пол. у 4 вывода + красная точ.
2Д906В	0.2	30	белая пол. у 4 вывода + 2 красных т.
КДС111А	0. 2	300	красная точка
КДС111Б	0.2	300	зеленая точка
КДС111В	0.2	300	желтая точка
КЦ422А	0.5	50	точка отсутствует		черная точка
КЦ422Б	0.5	100	белая точка		черная точка
КЦ422В	0. 5	200	черная точка		черная точка
КЦ422Г	0.5	400	зеленая точка		черная точка

Проект каркасного дома КД-226-2-351 — ДомиСад33

	(фундамент, каркас, кровля)	(фундамент, каркас, кровля, наружная отделка, окна, двери)	(утепленный дом с наружной и внутренней отделкой)
Монтаж винтовых свай
Обвязка фундамента
Обвязка фундамента. Ростверк из 3-х досок
Доска сухая строганая 45х140х6000
Глухарь с шайбой
Черновой пол по ростверку
Доска обрезная 25х150х6000
Монтаж сетки от грызунов
Сетка металлическая от грызунов
Монтаж ветрозащитной мембраны
Монтаж лаг пола
Доска сухая строганая 45х195х6000
Утепление перекрытий минватой 200 мм
Изорок Изолайт-Л
Монтаж ОСП на пол
Наружные стены
Каркас наружных стен
Доска сухая строганая 45х140х6000
Доска сухая строганая 20х120х6000
Утепление наружных стен минватой 150 мм
Изорок Изолай-Л
Монтаж ветрозащитной мембраны в фасад
Тайвек Хаусврап
Монтаж бруска вентзазора на фасад
Брусок строганый 50х50х3000
Монтаж отливов
Отливы металлические 5 см
Монтаж имитации бруса на фасад
Имитация бруса 18х145 мм
Монтаж пароизоляционной пленки на наружные стены
Изоспан Д/полиэтиленовая пленка 200 мкм
Внутренние перегородки
Каркас внутренних перегородок
Доска сухая строганая 45х90х6000
Звукоизоляция внутренних перегородок минватой 100 мм
Изорок Изолайт-Л
Монтаж мембраны на внутренние перегородки
Монтаж имитации бруса на перегородки
Имитация бруса 18х145 мм
Изготовление стропильных ферм
Доска сухая строганая 45х140х6000
Доска сухая строганая 45х90х6000
Фанера ФСФ 12х1220х1440
Монтаж стропильных ферм
Монтаж лобовых досок
Доска сухая строганая 45х140х6000
Доска сухая строганая 45х90х6000
Монтаж подкровельной мембраны
Монтаж обрешетки
Брусок строганый 50х50х3000
Монтаж контробрешетки
Доска обрезная 25х150х6000
Монтаж металлочерепицы с доборами
Монтаж кровли и доборный элементов
Отделка лобовой доски “финская лесенка”
Доска сухая строганая 20х120х6000
Монтаж сетки от насекомых
Сетка от насекомых
Подшив свесов
Доска сухая строганая 20х120х6000
Пароизоляция потолка/Пароизоляция по стропилам (для мансардных этажей)
Изоспан Д/полиэтиленовая пленка 200 мкм
Обрешетка потолка
Доска сухая строганая 20х120х6000
Утепление потолка/утепление кровли по стропилам (для мансардных этажей)
Изорок Изолайт-Л
Аренда задувочной машины
Монтаж имитации бруса на потолок
Имитация бруса 18х145 мм
Входная дверь, окна
Монтаж входной двери
Дверь входная JELD-WEN F2000 W71
Комплект окон REHAU GRAZIO 55/70 мм, фурнитура ROTO
Доска сухая строганая 20х120х6000

Диод КД226

Справочник количества содержания ценных металлов в диоде КД226 согласно паспорта на изделие и информационной литературы. Указано точное значение драгоценных металлов в граммах (Золото, серебро, платина, палладий и другие) на единицу изделия.

Содержание драгоценных металлов в диоде КД226

Золото: 5,37E-04 грамм.
Серебро: 1,30E-04 грамм.
Платина: 0 грамм.
Палладий: 0 грамм.

Источник информации: .

Фото диода КД226:

Панель ламповая виды

Диод — электронный элемент, обладающий различной проводимостью в зависимости от направления электрического поля. Электрод диода, подключаемый к положительному полюсу источника тока, когда диод открыт (то есть имеет маленькое сопротивление), называют анодом, подключаемый к отрицательному полюсу — катодом.

О комплектующем изделии – Диод

Диод – видео.

Диод это полупроводниковый прибор основанный на PN-переходе. А если без теории, то диод в одном направлении пропускает ток, а в другом нет. Вот и все.

Как работает диод – видео.

В этом выпуске вы узнаете: что такое диод, принцип действия диода, как работает диод, что такое p – n переход; что такое прямой ток диода, что такое обратный ток диода; каково внутреннее сопротивление диода; что такое вольт- амперная характеристика диода; что такое пропускное и не пропускное напряжение диода; как работает диод в цепи постоянного тока, как работает диод в цепи переменного тока; как устроен плоскостной диод; какие существуют виды диодов; как устроен выпрямительный диод.

Характеристики диодов КД226:

Купить или продать а также цены на Диод КД226:

Оставьте отзыв о КД226:

Справочник диодов выпрямительных отечественных.

Отечественные производители диодов   Наименование   PDF   Iмакс, А Uмакс, В F, кГц Выпрямительные диоды Д202, Д203, Д204, Д205-Д211 0.4  600 20 Д226(А,Е)     0.3 400 1.0 Д231, Д232, Д233, Д234 10 600 1. 1 Д242, Д243, Д245, Д246-Д248     10 600 2.0 КД102, КД103     0.1 300 20 КД104А     0.01 300 20 КД105     0.3 800 1.0 КД106     0.3 100 30 КД208, КД209     1.5 800 1.0 КД212     1 200 100 КД213     10 200 100 КД221     0.7 600 50 КД226     1. 7 800 36 КД2997, КД2999     30 200 100 Универсальные, импульсные и высокочастотные диоды КД509, КД510     0.2 50   КД519     0.03 30   КД520     0.02 15   КД521, КД522     0.1 75   Высоковольтные столбы Д1005 — Д1011     0.3 10000 1.0 КЦ103     0.01 2000 50 КЦ105     0. 1 10000 10 КЦ106     0.01 10000 20 КЦ108, КЦ109     0.3 6000 50 КЦ114, КЦ117     0.05 12000 10 КЦ201     0.5 15000 1.0 Е306     0.001 3000 50

границ | CD226: новая роль в иммунологических заболеваниях

Структура CD226

Открытие и присвоение имен

CD226, а именно антиген активации 1 линии Т (TLisA1), антиген 1 тромбоцитов и Т-клеток (PTA-1) или DNAM-1, является членом суперсемейства иммуноглобулинов. Молекулярная мембрана содержит два V-подобных домена иммуноглобулина (Shibuya et al. , 1996; Sherrington et al., 1997). Burns et al. впервые обнаружили, что CD226 экспрессируется на поверхности Т-клеток в 1985 году, документально подтвердив, что он связан с активацией CTL, поэтому он был назван TLisA1 (Burns et al., 1986). Более поздние исследования показали, что CD226 также экспрессируется в тромбоцитах и ​​участвует в агрегации активации тромбоцитов, поэтому он был назван PTA1 (Shibuya et al., 1996). В 1997 г. Burns et al. подтвердили, что TLisA1 и DNAM-1 на самом деле являются одной и той же молекулой (Sherrington et al., 1997). В 2000 году на Седьмой Международной конференции группы сотрудничества антигенов дифференцировки человеческих лейкоцитов молекула была официально названа CD226 (Mason et al., 2001).

Ген и структура

CD226 представляет собой консервативную последовательность в генах человека и мыши, которые расположены в 18q22.3 и 18E4 полосы хромосомы соответственно (Jinlong et al., 2002). В 2002 году у мышей был успешно идентифицирован ген CD226, общая длина которого составляет 2487 п. н. Он содержит открытую рамку считывания размером 1002 п.о. и кодирует ведущую последовательность из 18 аминокислот и зрелый белок CD226 из 315 аминокислот (Xinhai et al., 2002). В 2006 году была идентифицирована промоторная последовательность гена CD226 человека (Jian et al., 2006). Ген имеет по крайней мере два промотора, которые расположены на уровне от -810 до -287 п.н. и от +33 до +213 п.н., которые выполняют различные тканеспецифические роли и физически разделены негативным регуляторным элементом (Jian et al., 2006). Ген CD226 человека содержит 7 экзонов и 6 интронов, из которых экзон 7 кодирует 41 аминокислоту в цитоплазматической области (Jinlong et al., 2002). Биоинформатический анализ показывает, что в этой области гена CD226 имеются предполагаемые сайты связывания для факторов транскрипции AP-1, Sp1, PEA3 и Ets-1 (Jian et al., 2006). Полная длина кДНК CD226 человека составляет 2664 п.о., она содержит открытую рамку считывания и кодирует ведущую последовательность из 18 аминокислот и зрелый белок CD226 из 318 аминокислот. Внеклеточный домен содержит 230 аминокислот, включая 2 иммуноглобулиновых V-подобных домена и 8 N-связанных сайтов гликозилирования, и, таким образом, он чрезвычайно чувствителен к деградации своих гликановых остатков; дегликозилирование дает белок 35 кДа (Shibuya et al., 1996). Трансмембранный домен содержит 28 аминокислот. Внутриклеточный домен содержит 60 аминокислот. Внутриклеточный домен содержит 4 остатка тирозина и 1 остаток серина, которые могут собирать сигнальные белки после фосфорилирования.Эта реакция основана на взаимодействии между CD226 и его лигандом (Jun et al., 2012). Первый домен вне оболочки молекулы CD226 является ее структурной основой для распознавания лигандов, адгезии, образования иммунных синапсов и цитотоксического действия (Shengke et al., 2014; Рисунок 1).

Рисунок 1. CD226 состоит из трех доменов. Внеклеточный домен включает 2 V-подобных домена иммуноглобулина и 8 сайтов N-связанных гликопротеинов. Первый домен вне оболочки молекулы CD226 является ее структурной основой для распознавания лигандов, адгезии, образования иммунных синапсов и цитотоксического действия. Внутриклеточный домен содержит 4 остатка тирозина и 1 остаток серина. Когда CD226 связывается со своим лигандом, молекула CD226 направленно перемещается к липидным рафтам на клеточной мембране и рекрутирует внутриклеточные сигнальные молекулы, такие как PTK и PKC, которые фосфорилируют по четырем остаткам и активируют клетку.

Существует три типа однонуклеотидных мутаций в экзоне гена CD226, включая CD226 rs763361, rs34794968 и rs727088 (Bossini-Castillo et al., 2012). Было подтверждено, что эти три однонуклеотидных полиморфизма гена CD226 связаны с восприимчивостью к различным аутоиммунным заболеваниям (Bossini-Castillo et al., 2012). Несинонимичные мутации CD226 rs763361 / gly307ser связаны с предрасположенностью к аутоиммунным заболеваниям, таким как диабет 1 типа (T1D), ревматоидный артрит (RA), рассеянный склероз (MS), аутоиммунное заболевание щитовидной железы (AITD) и системный склероз (SSc; Todd). et al., 2007; Qiu et al., 2008; Smyth et al., 2008; Dieudé et al., 2011). Поскольку несинонимичная мутация, кодируемая этим аллелем, может кодировать цитоплазматический хвост (экзон 7) белка CD226, эта мутация может влиять на функцию Т-клеток или других клеток (Todd et al., 2007). Действительно, дисфункция Т-клеток и других клеток тесно связана с началом и развитием аутоиммунных заболеваний (Li et al., 2013; Maogen et al., 2014; Yaoyao et al., 2018). Другие гипотезы предполагают, что эта мутация может нарушать сайты связывания энхансеров и / или сайленсеров, тем самым изменяя сплайсинг РНК (Todd et al., 2007). Кроме того, замена rs763361 на серин может также мешать фосфорилированию 322 тирозиновых и 329 сериновых сайтов CD226, а также посттрансляционным модификациям в нижестоящих сигнальных путях (Todd et al., 2007; Бокюань и Чжувэй, 2010). CD226 rs727088, однонуклеотидный полиморфизм, может влиять на экспрессию CD226 на уровне транскрипции, что, как было обнаружено, сильно коррелирует с восприимчивостью к опухоли (Löfgren et al., 2010). Однонуклеотидная мутация CD226 rs34794968 сама по себе не влияет на возникновение и развитие заболевания, но может играть синергетическую роль с двумя вышеупомянутыми мутациями (Bossini-Castillo et al., 2012).

Выражение и распространение

Паттерны экспрессии CD226 разнообразны (Ralston et al., 2004). В периферической крови CD226 экспрессируется на Т-клетках, NK-клетках, NK-Т-клетках, В-клетках, моноцитах / макрофагах, дендритных клетках (DC), клонах мегакариоцитов / тромбоцитов и гематопоэтических клетках-предшественниках (Burns et al., 1986; Scott et al., 1989; Kojima et al., 2003; Shibuya et al., 2003; Reymond et al., 2004; Dongchu et al., 2005). Эндотелиальные клетки также демонстрируют низкие количества этого белка в условиях покоя, но экспрессия значительно усиливается при их стимуляции (Lihua et al., 2003).CD226 также экспрессируется на зрелых тучных клетках и клетках-предшественниках CD34 + костного мозга, но не на предшественниках эритроцитарного клона (Dongchu et al., 2005; Bachelet et al., 2006). Было продемонстрировано, что CD226 + NK-клетки играют важную роль в распознавании нескольких типов опухолей человека, таких как миелома, меланома и карцинома яичников, а недавние исследования показали, что CD226 может быть одним из маркеров зрелых NK-клеток ( Мартине и др., 2015). Ранее мы сообщали, что количество CD226 + NK-клеток увеличивается при волчанке и преимущественно инфильтрируется в волчаночную почку.Кроме того, эти активированные NK-клетки опосредуют повреждение тканей, продуцируя цитотоксические гранулы, что в конечном итоге способствует волчаночному нефриту (Huang et al., 2011).

Лиганды CD226

В 2003 году Bottino et al. подтвердили, что лиганд человеческого CD226 представляет собой CD155 (nacl-5, PVR) и CD112 (никотин-2), которые имеют аналогичную молекулярную массу, 70 кДа и 65/60 кДа. Они принадлежат к семейству никотиноподобных белков и семейству никотиновых белков (Bottino et al., 2003; Wang et al., 2009). В 2005 году Tahara-Hanaoka et al. (2005) продемонстрировали, что лигандами молекул CD226 мыши также являются CD155 и CD112. Молекулы CD155 и CD112 широко экспрессируются в различных тканевых клетках, таких как нервные клетки, эндотелиальные клетки, эпителиальные клетки, антигенпрезентирующие клетки, фибробласты, клетки, инфицированные патогенами, и множество опухолевых клеток (Bottino et al., 2003; Tahara-Hanaoka et al., 2004; Dardalhon et al., 2005; Bryceson et al., 2006; Pende et al., 2006; Gilfillan et al., 2008; Kraus et al., 2016). Солидный рак, а также гематологические злокачественные новообразования имеют высокие уровни CD155 и CD112, что делает их хорошими мишенями для атаки CTL посредством CD226-специфического связывания (Castriconi et al., 2004; Pende et al., 2005; Moretta et al., 2006). ; Карлстен и др., 2007; Эль-Щербины и др., 2007). Они также экспрессируются в иммунных клетках, таких как моноциты, DC и активированные Т-клетки (Pende et al., 2006), а также влияют на некоторые физиологические процессы.

Функция CD226

CD226 участвует в функции клеток CTL и NK клеток

В организме человека CD226 высоко экспрессируется на поверхности NK-клеток и CD8 + Т-клеток (Shibuya et al., 1996). У мышей 40-50% NK-клеток и все CTL-клетки конститутивно экспрессируют CD226 (Dardalhon et al., 2005).

CD226, как молекула адгезии, способствует миграции, активации, пролиферации, дифференцировке и функции CD8 + Т-клеток. Клеткам CTL необходимо мигрировать к месту воспаления или микросреде опухоли через молекулы адгезии для установления тесного контакта (Bryceson et al., 2006). Во вторичных лимфоидных органах молекулы адгезии опосредуют взаимодействие между клетками CTL и антигенпрезентирующими клетками и, наконец, активируют, пролиферируют и дифференцируют их.Взаимодействие CD226 / CD155 очень важно для пролиферации CD8 + Т-клеток и иммунного ответа антиген-специфичных CD8 + Т-клеток (Gilfillan et al., 2008). Костимулирующий сигнальный путь CD8 + Т-клеток, опосредованный CD226, был прерван в процессе хронической инфекции ВИЧ-1. Следовательно, экспрессия CD226 на поверхности CD8 + Т-клеток подавляется, что снижает эффект CTL (Cella et al., 2010).

Все больше и больше данных показывают, что CD226 участвует в биологической функции NK-клеток (Enqvist et al., 2015; Мартине и Смит, 2015; Мартине и др., 2015). Комбинация CD226 с CD155 и / или CD112 в сотрудничестве с NKp30 может побуждать NK-клетки растворять незрелые DC и способствовать пролиферации зрелых DC (Balsamo et al., 2009). Созревание ДК способствует иммунному ответу за счет усиления адаптивной иммунной системы (Zheng et al., 2006; Ramalingam et al., 2012; Peng et al., 2020). Взаимодействие между CD226 и его лигандами участвует в перекрестном связывании NK- и Т-клеток. При реакции трансплантат против хозяина (GVHD; Lozano et al., 2013) и других аутоиммунных заболеваниях (Ardolino et al., 2011), NK-клетки могут распознавать и уничтожать стимулированные антигеном Т-клетки, которые были активированы / пролиферировали, а также могут способствовать дифференцировке хелперных Т-клеток.

CD226 вместе с CD96, TIGIT и CRTAM также участвует в регуляции функции NK-клеток (Ralston et al., 2004; Chan et al., 2014; Nabekura et al., 2014; Shu-Bin et al. , 2020). После стимуляции ЛПС доля IFN-γ + NK-клеток у мышей с дефицитом CD226 была значительно ниже, чем у мышей дикого типа (Chan et al., 2014). Считается, что CD96 ингибирует секрецию IFN-γ NK-клетками. Следовательно, молекулы CD96 и CD226 обращают обратную секрецию IFN-γ в NK-клетках (Chan et al., 2014). TIGIT, CD96 и CRTAM способны распознавать нектин и молекулы семейства Necl и регулировать функцию NK-клеток, что еще больше усложняет исследование CD226 в биологической функции NK-клеток (Chan et al., 2014). В последние годы сообщалось, что синергетический эффект CD226 и этих трех молекул уравновешивает активацию NK-клеток in vivo (Martinet and Smyth, 2015).

CD226 участвует в функции CD4 + Т-клеток

В 2005 г. Dardalhon et al. (2005) заявили, что CD226 был специфическим поверхностным маркером клеток Th2 у мышей. В 2006 году Shibuya et al. выявили, что свежевыделенные CD4 + Т-клетки у мышей также экспрессируют молекулы CD226 низкого уровня, что исходные Т-клетки экспрессируют молекулы CD226, и что наиболее поляризованные клетки Th2 и Th3 также экспрессируют молекулы CD226 (Shibuya et al., 2006). В 2012 году Lozano et al. продемонстрировали, что TIGIT может подавлять функции Т-клеток, конкурируя с CD226 (Lozano et al., 2012). В 2015 году Fuhrman et al. обнаружили, что CD226 экспрессируется в CD4 + Т-клетках памяти (Fuhrman et al., 2015). Эти аномальные клетки и относительные провоспалительные цитокины способствуют возникновению многих иммунологических заболеваний (Yang and Song Guo, 2016; Sujuan et al., 2018, 2019).

В 2013 году Sutavani et al. (2013) доказали, что поверхностным маркером регуляторных Т-клеток человека 1 типа (Tr1) является CD4 + CD49b + LAG-3 + CD226 +. Tr1 представляет собой разновидность хронически активированных CD4 + Т-клеток в присутствии IL-10 (Weishan et al., 2017; Fang et al., 2018), который выполняет функции низкой пролиферации, высокой секреции IL-10, низкой экспрессии IL-2 и IL-4 (Gagliani et al., 2013). CD226 высоко экспрессируется на поверхности регуляторных Т-клеток человека I типа и участвует в уничтожении миелоидных антигенпредставляющих клеток (Magnani et al., 2011). Tr1 выполняет функцию подавления иммунного ответа и поддержания периферической иммунной толерантности. Имеет перспективу применения при лечении аутоиммунных заболеваний, опухолей, а также при отказе от аллогенной трансплантации тканей и органов.

Недавно было обнаружено, что молекулы CD226 и TIGIT, экспрессируемые на поверхности клеток CD4 + Foxp3 + Treg человека, связаны с их стабильностью и ингибированием. Подобно клеткам Tr1, CD4 + Foxp3 + Treg имеют решающее значение для поддержания гомеостаза и предотвращения аутоиммунных проблем (Ya et al., 2014; Anping et al., 2016). Чистота и ингибирующая функция подмножеств Treg CD226 + TIGIT- будут ослаблены после амплификации, а с увеличением IL-10 и эффекторных цитокинов предполагается, что экспрессия CD226 влияет на функцию Treg (Fuhrman et al., 2015). Foxp3, Helios были высоко экспрессированы в клетках CD226-TIGIT + Treg и с Treg-специфическим деметилированным участком. In vitro эксперименты по ингибированию показывают, что экспрессия TIGIT в Treg-клетках связана с его сильной ингибирующей активностью. С другой стороны, уровень экспрессии CD226 в активированных Treg-клетках повышается. Следовательно, в процессе поиска блокирования CD226 для ослабления активности традиционных эффекторных Т-клеток следует сосредоточить внимание на соответствующих дозах, чтобы избежать одновременного снижения функции Treg (Fuhrman et al., 2015). Однако у пациентов с РА мы недавно продемонстрировали, что, хотя и CD226, и TIGIT демонстрируют повышенные уровни экспрессии в клетках CD4 + Foxp3 +, они не связаны с активностью заболевания у пациентов с РА (Mengru et al., 2019). Таким образом, CD226 не кажется идеальным маркером для Treg-клеток человека.

CD226 участвует в функции других клеток

CD226 также экспрессируется в тромбоцитах. Поперечное сшивание CD226 и mAb может индуцировать активацию тромбоцитов, позволяя тромбину индуцировать фосфорилирование тирозина CD226 и опосредовать адгезию тромбоцитов (Scott et al., 1989). Впоследствии документально подтверждено, что CD226 опосредует адгезию тромбоцитов и мегакариоцитов к эндотелиальным клеткам сосудов (Kojima et al., 2003).

Тучные клетки человека и эозинофилы могут одновременно экспрессировать CD226 и CD112. Эти клетки играют важную роль в развитии аллергических заболеваний (Wenru et al., 2012, 2014, 2015). На поздних и хронических стадиях анафилактического воспаления тучные клетки и эозинофилы с тканевой инфильтрацией образуют регуляторную единицу. В присутствии эозинофилов дегрануляция, опосредованная FC RI тучных клеток, усиливается.Этот эффект частично вызван взаимодействием CD226 / CD112, запускающих сигнальные пути Fyn, LAT и фосфолипазы Cγ2, участвующие в указанном выше прогрессе (Bachelet et al., 2006) (Рисунок 2).

Рисунок 2. В качестве молекулы адгезии связывание CD226 и CD155 может опосредовать взаимодействие между клетками CTL и профессиональными антигенпредставляющими клетками, что в конечном итоге позволяет им активировать, пролиферировать и дифференцироваться. CD226 также может индуцировать активацию тромбоцитов и опосредовать адгезию тромбоцитов за счет перекрестного связывания со своим mAb.Уничтожение опухолевых клеток NK-клетками в основном зависит от связывания CD226 с CD112 и CD155, экспрессируемыми на опухолевых клетках. В присутствии эозинофилов дегрануляция, опосредованная FC RI тучных клеток, усиливается. Этот эффект частично вызван взаимодействием CD226 / CD112.

CD226 и клинические болезни

CD226 и аутоиммунные заболевания

Предыдущие исследования показали, что экспрессия CD226 отрицательно коррелирует с ингибирующей функцией Foxp3 + Tregs.TIGIT, ко-ингибирующая молекула на Т-клетки, оказывает иммуносупрессивное действие, конкурируя с CD226 за тот же лиганд CD155 (Lozano et al., 2012). Костимулирующая ось TIGIT и CD226 играет важную роль в иммунорегуляторной функции Foxp3 + Treg и связана с несколькими аутоиммунными заболеваниями. Несколько линий доказательств подтверждают, что подавляющая способность CD226 + Tregs ингибируется (Ning et al., 2019), и что TIGIT + Tregs обладают высокой подавляющей способностью и в большей степени (Joller et al., 2014).Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (EAE) способствует нарушению самотолерантности и приводит к тому, что клетки Th27 проникают в центральную нервную систему, чтобы опосредовать воспаление и повреждение нейронов (Rostami and Ciric, 2013). Zhang et al. сообщили, что чувствительность к EAE у мышей, получавших анти-CD226 pAb, была заметно снижена за счет уравновешивания соотношения Th27 / Treg (Rong et al., 2016), а повышенная супрессивная способность Treg во время EAE связана с отсутствием CD226 и увеличением уровни экспрессии TIGIT (Ning et al., 2019). Язвенный колит (ЯК) — хроническое воспалительное заболевание, связанное с иммунитетом. Long et al. обнаружили, что отсутствие экспрессии CD226 на Foxp3 + Tregs играет положительную роль в восстановлении клинической ремиссии из активной стадии у пациентов с ЯК, а экспрессия TIGIT на CD226-Foxp3 + Tregs потенциально положительно влияет на подавление CD226-Foxp3 + Treg ( Ян и др., 2020).

В последние годы с развитием технологии секвенирования связь между геном и заболеванием становится более ясной.Изучение полиморфизма гена CD226 и предрасположенности к аутоиммунным заболеваниям вступило в новый этап.

CD226 rs763361 представляет собой 307 глицин, замещенный серином. Эта мутация может быть связана с развитием ряда связанных с иммунитетом заболеваний, таких как СКВ, ССД, СД1 и РА (Du et al., 2011; Avouac et al., 2013; Mattana et al., 2014; Elhai et al., 2014; Elhai et al., 2011; Avouac et al., 2013; Mattana et al., 2014; Elhai et al. др., 2015). SSc — это хроническое аутоиммунное заболевание, поражающее соединительную ткань, характеризующееся фиброзом кожи и утолщением кожи. В модели мышей CD226 — / — характеристики фиброза были ослаблены по сравнению с мышами дикого типа.Возможно, что экспрессия CD226 способствует развитию SSc (Avouac et al., 2013). В модели in vitro RA, CD226 и CD226L экспрессировались в NK-клетках и фибробластоподобном синовите (FLS) пациентов с RA, соответственно, что позволяет предположить, что RA-FLS-клетки могут распознаваться и уничтожаться NK-клетками (Nielsen et al. ., 2014). Многие исследования показали, что аутоиммунные заболевания связаны с дисфункцией NK-клеток. Предполагается, что мутация 307 глицин-серина CD226 может вызывать дисфункцию NK-клеток (Fogel et al., 2013). Активация Т-клеток требует фактора обмена гуаниновых нуклеотидов VAV1 (Katzav et al., 1989). Включение CD226 запускает активацию VAV1 через фосфорилирование тирозина и синергетично с передачей сигналов через рецептор Т-клеток (TCR), чтобы положительно регулировать продукцию цитокинов CD4 + Т-клетками. Более того, совместное участие TCR и CD226 rs763361, которое связано с аутоиммунитетом, дополнительно усиливает активацию VAV1 и продукцию IL-17 (Gaud et al., 2018). Все вышеперечисленные результаты предполагают возможность нацеливания на CD226 при лечении аутоиммунных заболеваний.

CD226 и опухоли

CD226 экспрессируется на поверхности NK-клеток и CD8 + Т-клеток. Как важный рецептор, активирующий NK-клетки, CD226 широко участвует в различных иммунных ответах. Исследования показали, что CD226 играет важную роль в уничтожении опухолевых клеток NK-клетками (Verhoeven et al., 2008; Lakshmikanth et al., 2009). Образование стабильных конъюгатов с опухолевыми клетками необходимо для того, чтобы NK-клетки оказывали эффект уничтожения опухолей, а CD226 обеспечивает длительное стабильное взаимодействие между NK и опухолевыми клетками (Kim et al., 2017). CD155 и CD112 — два важных лиганда CD226. Уровень CD112 в опухолевой ткани снижается. Он может сочетаться с CD226 на поверхности NK-клеток, тем самым активируя NK-клетки для уничтожения опухолевых клеток (Xiaojun et al., 2014). Точно так же снижение CD155 в ткани рака печени может снизить цитотоксический эффект, опосредованный NK-клетками (Jiuyu et al., 2014). Эксперимент in vivo продемонстрировал, что CD226 опосредует фосфорилирование FOXO1 и активирует NK-клетки посредством взаимодействия с опухолевыми клетками, экспрессирующими CD155 (Xiangnan et al., 2018). Иммунотерапия опухолей предлагает многообещающие результаты у пациентов с опухолью. Concepción et al. обнаружил важность соотношения CD226 / иммуноглобулиноподобных рецепторов NK-клеток, индуцированного лицензионными взаимодействиями, в качестве критических детерминант для иммунного надзора за солидным раком, и предоставил прогностические биомаркеры для выживаемости пациентов, которые также могут улучшить выбор доноров для иммунотерапии NK-клетками (Guillamón et al. др., 2018). Обычно считается, что Treg в опухолях препятствуют ответам Т-клеток на опухоли (Naturally, 2005).Среди текущих режимов иммунотерапии опухолей, нацеленных на Treg, самой большой проблемой является отсутствие высокоселективных препаратов для Treg. В основном это связано с тем, что высокоспецифичные маркеры еще не обнаружены в Tregs. Жюльен и др. указали, что высокое соотношение TIGIT / CD226 в Tregs регулирует их супрессивную функцию и стабильность при меланоме, и они предложили новые иммунотерапевтические методы для активации CD226 в Treg вместе с блокадой TIGIT для противодействия подавлению Treg у онкологических пациентов (Fourcade et al., 2018). В последние годы некоторые исследователи стали обращать внимание на экспрессию CD226 в опухолевых клетках. Эти исследования показали, что экспрессия CD226 на клетках гепатомы подавляется и что экспрессия связана с выживаемостью и временем выживания пациентов (Baoxing et al., 2017). Кроме того, было обнаружено, что полиморфизм гена CD226 напрямую связан с риском опухоли (Shaoqing et al., 2013). Все вышеперечисленные результаты предполагают, что CD226 может оказывать противоопухолевое действие. Таким образом, роль и механизм CD226 при различных раковых заболеваниях требует углубленного изучения в будущем.

CD226 и вирусные инфекции

При большинстве заболеваний, инфицированных вирусом, NK-клетки могут уничтожать инфицированные вирусом и трансформированные клетки (Cooper et al., 2001; Smyth et al., 2005). Они распознают клетки-мишени с помощью кодируемого зародышевой линией репертуара активирующих и ингибирующих рецепторов (Bryceson et al., 2006). CD226 — важный активирующий рецептор. NK-клеткам необходим CD226 для распознавания инфицированных HCV клеток гепатомы (Stegmann et al., 2012) и инфицированных HCMV миелоидных DCs (Magri et al., 2011).Инфекция вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) вызывает дисфункцию врожденной и адаптивной иммунной систем, нарушает функцию NK-клеток и CD8 + T-клеток, а также уровни поверхностной экспрессии некоторых рецепторов (Watzl et al., 2014; Zhuo et al., 2017) . Инь и др. (2018) демонстрируют, что экспрессия TIGIT специфически повышается на CD226 + NK-клетках у ВИЧ-инфицированных людей, а высокие уровни TIGIT могут ингибировать продукцию IFN-γ NK-клетками, в то время как блокада TIGIT может восстановить их функцию. Подобные результаты были обнаружены на CD8 + Т-клетках у ВИЧ-инфицированных.ВИЧ-специфические CD8 + Т-клетки были почти исключительно TIGIT +, а ВИЧ-специфические клетки TIGIT ^hi отрицательно коррелировали с полифункциональностью и демонстрировали пониженную экспрессию CD226 (Tauriainen et al., 2017). Все это подчеркивает важную роль оси TIGIT / CD226 в вирусных инфекциях и предлагает новые возможности для разработки терапевтических стратегий, направленных на функциональное излечение.

Заключение

С момента своего открытия было продемонстрировано, что CD226 широко экспрессируется на различных иммунных клетках и играет важную функциональную роль в иммунной системе.Многие аспекты патофизиологического состояния CD226 еще не выяснены; однако текущие исследования функции и механизмов этой молекулы позволяют лучше понять клиническую значимость этой молекулы. Действительно, CD226, как костимулирующий фактор, играет важную роль в развитии различных заболеваний. Таким образом, изменение экспрессии и функции CD226 может быть осуществимой терапевтической стратегией для многих связанных с иммунитетом заболеваний и опухолей.

Заявление о доступности данных

Оригинальные материалы, представленные в исследовании, включены в статью / дополнительный материал, дальнейшие запросы можно направить автору-корреспонденту.

Авторские взносы

ZH и GQ разработали исследование и написали обзор. SZ задумал и разработал обзор. SZ и JM отредактировали и исправили обзор. Все авторы обсудили и одобрили окончательную версию.

Финансирование

Эта работа частично поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (гранты №№ 81460411 и 81660450), Проектом Фонда естественных наук Гуанси (№№: 2017AD23009, 2017JJD10037 и 2015jjAA40450) и Проектом развития ключевых лабораторий из Гуанси (все до GQ).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Список литературы

Anping, X., Ya, L., Weiqian, C., Julie, W., Youqiu, X., Feng, H., et al. (2016). TGF-β-индуцированные регуляторные Т-клетки напрямую подавляют В-клеточные ответы посредством нецитотоксического механизма. J. Immunol. 196, 3631–3641. DOI: 10.4049 / jimmunol.1501740

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ардолино, М., Зингони, А., Цербони, К., Сесере, Ф., Сориани, А., Яннитто, М. Л. и др. (2011). Экспрессия лиганда DNAM-1 на стимулируемых Ag Т-лимфоцитах опосредуется ROS-зависимой активацией ответа на повреждение ДНК: актуальность для взаимодействия NK-T-клеток. Кровь 117, 4778–4786. DOI: 10.1182 / кровь-2010-08-300954

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Avouac, J., Elhai, M., Tomcik, M., Ruiz, B., Friese, M., Piedavent, M., et al. (2013). Критическая роль вспомогательной молекулы-1 рецептора адгезии DNAX (DNAM-1) в развитии фиброза кожи, вызванного воспалением, на мышиной модели системного склероза. Ann. Реум. Дис. 72, 1089–1098. DOI: 10.1136 / annrheumdis-2012-201759

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бачелет И., Муниц А., Манкутад Д. и Леви-Шаффер Ф. (2006). Костимуляция тучных клеток с помощью CD226 / CD112 (DNAM-1 / нектин-2): новый интерфейс в аллергическом процессе. J. Biol. Chem. 281, 27190–27196. DOI: 10.1074 / jbc.M602359200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бальзамо, М., Замбелло, Р., Терамо, А., Педрацци, М., Спараторе, Б., Скордамалья, Ф. и др. (2009). Анализ взаимодействия NK-клетки / DC при лимфопролиферативном заболевании NK-типа гранулярных лимфоцитов (LDGL): роль DNAM-1 и NKp30. Exp. Гематол. 37, 1167–1175. DOI: 10.1016 / j.exphem.2009.06.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Баосин, Дж., Лудонг, Т., Чже, Дж., Ян, Дж., Ю, Ф. и Яхуи, Л. (2017). MiR-892a способствует пролиферации и инвазии клеток гепатоцеллюлярной карциномы посредством нацеливания на CD226. J. Cell Biochem. 118, 1489–1496. DOI: 10.1002 / jcb.25808

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бокван Дж. И Чжувэй X. (2010). Новый интерфейс, состоящий из гомологичных членов суперсемейства иммуноглобулинов с множеством функций. Cell. Мол. Иммунол. 7, 11–19. DOI: 10.1038 / cmi.2009.108

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Bossini-Castillo, L., Simeon, C.P., Beretta, L., Broen, J.C., Vonk, M.C., Espinosa, G., et al. (2012). Многоцентровое исследование подтверждает ассоциацию гена CD226 с легочным фиброзом, связанным с системным склерозом. Артрит. Res. Ther. 12: R85. DOI: 10.1186 / ar3809

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Боттино, К., Кастрикони, Р., Пенде, Д., Ривера, П., Нанни, М., Карнемолла, Б. и др. (2003). Идентификация PVR (CD155) и нектина-2 (CD112) в качестве лигандов клеточной поверхности для активирующей молекулы DNAM-1 (CD226) человека. J. Exp. Med. 198, 557–567. DOI: 10.1084 / jem.20030788

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Брайсесон, Ю. Т., Марч, М. Э., Юнггрен, Х.-Г., и Лонг, Э. О. (2006). Активация, коактивация и костимуляция покоящихся естественных клеток-киллеров человека. Immunol. Ред. 214, 73–91.DOI: 10.1111 / j.1600-065X.2006.00457.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бернс, Г. Ф., Триглиа, Т., Веркмайстер, Дж. А., Бегли, К. Г., и Бойд, А. В. (1986). TLiSA1, активационный антиген, специфичный для Т-линии человека, участвующий в дифференцировке цитотоксических Т-лимфоцитов и аномальных клеток-киллеров от их предшественников. J. Exp. Med. 161, 1063–1078. DOI: 10.1084 / jem.161.5.1063

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Карлстен, М., Бьоркстрём, Н. К., Норелл, Х., и Брайсесон, Ю. (2007). Вспомогательная молекула-1 ДНКX опосредует распознавание свежевыделенной карциномы яичника покоящимися естественными клетками-киллерами. Cancer Res. 67, 1317–1325. DOI: 10.1158 / 0008-5472.CAN-06-2264

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Castriconi, R., Dondero, A., Corrias, M. V., Lanino, E., Pende, D., Moretta, L., et al. (2004). Опосредованное естественными клетками-киллерами убийство свежевыделенных клеток нейробластомы: критическая роль взаимодействия вспомогательной молекулы ДНКХ-1-рецептора полиовируса. Cancer Res. 64, 9180–9184. DOI: 10.1158 / 0008-5472.CAN-04-2682

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Селла, М., Прести, Р., Верми, В., Лаванда, К., Тернбулл, Э., Оксенбауэр-Джамбор, К., и др. (2010). Потеря DNAM-1 способствует истощению CD8 + Т-клеток при хронической ВИЧ-1-инфекции. Eur. J. Immunol. 40, 949–954. DOI: 10.1002 / eji.200940234

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чан, К.J., Martinet, L., Gilfillan, S., Souza-Fonseca-Guimaraes, F., Chow, M. T., Town, L., et al. (2014). Рецепторы CD96 и CD226 противостоят друг другу в регуляции функций естественных клеток-киллеров. Nat. Иммунол. 15, 431–438. DOI: 10.1038 / ni.2850

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Купер, М.А., Фенигер, Т.А., и Калиджури, М.А. (2001). Биология естественных подмножеств клеток-киллеров человека. Trends Immunol. 22, 633–640. DOI: 10.1016 / с 1471-4906 (01) 02060-9

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дардалхон В., Шубарт А.С., Редди Дж., Мейерс, Дж. Х., Монни, Л., Сабатос, К. А. и др. (2005). CD226 специфически экспрессируется на поверхности клеток Th2 и регулирует их рост и эффекторные функции. J. Immunol. 175, 1558–1565. DOI: 10.4049 / jimmunol.175.3.1558

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Dieudé, P., Guedg, M.E., Wipff, J., Revillod, L., Riemekasten, G., Matucci-Cerinic, M., et al. (2011). Ассоциация варианта CD226 Ser (307) с системным склерозом: свидетельство вклада путей костимуляции в патогенез системного склероза. Артрит. Реум. 63, 1097–1105. DOI: 10.1002 / art.30204

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Dongchu, M., Yinghui, S., Di, L., Haoyang, W., Bing, D., Xinghai, Z., et al. (2005). CD226 экспрессируется в мегакариоцитарном клоне гемопоэтических стволовых клеток / клеток-предшественников и участвует в его полиплоидизации. Eur. J. Haematol. 74, 228–240. DOI: 10.1111 / j.1600-0609.2004.00345.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Du, Y., Tian, ​​L., Shen, L. X., Wang, F., Yu, L. K., Song, Y., et al. (2011). Ассоциация однонуклеотидного полиморфизма CD226 с системной красной волчанкой у китайской ханьской популяции. Tissue Antig. 77, 65–67. DOI: 10.1111 / j.1399-0039.2010.01568.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эльхай, М., Chiocchia, G., Marchiol, C., Lager, F., Renault, G., Colonna, M., et al. (2015). Нацеливание на вспомогательную молекулу-1 CD226 / DNAX (DNAM-1) в моделях индуцированного коллагеном артрита на мышах. J. Inflamm. 12: 9. DOI: 10.1186 / s12950-015-0056-5

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Эль-Щербины, Ю. М., Мид, Дж. Л., Холмс, Т. Д., МакГонагл, Д., Маки, С. Л., Морган, А. В. и др. (2007). Потребность в DNAM-1, NKG2D и NKp46 для опосредованного естественными клетками-киллерами уничтожения миеломных клеток. Cancer Res. 67, 8444–8449. DOI: 10.1158 / 0008-5472.CAN-06-4230

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Энквист, М., Аск, Э. Х., Форслунд, Э., Карлстен, М., Абрахамсен, Г., Безиат, В. и др. (2015). Скоординированная экспрессия DNAM-1 и LFA-1 в образованных NK-клетках. J. Immunol. 194, 4518–4527. DOI: 10.4049 / jimmunol.1401972

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фанг, Л., Сяо Сюэ, Ф., Шан Лин, З., Hong, Y.H., Ying, D.C., Yun, F.P., et al. (2018). Сигнальный путь Sonic hedgehog опосредует пролиферацию и миграцию фибробластоподобных синовиоцитов при ревматоидном артрите через сигнальный путь MAPK / ERK. Фронт. Иммунол. 9: 2847. DOI: 10.3389 / fimmu.2018.02847

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фуркад, Дж., Чжаоцзюнь, С., Шовен, Ж.-М., Ка, М., Давар, Д., Пальяно, О., и др. (2018). Cd226 противостоит tigit, чтобы разрушить tregs при меланоме. JCI Insight. 3: e121157. DOI: 10.1172 / jci.insight.121157

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Fuhrman, C.A., Yeh, W.-I., Seay, H.R., Lakshmi, P. S., Chopra, G., Zhang, L., et al. (2015). Дивергентные фенотипы регуляторных Т-клеток человека, экспрессирующих рецепторы TIGIT и CD226. J. Immunol. 195, 145–155. DOI: 10.4049 / jimmunol.1402381

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гаглиани, Н., Magnani, C.F., Huber, S., Gianolini, M.E., Pala, M., Licona-Limon, P., et al. (2013). Коэкспрессия CD49b и LAG-3 позволяет идентифицировать регуляторные Т-клетки 1 типа человека и мыши. Nat. Med. 19, 739–746. DOI: 10,1038 / нм. 3179

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Gaud, G., Roncagalli, R., Chaoui, K., Bernard, I., Familiades, J., Colacios, C., et al. (2018). Костимулирующая молекула CD226 передает сигналы через VAV1, чтобы усилить сигналы TCR и способствовать выработке IL-17 CD4 + Т-клетками. Sci. Сигнал. 11: eaar3083. DOI: 10.1126 / scisignal.aar3083

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гилфиллан, С., Чан, К. Дж., Селла, М., Хейнс, Н. М., Рапапорт, А. С., Болес, К. С. и др. (2008). DNAM-1 способствует активации цитотоксических лимфоцитов непрофессиональными антигенпрезентирующими клетками и опухолями. J. Exp. Med. 205, 2965–2973. DOI: 10.1084 / jem.20081752

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гийамон, Ф.К., Мартинес-Санчес, В. М., и М. Р. Ровец, Г. Л. (2018). Образование NK-клеток в иммунном надзоре за опухолью: отношения рецепторов DNAM-1 / KIR как прогностические биомаркеры исхода солидной опухоли. Cancer Immunol. Res. 6, 1537–1547. DOI: 10.1158 / 2326-6066

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хуанг, З., Фу, Б., Чжэн, С. Г., Ли, X., Сун, Р., Тиан, З. и др. (2011). Участие CD226 + NK-клеток в иммунопатогенезе системной красной волчанки. J. Immunol. 186, 3421–3431.DOI: 10.4049 / jimmunol.1000569

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jian, J. L., Zhu, C. S., Xu, Z. W., Ouyang, W. M., Ma, D. C., Zhang, Y., et al. (2006). Идентификация и характеристика промотора гена CD226. J. Biol. Chem. 281, 28731–28736. DOI: 10.1074 / jbc.M601786200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Цзиньлун, К., Юн, З., Демин, Л., Вейминг, О., и Бокван, Дж. (2002). Анализ промоторной последовательности и сайта SNP гена CD226 человека. Подбородок. J. Cell. Мол. Иммунол. 18, 203–207. DOI: 10.3321 / j.issn: 1007-8738.2002.03.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Jiuyu, G., Liang, F., Rongrong, L., Ying, W., Jinliang, X., Yibing, C., et al. (2014). UPR снижает экспрессию CD155 лиганда CD226 и чувствительность к цитотоксичности, опосредованной NK-клетками, в клетках гепатомы. Eur. J. Immunol. 44, 3758–3767. DOI: 10.1002 / eji.201444574

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джоллер, Н., Lozano, E., Burkett, P.R., Patel, B., Xiao, S., Zhu, C., et al. (2014). Treg-клетки, экспрессирующие коингибиторную молекулу TIGIT, избирательно ингибируют провоспалительные реакции клеток Th2 и Th27. Иммунитет 40, 569–581. DOI: 10.1016 / j.immuni.2014.02.012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Цзюнь, Л., Сяомин, К., Чжуцзюнь, К., Сян, X., Фэн, Г., Шуцзюнь, З., и др. (2012). Кристаллическая структура молекулы клеточной адгезии нектин-2 / CD112 и ее связывание с иммунным рецептором DNAM-1 / CD226. J. Immunol. 188, 5511–5520. DOI: 10.4049 / jimmunol.1200324

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кацав, С., Мартин-Занка, Д., и Барбакид, М. (1989). Vav, новый человеческий онкоген, происходящий из локуса, повсеместно экспрессируемого в гемопоэтических клетках. EMBO J. 8, 2283–2290. DOI: 10.1002 / j.1460-2075.1989.tb08354.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ким, Дж. С., Шин, Б. Р., Ли, Х. К., Ли, Дж. Х., Ким, К.Х., Чой, Дж. Э. и др. (2017). Cd226 — / — естественные клетки-киллеры не могут установить стабильные контакты с раковыми клетками и демонстрируют нарушение контроля над метастазами опухолей in vivo. Онкоиммунология 6: e1338994. DOI: 10.1080 / 2162402x.2017.1338994

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кодзима, Х., Канада, Х., Симидзу, С., Касама, Э., Сибуя, К., Накаучи, Х. и др. (2003). CD226 опосредует адгезию тромбоцитов и мегакариоцитарных клеток к эндотелиальным клеткам сосудов. J. Biol. Chem. 278, 36748–36753. DOI: 10.1074 / jbc.M300702200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Краус, А. К., Чен, Дж., Эденхофер, И., Воронов, И., Гасперт, А., Сиппа, П. Е. и др. (2016). Роль костимуляции Т-клеток с помощью DNAM-1 в трансплантации почки. PLoS One 11: e0147951. DOI: 10.1371 / journal.pone.0147951

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лакшмикант, Т., Берк, С., Али, Т. Х., Кимпфлер, С., Урсини, Ф., Руджери, Л. и др. (2009). NCR и DNAM-1 опосредуют распознавание NK-клеток и лизис линий клеток меланомы человека и мыши in vitro и in vivo. J. Clin. Вкладывать деньги. 119, 1251–1263. DOI: 10.1172 / JCI36022

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ли, Н., Ван, Дж. К., Лян, Т. Х., Чжу, М. Х., Ван, Дж. Й., Фу, X. Л. и др. (2013). Патологическое открытие повышенной экспрессии интерлейкина-17 в синовиальной ткани пациентов с ревматоидным артритом. Внутр. J. Clin. Exp. Патол. 6, 1375–1379. DOI: 10.1159 / 000354821

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лихуа, К., Синь, X., Синьхай, З., Вэй, Дж., Цзиньлун, Дж., Чаоцзюнь, С., и др. (2003). Экспрессия, регуляция и функция адгезии новой молекулы CD, CD226, на эндотелиальных клетках человека. Life Sci. 73, 2373–2382. DOI: 10.1016 / s0024-3205 (03) 00606-4

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лёфгрен, С. Э., Дельгадо-Вега, А.M., Gallant, C.J., Sánchez, E., Frostegård, J., Truedsson, L., et al. (2010). Вариант 3’-нетранслируемой области связан с нарушением экспрессии CD226 в Т-клетках и естественных Т-клетках-киллерах и связан с восприимчивостью к системной красной волчанке. Артрит. Реум. 62, 3404–3414. DOI: 10.1002 / art.27677

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лозано, Э., Домингес-Вильяр, М., Кучро, В., и Хафлер, Д. А. (2012). Ось TIGIT / CD226 регулирует функцию Т-клеток человека. J. Immunol. 188, 3869–3875. DOI: 10.4049 / jimmunol.1103627

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лозано, Э., Джоллер, Н., Цао, Ю., Кучру, В. К., и Хафлер, Д. А. (2013). Взаимодействие CD226 / CD155 регулирует провоспалительный (Th2 / Th27) / противовоспалительный (Th3) баланс у людей. J. Immunol. 191, 3673–3680. DOI: 10.4049 / jimmunol.1300945

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маньяни, К.Ф., Альбериго, Г., Баккетта, Р., Серафини, Г., Андреани, М., Ронкароло, М. Г. и др. (2011). Убийство миелоидных APC посредством HLA класса I, CD2 и CD226 определяет новый механизм подавления человеческими клетками Tr1. Eur. J. Immunol. 41, 1652–1662. DOI: 10.1002 / eji.201041120

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Magri, G., Muntasell, A., Romo, N., Sáez-Borderías, A., Pende, D., Geraghty, D. E., et al. (2011). NKp46 и DNAM-1 Рецепторы NK-клеток управляют ответом на миелоидные дендритные клетки, инфицированные цитомегаловирусом человека, преодолевая стратегии вирусного уклонения от иммунитета. Кровь 117, 846–856. DOI: 10.1182 / кровь-2010-08-301374

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Maogen, C., Xiaohong, L., Ya, L., Qiang, L., Yiling, D., Zhongmin, L., et al. (2014). Функция BAFF на Т-хелперные клетки при аутоиммунитете. Факт роста цитокинов. Ред. 25, 301–305. DOI: 10.1016 / j.cytogfr.2013.12.011

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мартине, Л., Андраде, Л. Ф. Д., Гийрей, К., Ли, Дж. С., Лю, Дж., Соуза-Фонсека-Гимарайнш, Ф. и др. (2015). Экспрессия DNAM-1 отмечает альтернативную программу созревания NK-клеток. Cell Rep. 11, 85–97. DOI: 10.1016 / j.celrep.2015.03.006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мейсон Д., Андре П., Бенсуссан А., Бакли К., Сивин К., Кларк Э. и др. (2001). CD Antigens 2001. J. Leukoc. Биол. 211, 685–690. DOI: 10.1006 / cimm.2001.1831

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маттана Т.К. К., Сантос, А. С., Фукуи, Р. Т., Майнарди-Ново, Д. Т. О., Коста, В. С., Сантос, Р. Ф. и др. (2014). CD226 rs763361 связан с предрасположенностью к диабету 1 типа и большей частотой аутоантитела GAD65 в бразильской когорте. Med. Воспаление. 2014: 694948. DOI: 10.1155 / 2014/694948

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Mengru, Y., Yan, L., Biyao, M., Youqiu, X., Congxiu, Y., Yutong, J., et al. (2019). Helios, но не CD226, TIGIT и Foxp3, является потенциальным маркером CD4 + Treg-клеток у пациентов с ревматоидным артритом. Cell. Physiol. Биохим. 52, 1178–1192. DOI: 10.33594 / 000000080

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Моретта, Л., Боттино, К., Пенде, Д., Кастрикони, Р., Мингари, М. К., и Моретта, А. (2006). Поверхностные рецепторы NK и их лиганды на опухолевых клетках. Семин. Иммунол. 18: 151. DOI: 10.1016 / j.smim.2006.03.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Набекура, Т., Каная, М., Сибуя, А., Фу, Г., Гаскойн, Н. Р. Дж., И Ланье, Л. Л. (2014). Костимулирующая молекула DNAM-1 важна для оптимальной дифференциации естественных клеток-киллеров памяти во время цитомегаловирусной инфекции мышей. Иммунитет 40, 225–234. DOI: 10.1016 / j.immuni.2013.12.011

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нильсен, Н., Паскаль, В., Фаст, А. Е. Р., Сундстрём, Ю., Галсгаард, Э. Д., Ахерн, Д., и др. (2014). Баланс между активацией NKG2D, DNAM-1, NKp44 и NKp46 и ингибирующими рецепторами CD94 / NKG2A определяет дегрануляцию естественных киллеров в отношении синовиальных фибробластов ревматоидного артрита. Иммунология 142, 581–593. DOI: 10.1111 / imm.12271

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Нин В., Шуанг Л., Цзинъи Дж., Лян Ф., Цяньли М., Сиань В. и др. (2019). CD226 ослабляет способность подавления Treg через CTLA-4 и TIGIT во время EAE. Immunol. Res. 67, 486–496. DOI: 10.1007 / s12026-019-09112-9

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Пенде, Д., Боттино, К., Кастрикони, Р., Кантони, К., Марченаро, С., Ривера, П. и др. (2005). PVR (CD155) и нектин-2 (CD112) в качестве лигандов активирующего рецептора человеческого DNAM-1 (CD226): участие в лизисе опухолевых клеток. Мол. Иммунол. 42, 463–469. DOI: 10.1016 / j.molimm.2004.07.028

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Pende, D., Castriconi, R., Romagnani, P., Spaggiari, G.M., Marcenaro, S., Dondero, A., et al. (2006). Экспрессия лигандов DNAM-1, нектина-2 (CD112) и рецептора полиовируса (CD155) на дендритных клетках: актуальность для взаимодействия естественных киллеров и дендритных клеток. Кровь 107, 2030–2036. DOI: 10.1182 / кровь-2005-07-2696

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Peng, Y.-Q., Qin, Z.-L., Fang, S.-B., Xu, Z.-B., Zhang, H.-Y., Chen, D., et al. (2020). Влияние миелоидных и плазмацитоидных дендритных клеток на ILC2 у пациентов с аллергическим ринитом. J. Allergy Clin. Иммунол. 145, 855–867. DOI: 10.1016 / j.jaci.2019.11.029

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Цю, З., Чжан, К., Цю, X., Чжоу, М., и Ли, В. (2008). Ассоциация CD226 Gly307Ser с множественными аутоиммунными заболеваниями: метаанализ. Hum. Иммунол. 74, 249–255. DOI: 10.1016 / j.humimm.2012.10.009

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ральстон, К. Дж., Хирд, С. Л., Синьхай, З., Скотт, Дж. Л., Бокуан, Дж., Торн, Р. Ф. и др. (2004). Связанная с LFA-1 молекула PTA-1 (CD226) на Т-клетках образует динамический молекулярный комплекс с белком 4.1G и большими дисками человека. J. Biol. Chem. 279, 33816–33828. DOI: 10.1074 / jbc.M401040200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Рамалингам, Р., Лармонье, К. Б., Терстон, Р. Д., Мидура-Кила, М. Т., Чжэн, С. Г., Гишан, Ф. К. и др. (2012). Специфическое для дендритных клеток нарушение рецептора II TGF-β приводит к изменению фенотипа регуляторных Т-клеток и спонтанному полиорганному аутоиммунитету. J. Immunol. 189, 3878–3893. DOI: 10.4049 / jimmunol.1201029

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Реймонд, Н., Энн-Мари, И., Девилард, Э., Фабр, С., Чабаннон, К., Ксерри, Л. и др. (2004). DNAM-1 и PVR регулируют миграцию моноцитов через эндотелиальные соединения. J. Exp. Med. 199, 1331–1341. DOI: 10.1084 / jem.20032206

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Rong, Z., Hanyu, Z., Yun, Z., Kun, C., Chunmei, Z., Chaojun, S., et al. (2016). Лигирование CD226 защищает от EAE, способствуя экспрессии IL-10 посредством регуляции дифференцировки CD4 + T-клеток. Oncotarget 7, 19251–19264. DOI: 10.18632 / oncotarget.7834

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Скотт, Дж. Л., Данн, С. М., Джин, Б., Хиллам, А. Дж., Уолтон, С., Берндт, М. С. и др. (1989). Характеристика нового мембранного гликопротеина, участвующего в активации тромбоцитов. J. Biol. Chem. 264, 13475–13482.

Google Scholar

Шаоцин, С., Бинь, З., Куи, З., и Лин, З. (2013). Связь между двумя генетическими вариантами гена CD226 и плоскоклеточным раком шейки матки: исследование случай-контроль. Ген 519, 159–163. DOI: 10.1016 / j.gene.2012.11.039

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шэнкэ, Х., Куикуй, Г., Сяодун, З., Хаймин, В., Жуй, С., Чжиган, Т. (2014). Белок CD226 участвует в формировании иммунных синапсов и запускает активацию естественных киллеров (NK) через свой первый внеклеточный домен. J. Biol. Chem. 289, 6969–6977. DOI: 10.1074 / jbc.M113.498253

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шеррингтон, П.Д., Скотт, Дж. Л., Джин, Б., Симмонс, Д., Дорахи, Д. Дж., Ллойд, Дж. И др. (1997). Антиген активации TLiSA1 (PTA1), участвующий в дифференцировке Т-клеток и активации тромбоцитов, является членом суперсемейства иммуноглобулинов, проявляющим отличительную регуляцию экспрессии. J. Biol. Chem. 272, 21735–21744. DOI: 10.1074 / jbc.272.35.21735

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сибуя, А., Кэмпбелл, Д., Ханнум, К., Иссел, Х., Франц-Бэкон, К., МакКланахан, Т., и другие. (1996). DNAM-1, новая молекула адгезии, участвующая в цитолитической функции Т-лимфоцитов. Иммунитет 4, 573–581. DOI: 10.1016 / S1074-7613 (00) 70060-4

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сибуя, К., Ланье, Л. Л., Филлипс, Дж. Х. и Охс, Х. Д. (1999). Физическая и функциональная ассоциация LFA-1 с молекулой адгезии DNAM-1. Иммунитет 11, 615–623. DOI: 10.1016 / S1074-7613 (00) 80136-3

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сибуя, К., Шибата, К., Тахара-Ханаока, С., и Сибуя, А. (2006). Комментарий: «CD226 специфически экспрессируется на поверхности клеток Th2 и регулирует их размножение и эффекторные функции». J. Immunol. 176: 3885.

Google Scholar

Сибуя, К., Сиракава, Дж., Камеяма, Т., Син-Ичиро, Х., Тахара-Ханаока, С., Миямото, А. и др. (2003). CD226 (DNAM-1) участвует в костимулирующем сигнале антигена 1, ассоциированном с функцией лимфоцитов, для дифференцировки и пролиферации наивных Т-клеток. J. Exp. Med. 198, 1829–1839. DOI: 10.1084 / jem.20030958

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шу-Бин, Ф., Хун-Ю, З., Конг, В., Би-Синь, Х., Сяо-Цин, Л., Сян-Ци, М., и др. (2020). Небольшие внеклеточные везикулы, происходящие из мезенхимальных стромальных клеток человека, предотвращают врожденное доминантное лимфоидными клетками аллергическое воспаление дыхательных путей группы 2 посредством доставки miR-146a-5p. J. Extracell. Вес. 9: 1723260. DOI: 10.1080 / 20013078.2020.1723260

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Смит, Д.Дж., Планьол, В., Уокер, Н. М., Купер, Дж. Д., Даунс, К., Янг, Дж. Х. М. и др. (2008). Общие и различные генетические варианты при диабете 1 типа и целиакии. N. Engl. J. Med. 359, 2767–2777. DOI: 10.1056 / NEJMoa0807917

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Смит, Дж., Кретни, Э., Келли, Дж., Вествуд, Дж., Стрит, С., Ягита, Х. и др. (2005). Активация цитотоксичности NK-клеток. Мол. Иммунол. 42, 501–510. DOI: 10.1016 / j.молимм.2004.07.034

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Стегманн, К.А., Бьёркстрём, Н.К., Цизек, С., Лунеманн, С., Ярошевич, Дж., Виганд, Дж. И др. (2012). Стимулированные интерфероном α естественные клетки-киллеры от пациентов с острой инфекцией вируса гепатита С (ВГС) распознают инфицированные ВГС и неинфицированные клетки гепатомы через вспомогательную молекулу-1 ДНКХ. J. Infect. Дис. 205, 1351–1362. DOI: 10.1093 / infdis / jis210

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Суджуань, Ю., Chichu, X., Ye, C., Julie, W., Xiaoqing, C., Zhengqi, L., et al. (2019). Различная роль TNFα-TNFR1 и TNFα-TNFR2 в дифференцировке и функции CD4 + Foxp3 + индуцированных treg-клеток in vitro и на периферии in vivo при аутоиммунных заболеваниях. Cell Death Dis. 10:27. DOI: 10.1038 / s41419-018-1266-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Суджуан Ю., Джули В., Дэвид Д. Б. и Сон Го З. (2018). Роль сигнала рецептора 2 TNF-TNF в регуляторных Т-клетках и его терапевтическое значение. Фронт. Иммунол. 9: 784. DOI: 10.3389 / fimmu.2018.00784

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сутавани Р. В., Брэдли Р. Г., Рэймидж Дж. М., Джексон А. М., Даррант Л. Г. и Спендлов И. (2013). Костимуляция CD55 индуцирует дифференцировку дискретной популяции Т-регуляторных клеток 1-го типа со стабильным фенотипом. J. Immunol. 191, 5895–5903. DOI: 10.4049 / jimmunol.1301458

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тахара-Ханаока, С., Миямото А. и Хара А. (2005). Идентификация и характеристика мышиного DNAM-1 (CD226) и его лигандов семейства рецепторов полиовируса. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 329, 996–1000. DOI: 10.1016 / j.bbrc.2005.02.067

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тахара-Ханаока, С., Сибуя, К., Онода, Ю., Хуа, З., Сатоши, Ю., Акитомо, М., и др. (2004). Функциональная характеристика взаимодействия DNAM-1 (CD226) с его лигандами PVR (CD155) и нектином-2 (PRR-2 / CD112). Внутр. Иммунол. 16, 533–538. DOI: 10.1093 / intimm / dxh059

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тауриайнен, Дж., Шарф, Л., Фредериксен, Дж., Наджи, А., Юнггрен, Х.-Г., Зеннерборг, А., и др. (2017). Нарушение оси TIGIT / CD226 / PVR CD8 + Т-клеток, несмотря на раннее начало антиретровирусной терапии у ВИЧ-инфицированных лиц. Sci. Отчет 7: 40354. DOI: 10.1038 / srep40354

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тодд, Дж.А., Уокер, Н. М., Купер, Дж. Д., Смит, Д. Дж., И Клейтон, Д. Г. (2007). Устойчивые ассоциации четырех новых областей хромосом из полногеномного анализа диабета 1 типа. Nat. Genet. 39, 857–864. DOI: 10,1038 / ng2068

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Верховен, Д. Х. Дж., Хоуг, А. С., Моиман, Э. К. К., Сантос, С. Дж., Дам, М. М., Гелдерблом, Х. и др. (2008). NK-клетки распознают и лизируют клетки саркомы Юинга через пути, зависимые от рецепторов NKG2D и DNAM-1. Мол. Иммунол. 45, 3917–3925. DOI: 10.1016 / j.molimm.2008.06.016

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Wang, L., Zhang, W., Wu, D.-A., Chen, C., Xu, Q.-Z., Zhao, B., et al. (2009). Молекулярное клонирование, характеристика и трехмерное моделирование нектина-2 / CD112 свиньи. Вет. Иммунол. Immunopathol. 132, 257–263. DOI: 10.1016 / j.vetimm.2009.05.008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вэйшань, Х., Солоуки, С., Койласс, Н., Сон Го, З. (2017). Передача сигналов ITK через путь Ras / IRF4 регулирует развитие и функцию клеток Tr1. Nat. Commun. 8: 15871. DOI: 10.1038 / ncomms15871

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Венру, С., Хуйминь, Ф., Маоген, К., Джули, В., Дэвид, Б., Сяошунь, Х. и др. (2012). Индуцированные CD4 + позитивные по белку вилочного бокса Т-клетки подавляют функцию тучных клеток и вызывают контактную гиперчувствительность через TGF-β1. J. Allergy Clin. Иммунол. 130, 444–452. DOI: 10.1016 / j.jaci.2012.05.011

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Венру, С., Цянь, В., Лунхуэй, Х., Цзинвэнь, Х., Сяоцин, К., Гуйхуа, К., и др. (2014). Доксициклин оказывает множественное противоаллергическое действие для ослабления мышиного аллергического конъюнктивита и системной анафилаксии. Biochem. Pharmacol. 91, 359–368. DOI: 10.1016 / j.bcp.2014.08.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Венру, С., Qian, W., Longhui, H., Jingwen, H., Xiaoqing, C., Guihua, C., et al. (2015). Культуральная среда из мезенхимальных стволовых клеток, стимулированных TNF-α, ослабляет аллергический конъюнктивит с помощью множества противоаллергических механизмов. J. Allergy Clin. Иммунол. 136, 423–432. DOI: 10.1016 / j.jaci.2014.12.1926

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Xiangnan, D., Almeida, P. D., Manieri, N., Nagata, D. T., and Wu, B. (2018). CD226 регулирует противоопухолевые ответы естественных клеток-киллеров посредством инактивации фактора транскрипции FOXO1, опосредованной фосфорилированием. Proc. Natl. Акад. Sci.U.S.A. 115, E11731 – E11740. DOI: 10.1073 / pnas.1814052115

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Xiaojun, H., Ping, Q., Yibing, C., Xingchun, Z., Yousheng, W., Fange, L., et al. (2014). Низкая экспрессия CD112 связана с плохой общей выживаемостью у пациентов с гепатоцеллюлярной карциномой. Hum. Патол. 45, 1944–1950. DOI: 10.1016 / j.humpath.2014.06.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Синьхай, З., Демин, Л., Вейминг, О. (2002). Клонирование гена и гетероморфизм мышиного CD226 (PTA1). Подбородок. J. Immunol. 6, 371–375.

Google Scholar

Ya, L., Qin, L., Ling, L., Maogen, C., Zanxian, X., Jilin, M., et al. (2014). Фенотипическая и функциональная характеристика вновь идентифицированных CD8 + Foxp3-CD103 + регуляторных Т-клеток. J. Mol. Cell Biol. 6, 81–92. DOI: 10.1093 / jmcb / mjt026

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ян, Л., Chengbin, W., Changsheng, X., Xiaoxu, L., Chunhong, F., Xiaotao, Z., et al. (2020). Восстановление CD226-TIGIT + FoxP3 + и CD226-TIGIT-FoxP3 + регуляторных Т-клеток способствует клинической ремиссии из активной стадии у пациентов с язвенным колитом. Immunol. Lett. 218, 30–39. DOI: 10.1016 / j.imlet.2019.12.007

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ян Л. и Сун Го З. (2016). Зал славы провоспалительных цитокинов: ген интерлейкина-6 и его механизмы регуляции транскрипции. Фронт. Иммунол. 7: 604. DOI: 10.3389 / fimmu.2016.00604

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Yaoyao, Z., Siqi, X., Youjun, X., Qian, Q., Maohua, S., Jingnan, W., et al. (2018). Длинная некодирующая РНК LERFS отрицательно регулирует ревматоидную синовиальную агрессию и пролиферацию. J. Clin. Вкладывать деньги. 128, 4510–4524. DOI: 10.1172 / JCI97965

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Инь, X., Tingting, L., Zhuo, W., Meichen, M., Jie, L., Zining, Z., et al. (2018). Экспрессия ингибирующего рецептора TIGIT повышается специфически на NK-клетках с помощью рецептора, активирующего CD226, у ВИЧ-инфицированных людей. Фронт. Иммунол. 9: 2341. DOI: 10.3389 / fimmu.2018.02341

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zheng, S.G., Meng, L., Wang, J.H., Watanabe, M., Barr, M.L., Cramer, D.V., et al. (2006). Перенос регуляторных Т-клеток, генерированных ex vivo, модифицирует отторжение трансплантата за счет индукции толерогенных CD4 + CD25 + клеток у реципиента. Внутр. Иммунол. 18, 279–289. DOI: 10.1093 / intimm / dxh468

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zhuo, W., Tong, W., Meichen, M., Zining, Z., Yajing, F., Jing, L., et al. (2017). Повышенный уровень интерферон-гамма-индуцированного белка 10 и его рецептора CXCR3 нарушает функцию NK-клеток во время ВИЧ-инфекции. J. Leukoc. Биол. 102, 163–170. DOI: 10.1189 / jlb.5A1016-444R

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

CD226 регулирует противоопухолевые реакции естественных клеток-киллеров посредством инактивации фактора транскрипции FOXO1, опосредованной фосфорилированием

Значимость

CD226 является важным активирующим рецептором, участвующим в опосредовании ответов естественных киллеров (NK) против опухолей, но как CD226 осуществляет контроль над функцией NK-клеток полностью не изучен.CD226 принадлежит к семейству рецепторов полиовируса (PVR) -нектинов, которое включает TIGIT и CD96, при этом TIGIT привлекает большое внимание как ключевая контрольная точка в противоопухолевых ответах Т-клеток и NK-клеток и как мишень иммунотерапии. Таким образом, крайне важно определить, как CD226 противодействует действиям TIGIT и CD96, с которыми он конкурирует за связывание со своими лигандами, такими как CD155 (PVR). Мы демонстрируем, что включение CD226 в CD155 необходимо для фосфорилирования фактора транскрипции FOXO1, что приводит к инактивации его негативного регуляторного контроля над эффекторной функцией NK-клеток.

Abstract

Распознавание опухолевых клеток естественными киллерами (NK) опосредуется активацией рецепторов, таких как CD226, с подавлением эффекторных функций, часто контролируемых негативными регуляторными факторами транскрипции, такими как FOXO1. Здесь мы показываем, что регуляция цитотоксичности NK-клеток CD226 облегчается за счет инактивации FOXO1. Анализ экспрессии генов NK-клеток, выделенных из сингенных опухолей, выращенных у мышей дикого типа или мышей с дефицитом CD226, выявил дисрегулируемую экспрессию FOXO1-регулируемых генов в отсутствие CD226.Анализы цитотоксичности и стимуляции in vitro продемонстрировали, что CD226 необходим для оптимального уничтожения опухолевых клеток-мишеней с участием его лиганда CD155, что приводит к фосфорилированию FOXO1. Дефицит CD226 или блокада анти-CD226 антител снижают цитотоксичность с сопутствующей нарушенной инактивацией FOXO1. Кроме того, ингибиторы фосфорилирования FOXO1 аннулировали опосредованную CD226 передачу сигналов и эффекторные ответы. Эти результаты определяют путь, с помощью которого CD226 осуществляет контроль ответов NK-клеток против опухолей.

Естественные киллеры (NK) — это лимфоциты врожденной иммунной системы, которые играют важную роль в раннем обнаружении и уничтожении инфицированных вирусом и злокачественно трансформированных клеток (1). Активация NK-клеток зависит от интеграции активирующих и ингибирующих сигналов, полученных от ряда рецепторов (2). Ингибирующие рецепторы позволяют NK-клеткам ощущать аномальные клетки, которые подавили или утратили экспрессию MHC класса I в результате инфекции или трансформации (3).В отсутствие ингибирующей передачи сигналов активирующие рецепторы, обычно распознающие лиганды, индуцированные патогенами или стрессом, запускают эффекторные ответы. Среди активирующих рецепторов выделяются рецепторы естественной цитотоксичности NKG2D, 2B4 и CD226 (также известные как «вспомогательная молекула ДНКX-1», DNAM-1) (4).

CD226 представляет собой гликопротеин семейства Ig-подобных, экспрессируемый на большинстве иммунных клеток, включая NK-клетки и Т-клетки, который принадлежит к семейству рецепторов полиовируса (PVR) -нектинов (5-8). Другие члены этого семейства включают Т-клеточный Ig и домен ITIM (TIGIT) и CD96, которые конкурируют за связывание лиганда с CD226 (9⇓ – 11).Лигандами для CD226 являются CD155 (также известный как «PVR») и нектин CD112, при этом CD226 имеет более высокое сродство к CD155 (6, 10, 12). CD155 и CD112 широко экспрессируются на нормальных эпителиальных, эндотелиальных, нейрональных и фибробластных клетках. Экспрессия лиганда CD226 часто повышается в ответ на клеточный стресс (13). Повышенная экспрессия CD155 и CD112 наблюдается во многих линиях опухолевых клеток, особенно эпителиального или нейронального происхождения, таких как карциномы и меланомы (6, 14–18).В контексте опосредованного NK-клетками элиминации опухолевых клеток было продемонстрировано, что CD226 является важным активирующим рецептором. Было показано, что блокада CD226 антителами препятствует уничтожению человеческими NK-клетками гемопоэтических и негематопоэтических опухолевых мишеней (5). Вовлечение CD226 – CD155 может быть более важным, чем распознавание CD112, поскольку блокада CD155 снижает чувствительность опухолевых клеток к уничтожению NK-клетками, тогда как блокада CD112 не может ингибировать это уничтожение (6, 14). Создание мышей с дефицитом CD226 подтвердило роль CD226 в иммунном надзоре за опухолями, при этом мыши Cd226 ^{— / —} были более восприимчивы, чем мыши WT, к различным опухолям, включая меланому и карциному легких (7, 18⇓). –20).

В NK-клетках мыши стимуляция антителами к CD226 способствует активации NK-клеток через иммунорецепторный тирозиновый хвост (ITT) -подобный мотив, который связывает CD226 с адаптерным белком GRB2, тем самым вызывая фосфорилирование тирозина VAV1, PLC-γ1, и PI3K и, следовательно, активирующие киназы ERK и AKT (21). CD226-опосредованная активация AKT в NK-клетках мыши интригует, поскольку фактор транскрипции FOXO1, прямой субстрат фосфорилированного AKT, является негативным регулятором хоминга NK-клеток, поздней стадии созревания и эффекторных функций (22).FOXO1 принадлежит к подсемейству FOXO транскрипционных факторов Forkhead. Белки FOXO функционируют в широком диапазоне тканей, регулируя различные клеточные процессы, включая энергетический метаболизм, развитие клеточного цикла, репарацию ДНК, апоптоз, аутофагию и дифференцировку клеток (23–25). Контроль транскрипционной активности FOXO1, ее количество и локализация определяются посредством различных посттрансляционных модификаций, в основном фосфорилирования FOXO1 (24). FOXO1 напрямую фосфорилируется AKT и / или SGK1, вызывая транслокацию FOXO1 из ядра в цитоплазму, где он изолируется и подвергается деградации, таким образом эффективно инактивируя FOXO1 от осуществления контроля экспрессии гена-мишени.

Здесь мы демонстрируем, что взаимодействие CD226 с NK-клетками мыши посредством взаимодействия с опухолевыми клетками, экспрессирующими CD155, опосредует фосфорилирование FOXO1 и активирует NK-клетки. Используя генетически CD226-дефицитных мышей и анти-CD226-антитела, которые либо блокируют взаимодействия CD226-CD155, либо разрешают взаимодействие, мы показали, что передача сигналов через путь AKT-FOXO1 обеспечивает CD226 механизмом для прямой регуляции цитотоксичности NK-клеток. Эти данные подчеркивают неотъемлемую роль CD226 в противоопухолевых ответах NK-клеток.

Результаты

Дефицит CD226 усиливает рост сингенной опухоли CT26 и нарушает регуляцию экспрессии генов в NK-клетках, инфильтрирующих опухоль.

Использование мышей с дефицитом CD226 подтвердило, что CD226 является важным активирующим рецептором в иммунном надзоре за опухолями, при этом мыши Cd226 ^{— / —} более восприимчивы к множеству опухолей, чем мыши WT (7, 15, 18 № – 20, 26). Здесь мы использовали модель сингенной опухоли CT26 для оценки функциональной роли CD226 в противоопухолевых ответах у иммунокомпетентных мышей.Рост опухоли CT26 был усилен у мышей с дефицитом CD226 по сравнению с однопометными мышами дикого типа (фиг. 1 A ). Иммунные клетки CT26, инфильтрирующие опухоль, состояли из значительной части NK-клеток, при этом примерно треть всех клеток CD45 ⁺ были NK-клетками по сравнению с 10% Т-клеток CD8 ⁺ и 30% CD4 ⁺ Т-клетки со скромным, но значительным снижением частот NK-клеток и CD8 ⁺ Т-клеток, наблюдаемых в опухолях от мышей CD226-KO (рис.1 B и SI Приложение , рис.S1 A ). Приблизительно 30% NK-клеток экспрессировали CD226, а также CD96, тогда как большая часть CD8 ⁺ T-клеток экспрессировала этих членов семейства PVR-нектинов; Экспрессия TIGIT была в основном ограничена Tregs (фиг. 1 C ). Уровни экспрессии CD226 и CD96 также были выше на Т-клетках CD8 ⁺ (фиг. 1 D ). Учитывая преобладание NK-клеток в опухолях CT26, NK-клетки были выделены из опухолей, а также из селезенки и дренирующих лимфатических узлов через 21 день после инокуляции, как и CD8 ⁺ и CD4 ⁺ T, клетки для секвенирования РНК (RNA -seq).На основании экспрессии гена Cd226 экспрессировался NK-клетками, CD8 ⁺ T-клетками и CD4 ⁺ T-клетками в опухолях и селезенке, как и Cd96 (фиг.1 E ), что соответствует наблюдаемая экспрессия белка. Напротив, экспрессия Tigit ограничивалась инфильтрирующими опухоль лимфоцитами. Профили экспрессии генов NK-клеток, очищенных из опухолей CT26, показали, что 799 генов были более высоко экспрессированы в WT, чем в клетках CD226-KO, в то время как 97 генов были более высоко экспрессированы в клетках CD226-KO, с использованием критерия различия в два или более раз. (Рисунок.1 F ) (полный список дифференциально экспрессируемых генов см. В наборе данных S1). Дифференциальная экспрессия генов была выражена только в NK-клетках, выделенных из опухолей, поскольку только один ген дифференциально экспрессировался в NK-клетках, выделенных из селезенки (рис. 1 G ). Кроме того, действие CD226 было в первую очередь ограничено NK-клетками, поскольку проникающие в опухоль Т-клетки CD8 ⁺ и CD4 ⁺ показали несколько генов с двукратной или большей дифференциальной экспрессией (рис. 1 H и I и Набор данных S1).Дефицит CD226 оказал явное влияние на идентичность опухолевых NK-клеток, что видно по экспрессии набора генов, используемых для определения NK-клеток в различных состояниях ( SI Приложение , рис. S1 B ) (27). Анализ обогащения набора генов (GSEA) не выявил более чем двукратного изменения любого пути среди 50 наборов отличительных генов, принадлежащих коллекции базы данных молекулярных сигнатур (MSigDB).

Рис. 1. Рост опухоли

CT26 у мышей с дефицитом CD226 и дифференциальная экспрессия генов в лимфоцитах, инфильтрирующих опухоль.( A ) Рост опухоли CT26 у мышей с дефицитом CD226 и однопометных WT. ( слева, ) Групповой анализ со статистически значимыми различиями ( n = 10 на группу; * P <0,005). ( Центр и Правый ) Кривые роста опухоли от отдельных животных WT ( Центр ) и CD226 ( Правый ) животных. Данные представляют четыре независимых эксперимента. ( B ) Состав лимфоцитов в опухолях CT26. Частоты CD4 ⁺ T-клеток, CD8 ⁺ T-клеток и NK-клеток в опухолях, полученных от мышей WT (черные символы) или CD226-KO (красные символы) на 21 день ( n = 5 на группу).( C ) Частота NK-клеток, инфильтрирующих опухоль, Т-клеток CD8 ⁺ , Т-клеток CD4 ⁺ и Treg, экспрессирующих CD226, CD96 или TIGIT. Опухоли собирали на 21 день и проводили окрашивание методом проточной цитометрии. ( D ) Уровни поверхностной экспрессии CD226, CD96 или TIGIT на субпопуляциях лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль, измеренные с помощью проточной цитометрии. Данные проточной цитометрии показаны как среднее ± стандартное отклонение; каждый символ представляет отдельное животное ( n = 5 на группу). ( E ) Экспрессия генов CD226, CD96 и TIGIT в NK-клетках, Т-клетках CD8 ⁺ или Т-клетках CD4 ⁺ , очищенных от опухолей (черные символы) или селезенки (синие символы) несущих опухоль WT CT26 мышей.rpkm, считываний на килобазу транскриптов на миллион сопоставленных операций чтения. ( F ) Графики вулканов, демонстрирующие дифференциальную экспрессию генов в NK-клетках, очищенных из пулов опухолей. Опухоли собирали на 21 день, и три пула, состоящие из четырех опухолей каждый, обрабатывали на РНК-seq. Были нанесены гены, отвечающие критериям более чем двукратного различия, и скорректированное значение P > 0,05. Гены с более высокой экспрессией в опухолевых NK-клетках мышей WT показаны красным; гены с более высокой экспрессией у мышей CD226-KO показаны синим цветом.( G ) Дифференциальная экспрессия генов в NK-клетках, очищенных от селезенки. ( H ) Дифференциальная экспрессия генов CD8 ⁺ Т-клеток, очищенных от опухолей. ( I ) Дифференциальная экспрессия генов CD4 ⁺ Т-клеток, очищенных от опухолей. Указано количество дифференциально экспрессируемых генов. Список дифференциально экспрессируемых генов см. В наборе данных S1. N.C., без изменений.

Дефицит CD226 влияет на экспрессию FOXO1-регулируемых генов в NK-клетках из сингенных опухолей.

Поскольку профили экспрессии генов показали, что инфильтрирующие опухоль NK-клетки от мышей WT и CD226-KO демонстрируют сильно дифференцированную экспрессию генов, мы стремились определить, может ли нарушение передачи сигналов CD226 напрямую приводить к нарушению активности NK-клеток. Поскольку FOXO1 является известным негативным регулятором созревания и эффекторной функции NK-клеток и участвует в регуляции множества клеточных процессов посредством прямого, а также косвенного контроля транскрипции широкого спектра генов (22), мы сосредоточились на генах, которые, как известно, регулируются. с помощью FOXO1 и / или FOXO3 (25) или играть критическую роль в NK-клетках.Проникающие в опухоль NK-клетки имели активированный фенотип по сравнению с NK-клетками селезенки (фиг. 2 A ). Дефицит CD226 в опухолевых NK-клетках привел к широко распространенному нарушению регуляции FOXO-контролируемых генов, влияя на экспрессию других факторов транскрипции, участвующих в функции иммунных клеток (рис. 2 B ), а также генов, участвующих в различных клеточных путях, таких как активация / эффектор. функции (фиг.2 C ), апоптоза (фиг.2 D ), трафика (фиг.2 E ) и клеточного цикла (фиг.2 F ).

Рис. 2.

Анализ экспрессии генов для NK-клеток, очищенных от сингенных опухолей CT26. ( A ) Тепловая карта выбранных FOXO1-регулируемых генов или генов с известной функцией в NK-клетках. ( B ) Экспрессия генов факторов транскрипции Tbx21 , Kfl2 , Runx3 и Tcf7 . ( C ) Экспрессия генов эффекторных молекул гранзима B ( Gzmb ), гранзима A ( Gzma ), перфорина ( Prf1 ) и маркера Klrg1 .( D ) Экспрессия генов компонентов апоптоза / выживания Bcl2 , Bcl6 и FasL . ( E ) Экспрессия генов хемокиновых рецепторов Ccr5 и Ccr2 . ( F ) Экспрессия гена циклина D1 ( Ccnd1 ). Для всех анализов образцы состояли из трех или четырех пулов клеток, выделенных из тканей, собранных у четырех мышей на пул. Гистограммы и усы обозначают среднее значение ± стандартное отклонение, причем каждый символ представляет одну объединенную выборку.Статистически значимые различия между мышами дикого типа и мышами с дефицитом CD226 (KO) обозначены числами, обозначающими значения P .

Профили экспрессии генов CD8 ⁺ Т-клеток, очищенных от опухолей CT26, установленных у мышей WT или CD226-KO, показали только ограниченное количество генов с более чем двукратными различиями в экспрессии. Хотя инфильтрирующие опухоль Т-клетки CD8 ⁺ имели фенотип эффекторных клеток по сравнению с Т-клетками CD8 ⁺ , присутствующими в селезенке или дренирующих лимфатических узлах, явных различий в экспрессии регулируемых FOXO1 генов (28-30) не наблюдалось. между клетками WT и CD226-KO ( SI Приложение , рис.S2). Однако более точный анализ сигнатур генов, используемый для определения кластеров Т-клеток CD8 ⁺ на различных стадиях ответа на инфекцию (31), показал, что CD226-KO CD8 ⁺ Т-клетки имели дисрегулируемую экспрессию генов почти во всех исследованных кластерах, особенно те, которые участвуют в эффекторной функции, такие как Klrg1 , Tbx21 , Prf1 и Ifng (рис. 3).

Рис. 3.

Анализ экспрессии генов CD8 ⁺ Т-клеток, очищенных от сингенных опухолей CT26.( Left ) Тепловые карты генов, используемые для определения конкретных кластеров CD8 ⁺ Т-клеток. Для всех анализов образцы состояли из трех или четырех пулов клеток, выделенных из тканей, собранных у четырех мышей на пул. ( Right ) Гены, показывающие статистически значимые различия в экспрессии, показаны на графиках. Гистограммы и усы обозначают среднее значение ± стандартное отклонение, причем каждый символ представляет одну объединенную выборку. Статистически значимые различия между мышами дикого типа и мышами с дефицитом CD226 (KO) обозначены числами, обозначающими значения P .

Оптимальное уничтожение NK-клеток зависит от экспрессии лигандов CD226 в клетках-мишенях.

Активация CD226 требует взаимодействия с его лигандами CD155 и / или CD112. Это было подтверждено проведением анализов цитотоксичности in vitro с использованием лимфокин-активированных клеток-киллеров (LAK), полученных из основной массы клеток селезенки дикого типа, в качестве эффекторов. В отличие от CT26, который экспрессирует многочисленные лиганды для других активирующих рецепторов или ингибиторов контрольных точек, опухоль меланомы B16F10 в значительной степени лишена этих лигандов ( SI Приложение , рис.S3 A ). Экспрессия гена Rae1 обнаруживалась в опухолях B16F10; однако белок RAE-1, лиганд для NKG2D, не обнаруживался на поверхности клетки ( SI Приложение , рис. S3 B ). В качестве сингенной мишени использовали клетки B16F10, поскольку они конститутивно экспрессируют CD155 и CD112 ( SI Приложение , фиг. S3 C и D ). Линия клеток с дефицитом CD155 / CD112 B16F10, обозначенная как «B16.DKO», также была получена путем нокаута CRISPR как Cd155 , так и Cd112 ( SI Приложение , фиг.S3 D ). Клетки WT LAK эффективно лизировали мишени B16F10 с почти 70% цитотоксичностью (фиг. 4 A ). Однако клетки WT LAK плохо распознают мишени B16.DKO, при этом цитотоксичность снижается более чем на 40% (рис. 4 A ). Клетки LAK экспрессировали уровни CD226, CD96 и TIGIT ( SI Приложение , рис. S4 A — C ), аналогичные уровням в свежеочищенных NK-клетках селезенки или очищенных NK-клетках, активированных IL-2 (см. как клетки «IL-2 NK»). Клетки LAK не экспрессировали, или небольшая часть клеток LAK не экспрессировала низкие уровни других ингибиторов контрольных точек, таких как PD-1, CTLA-4, TIM-3 и LAG3 ( SI Приложение , рис.S4 D ). LAK-клеточное уничтожение клеток B16F10 было сравнимо с убийством NK-клеток IL-2, с существенно более высокой цитотоксичностью, чем очищенные NK-клетки ( SI Приложение , фиг. S4 E ).

Рис. 4. Включение

CD226 усиливает активность эффекторных клеток и индуцирует фосфорилирование FOXO1. ( A , Left ) Профилирование в реальном времени уничтожения клетками WT LAK мишеней B16F10 (черная линия) или мишеней B16F10 (B16.DKO) с дефицитом CD155 / CD112 (красная линия). ( Right ) Процент цитотоксичности в 4-часовой временной точке; данные представлены как среднее ± стандартное отклонение для трех повторов.Анализы цитотоксичности были выполнены пять раз с аналогичными результатами. ( B ) Клетки WT LAK стимулировали клетками B16F10 или B16.DKO в течение указанного времени (минут). Иммуноблоттинг проводили для pFOXO1 (T24) / pFOXO3a (T32), общего FOXO1 или FOXO3, pAKT (S473), общего AKT, pSGK1 (S78), общего SGK1, pGSK-3α / β (S21 / 9) и общего GSK- 3β. Числа под каждой полосой представляют собой денситометрическое количественное определение после нормализации фосфорилированного белка до общего белка. Приведенные данные являются репрезентативными для четырех независимых экспериментов.( C ) Кинетика индукции pAKT, pFOXO1 или общего FOXO1 в цитозольной фракции ( Слева ) или индукции общего FOXO1 в ядерной фракции ( Справа ). Клетки WT или CD226-KO LAK стимулировали клетками B16F10 в течение указанного времени (минут). Клетки LAK собирали и фракционировали на цитозольные или ядерные фракции. Иммуноблоттинг для pAKT, pFOXO1 или общего FOXO1 в цитозольной или ядерной фракциях был выполнен ( SI Приложение , рис. S6). Индукцию складки определяли путем нормализации измерений денситометрии к белку домашнего хозяйства GAPDH и затем нормализации до нестимулированного состояния (t = 0 мин).Результаты являются репрезентативными для трех независимых экспериментов. ( D ) Влияние ингибитора пути AKT-FOXO1 на цитотоксичность эффекторных клеток против мишеней B16F10. Клетки LAK WT предварительно инкубировали с указанной концентрацией ингибитора FOXO1 (iFOXO1), ингибитора AKT1 / 2 (iAKT1 / 2) или ингибитора SGK1 (iSGK1) в течение 30 минут перед инкубацией с клетками-мишенями. Процент цитотоксичности определяли через 4 часа. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение трех измерений. Эксперименты с ингибиторами проводились как минимум дважды с аналогичными результатами.

Фосфорилирование FOXO1 индуцируется при взаимодействии NK-клеток с мишенями B16F10.

Затем мы оценили, зависит ли CD226-опосредованное уничтожение опухолевых клеток NK-клетками от передачи сигналов через FOXO1. Фосфорилирование FOXO1 необходимо для инактивации ядерного FOXO1, что приводит к освобождению функции эффекторных клеток от негативной регуляции FOXO1 (22). Фосфорилирование AKT сильно индуцировалось в клетках LAK WT уже через 2 мин после стимуляции либо B16F10, либо B16.Клетки DKO (рис. 4 B ), подтверждающие предыдущие сообщения о том, что CD226 запускает фосфорилирование AKT (21). FOXO1 является прямым субстратом фосфорилированного AKT (22), а фосфорилирование FOXO1 и FOXO3a обнаруживалось через 2 мин и увеличивалось за 30 мин стимуляции клетками B16F10, но лишь слабо индуцировалось клетками B16.DKO (рис. 4 B ). . Хотя было показано, что IL-2 индуцирует фосфорилирование FOXO1 (22), мы наблюдали, что относительная сила индукции при стимуляции B16F10 была намного сильнее, чем при стимуляции IL-2 ( SI Приложение , рис.S5 A ). Аналогичные эффекты наблюдались при использовании NK-клеток IL-2 ( SI Приложение , рис. S5 B ). FOXO1 также является субстратом pSGK1 (24), но фосфорилирование SGK1 не было заметно усилено при стимуляции, независимо от экспрессии CD226 или лиганда (рис. 4 B ). Другим негативным регулятором активации NK-клеток является киназа гликогенсинтазы (GSK) -3β (32), но, в отличие от FOXO1, GSK-3β конститутивно фосфорилировался в клетках LAK WT, и дальнейшее фосфорилирование существенно не увеличивалось с помощью B16F10 или B16.ДКО стимуляция (рис. 4 B ).

При фосфорилировании FOXO1 перемещается из ядра в цитоплазму, где он убиквитинируется и впоследствии разлагается (24). Цитозольный фосфорилированный FOXO1 обнаруживался через несколько минут после стимуляции в клетках LAK WT, но не индуцировался в клетках LAK CD226-KO (фиг. 4 C и SI, приложение , фиг. S6). Кинетика фосфорилирования FOXO1 в клетках LAK дикого типа отражает фосфорилирование AKT, что согласуется с тем, что FOXO1 является прямым субстратом фосфор-AKT (рис.4 С ). Постепенное снижение общего FOXO1 наблюдалось в ядерной фракции клеток LAK WT, тогда как увеличение наблюдалось в клетках CD226-KO LAK (фиг. 4 C ). Ни фосфорилированный FOXO1, ни фосфорилированный AKT не были обнаружены в ядерной фракции клеток WT или CD226 LAK ( SI, приложение , фиг. S6). Эти данные согласуются с транслокацией ядерного FOXO1 в цитоплазму после фосфорилирования, индуцированного при передаче сигнала CD226.

Ингибирование фосфорилирования FOXO1 отменяет опосредованное CD226 убийство.

Анализы цитотоксичности проводили в присутствии ингибитора FOXO1, который предотвращает фосфорилирование (33), чтобы подтвердить, что опосредованное CD226 фосфорилирование FOXO1 необходимо для усиления эффекторной активности. Ядерный FOXO1 не перемещается в цитоплазму в присутствии ингибитора, таким образом поддерживая FOXO1 в активном состоянии. Ингибитор FOXO1 отменял способность клеток WT LAK убивать мишени B16F10 дозозависимым образом, в то время как уничтожение мишеней с дефицитом CD155 / CD112 не затрагивалось (рис.4 D и SI Приложение , рис. S4 F ), что указывает на то, что передача сигнала CD226 не может индуцировать фосфорилирование FOXO1 в присутствии ингибитора. Ингибиторы AKT и SGK1 использовали для подтверждения сигнальной роли этих киназ в CD226-опосредованной инактивации FOXO1. Ингибитор AKT сильно ухудшает цитотоксичность клеток LAK WT против клеток-мишеней B16F10, тогда как ингибирование SKG1 не влияет на цитотоксичность (фиг.4 D и SI Приложение , фиг.S4 F ). Ни один из ингибиторов не влиял ни на эффекторную, ни на жизнеспособность клеток-мишеней ( SI Приложение , рис. S4 G ). Ингибиторы FOXO1 и AKT снижали цитотоксичность почти на 80%, подтверждая прямую связь между фосфорилированием AKT и FOXO1. Однако фосфорилирование AKT наблюдалось без сопутствующего фосфорилирования FOXO1, как в случае стимуляции клетками B16.DKO (фиг.4 B ), что указывает на то, что пути AKT может быть недостаточно для индукции фосфорилирования FOXO1 и что другие пути могут также участвовать в передаче сигналов CD226.

Фосфорилирование FOXO1 конкретно регулируется CD226.

Хотя эффекторные клетки экспрессируют мишени CD226 и B16F10, экспрессируют CD155 и CD112, также могут присутствовать другие пары активирующий рецептор / лиганд. Чтобы оценить потребность в CD226 для индукции фосфорилирования FOXO1, мы использовали эффекторные клетки, полученные от мышей с дефицитом CD226. У CD226-дефицитных клеток LAK была нарушена их способность лизировать мишени B16F10 с почти 30% снижением цитотоксичности по сравнению с клетками LAK WT; отсутствие CD226 не уменьшало убийство B16.Клетки-мишени DKO (рис. 5 A ). Фосфорилирование FOXO1 было сильно нарушено, когда клетки CD226 KO LAK стимулировали клетками-мишенями B16F10, и было дополнительно снижено с использованием клеток B16.DKO (фиг. 5 B ). Однако AKT фосфорилировался, когда CD226-дефицитные клетки LAK стимулировали клетками B16F10 или B16.DKO. Требование взаимодействия CD226 с его лигандами для индукции передачи сигнала было дополнительно подтверждено обработкой клеток WT LAK анти-CD226 mAb, способных блокировать взаимодействие с CD155 ( SI Приложение , рис.S7 А ). MAb против CD226 подавляло гибель клеток-мишеней B16F10 WT LAK дозозависимым образом, снижая цитотоксичность на ∼30% при наивысшей протестированной концентрации (рис. 5 C и SI Приложение , рис. S7 B ) и, таким образом, оказывает влияние на уничтожение клеток LAK, сравнимое с действием дефицита CD226 (фиг. 5 A ). MAb против CD226 не влияло на уничтожение CD226-дефицитными клетками LAK мишеней B16F10 или B16.DKO ( SI Приложение , фиг. S7 C и D ).Блокада CD226 нарушала фосфорилирование FOXO1 в клетках WT LAK, стимулированных B16F10, фенокопирование сигнальных ответов в клетках CD226-KO LAK (фиг. 5 D ).

Рис. 5.

Влияние дефицита CD226 или блокирования анти-CD226 mAb на цитотоксичность и фосфорилирование FOXO1. ( A , слева ) Профилирование в реальном времени уничтожения клетками CD226-KO LAK клеток-мишеней B16F10 (красная кривая) или B16.DKO (синяя кривая); Убийство WT LAK мишеней B16F10 (черный след) использовали в качестве компаратора для оптимальной цитотоксичности.( Right ) Процент цитотоксичности в 4-часовой временной точке; данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение для трех повторов. ( B ) Клетки CD226-KO LAK стимулировали клетками B16F10 или B16.DKO в течение указанного времени (минут). Иммуноблоттинг проводили для pFOXO1 (T24) / pFOXO3a (T32), общего FOXO1 или FOXO3, pAKT (S473) и общего AKT. Числа под каждой полосой представляют собой денситометрическое количественное определение после нормализации фосфорилированного белка до общего белка. ( C , Left ) Цитотоксичность против мишеней B16F10 клетками WT LAK, предварительно инкубированными с 50 мкг / мл mAb против CD226 (красная пунктирная линия) или изотипическим контролем (черная сплошная линия) в течение 30 минут перед инкубацией с мишенями.( Right ) Процент цитотоксичности в 4-часовой временной точке; данные представлены как среднее ± стандартное отклонение для трех повторов. ( D ) Иммуноблоттинг выполняли на клетках WT LAK, предварительно инкубированных в течение 30 минут с изотипическим контролем или mAb против CD226 перед стимуляцией клетками B16F10 в течение указанного времени (минут). Все эксперименты по цитотоксичности и передаче сигналов были выполнены не менее трех раз с аналогичными результатами. ( E ) Влияние ингибитора FOXO1 (iFOXO1) ( Левый ) или ингибитора AKT1 / 2 (iAKT1 / 2) ( Правый ) на CD226-KO (красная сплошная линия) или эффекторные клетки, обработанные mAb против CD226 цитотоксичность в отношении мишеней B16F10.Для блокады антителами клетки LAK WT предварительно инкубировали с указанной концентрацией iFOXO1 вместе с либо изотипическим контролем (черная сплошная линия), либо с mAb против CD226 (красная пунктирная линия) в концентрации 50 мкг / мл в течение 30 минут перед инкубацией с мишенью. клеток, и процент цитотоксичности рассчитывали на 4-часовой временной точке; каждая точка данных представляет собой среднее значение ± стандартное отклонение трех измерений. Дважды были проведены эксперименты с аналогичными результатами.

Ингибирование

FOXO1 не приводило к дальнейшему ухудшению цитотоксичности, опосредованной клетками CD226-KO LAK или клетками WT LAK, обработанными mAb против CD226 (фиг.5 E ), что указывает на то, что отсутствие передачи сигнала CD226 достаточно для полного предотвращения фосфорилирования FOXO1. Напротив, ингибитор AKT дополнительно снижает цитотоксичность клеток CD226-KO LAK или обработанных анти-CD226 клеток WT LAK на ∼20% (рис. 5 E ), что позволяет предположить, что другие пары активирующий / лиганд также могут присутствовать и передавать сигнал через путь AKT.

Обсуждение

Здесь мы показываем, что взаимодействие CD226 с его лигандами CD155 и / или CD112 приводит к фосфорилированию FOXO1, обеспечивая путь, с помощью которого этот негативный регулятор эффекторной функции и развития NK-клеток может быть инактивирован.CD226, по-видимому, является первичным активирующим рецептором, ответственным за фосфорилирование FOXO1, при отсутствии либо CD226 на эффекторных клетках, либо лигандов CD226 на клетках-стимуляторах, серьезно снижающих фосфорилирование FOXO1. Кроме того, вмешательство во взаимодействие эффектор-мишень CD226 / CD155 с mAb против CD226 предотвращает инактивацию FOXO1, которая приводит к субоптимальной цитотоксичности NK-клеток против опухолевых мишеней. Роль CD226 в активации NK-клеток была тщательно изучена, но механизм, с помощью которого этот важный рецептор активации регулирует эффекторную функцию NK-клеток, остается неуловимым.В этом исследовании установлена ​​прямая связь между передачей сигналов CD226 и регуляцией фактора транскрипции FOXO1, обеспечивая путь, с помощью которого CD226 независимо опосредует цитотоксическую активность против клеток-мишеней. Используя системы in vitro, мы демонстрируем, что взаимодействие CD226 с его родственными лигандами CD155 и / или CD112 необходимо для оптимальной эффективности цитотоксичности LAK-клеток мыши. Генетическое устранение экспрессии CD226 или блокада антителом CD226 нарушает гибель клеток-мишеней. Что еще более важно, взаимодействия эффектор-мишень показали, что фосфорилирование FOXO1 является конечным следствием передачи сигналов CD226, что приводит к удалению критического негативного регулятора функции NK-клеток.

Работа in vitro была сосредоточена в первую очередь на опосредованном LAK мышином распознавании и уничтожении опухолевых клеток меланомы B16F10, поскольку клетки B16F10 избирательно экспрессируют лиганды CD226 CD155 и CD112. Преимуществом штамма B16F10 является отсутствие поверхностной экспрессии ICAM-1 (лиганд для LFA-1), RAE-1, MULT-1 и H-2K ^b (лиганды для NKG2D), CD48 (лиганд для 2B4), CD70 (лиганд для CD27) и CD80 (лиганд для CD28), что позволяет изучать CD226 в относительной изоляции от других известных активирующих рецепторов (18–20).Эта система также использовалась другими: недавнее исследование показало, что CD226 ^— IL-2-активированные NK-клетки мыши обладают нарушенной способностью образовывать длительные стабильные контакты с клетками B16F10, что способствует снижению их способности к устранить эту опухоль как in vitro, так и in vivo (19). Хотя клетки B16F10 лишены многих активирующих лигандов рецепторов, некоторая степень уничтожения мишеней B16.DKO наблюдалась даже с клетками WT LAK, а также с клетками CD226-KO LAK. Клетки B16F10 действительно экспрессируют лиганды для рецептора естественной цитотоксичности NKp46 (18), что может объяснять некоторую не-CD226-опосредованную цитотоксичность (34).Поскольку наша экспериментальная система позволяла специфически исследовать только передачу сигналов CD226, она не исключает возможности того, что другие активирующие рецепторы, такие как NKG2D, могут аналогичным образом фосфорилировать FOXO1. Ограничен ли этот путь CD226 или является общим для активирующих рецепторов, еще предстоит определить.

FOXO1 принадлежит к семейству факторов транскрипции FOXO и наиболее высоко экспрессируется в В-клетках и Т-клетках в дополнение к NK-клеткам (24). Экспрессия фактора транскрипции FOXO1 не определяет клеточную функциональность или состояние дифференцировки; скорее, это позволяет увеличить клеточный потенциал.Инактивация FOXO1 происходит в результате его фосфорилирования в ядре с последующей транслокацией в цитоплазму, где он убиквитинируется и затем деградирует (23). Примечательно, что фосфорилирование FOXO1 было обнаружено только в условиях, в которых специфически задействован CD226. Фосфорилирование FOXO1 не наблюдалось, когда клетки LAK были дефицитными по CD226 или когда взаимодействия CD226-CD155 блокировались с помощью Ab, или когда клетки-мишени не содержали лигандов CD226. В то время как клетки LAK с дефицитом CD226 могут экспрессировать CD96, который также связывается с CD155 (11), FOXO1 не фосфорилируется в значительной степени, когда клетки LAK с дефицитом CD226 находятся в контакте с клетками B16F10.TIGIT — это ингибирующий рецептор, который также распознает CD155 и CD112 (9, 10). Однако клетки LAK с дефицитом WT и CD226 не экспрессировали TIGIT, что исключает любой возможный вклад передачи сигналов TIGIT в фосфорилирование FOXO1.

TIGIT и CD96 обладают более высоким сродством к CD155 и могут превосходить CD226 по связыванию (9). Кроме того, было показано, что TIGIT взаимодействует с CD226 в цис-, нарушая гомодимеризацию CD226 (35). В условиях опухоли было обнаружено, что экспрессия TIGIT связана с истощением инфильтрирующих опухоль NK-клеток, а блокада TIGIT напрямую обращает истощение NK-клеток независимым от Т-клеток образом (36).Блокада TIGIT может также усиливать хелперную функцию NK-клеток в отношении Т-клеточного иммунитета против CD8 ⁺ . Было показано, что как лечение mAb против CD226, так и истощение NK-клеток снижает терапевтический эффект комбинированной терапии антителами против TIGIT и PD-L1 (35, 36). Точно так же mAb против CD96, независимо от того, блокируют ли они взаимодействие с CD155, могут подавлять образование метастазов зависимым от NK-клеток способом, который требует CD226 (37). Наши результаты предполагают, что эффекты блокады TIGIT или лечения CD96 mAb могут быть связаны с инактивацией негативного регулятора NK-клеток FOXO1, опосредованного CD226, либо за счет образования рецептора CD226, либо за счет удаления первичного конкурента связывания CD226 с его лигандами, тем самым обеспечивая механизм, с помощью которого CD226 может усиливать эффекторную функцию и предотвращать истощение.

Специфичность инактивации FOXO1 посредством передачи сигналов CD226 может позволить CD226 модулировать функцию NK-клеток независимым образом, позволяя этому единственному рецептору преодолевать ключевые контрольные точки ингибирования. В дополнение к контрольным точкам SLP-76 и NF-κB для активации NK-клеток, которые требуют передачи сигналов через несколько активирующих рецепторов (38⇓⇓ – 41), недавно было сообщено, что GSK-3β также действует как негативный регулятор множественных активирующих сигналов. (32). GSK-3β конститутивно активен в покоящихся клетках, но ингибируется после клеточной стимуляции посредством фосфорилирования Ser9, опосредованного PI3K / AKT или MEK / ERK; он служит точкой схождения различных сигнальных путей, участвующих в метаболизме, дифференцировке, пролиферации и иммунных ответах клеток (42).В NK-клетках GSK-3β является общим для активирующих рецепторов независимо от того, содержат ли они ITAM, и передача сигналов через отдельные рецепторы может индуцировать фосфорилирование GSK-3β. Однако для полного ингибирования GSK-3β требуется запуск нескольких рецепторов, таких как NKG2D и 2B4 (32). Наши данные подтверждают мнение, что GSK-3β может модулироваться посредством ряда различных рецепторов, поскольку фосфорилирование GSK-3β очевидно независимо от того, экспрессируется ли CD226 в передаче сигналов между клетками. Таким образом, CD226, по-видимому, однозначно ответственен за инактивацию FOXO1, что отличает CD226 от парадигмы, в которой требуется задействование множества активирующих рецепторов для преодоления тормозных контрольных точек в NK-клетках.

FOXO1, как сообщается, является отрицательным регулятором функции NK-клеток, противодействуя функции положительного регулятора TBET (22). Мы обнаружили, что экспрессия TBET снижена в CD226-дефицитных опухолевых NK-клетках, что согласуется с мнением о том, что передача сигнала CD226 необходима для инактивации FOXO1, тем самым высвобождая супрессию TBET. Точно так же уровень экспрессии Klf2 и Runx3 ниже в CD226-дефицитных опухолевых NK-клетках. KLF2 является ключевым фактором транскрипции для размножения и выживания NK-клеток (43), а RUNX3 важен для чувствительности NK-клеток к IL-15 (44), что указывает на то, что FOXO1 является потенциальным негативным регулятором многих важных факторов транскрипции NK-клеток.TCF7 является фактором транскрипции, важным для памяти Т-клеток CD8 ⁺ , и сообщалось, что дефицит FOXO1 предотвращает экспрессию TCF7 (45), предполагая, что передача сигналов CD226 также может играть роль в генерации памяти NK-клеток, как это было ранее вовлечены в контекст вирусной инфекции (46). Наши данные также показывают, что дефицит CD226 влияет на регулируемые FOXO1 гены, участвующие в апоптозе / выживании, клеточном цикле и перемещении, что может полностью или частично способствовать относительной малочисленности NK-клеток в опухолях мышей с дефицитом CD226.Таким образом, CD226 является не просто медиатором цитотоксичности эффекторных клеток, но может участвовать практически во всех аспектах биологии NK-клеток.

Действие CD226 в значительной степени ограничивалось опухолевыми NK-клетками. Большое количество дифференциально экспрессируемых генов было обнаружено между опухолевыми NK-клетками WT и CD226-KO, в отличие от NK-клеток селезенки, в которых практически не наблюдали генных различий. Возможно, что в селезенке мириады сигналов, принимаемых как ингибирующими, так и активирующими рецепторами, включая CD226, могут удерживать покоящиеся NK-клетки в состоянии готовности к ответу, тогда как опухолевые NK-клетки, по-видимому, находятся в эффекторном состоянии, а CD226 усиливает эффекторный статус.Дифференциальная экспрессия генов, наблюдаемая между опухолевыми NK-клетками WT и CD226-KO, отражает важность CD226 как активирующего рецептора. В опухолевой среде CD226 может подвергаться воздействию более высоких уровней CD155 и / или CD112, экспрессируемых на опухолевых клетках, чем те, которые встречаются в нормальных тканях, вызывая опосредованную CD226 инактивацию FOXO1.

Роль CD226-опосредованной регуляции FOXO1 в инфильтрирующих опухоль Т-лимфоцитах CD8 ⁺ также была очевидна, хотя функциональные последствия могут быть более тонкими, чем наблюдаемые для NK-клеток.В то время как как WT, так и CD226-дефицитные Т-клетки CD8 ⁺ проявляли эффекторный фенотип в опухолях, экспрессия эффекторных генов отличительных признаков, а также продукция эффекторных молекул, таких как гранзим B и IFN-γ, были более выраженными, когда CD226-FOXO1 сигнальный путь не был нарушен. Интересно, что путь CD226-FOXO1 влияет на экспрессию ключевых факторов транскрипции, участвующих в дифференцировке памяти. TBET репрессируется FOXO1 с инактивацией FOXO1, необходимой для дифференцировки эффекторных клеток (47).Активация CD226 приводит к фосфорилированию FOXO1, тем самым позволяя TBET осуществлять контроль над эффекторными механизмами. Напротив, EOMES и TCF7, два фактора транскрипции, участвующие в установлении Т-клеточной памяти, напрямую нацелены на FOXO1, тем самым предоставляя FOXO1 средство влиять на континуум от эффектора к памяти, смещая Т-клетки CD8 ⁺ в сторону программирования памяти ( 48, 49). Передача сигналов CD226 снижает активный FOXO1 с предполагаемым эффектом нарушения способности дифференцировки клеток памяти.Влияние CD226 на генерацию Т-клеток памяти CD8 ⁺ в условиях опухоли еще предстоит изучить и может быть лучше выяснено на моделях вирусной инфекции.

Дальнейшие исследования определят, применимы ли наши результаты к человеческим NK-клеткам. Хотя NK-клетки мыши и человека имеют схожие функции и некоторые пути развития, существуют различия, особенно с точки зрения фенотипа. Почти все NK-клетки периферической крови человека экспрессируют CD226 по сравнению с примерно 50–80% NK-клеток селезенки мыши.В контексте рака человека воздействие CD155 может подавлять экспрессию CD226 на NK-клетках, инфильтрирующих опухоль (50). Еще предстоит выяснить, связаны ли потеря экспрессии CD226 и сопутствующее нарушение функции NK-клеток в опухолях человека с активностью FOXO1.

В целом, наши результаты демонстрируют, что участие CD226 в NK-клетках мыши запускает инактивацию FOXO1, ключевого фактора транскрипции, участвующего в негативной регуляции NK-клеток. Экспериментальная система, использованная в этих исследованиях, демонстрирует, что регуляция FOXO1 независимо опосредуется CD226, без синергизма, обеспечиваемого другими активирующими рецепторами, такими как 2B4, подтверждая важность CD226 для полной эффекторной функции NK-клеток и идентифицируя CD226 как ключевой регулятор разнообразных клеточных пути в NK-клетках.Важно отметить, что мы определили механизм, с помощью которого CD226 оказывает сильное влияние на NK-клетки, отвечающие против опухолей. Наши результаты дают обоснование для запуска передачи сигнала CD226, возможно, через агонистическое антитело, как средства обеспечения повышенной противоопухолевой активности NK-клеток, которая может быть терапевтически полезной.

Методы

Создание мышей

Cd226 -KO.

Конструкция, использованная для генерации аллеля C57BL / 6N Cd226 -KO в ES-клетках, была получена с использованием комбинации методов рекомбинирования и стандартных методов молекулярного клонирования.В частности, мы использовали подход CoSBR, как описано ранее (51), для создания вектора таргетинга с условным нокаутом. В полученном векторе плечо 5′-гомологии длиной 2,431 п.н. соответствует GRCm38 / mm10 chr18: 89,203,889–89,206,319, а плечо 3′-гомологии из 2535 п.н. соответствует chr18: 89,207,509–89,210,043. Область длиной 1,189 п.н., фланкированная сайтами loxP (экзоны 2 и 3), соответствует chr18: 89,206,320–89,207,508. Конечный вектор подтверждали секвенированием ДНК, линеаризовали и использовали для нацеливания на ES-клетки C2 (C57BL / 6N) с использованием стандартных методов (положительный G418 и отрицательный отбор по ганцикловиру).Положительные клоны идентифицировали с помощью ПЦР с дальним диапазоном с последующим подтверждением последовательности. Затем правильно нацеленные ES-клетки инфицировали Adeno-Cre для удаления флоксованного экзона и получения клонов с аллелем Cd226 exon2-3 – KO. Затем нокаутные ES-клетки инъецировали в бластоцисты, и передачу по зародышевой линии получали после скрещивания с самками C57BL / 6N, в результате чего получали химеры. Подход CRISPR (52) был использован для создания мышей с дефицитом CD226 на фоне BALB / cAnN. Используемая последовательность однонаправленной РНК представляла собой 5′-GCTATTCTTCATGTGCACAA-3 ‘(расположенный на 3’-конце экзона 2 Cd226 ), а аллель KO представлял собой делецию 6 п.н. ) вставка: GCTATTCTTCATGTGC-CA — gtaaagc, что приводит к сдвигу рамки и преждевременному стоп-кодону в экзоне 3.Комплексное иммунофенотипирование не выявило каких-либо серьезных аномалий в NK-клетках, Т-клетках или миелоидных компартментах в селезенке или других различных лимфоидных органах, что согласуется с мышами CD226-KO, описанными другими (53).

Всех мышей содержали в Genentech в соответствии с рекомендациями Американской ассоциации по уходу за лабораторными животными. Все экспериментальные исследования на животных проводились с одобрения институциональных комитетов по уходу и использованию животных Genentech Lab Animal Research и проводились в учреждении, аккредитованном Ассоциацией по оценке и аккредитации ухода за лабораторными животными.

Сотовые линии.

Клеточные линии B16-F10 и CT26 (полученные от внешних поставщиков, таких как ATCC) содержались в специализированном помещении для внутренних линий клеток и тестировались на отсутствие микоплазм. Клетки CT26 культивировали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% FBS и 100 ед / мл пенициллина / 100 мкг / мл стрептомицина. Клетки B16-F10 культивировали в среде DMEM с добавлением 10% FBS и 100 ед. / Мл пенициллина / 100 мкг / мл стрептомицина. Обе клеточные линии выращивали в увлажненном при 37 ° C инкубаторе с 5% CO ₂ .Нокаут экспрессии CD155 и CD112 в клетках B16-F10 выполняли путем котрансфекции плазмидами, содержащими направляющие РНК, нацеленные на Cd155 или Cd112 , и Cas9 (Integrated DNA Technologies) с использованием липофектамина LTX с реагентом PLUS (Life Technologies) в Opti- МЕМ (Life Technologies). Клетки были размножены в течение 4 дней, а затем были отсортированы по одной клетке на CD155 / CD112 дважды отрицательные клетки для создания линии двойного нокаута B16-F10 CD155 / CD112 (называемой здесь «B16.DKO»).

Антитела и рекомбинантные белки.

Клон 37F6 mAb против CD226, используемый для исследований опухолей in vivo и исследований цитотоксичности in vitro, был описан ранее (35). Следующие Abs использовали для окрашивания клеток B16-F10 методом проточной цитометрии: Alexa-Fluor 488-мышиный Nectin-2 / CD112 (829038; R&D Systems) и APC-мышиный CD155 (TX56; BioLegend). Следующие Abs использовали для окрашивания и сортировки иммунных клеток мышей методом проточной цитометрии: PE-DX5 (BD Biosciences), PerCP-Cy5.5 CD226 (10E5; BioLegend), PE-Cy-7 TIGIT (GIGD7; eBioscience), BV421 CD96. (6A6; BD Biosciences), PE-Cy7 CD8a (53-6.7; eBioscience), Alexa-Fluor 700 CD8a (RPA-T8; BD Biosciences), BV650 CD4 (RM4-5; BioLegend), BV711-NKp46 (29A1.4; BioLegend), BV785-CD3 (145-2C11; BD Biosciences), BUV395 CD45 (30-F11; BD Biosciences) и краситель для фиксации жизнеспособности eFluor780 (eBioscience). Мышиный CD155.Fc для блокирования был описан ранее (35).

Проточная цитометрия и сортировка клеток.

Проточная цитометрия выполнялась с использованием стандартных протоколов. Для окрашивания иммунных клеток из опухолей суспензии отдельных клеток готовили осторожным механическим разрушением ткани сначала измельчением с последующей диссоциацией с использованием мягкого диссоциатора MACS (Miltenyi Biotec) и расщепления 2 мг / мл коллагеназы D (Roche) и 40 Ед / мл. мл ДНКазы (Roche).Суспензии одноклеточных клеток селезенки и дренирующих лимфатических узлов получали механическим расщеплением путем измельчения между двумя концами замороженных предметных стекол в холодном PBS с добавлением 2% FBS. Все образцы собирали на приборах LSR-II, LSR-Fortessa или BD Symphony (BD Biosciences) и анализировали с помощью программного обеспечения FlowJo v9.4.4 (Tree Star, Inc.). Сортировку клеток проводили с использованием инструментов FACS Aria или FACS Aria Fusion (BD Biosciences).

Выделение NK-клеток и создание эффекторных клеток.

NK-клеток выделяли из селезенки мышей WT с использованием набора для выделения NK-клеток EasySep Mouse (STEMCELL Technologies) в соответствии с инструкциями производителя. NK-клетки культивировали в полной среде RPMI (RPMI 1640 с добавлением 10% FBS, 2 мМ L-глутамина, 2 мкМ 2-меркаптоэтанола, 1 мМ пирувата натрия, 100 Ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина) с добавлением 1000 мкг / мл. Ед / мл рекомбинантного мышиного IL-2 (Akron Biotech) в инкубаторе с влажностью 37 ° C и 5% CO ₂ . NK-клетки, созданные таким образом, называются «NK-клетками IL-2».Альтернативно, объемные клетки селезенки культивировали в полной среде RPMI с добавлением 1000 ед / мл рекомбинантного мышиного IL-2 в течение 4 дней. Неприкрепленные клетки осторожно удаляли и добавляли свежую среду, содержащую IL-2, еще на 3 дня для образования клеток LAK.

Анализ цитотоксичности in vitro.

Электронное зондирование клеток в реальном времени с использованием системы xCELLigence RTCA MP (ACEA Biosciences) было выполнено для оценки цитотоксичности. Клетки-мишени A-427, B16-F10 или B16.DKO (0,5–1 × 10 ⁵ в 100 мкл полной среды RPMI) высевали в 96-луночный E-планшет и культивировали в течение 4–16 ч в xCELLigence. система установлена ​​в инкубаторе 37 ° C, 5% CO ₂ .Оптимальные условия посева были установлены путем мониторинга индекса клеток (CI), значения, непосредственно отражающего силу адгезии клеток и количество клеток, измеренное по значениям электрического импеданса на массиве электродов высокой плотности, покрывающих дно каждой лунки E-планшета. . После того как клеткам-мишеням дали возможность прилипнуть и CI стабилизировались в линейном диапазоне, 5 × 10 ⁵ эффекторных клеток в 100 мкл полной среды RPMI были добавлены в соответствующие лунки. Для блокады Ab клетки LAK предварительно инкубировали с клоном 37F6 mAb против CD226 или с изотипическим контролем в течение 30 минут на льду перед добавлением в E-планшет.Ab присутствовал на протяжении всего теста на умерщвление. Для исследований ингибитора FOXO1 клетки LAK предварительно инкубировали с ингибитором FOXO1 (Calbiochem) в течение 30 минут при 37 ° C перед добавлением в E-планшет. Лунки с клетками-мишенями без эффекторных клеток служили отрицательным контролем. После добавления эффекторных клеток CI измеряли каждые 10 мин в реальном времени. ДИ в каждый момент времени был нормализован относительно ДИ во время добавления клеток LAK, а цитотоксичность рассчитывалась как% цитолиза = (нормализованный ДИ _{№ эффектор} — нормализованный ДИ _{эффектор} ) / нормализованный ДИ _{№ эффектор} × 100.

Вестерн-блоттинг.

Клетки-мишени B16-F10 или B16.DKO использовали для стимуляции эффекторных клеток. Сливающиеся слои клеток-мишеней помещали в шестилуночные планшеты, среду удаляли и клетки дважды промывали PBS. Эффекторные клетки собирали, дважды промывали, а затем инкубировали в бессывороточной среде в течение 2 ч перед стимуляцией. Эффекторные клетки (5 × 10 ⁶ в объеме 1 мл бессывороточной среды) осторожно добавляли в лунки, содержащие клетки-мишени, и инкубировали при 37 ° C в течение 2, 10 или 30 мин.Эффекторные клетки осторожно собирали, чтобы избежать загрязнения прилипшими клетками-мишенями, центрифугировали и осаждали, промывали ледяным PBS, затем лизировали в буфере RIPA (EMD Millipore) с добавлением смеси ингибиторов фосфатазы (Roche) и полной смеси ингибиторов протеазы (Roche). Лизаты очищали от нерастворимых материалов центрифугированием. Концентрацию белка измеряли с использованием анализа бицинхониновой кислоты. Десять микрограммов общего белка ресуспендировали в восстановленном буфере для образцов и подвергали электрофорезу в 4–12% геле Бис-Трис.Для субклеточного фракционирования ядерные и цитоплазматические фракции получали с использованием реагентов NE-PER для ядерной и цитоплазматической экстракции (Thermo Scientific) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, 5 × 10 ⁶ клеток инкубировали в 50 мкл цитоплазматического буфера для экстракции (Thermo Scientific) над льдом в течение 3 мин; затем препарат центрифугировали при 20,800 × г в течение 4 мин для выделения цитоплазматических белков. Ядерные белки выделяли, добавляя к осадкам 50 мкл буфера для ядерной экстракции (Thermo Scientific).Равные количества белка загружали в каждую дорожку, разделяли на 4–12% геле Bis-Tris NuPAGE (Invitrogen), а затем переносили на нитроцеллюлозную мембрану. Вестерн-блоттинг выполняли со специфическими антителами к pAKT Ser473 [каталожный № 4048; Cell Signaling Technology (CST)], AKT (№ 9722; CST), p-FOXO1 (Thr24) / FOXO3a (Thr32) / FOXO4 (Thr28) (№ 2599; CST), FOXO1 (№ 2880; CST), FOXO3 (№ 2497; CST), pSGK1 Ser78 (№ 5599; CST), SGK1 (№ 12103; CST), pGSK-3α / β Ser21 / 9 (№8566; CST), GSK-3β (№ 12456; CST). Блоты визуализировали с использованием хемилюминесцентного субстрата (Pierce ECL Plus; Thermo).

CT26 Модель опухоли, анализ РНК-Seq и биоинформатика.

клеток CT26 (1 × 10 ⁵ ) подкожно. вводили аналогичным по возрасту самкам мышей WT и CD226-KO BALB / c в возрасте 6-8 недель. Через 21 день после инокуляции опухоли мышей умерщвляли и объединяли в три группы по четыре человека для каждого генотипа. Объемы опухолей измеряли и рассчитывали дважды в неделю с использованием модифицированной формулы эллипсоида: 1/2 × (длина × ширина ² ).Животных с опухолями размером более 2000 мм ³ или с изъязвлениями умерщвляли, если они были очевидны до 21 дня. Селезенки и дренирующие лимфатические узлы диссоциировали на суспензии отдельных клеток, а эритроциты лизировали с использованием буфера для лизиса ACK. Опухоли измельчали, а затем диссоциировали с использованием диссоциатора мягкого действия MACS (Miltenyi Biotec) в присутствии буфера для переваривания, состоящего из 2 мг / мл коллагеназы D (Roche) и 40 ед / мл ДНКазы (Roche).

NK-клеток, CD4 ⁺ T-клеток и CD8 ⁺ T-клеток (1 × 10 ⁵ ) были отсортированы из каждого объединенного образца селезенки, лимфатического узла и опухоли.РНК экстрагировали с помощью набора RNeasy Micro Kit (Qiagen) в соответствии с протоколом производителя. Профили экспрессии генов с помощью RNA-seq проводили с использованием трех пулов WT и трех пулов образцов KO для каждого типа клеток и типа ткани. Контроль качества каждого образца был определен для обеспечения количества и качества РНК перед обработкой для RNA-seq. Целостность РНК определяли с помощью биоанализатора Agilent 2100 (Agilent Genomics), а концентрацию определяли с помощью спектрофотометра NanoDrop 8000 (Thermo Scientific).Один микрограмм общей РНК использовали в качестве исходного материала для подготовки библиотеки с использованием набора TruSeq RNA Sample Preparation Kit v2 (Illumina). Размер библиотек подтверждали с помощью анализатора фрагментов (Advanced Analytical Technologies), а концентрации определяли с помощью набора для количественного определения библиотек (KAPA). Библиотеки были мультиплексированы, а затем секвенированы на секвенаторе Illumina HiSeq 2500 (Illumina), генерируя около 25 миллионов уникальных считываний карт на образец. Считывания были сопоставлены с геномом мыши mm9 с помощью GSNAP (research-pub.gene.com/gmap/).

Анализ дифференциальной экспрессии проводили с использованием методологии voom-limma. Данные подсчета на уровне гена обрабатывались в R с использованием пакета limma. Применялась линейная модель, содержащая термины для типа ткани (опухоль, селезенка, лимфатический узел), а также взаимодействия между типом ткани и типом клеток (NK-клетки, CD8 ⁺ T-клетки и CD4 ⁺ T-клетки) и между тип ткани, тип клеток и статус нокаута. Гены с низкой экспрессией были удалены, оставив только гены, которые были экспрессированы с двумя значениями на миллион или более, а отфильтрованная матрица подсчета затем была пропущена через функцию voom в limma для моделирования тенденции средней дисперсии количества считываний перед анализом дифференциальной экспрессии. .Все статистические данные, полученные на основе данных RNA-seq, представляют собой значения P с поправкой на частоту ложных открытий. Анализ генов производился с использованием пакета multiGSEA в R с использованием метода камеры. Наборы генов из коллекций MSigDB для наборов отличительных, курируемых, мотивных, генных онтологий и иммунологических генов были включены и отфильтрованы для скорректированного значения P , равного 0,05 или меньше, и, по крайней мере, двукратного изменения.

Статистика.

Данные анализировали с использованием программного обеспечения GraphPad Prism версии 6 (GraphPad).Измерения между двумя группами проводились с помощью двустороннего теста Стьюдента t . Группы из трех или более человек анализировали односторонним дисперсионным анализом с последующим посттестом Тьюки. Значения P <0,05 считались значимыми.

Благодарности

Мы благодарим основной центр FACS Genentech за вклад в их знания и выполнение сортировки ячеек; Роберт Дж. Ньюман, Тим Соукуп и Мероне Руз-Гирма за создание нацеленного вектора Cd226 и нацеленных на ES-клетки C57BL / 6N; Основные группы лабораторных животных Genentech для микроинъекций, ухода за животными и поддержки генотипирования; Зора Модрусан в лаборатории микрочипов для проведения анализа RNA-seq; и Роберта Бургона за вклад в биоинформатический анализ.

Сноски

• Вклад авторов: J.S., R.C., J.L.G. и E.Y.C. спланированное исследование; X.D., P.d.A., N.M., D.d.A.N., K.H.B., V.A., S.M., V.J. и E.Y.C. проведенное исследование; K.R.A. и С. внесены новые реагенты / аналитические инструменты; Т.Д.У. и E.Y.C. проанализированные данные; и J.L.G. и E.Y.C. написал газету.

• Заявление о конфликте интересов: Все авторы являются сотрудниками Genentech, члена группы Roche, которая разрабатывает и продает лекарства для получения прибыли.

• Эта статья представляет собой прямое представление PNAS.

• Эта статья содержит вспомогательную информацию на сайте www.pnas.org/lookup/suppl/doi:10.1073/pnas.1814052115/-/DCSupplemental.

• Авторские права © 2018 Автор (ы). Опубликовано PNAS.

CD226: мощный фактор противоопухолевого иммунитета, который необходимо поддерживать

1.

Weulersse, M. et al. Eomes-зависимая потеря коактивирующего рецептора CD226 ограничивает противоопухолевые функции CD8 (+) Т-клеток и ограничивает эффективность иммунотерапии рака. Иммунитет 53 , 824–839. e810 (2020).

CAS Статья Google Scholar

2.

Braun, M. et al. CD155 на опухолевых клетках вызывает устойчивость к иммунотерапии, вызывая деградацию активирующего рецептора CD226 в CD8 (+) Т-клетках. Иммунитет 53 , 805–823. e815 (2020).

CAS Статья Google Scholar

3.

Мартине, Л. и Смит, М. Дж. Балансировка активации естественных клеток-киллеров через парные рецепторы. Nat. Rev. Immunol. 15 , 243–254 (2015).

CAS Статья Google Scholar

4.

Johnston, R.J. et al. Иммунорецептор TIGIT регулирует противоопухолевую и противовирусную эффекторную функцию CD8 (+) Т-клеток. Раковая клетка 26 , 923–937 (2014).

CAS Статья Google Scholar

5.

Zhang, Q. et al. Блокада рецептора контрольной точки TIGIT предотвращает истощение NK-клеток и вызывает мощный противоопухолевый иммунитет. Nat. Иммунол. 19 , 723–732 (2018).

CAS Статья Google Scholar

6.

Blake, S.J. et al. Подавление метастазов с использованием новой контрольной точки лимфоцитов для иммунотерапии рака. Рак Discov. 6 , 446–459 (2016).

CAS Статья Google Scholar

7.

О’Доннелл, Дж. С., Мадор, Дж., Ли, X. Y. и Смит, М. Дж. Внутренние и внешние иммунные функции опухоли CD155. Семин. Cancer Biol. 65 , 189–196 (2020).

Артикул Google Scholar

8.

Kucan Brlic, P. et al. Нацеливание на PVR (CD155) и его рецепторы в противоопухолевой терапии. Cell. Мол. Иммунол. 16 , 40–52 (2019).

CAS Статья Google Scholar

9.

Li, X. Y. et al. Потеря CD155 усиливает подавление опухоли через комбинированные механизмы, присущие хозяину и опухоли. J. Clin. Расследование. 128 , 2613–2625 (2018).

Артикул Google Scholar

10.

Morimoto, K. et al. Взаимодействие раковых клеток с тромбоцитами, опосредованное рецептором Necl-5 / полиовируса, усиливает метастазирование раковых клеток в легкие. Онкоген 27 , 264–273 (2008).

CAS Статья Google Scholar

Новая роль в иммунологических заболеваниях

Abstract

CD226, член суперсемейства иммуноглобулинов, представляет собой функциональный белок, первоначально экспрессируемый на естественных киллерах и Т-клетках.В последние годы функция CD226 все больше осознается и исследуется. Накапливающиеся данные показывают, что CD226 тесно связан с возникновением аутоиммунных заболеваний, инфекционных заболеваний и опухолей. Из-за растущей важности CD226 автор в данном документе обсуждает структуру, механизм действия и роль CD226 в различных патофизиологических условиях, что позволяет лучше понять функцию CD226 и обеспечить основу для дальнейших исследований связанных заболеваний.

Ключевые слова: CD226, фактор адгезии, иммунитет, аутоиммунное заболевание, опухоль

Структура CD226

Открытие и присвоение имен

CD226, а именно антиген активации 1 линии Т (TLisA1), антиген тромбоцитов и Т-клеток 1 ( PTA-1), или DNAM-1, является членом суперсемейства иммуноглобулинов. Молекулярная мембрана содержит два V-подобных домена иммуноглобулина (Shibuya et al., 1996; Sherrington et al., 1997). Burns et al. впервые обнаружили, что CD226 экспрессируется на поверхности Т-клеток в 1985 году, документально подтвердив, что он связан с активацией CTL, поэтому он был назван TLisA1 (Burns et al., 1986). Более поздние исследования показали, что CD226 также экспрессируется в тромбоцитах и ​​участвует в агрегации активации тромбоцитов, поэтому он был назван PTA1 (Shibuya et al., 1996). В 1997 г. Burns et al. подтвердили, что TLisA1 и DNAM-1 на самом деле являются одной и той же молекулой (Sherrington et al., 1997). В 2000 году на Седьмой Международной конференции группы сотрудничества антигенов дифференцировки человеческих лейкоцитов молекула была официально названа CD226 (Mason et al., 2001).

Ген и структура

CD226 представляет собой консервативную последовательность в генах человека и мыши, которые расположены в 18q22.3 и 18E4 полосы хромосомы соответственно (Jinlong et al., 2002). В 2002 году у мышей был успешно идентифицирован ген CD226, общая длина которого составляет 2487 п.н. Он содержит открытую рамку считывания размером 1002 п.о. и кодирует ведущую последовательность из 18 аминокислот и зрелый белок CD226 из 315 аминокислот (Xinhai et al., 2002). В 2006 году была идентифицирована промоторная последовательность гена CD226 человека (Jian et al., 2006). Ген имеет по крайней мере два промотора, которые расположены на уровне от -810 до -287 п.н. и от +33 до +213 п.н., которые выполняют различные тканеспецифические роли и физически разделены негативным регуляторным элементом (Jian et al., 2006). Ген CD226 человека содержит 7 экзонов и 6 интронов, из которых экзон 7 кодирует 41 аминокислоту в цитоплазматической области (Jinlong et al., 2002). Биоинформатический анализ показывает, что в этой области гена CD226 имеются предполагаемые сайты связывания для факторов транскрипции AP-1, Sp1, PEA3 и Ets-1 (Jian et al., 2006). Полная длина кДНК CD226 человека составляет 2664 п.о., она содержит открытую рамку считывания и кодирует ведущую последовательность из 18 аминокислот и зрелый белок CD226 из 318 аминокислот.Внеклеточный домен содержит 230 аминокислот, включая 2 иммуноглобулиновых V-подобных домена и 8 N-связанных сайтов гликозилирования, и, таким образом, он чрезвычайно чувствителен к деградации своих гликановых остатков; дегликозилирование дает белок 35 кДа (Shibuya et al., 1996). Трансмембранный домен содержит 28 аминокислот. Внутриклеточный домен содержит 60 аминокислот. Внутриклеточный домен содержит 4 остатка тирозина и 1 остаток серина, которые могут собирать сигнальные белки после фосфорилирования.Эта реакция основана на взаимодействии между CD226 и его лигандом (Jun et al., 2012). Первый домен вне оболочки молекулы CD226 является ее структурной основой для распознавания лигандов, адгезии, образования иммунных синапсов и цитотоксического действия (Shengke et al., 2014;).

CD226 состоит из трех доменов. Внеклеточный домен включает 2 V-подобных домена иммуноглобулина и 8 сайтов N-связанных гликопротеинов. Первый домен вне оболочки молекулы CD226 является ее структурной основой для распознавания лигандов, адгезии, образования иммунных синапсов и цитотоксического действия.Внутриклеточный домен содержит 4 остатка тирозина и 1 остаток серина. Когда CD226 связывается со своим лигандом, молекула CD226 направленно перемещается к липидным рафтам на клеточной мембране и рекрутирует внутриклеточные сигнальные молекулы, такие как PTK и PKC, которые фосфорилируют по четырем остаткам и активируют клетку.

Существует три типа однонуклеотидных мутаций в экзоне гена CD226, включая CD226 rs763361, rs34794968 и rs727088 (Bossini-Castillo et al., 2012). Было подтверждено, что эти три однонуклеотидных полиморфизма гена CD226 связаны с восприимчивостью к различным аутоиммунным заболеваниям (Bossini-Castillo et al., 2012). Несинонимичные мутации CD226 rs763361 / gly307ser связаны с предрасположенностью к аутоиммунным заболеваниям, таким как диабет 1 типа (T1D), ревматоидный артрит (RA), рассеянный склероз (MS), аутоиммунное заболевание щитовидной железы (AITD) и системный склероз (SSc; Todd). et al., 2007; Qiu et al., 2008; Smyth et al., 2008; Dieudé et al., 2011). Поскольку несинонимичная мутация, кодируемая этим аллелем, может кодировать цитоплазматический хвост (экзон 7) белка CD226, эта мутация может влиять на функцию Т-клеток или других клеток (Todd et al., 2007). Действительно, дисфункция Т-клеток и других клеток тесно связана с началом и развитием аутоиммунных заболеваний (Li et al., 2013; Maogen et al., 2014; Yaoyao et al., 2018). Другие гипотезы предполагают, что эта мутация может нарушать сайты связывания энхансеров и / или сайленсеров, тем самым изменяя сплайсинг РНК (Todd et al., 2007). Кроме того, замена rs763361 на серин может также мешать фосфорилированию 322 тирозиновых и 329 сериновых сайтов CD226, а также посттрансляционным модификациям в нижестоящих сигнальных путях (Todd et al., 2007; Бокюань и Чжувэй, 2010). CD226 rs727088, однонуклеотидный полиморфизм, может влиять на экспрессию CD226 на уровне транскрипции, что, как было обнаружено, сильно коррелирует с восприимчивостью к опухоли (Löfgren et al., 2010). Однонуклеотидная мутация CD226 rs34794968 сама по себе не влияет на возникновение и развитие заболевания, но может играть синергетическую роль с двумя вышеупомянутыми мутациями (Bossini-Castillo et al., 2012).

Экспрессия и распределение

Паттерны экспрессии CD226 разнообразны (Ralston et al., 2004). В периферической крови CD226 экспрессируется на Т-клетках, NK-клетках, NK-Т-клетках, В-клетках, моноцитах / макрофагах, дендритных клетках (DC), клонах мегакариоцитов / тромбоцитов и гематопоэтических клетках-предшественниках (Burns et al., 1986; Scott et al., 1989; Kojima et al., 2003; Shibuya et al., 2003; Reymond et al., 2004; Dongchu et al., 2005). Эндотелиальные клетки также демонстрируют низкие количества этого белка в условиях покоя, но экспрессия значительно усиливается при их стимуляции (Lihua et al., 2003).CD226 также экспрессируется на зрелых тучных клетках и клетках-предшественниках CD34 + костного мозга, но не на предшественниках эритроцитарного клона (Dongchu et al., 2005; Bachelet et al., 2006). Было продемонстрировано, что CD226 + NK-клетки играют важную роль в распознавании нескольких типов опухолей человека, таких как миелома, меланома и карцинома яичников, а недавние исследования показали, что CD226 может быть одним из маркеров зрелых NK-клеток ( Мартине и др., 2015). Ранее мы сообщали, что количество CD226 + NK-клеток увеличивается при волчанке и преимущественно инфильтрируется в волчаночную почку.Кроме того, эти активированные NK-клетки опосредуют повреждение тканей, продуцируя цитотоксические гранулы, что в конечном итоге способствует волчаночному нефриту (Huang et al., 2011).

Лиганды CD226

В 2003 г. Bottino et al. подтвердили, что лиганд человеческого CD226 представляет собой CD155 (nacl-5, PVR) и CD112 (никотин-2), которые имеют аналогичную молекулярную массу, 70 кДа и 65/60 кДа. Они принадлежат к семейству никотиноподобных белков и семейству никотиновых белков (Bottino et al., 2003; Wang et al., 2009). В 2005 году Tahara-Hanaoka et al. (2005) продемонстрировали, что лигандами молекул CD226 мыши также являются CD155 и CD112. Молекулы CD155 и CD112 широко экспрессируются в различных тканевых клетках, таких как нервные клетки, эндотелиальные клетки, эпителиальные клетки, антигенпрезентирующие клетки, фибробласты, клетки, инфицированные патогенами, и множество опухолевых клеток (Bottino et al., 2003; Tahara-Hanaoka et al., 2004; Dardalhon et al., 2005; Bryceson et al., 2006; Pende et al., 2006; Gilfillan et al., 2008; Kraus et al., 2016). Солидный рак, а также гематологические злокачественные новообразования имеют высокие уровни CD155 и CD112, что делает их хорошими мишенями для атаки CTL посредством CD226-специфического связывания (Castriconi et al., 2004; Pende et al., 2005; Moretta et al., 2006). ; Карлстен и др., 2007; Эль-Щербины и др., 2007). Они также экспрессируются в иммунных клетках, таких как моноциты, DC и активированные Т-клетки (Pende et al., 2006), а также влияют на некоторые физиологические процессы.

Функция CD226

CD226 участвует в функции клеток CTL и NK-клеток

В организме человека CD226 высоко экспрессируется на поверхности NK-клеток и CD8 + Т-клеток (Shibuya et al., 1996). У мышей 40-50% NK-клеток и все CTL-клетки конститутивно экспрессируют CD226 (Dardalhon et al., 2005).

CD226, как молекула адгезии, способствует миграции, активации, пролиферации, дифференцировке и функции CD8 + Т-клеток. Клеткам CTL необходимо мигрировать к месту воспаления или микросреде опухоли через молекулы адгезии для установления тесного контакта (Bryceson et al., 2006). Во вторичных лимфоидных органах молекулы адгезии опосредуют взаимодействие между клетками CTL и антигенпрезентирующими клетками и, наконец, активируют, пролиферируют и дифференцируют их.Взаимодействие CD226 / CD155 очень важно для пролиферации CD8 + Т-клеток и иммунного ответа антиген-специфичных CD8 + Т-клеток (Gilfillan et al., 2008). Костимулирующий сигнальный путь CD8 + Т-клеток, опосредованный CD226, был прерван в процессе хронической инфекции ВИЧ-1. Следовательно, экспрессия CD226 на поверхности CD8 + Т-клеток подавляется, что снижает эффект CTL (Cella et al., 2010).

Все больше и больше доказательств того, что CD226 участвует в биологической функции NK-клеток (Enqvist et al., 2015; Мартине и Смит, 2015; Мартине и др., 2015). Комбинация CD226 с CD155 и / или CD112 в сотрудничестве с NKp30 может побуждать NK-клетки растворять незрелые DC и способствовать пролиферации зрелых DC (Balsamo et al., 2009). Созревание ДК способствует иммунному ответу за счет усиления адаптивной иммунной системы (Zheng et al., 2006; Ramalingam et al., 2012; Peng et al., 2020). Взаимодействие между CD226 и его лигандами участвует в перекрестном связывании NK- и Т-клеток. При реакции трансплантат против хозяина (GVHD; Lozano et al., 2013) и других аутоиммунных заболеваниях (Ardolino et al., 2011), NK-клетки могут распознавать и уничтожать стимулированные антигеном Т-клетки, которые были активированы / пролиферировали, а также могут способствовать дифференцировке хелперных Т-клеток.

CD226 вместе с CD96, TIGIT и CRTAM также участвует в регуляции функции NK-клеток (Ralston et al., 2004; Chan et al., 2014; Nabekura et al., 2014; Shu-Bin et al. ., 2020). После стимуляции ЛПС доля IFN-γ + NK-клеток у мышей с дефицитом CD226 была значительно ниже, чем у мышей дикого типа (Chan et al., 2014). Считается, что CD96 ингибирует секрецию IFN-γ NK-клетками. Следовательно, молекулы CD96 и CD226 обращают обратную секрецию IFN-γ в NK-клетках (Chan et al., 2014). TIGIT, CD96 и CRTAM способны распознавать нектин и молекулы семейства Necl и регулировать функцию NK-клеток, что еще больше усложняет исследование CD226 в биологической функции NK-клеток (Chan et al., 2014). В последние годы сообщалось, что синергетический эффект CD226 и этих трех молекул уравновешивает активацию NK-клеток in vivo (Martinet and Smyth, 2015).

CD226 участвует в функции CD4 + Т-клеток

В 2005 г. Dardalhon et al. (2005) заявили, что CD226 был специфическим поверхностным маркером клеток Th2 у мышей. В 2006 году Shibuya et al. выявили, что свежевыделенные CD4 + Т-клетки у мышей также экспрессируют молекулы CD226 низкого уровня, что исходные Т-клетки экспрессируют молекулы CD226, и что наиболее поляризованные клетки Th2 и Th3 также экспрессируют молекулы CD226 (Shibuya et al., 2006). В 2012 году Lozano et al. продемонстрировали, что TIGIT может подавлять функции Т-клеток, конкурируя с CD226 (Lozano et al., 2012). В 2015 году Fuhrman et al. обнаружили, что CD226 экспрессируется в CD4 + Т-клетках памяти (Fuhrman et al., 2015). Эти аномальные клетки и относительные провоспалительные цитокины способствуют возникновению многих иммунологических заболеваний (Yang and Song Guo, 2016; Sujuan et al., 2018, 2019).

В 2013 году Sutavani et al. (2013) доказали, что поверхностным маркером регуляторных Т-клеток человека 1 типа (Tr1) является CD4 + CD49b + LAG-3 + CD226 +. Tr1 представляет собой разновидность хронически активированных CD4 + Т-клеток в присутствии IL-10 (Weishan et al., 2017; Fang et al., 2018), который выполняет функции низкой пролиферации, высокой секреции IL-10, низкой экспрессии IL-2 и IL-4 (Gagliani et al., 2013). CD226 высоко экспрессируется на поверхности регуляторных Т-клеток человека I типа и участвует в уничтожении миелоидных антигенпредставляющих клеток (Magnani et al., 2011). Tr1 выполняет функцию подавления иммунного ответа и поддержания периферической иммунной толерантности. Имеет перспективу применения при лечении аутоиммунных заболеваний, опухолей, а также при отказе от аллогенной трансплантации тканей и органов.

Недавно было обнаружено, что молекулы CD226 и TIGIT, экспрессируемые на поверхности клеток CD4 + Foxp3 + Treg человека, связаны с их стабильностью и ингибированием. Подобно клеткам Tr1, CD4 + Foxp3 + Treg имеют решающее значение для поддержания гомеостаза и предотвращения аутоиммунных проблем (Ya et al., 2014; Anping et al., 2016). Чистота и ингибирующая функция подмножеств Treg CD226 + TIGIT- будут ослаблены после амплификации, а с увеличением IL-10 и эффекторных цитокинов предполагается, что экспрессия CD226 влияет на функцию Treg (Fuhrman et al., 2015). Foxp3, Helios были высоко экспрессированы в клетках CD226-TIGIT + Treg и с Treg-специфическим деметилированным участком. In vitro эксперименты по ингибированию показывают, что экспрессия TIGIT в Treg-клетках связана с его сильной ингибирующей активностью. С другой стороны, уровень экспрессии CD226 в активированных Treg-клетках повышается. Следовательно, в процессе поиска блокирования CD226 для ослабления активности традиционных эффекторных Т-клеток следует сосредоточить внимание на соответствующих дозах, чтобы избежать одновременного снижения функции Treg (Fuhrman et al., 2015). Однако у пациентов с РА мы недавно продемонстрировали, что, хотя и CD226, и TIGIT демонстрируют повышенные уровни экспрессии в клетках CD4 + Foxp3 +, они не связаны с активностью заболевания у пациентов с РА (Mengru et al., 2019). Таким образом, CD226 не кажется идеальным маркером для Treg-клеток человека.

CD226 участвует в функции других клеток

CD226 также экспрессируется в тромбоцитах. Поперечное сшивание CD226 и mAb может индуцировать активацию тромбоцитов, позволяя тромбину индуцировать фосфорилирование тирозина CD226 и опосредовать адгезию тромбоцитов (Scott et al., 1989). Впоследствии документально подтверждено, что CD226 опосредует адгезию тромбоцитов и мегакариоцитов к эндотелиальным клеткам сосудов (Kojima et al., 2003).

Тучные клетки человека и эозинофилы могут одновременно экспрессировать CD226 и CD112. Эти клетки играют важную роль в развитии аллергических заболеваний (Wenru et al., 2012, 2014, 2015). На поздних и хронических стадиях анафилактического воспаления тучные клетки и эозинофилы с тканевой инфильтрацией образуют регуляторную единицу. В присутствии эозинофилов дегрануляция, опосредованная FC RI тучных клеток, усиливается.Этот эффект частично вызван взаимодействием CD226 / CD112, запускающих сигнальные пути Fyn, LAT и фосфолипазы Cγ2, участвующие в указанном выше прогрессе (Bachelet et al., 2006) ().

В качестве молекулы адгезии связывание CD226 и CD155 может опосредовать взаимодействие между клетками CTL и профессиональными антигенпредставляющими клетками, что в конечном итоге позволяет им активировать, пролиферировать и дифференцироваться. CD226 также может индуцировать активацию тромбоцитов и опосредовать адгезию тромбоцитов за счет перекрестного связывания со своим mAb.Уничтожение опухолевых клеток NK-клетками в основном зависит от связывания CD226 с CD112 и CD155, экспрессируемыми на опухолевых клетках. В присутствии эозинофилов дегрануляция, опосредованная FC RI тучных клеток, усиливается. Этот эффект частично вызван взаимодействием CD226 / CD112.

CD226 и клинические заболевания

CD226 и аутоиммунные заболевания

Предыдущие исследования показали, что экспрессия CD226 отрицательно коррелирует с ингибирующей функцией Foxp3 + Treg. TIGIT, ко-ингибирующая молекула Т-клеток, оказывает иммуносупрессивное действие, конкурируя с CD226 за тот же лиганд CD155 (Lozano et al., 2012). Костимулирующая ось TIGIT и CD226 играет важную роль в иммунорегуляторной функции Foxp3 + Treg и связана с несколькими аутоиммунными заболеваниями. Несколько линий доказательств подтверждают, что подавляющая способность CD226 + Tregs ингибируется (Ning et al., 2019), и что TIGIT + Tregs обладают высокой подавляющей способностью и в большей степени (Joller et al., 2014). Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (EAE) способствует нарушению самотолерантности и приводит к тому, что клетки Th27 проникают в центральную нервную систему, чтобы опосредовать воспаление и повреждение нейронов (Rostami and Ciric, 2013).Zhang et al. сообщили, что чувствительность к EAE у мышей, получавших анти-CD226 pAb, была заметно снижена за счет уравновешивания соотношения Th27 / Treg (Rong et al., 2016), а повышенная супрессивная способность Treg во время EAE связана с отсутствием CD226 и увеличением уровни экспрессии TIGIT (Ning et al., 2019). Язвенный колит (ЯК) — хроническое воспалительное заболевание, связанное с иммунитетом. Long et al. обнаружили, что отсутствие экспрессии CD226 на Foxp3 + Tregs играет положительную роль в восстановлении клинической ремиссии из активной стадии у пациентов с ЯК, а экспрессия TIGIT на CD226-Foxp3 + Tregs потенциально положительно влияет на подавление CD226-Foxp3 + Treg ( Ян и др., 2020).

В последние годы с развитием технологии секвенирования связь между геном и заболеванием становится более ясной. Изучение полиморфизма гена CD226 и предрасположенности к аутоиммунным заболеваниям вступило в новый этап.

CD226 rs763361 представляет собой 307 глицин, замененный серином. Эта мутация может быть связана с развитием ряда заболеваний, связанных с иммунитетом, таких как СКВ, ССД, СД1 и РА (Du et al., 2011; Avouac et al., 2013; Mattana et al., 2014; Elhai et al., 2014; Elhai et al., 2011; Avouac et al., 2013; Mattana et al., 2014; Elhai et al. al., 2015). SSc — это хроническое аутоиммунное заболевание, поражающее соединительную ткань, характеризующееся фиброзом кожи и утолщением кожи. В модели мышей CD226 — / — характеристики фиброза были ослаблены по сравнению с мышами дикого типа. Возможно, что экспрессия CD226 способствует развитию SSc (Avouac et al., 2013). В модели in vitro RA, CD226 и CD226L были экспрессированы в NK-клетках и фибробластоподобном синовите (FLS) пациентов с RA, соответственно, что позволяет предположить, что RA-FLS-клетки могут распознаваться и уничтожаться NK-клетками (Nielsen et al. ., 2014). Многие исследования показали, что аутоиммунные заболевания связаны с дисфункцией NK-клеток. Предполагается, что мутация 307 глицин-серина CD226 может вызывать дисфункцию NK-клеток (Fogel et al., 2013). Активация Т-клеток требует фактора обмена гуаниновых нуклеотидов VAV1 (Katzav et al., 1989). Включение CD226 запускает активацию VAV1 через фосфорилирование тирозина и синергетично с передачей сигналов через рецептор Т-клеток (TCR), чтобы положительно регулировать продукцию цитокинов CD4 + Т-клетками.Более того, совместное участие TCR и CD226 rs763361, которое связано с аутоиммунитетом, дополнительно усиливает активацию VAV1 и продукцию IL-17 (Gaud et al., 2018). Все вышеперечисленные результаты предполагают возможность нацеливания на CD226 при лечении аутоиммунных заболеваний.

CD226 и опухоли

CD226 экспрессируется на поверхности NK-клеток и CD8 + Т-клеток. Как важный рецептор, активирующий NK-клетки, CD226 широко участвует в различных иммунных ответах. Исследования показали, что CD226 играет важную роль в уничтожении опухолевых клеток NK-клетками (Verhoeven et al., 2008; Lakshmikanth et al., 2009). Образование стабильных конъюгатов с опухолевыми клетками важно для NK-клеток, чтобы оказывать эффект уничтожения опухолей, а CD226 обеспечивает длительное стабильное взаимодействие между NK и опухолевыми клетками (Kim et al., 2017). CD155 и CD112 — два важных лиганда CD226. Уровень CD112 в опухолевой ткани снижается. Он может сочетаться с CD226 на поверхности NK-клеток, тем самым активируя NK-клетки для уничтожения опухолевых клеток (Xiaojun et al., 2014). Точно так же снижение CD155 в ткани рака печени может снизить цитотоксический эффект, опосредованный NK-клетками (Jiuyu et al., 2014). Эксперимент in vivo продемонстрировал, что CD226 опосредует фосфорилирование FOXO1 и активирует NK-клетки посредством взаимодействия с опухолевыми клетками, экспрессирующими CD155 (Xiangnan et al., 2018). Иммунотерапия опухолей предлагает многообещающие результаты у пациентов с опухолью. Concepción et al. обнаружил важность соотношения CD226 / иммуноглобулиноподобных рецепторов NK-клеток, индуцированного лицензионными взаимодействиями, как критических детерминант для иммунного надзора за солидным раком, и предоставил прогностические биомаркеры для выживаемости пациентов, которые также могут улучшить выбор доноров для иммунотерапии NK-клетками (Guillamón et al. al., 2018). Обычно считается, что Treg в опухолях препятствуют ответам Т-клеток на опухоли (Naturally, 2005). Среди текущих режимов иммунотерапии опухолей, нацеленных на Treg, самой большой проблемой является отсутствие высокоселективных препаратов для Treg. В основном это связано с тем, что высокоспецифичные маркеры еще не обнаружены в Tregs. Жюльен и др. указали, что высокое соотношение TIGIT / CD226 в Tregs регулирует их супрессивную функцию и стабильность при меланоме, и они предложили новые иммунотерапевтические методы для активации CD226 в Treg вместе с блокадой TIGIT для противодействия подавлению Treg у онкологических пациентов (Fourcade et al., 2018). В последние годы некоторые исследователи стали обращать внимание на экспрессию CD226 в опухолевых клетках. Эти исследования показали, что экспрессия CD226 на клетках гепатомы подавляется и что экспрессия связана с выживаемостью и временем выживания пациентов (Baoxing et al., 2017). Кроме того, было обнаружено, что полиморфизм гена CD226 напрямую связан с риском опухоли (Shaoqing et al., 2013). Все вышеперечисленные результаты предполагают, что CD226 может оказывать противоопухолевое действие. Таким образом, роль и механизм CD226 при различных раковых заболеваниях требует углубленного изучения в будущем.

CD226 и вирусные инфекции

При большинстве заболеваний, инфицированных вирусом, NK-клетки могут уничтожать инфицированные вирусом и трансформированные клетки (Cooper et al., 2001; Smyth et al., 2005). Они распознают клетки-мишени с помощью кодируемого зародышевой линией репертуара активирующих и ингибирующих рецепторов (Bryceson et al., 2006). CD226 — важный активирующий рецептор. NK-клеткам необходим CD226 для распознавания инфицированных HCV клеток гепатомы (Stegmann et al., 2012) и инфицированных HCMV миелоидных DCs (Magri et al., 2011).Инфекция вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) вызывает дисфункцию врожденной и адаптивной иммунной систем, нарушает функцию NK-клеток и CD8 + T-клеток, а также уровни поверхностной экспрессии некоторых рецепторов (Watzl et al., 2014; Zhuo et al., 2017) . Инь и др. (2018) демонстрируют, что экспрессия TIGIT специфически повышается на CD226 + NK-клетках у ВИЧ-инфицированных людей, а высокие уровни TIGIT могут ингибировать продукцию IFN-γ NK-клетками, в то время как блокада TIGIT может восстановить их функцию. Подобные результаты были обнаружены на CD8 + Т-клетках у ВИЧ-инфицированных.ВИЧ-специфические CD8 + Т-клетки были почти исключительно TIGIT +, а ВИЧ-специфические клетки TIGIT ^hi отрицательно коррелировали с полифункциональностью и демонстрировали пониженную экспрессию CD226 (Tauriainen et al., 2017). Все это подчеркивает важную роль оси TIGIT / CD226 в вирусных инфекциях и предлагает новые возможности для разработки терапевтических стратегий, направленных на функциональное излечение.

Заключение

С момента своего открытия было продемонстрировано, что CD226 широко экспрессируется на различных иммунных клетках и играет важную функциональную роль в иммунной системе.Многие аспекты патофизиологического состояния CD226 еще не выяснены; однако текущие исследования функции и механизмов этой молекулы позволяют лучше понять клиническую значимость этой молекулы. Действительно, CD226, как костимулирующий фактор, играет важную роль в развитии различных заболеваний. Таким образом, изменение экспрессии и функции CD226 может быть осуществимой терапевтической стратегией для многих связанных с иммунитетом заболеваний и опухолей.

Тканевая экспрессия CD226 — Резюме

АНДНО

Поле
Все название гена Класс белка Uniprot ключевое слово Хромосома Внешний идентификатор Оценка надежности ткань (IHC) Оценка надежности мышиный мозг Оценка надежности клеток (ICC) Белковый массив (PA) Вестерн-блоттинг (WB) Иммуногистохимия (IHC) Иммуноцитохимия (ICC) Местоположение секретома Локация субклеточной аннотации (ICC) Фаза пика субклеточного клеточного цикла Экспрессия ткани (IHC) Категория ткани (РНК) Категория типа клеток (РНК) Категория линии клеток (РНК) Категория рака (РНК) Категория области мозга (РНК) Категория клеток крови (РНК) Категория клеток крови (РНК) Категория мозга мыши (РНК) Категория головного мозга свиньи (РНК) Прогностический рак Метаболический путьСводка доказательств Доказательства UniProt Нет доказательствProt Доказательства HPA Доказательства MSС антителами Имеются данные о белках Сортировать по

Класс
, антигенные белки группы крови, гены, связанные с раком, гены-кандидаты, гены сердечно-сосудистых заболеваний, маркеры CD, белки, связанные с циклом лимонной кислоты, гены, связанные с болезнями, ферменты, одобренные FDA, рецепторы, сопряженные с G-белками. Белки Рибосомные белки Белки, родственные РНК-полимеразе Факторы транскрипции Транспортеры Ионные каналы, управляемые напряжением

Подкласс

Класс
Биологический процесс Молекулярная функция Болезнь

Ключевое слово

Хромосома
12345678121314151617181

22MTUnmappedXY

Надежность
Улучшено Поддерживается Утверждено Неопределено

Надежность
Поддерживается Одобрено

Надежность
Улучшено Поддерживается Утверждено Неопределено

Подтверждение
Поддерживается УтвержденоНеопределено

Проверка
Enhanced — CaptureEnhanced — GeneticEnhanced — IndependentEnhanced — OrthogonalEnhanced — РекомбинантныйПоддерживаемыйПодтвержденныйНеопределенный

Проверка
Enhanced — IndependentEnhanced — OrthogonalSupportedApprovedUncertain

Проверка
Enhanced — GeneticEnhanced — IndependentEnhanced — РекомбинантнаяПоддерживаемаяПодтвержденнаяНеопределенная

Аннотация
Внутриклеточно и мембранно, секретно — неизвестное местоположение, секретируется в мозге, секретируется в женской репродуктивной системе, секретируется в мужской репродуктивной системе, секретируется в других тканях, секретируется в кровь, секретируется в пищеварительную систему, секретируется во внеклеточном матриксе

Расположение
актина filamentsAggresomeCell JunctionsCentriolar satelliteCentrosomeCleavage furrowCytokinetic bridgeCytoplasmic bodiesCytosolEndoplasmic reticulumEndosomesFocal адгезия sitesGolgi apparatusIntermediate filamentsKinetochoreLipid dropletsLysosomesMicrotubule endsMicrotubulesMidbodyMidbody ringMitochondriaMitotic chromosomeMitotic spindleNuclear bodiesNuclear membraneNuclear specklesNucleoliNucleoli фибриллярный centerNucleoli rimNucleoplasmPeroxisomesPlasma membraneRods & RingsVesicles

Поиск
EnhancedSupportedApprovedUncertainIntensity вариация Пространственная вариация Корреляция интенсивности клеточного цикла Пространственная корреляция клеточного цикла Биологический клеточный цикл Зависит от клеточного цикла пользовательских данныхЗависимый от клеточного цикла белокНезависимый от клеточного цикла белокЗависимый от клеточного цикла транскриптНезависимый от клеточного цикла транскрипт

Расположение
AnyActin filamentsAggresomeCell JunctionsCentriolar satelliteCentrosomeCleavage furrowCytokinetic bridgeCytoplasmic bodiesCytosolEndoplasmic reticulumEndosomesFocal адгезия sitesGolgi apparatusIntermediate filamentsKinetochoreLipid dropletsLysosomesMicrotubule endsMicrotubulesMidbodyMidbody ringMitochondriaMitotic chromosomeMitotic spindleNuclear bodiesNuclear membraneNuclear specklesNucleoliNucleoli фибриллярный centerNucleoli rimNucleoplasmPeroxisomesPlasma membraneRods & RingsVesicles

Клеточная линия
анйа-431A549AF22ASC TERT1BJCACO-2EFO-21FHDF / TERT166GAMGHaCaTHAP1HBEC3-KTHBF TERT88HDLM-2HEK 293HELHeLaHep G2HTCEpiHTEC / SVTERT24-BHTERT-HME1HTERT-RPE1HUVEC TERT2JURKATK-562LHCN-M2MCF7NB-4OE19PC-3REHRH-30RPTEC TERT1RT4SH-SY5YSiHaSK-MEL-30SuSaTHP-1U-2 ОСУ-251 МГ

Тип
ProteinRna

Фаза
G1SG2M

Ткань
AnyAdipose tissueAdrenal glandAppendixBone marrowBreastBronchusCartilageCaudateCerebellumCerebral cortexCervix, uterineChoroid plexusColonDorsal rapheDuodenumEndometriumEpididymisEsophagusEyeFallopian tubeGallbladderHairHeart muscleHippocampusHypothalamusKidneyLactating breastLiverLungLymph nodeNasopharynxOral mucosaOvaryPancreasParathyroid glandPituitary glandPlacentaProstateRectumRetinaSalivary glandSeminal vesicleSkeletal muscleSkinSmall intestineSmooth muscleSoft tissueSole из footSpleenStomachSubstantia nigraTestisThymusThyroid glandTonsilUrinary bladderVagina

Тип ячейки

Экспрессия
Не обнаружено LowMediumHigh

Ткань
AnyAdipose tissueAdrenal glandBloodBone marrowBrainBreastCervix, uterineDuctus deferensEndometriumEpididymisEsophagusFallopian tubeGallbladderHeart muscleIntestineKidneyLiverLungLymphoid tissueOvaryPancreasParathyroid glandPituitary glandPlacentaProstateRetinaSalivary glandSeminal vesicleSkeletal muscleSkinSmooth muscleStomachTestisThyroid glandTongueUrinary bladderVagina

Категория
Обогащенная ткань Группа обогащенная Усиленная ткань Низкая тканевая специфичность Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночной Наивысшей экспрессии

Тип клетки
AnyAlveolar клетки типа 1Alveolar клетки типа 2B-cellsBasal железистой cellsBasal keratinocytesBipolar cellsCardiomyocytesCholangiocytesCiliated cellsClub cellsCollecting канал cellsCone фоторецептор cellsCytotrophoblastsDistal трубчатой ​​cellsDuctal cellsEarly spermatidsEndothelial cellsEnterocytesErythroid cellsExocrine железистой cellsExtravillous trophoblastsFibroblastsGlandular cellsGranulocytesHepatocytesHofbauer cellsHorizontal cellsIntestinal эндокринного cellsIto cellsKupffer cellsLate spermatidsLeydig cellsMacrophagesMelanocytesMonocytesMucus-секретирующее cellsMuller глии cellsPancreatic эндокринных cellsPaneth cellsPeritubular cellsProximal трубчатых клетки стержневые фоторецепторные клетки клетки сертоли гладкомышечные клетки сперматоциты сперматогонии супрабазальные кератиноциты синцитиотрофобласты Т-клетки недифференцированные клетки уротелиальные клетки

Категория
Тип клеток обогащенный Группа обогащенный Тип клеток улучшенный Низкая специфичность типа клеток Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено одним Обнаружено наивысшим уровнем экспрессии

Клеточная линия
анйа-431A549AF22AN3-CAASC diffASC TERT1BEWOBJBJ hTERT + BJ hTERT + SV40 большой Т + BJ hTERT + SV40 большой Т + RasG12VCACO-2CAPAN-2DaudiEFO-21FHDF / TERT166GAMGHaCaTHAP1HBEC3-KTHBF TERT88HDLM-2HEK 293HELHeLaHep G2HHSteCHL-60HMC-1HSkMCHTCEpiHTEC / SVTERT24-BHTERT-HME1HTERT- RPE1HUVEC TERT2JURKATK-562Karpas-707LHCN-M2MCF7MOLT-4NB-4NTERA-2OE19PC-3REHRH-30RPMI-8226RPTEC TERT1RT4SCLC-21HSH-3-SY5YSiHaSK-25-MGU-1 MGU-138-MGU-217-MGU-217-MGU-217-MGUSK-25-MGU-21-MGU-2B-MU-217-MGU-217-MGU-217-MGU-217 / 70U-266 / 84U-698U-87 MGU-937WM-115

Категория
Клеточная линия обогащена Группа обогащена Линия клеток улучшена Низкая специфичность клеточной линии Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночной Наивысшая экспрессия

Рак
ЛюбойРак грудиРак шейкиКолоректальный ракРак эндометрияГлиомаРак головы и шеиРак печениРак легкихМеланомаРак яичниковРак поджелудочной железыРак предстательной железыРак почкиРак желудкаРак тестируемого ракаРак щитовидной железыРак уротелия

Категория
Обогащенный раком Группа обогащенныйРак усиленный Низкая специфичность рака Не обнаружено Обнаружено у всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одном Максимально выражено

Область головного мозга
Любая Амигдала Базальные ганглии Мозжечок Кора головного мозга Формирование гиппокампа Гипоталамус Средний мозг Обонятельная область Мост и продолговатый мозг Таламус

Категория
Обогащенная по региону Обогащенная по группе Улучшенная по региону Низкая специфичность по региону Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночном Максимально выражено

Тип клеток
AnyBasophilClassical monocyteEosinophilGdT-cellIntermediate monocyteMAIT T-cellMemory B-cellMemory CD4 T-cellMemory CD8 T-cellMyeloid DCNaive B-cellNaive CD4 T-cellNaive CD8 T-cellNeutrophil-DCM-PBT-клетка NK1

Категория
Тип клеток обогащенный Группа обогащенный Тип клеток улучшенный Низкая специфичность типа клеток Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено одним Обнаружено наивысшим уровнем экспрессии

Клеточная линия
AnyB-клетки Дендритные клетки Гранулоциты МоноцитыNK-клетки Т-клетки

Категория
Линия обогащенная Группа обогащенная Линия расширенная Низкая специфичность линии Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в одиночной Наивысшая экспрессия

Область мозга
AnyAmygdalaБазальные ганглии мозжечокКора большого мозга мозолистое тело Образование гиппокампа Гипоталамус Средний мозг Обонятельная область Гипофиз Мосты и продолговатый мозг РетинаТаламус

Категория
Обогащенная по региону Обогащенная по группе Улучшенная по региону Низкая специфичность по региону Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночном Максимально выражено

Область головного мозга
Любая АмигдалаНазальные ганглии мозжечокКора головного мозга мозолистое тело Формирование гиппокампа Гипоталамус Средний мозг Обонятельная область Гипофиз Мосты и продолговатый мозг Ретина Спинной мозг Таламус

Категория
Обогащенная по региону Обогащенная по группе Улучшенная по региону Низкая специфичность по региону Не обнаружено Обнаружено во всех Обнаружено во многих Обнаружено в некоторых Обнаружено в одиночном Максимально выражено

Рак
Рак молочной железы Рак маткиКолоректальный ракКолоректальный ракРак эндометрияГлиомаРак головы и шеиРак печениРак легкихРак легкихМеланомаРак яичниковРак поджелудочной железыРак предстательной железыРак почкиРак почкиРак почкиРак желудкаРак рака щитовидной железы

Прогноз
Благоприятный Неблагоприятный

Путь
Гидролиз ацил-КоА Метаболизм ацилглицеридов Аланин; метаболизм аспартата и глутамата, метаболизм аминосахаров и нуклеотидных сахаров, биосинтез аминоацил-тРНК, метаболизм андрогенов, метаболизм арахидоновой кислоты, метаболизм аргинина и пролина, метаболизм скорбатов и альдаратов, бета-окисление жирных кислот с разветвленной цепью (митохондриальные) (митохондриальные), бета-ненасыщенные жирные кислоты, окисление бета-ненасыщенных жирных кислот, бета-ненасыщенные 6 диоксидных кислот. диненасыщенные жирные кислоты (n-6) (пероксисомальные) Бета-окисление жирных кислот с четной цепью (митохондриальные) Бета-окисление жирных кислот с четной цепью (пероксисомальные) Бета-окисление жирных кислот с нечетной цепью (митохондрии) Бета-окисление фитановых кислот кислотное (пероксисомальное) Бета-окисление полиненасыщенных жирных кислот (митохондрии) Бета-окисление ненасыщенных жирных кислот (n-7) (митохондриальное) Бета-окисление ненасыщенных жирных кислот (n-7) (пероксисомальное) Бета-окисление ненасыщенных жирных кислот ( n-9) (митохондрии) Бета-окисление ненасыщенных жирных кислот (n-9) (пероксисомальный) Метаболизм бета-аланина Биосинтез желчных кислот Рециклинг желчных кислот Биоптерин me таболизм, метаболизм биотина, биосинтез группы крови, метаболизм бутаноатов, метаболизм C5-разветвленной двухосновной кислоты, карнитиновый челнок (цитозольный), карнитиновый челнок (эндоплазматический ретикуляр), карнитиновый челнок (митохондриальный), карнитиновый челнок (пероксисомальный), холестериновый, метаболический путь, биосинтез холестерина, метаболизм, биосинтез холестерина, биосинтез холестерина, путь биосинтеза, метаболизм, холестерин, метаболизм Биосинтез / гепарансульфат Деградация хондроитинсульфата Синтез CoA Метаболизм цистеина и метионина Метаболизм лекарственных препаратов Метаболизм эстрогенов Метаболизм эфирных липидов Реакции обмена / спроса биосинтез (ненасыщенные) Десатурация жирных кислот (четная цепь) Десатурация жирных кислот (нечетная цепь) Удлинение жирных кислот (четная цепь) Удлинение жирных кислот (нечетная цепь) Окисление жирных кислот Метаболизм жирных кислот Формирование d гидролиз эфиров холестерина, метаболизм фруктозы и маннозы, метаболизм галактозы, биосинтез глюкокортикоидов, метаболизм глутатиона, метаболизм глицеролипидов, метаболизм глицерофосфолипидов, глицин; серин и треонин metabolismGlycolysis / GluconeogenesisGlycosphingolipid биосинтез-ganglio seriesGlycosphingolipid биосинтез-Globo seriesGlycosphingolipid биосинтез-лакто и neolacto seriesGlycosphingolipid metabolismGlycosylphosphatidylinositol (GPI) -anchor biosynthesisHeme degradationHeme synthesisHeparan сульфат degradationHistidine metabolismInositol фосфат metabolismIsolatedKeratan сульфат biosynthesisKeratan сульфат degradationLeukotriene metabolismLinoleate metabolismLipoic кислота metabolismLysine metabolismMetabolism из другой аминокислоты acidsMetabolism ксенобиотиков пути цитохром P450 Разное Метаболизм N-гликанов Метаболизм никотинатов и никотинамидов Метаболизм азота Метаболизм нуклеотидов Метаболизм O-гликанов Метаболизм жирных кислот омега-3 Метаболизм жирных кислот Омега-6 Метаболизм жирных кислот Окислительное фосфорилированиеПантотенат и КоА Биосинтез Пуроненатный путь метаболизм глюконатина тирозин и триптофан biosynthesisPhosphatidylinositol фосфат metabolismPool reactionsPorphyrin metabolismPropanoate metabolismProstaglandin biosynthesisProtein assemblyProtein degradationProtein modificationPurine metabolismPyrimidine metabolismPyruvate metabolismRetinol metabolismRiboflavin metabolismROS detoxificationSerotonin и мелатонина biosynthesisSphingolipid metabolismStarch и сахароза metabolismSteroid metabolismSulfur metabolismTerpenoid магистральная biosynthesisThiamine metabolismTransport reactionsTriacylglycerol synthesisTricarboxylic цикл кислота и глиоксилат / дикарбоксилат metabolismTryptophan metabolismTyrosine metabolismUbiquinone synthesisUrea cycleValine; лейцин; Метаболизм витамина A Метаболизм витамина B12 Метаболизм витамина B2 Метаболизм витамина B6 Метаболизм витамина C Метаболизм витамина D Метаболизм витамина E Метаболизм ксенобиотиков

Категория
Доказательства на уровне белка Доказательства на уровне транскрипта Нет доказательств человеческого белка / транскрипта

Оценка
Доказательства на уровне белка Доказательства на уровне транскрипта Нет доказательств человеческого белка / транскрипта

Оценка
Доказательства на уровне белка Доказательства на уровне транскрипта Нет доказательств человеческого белка / транскрипта

Оценка
Доказательства на уровне белка Доказательства на уровне транскрипта Нет доказательств человеческого белка / транскрипта

Оценка
Доказательства на уровне белка Доказательства на уровне транскрипта Нет доказательств человеческого белка / транскрипта

В атласе
TissueCellPathologyBrainBlood — конц.иммуноанализ Кровь — конц. масс-спектрометрия кровь — горох детектированный

Столбец
Позиция гена Оценка, специфичная для ткани Прогностическая надежность (IF) Надежность (IH)

Антитело против человеческого CD226, клон DX11

Мышиное антитело против человеческого CD226, клон DX11 распознает человеческий CD226, гликопротеин ~ 65 кДа, также известный как DNAM1 (вспомогательная молекула ДНКX-1). CD226 широко экспрессируется на Т-клетках, NK-клетках, тромбоцитах, моноцитах и ​​некоторых В-клетках.CD226 также экспрессируется подгруппой CD3-положительных тимоцитов.

Мышиное антитело против CD226 человека, клон DX11, как сообщается, ингибирует цитотоксичность, опосредованную Т- и NK-клетками, в отношении мишеней опухолевых клеток и блокирует секрецию TNF-альфа и IFN-гамма аллоантиген-специфическими Т-клетками (Kojima et al. 2003).

Хранилище

Этот продукт транспортируется при температуре окружающей среды. При получении рекомендуется аликвотирование и хранение при -20 ° C. После разморозки, при необходимости, аликвотируйте образец.Храните аликвоты при 2-8 ° C для краткосрочного использования (до 4 недель), а оставшиеся аликвоты храните при -20 ° C.

Избегайте многократного замораживания и оттаивания, поскольку это может денатурировать антитело. Хранение в морозильных камерах не рекомендуется. Этот продукт светочувствителен и должен быть защищен от света.

Хранилище

Хранить только при -20 ^o C.

Этот продукт следует хранить неразбавленным.

Хранение в морозильных камерах не рекомендуется. Избегайте повторного замораживания и оттаивания, так как это может денатурировать антитело.Если этот продукт содержит осадок, мы рекомендуем микроцентрифугирование перед использованием.

Хранилище

Данный продукт транспортируется при температуре окружающей среды. При получении рекомендуется аликвотирование и хранение при -20 ° C. После разморозки, при необходимости, аликвотируйте образец. Храните аликвоты при 2-8 ° C для краткосрочного использования (до 4 недель), а оставшиеся аликвоты храните при -20 ° C.

Избегайте многократного замораживания и оттаивания, поскольку это может денатурировать антитело. Хранение в морозильных камерах не рекомендуется.

Хранилище

Этот продукт транспортируется при температуре окружающей среды. При получении рекомендуется аликвотирование и хранение при -20 ° C. После разморозки, при необходимости, аликвотируйте образец. Храните аликвоты при 2-8 ° C для краткосрочного использования (до 4 недель), а оставшиеся аликвоты храните при -20 ° C.

Избегайте многократного замораживания и оттаивания, поскольку это может денатурировать антитело. Хранение в морозильных камерах не рекомендуется. Этот продукт светочувствителен и должен быть защищен от света.

Хранилище

Хранить только при -20 ^o C.

Этот продукт следует хранить неразбавленным.

Хранение в морозильных камерах не рекомендуется. Избегайте повторного замораживания и оттаивания, так как это может денатурировать антитело. Если этот продукт содержит осадок, мы рекомендуем микроцентрифугирование перед использованием.

Хранилище

Данный продукт транспортируется при температуре окружающей среды. При получении рекомендуется аликвотирование и хранение при -20 ° C. После разморозки, при необходимости, аликвотируйте образец. Храните аликвоты при 2-8 ° C для краткосрочного использования (до 4 недель), а оставшиеся аликвоты храните при -20 ° C.

Избегайте многократного замораживания и оттаивания, поскольку это может денатурировать антитело. Хранение в морозильных камерах не рекомендуется.

Хранилище

Хранить при +4 ^o C.

НЕ ЗАМЕРЗАТЬ

Этот продукт следует хранить неразбавленным. Этот продукт светочувствителен и должен быть защищен от света. Если этот продукт содержит осадок, мы рекомендуем микроцентрифугирование перед использованием.

Хранилище

Магазин до восстановления по адресу +4 ^o C.
После восстановления хранить в +4 ^o C.
НЕ ЗАМЕРЗАТЬ. Этот продукт следует хранить в неразбавленном виде. Этот продукт светочувствителен и должен быть защищен от света.

Гарантия

12 месяцев с даты отправки

Гарантия

12 месяцев с даты отправки

Гарантия

12 месяцев с даты отправки

Гарантия

12 месяцев с даты отправки

Гарантия

12 месяцев с даты отправки

Гарантия

12 месяцев с даты отправки

Гарантия

12 месяцев с даты отправки

Гарантия

12 месяцев с даты отправки

Применение антитела к CD226

Сообщается, что этот продукт работает в следующих приложениях.Эта информация получена в результате тестирования в наших лабораториях, рецензируемых публикаций или личных сообщений авторов. Пожалуйста, обратитесь к указанным ссылкам для получения дополнительной информации. Для получения общих рекомендаций по протоколу посетите страницу протоколов антител.

Название приложения	Проверено	Мин. Разбавление	Максимальное разбавление
Проточная цитометрия		Аккуратный
Проточная цитометрия		1/50	1/200
Функциональные анализы
Иммунопреципитация
Проточная цитометрия		Аккуратный	1/10
Иммунопреципитация
Проточная цитометрия		1/10	1/20
Проточная цитометрия		1/50	1/200
Функциональные анализы
Иммунопреципитация
Проточная цитометрия		1/50 Размер упаковки: 0.2 мг 1/25 Размер упаковки: 0,1 мг	1/200 Размер упаковки: 0,2 мг 1/100 Размер упаковки: 0,1 мг
Иммунопреципитация
Проточная цитометрия			Аккуратный
Проточная цитометрия		Аккуратный

Если этот продукт не был протестирован для использования в определенной методике, это не обязательно исключает его использование в таких процедурах.Предлагаемые рабочие разведения приведены только для справки. Рекомендуется, чтобы пользователь титровал продукт для использования в своей собственной системе, используя соответствующие отрицательные / положительные контроли.

Если это антитело не тестировалось для использования в определенной методике, это не обязательно исключает его использование в таких процедурах. Предлагаемые рабочие разведения приведены только для справки. Рекомендуется, чтобы пользователь титровал антитело для использования в своей собственной системе, используя соответствующие отрицательные / положительные контроли.

Если это антитело не тестировалось для использования в определенной методике, это не обязательно исключает его использование в таких процедурах. Предлагаемые рабочие разведения приведены только для справки. Рекомендуется, чтобы пользователь титровал антитело для использования в своей собственной системе, используя соответствующие отрицательные / положительные контроли.

Если это антитело не тестировалось для использования в определенной методике, это не обязательно исключает его использование в таких процедурах. Предлагаемые рабочие разведения приведены только для справки.Рекомендуется, чтобы пользователь титровал антитело для использования в своей собственной системе, используя соответствующие отрицательные / положительные контроли.

Если это антитело не тестировалось для использования в определенной методике, это не обязательно исключает его использование в таких процедурах. Предлагаемые рабочие разведения приведены только для справки. Рекомендуется, чтобы пользователь титровал антитело для использования в своей собственной системе, используя соответствующие отрицательные / положительные контроли.

Если это антитело не тестировалось для использования в определенной методике, это не обязательно исключает его использование в таких процедурах.Предлагаемые рабочие разведения приведены только для справки. Рекомендуется, чтобы пользователь титровал антитело для использования в своей собственной системе, используя соответствующие отрицательные / положительные контроли.

Если это антитело не тестировалось для использования в определенной методике, это не обязательно исключает его использование в таких процедурах. Предлагаемые рабочие разведения приведены только для справки. Рекомендуется, чтобы пользователь титровал антитело для использования в своей собственной системе, используя соответствующие отрицательные / положительные контроли.

Если этот продукт не был протестирован для использования в определенной методике, это не обязательно исключает его использование в таких процедурах. Предлагаемые рабочие разведения приведены только для справки. Рекомендуется, чтобы пользователь титровал продукт для использования в своей собственной системе, используя соответствующие отрицательные / положительные контроли.

Проточная цитометрия

Используйте 10 мкл предложенного рабочего разведения для маркировки 1 x 10 ⁶ клеток в 100 мкл

Проточная цитометрия

Используйте 10 мкл предложенного рабочего разведения, чтобы пометить 1 x 10 ⁶ клеток на 100 мкл.

Проточная цитометрия

Используйте 10 мкл предложенного рабочего разведения, чтобы пометить 1 x 10 ⁶ клеток на 100 мкл.

Проточная цитометрия

Используйте 10 мкл предложенного рабочего разведения, чтобы пометить 1 x 10 ⁶ клеток на 100 мкл.

Проточная цитометрия

Используйте 10 мкл предложенного рабочего разведения, чтобы пометить 1 x 10 ⁶ клеток на 100 мкл.

Проточная цитометрия

Используйте 10 мкл предложенного рабочего разведения, чтобы пометить 1 x 10 ⁶ клеток на 100 мкл.

Проточная цитометрия

Используйте 10 мкл предложенного рабочего разведения, чтобы пометить 1 x 10 ⁶ клеток на 100 мкл.

Проточная цитометрия

Используйте 10 мкл предложенного рабочего разведения для маркировки 1 x 10 ⁶ клеток в 100 мкл

Повышенные уровни растворимого CD226 в сыворотке, сопровождающиеся снижением мембранной экспрессии CD226 на мононуклеарных клетках периферической крови онкологических больных | BMC Immunology

1. 1.

   Burns GF, Triglia T, Werkmeister JA, Begley CG, Boyd AW: TLiSA1, активационный антиген, специфичный к линии Т человека, участвующий в дифференцировке цитотоксических Т-лимфоцитов и аномальных клеток-киллеров от их предшественников.J Exp Med. 1985, 161: 1063-78. 10.1084 / jem.161.5.1063.

   CAS Статья PubMed Google Scholar

2. 2.

   Скотт Дж. Л., Данн С. М., Джин Б., Хиллам А. Дж., Уолтон С., Берндт М. С., Мюррей А. В., Криссансен Г. В., Бернс Г. Ф.: Характеристика нового мембранного гликопротеина, участвующего в активации тромбоцитов. J Biol Chem. 1989, 264: 13475-82.

   CAS PubMed Google Scholar

3. 3.

   Shibuya A, Campbell D, Hannum C, Yssel H, Franz-Bacon K, McClanahan T, Kitamura T, Nicholl J, Sutherland GR, Lanier LL, et al: DNAM-1, новая молекула адгезии, участвующая в цитолитической функции Т-лимфоциты. Иммунитет. 1996, 4: 573-81. 10.1016 / С1074-7613 (00) 70060-4.

   CAS Статья PubMed Google Scholar

4. 4.

   Sherrington PD, Scott JL, Jin B, Simmons D, Dorahy DJ, Lloyd J, Brien JH, Aebersold RH, Adamson J, Zuzel M, et al: Антиген активации TLiSA1 (PTA1), участвующий в дифференцировке Т-клеток и активация тромбоцитов является членом суперсемейства иммуноглобулинов, проявляющим отличительную регуляцию экспрессии.J Biol Chem. 1997, 272: 21735-44. 10.1074 / jbc.272.35.21735.

   CAS Статья PubMed Google Scholar

5. 5.

   Tian F, Li D, Xia H, Liu X, Jia W, Sun C, Sun K, Jin B: Выделение кДНК, кодирующих гиббон ​​и тромбоциты обезьяны и антиген активации Т-клеток 1 (PTA1). ДНК Seq. 1999, 10: 155-61. 10.3109 / 1042517990

   41.

   CAS PubMed Google Scholar

6. 6.

   Bottino C, Castriconi R, Pende D, Rivera P, Nanni M, Carnemolla B, Cantoni C, Grassi J, Marcenaro S, Reymond N и др .: Идентификация PVR (CD155) и нектина-2 (CD112) как поверхности клетки лиганды активирующей молекулы DNAM-1 (CD226) человека. J Exp Med. 2003, 198: 557-67. 10.1084 / jem.20030788.

   PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

7. 7.

   Tahara-Hanaoka S, Shibuya K, Onoda Y, Zhang H, Yamazaki S, Miyamoto A, Honda S, Lanier LL, Shibuya A: Функциональная характеристика взаимодействия DNAM-1 (CD226) с его лигандами PVR ( CD155) и нектин-2 (PRR-2 / CD112).Int Immunol. 2004, 16: 533-8. 10.1093 / intimm / dxh059.

   CAS Статья PubMed Google Scholar

8. 8.

   Pende D, Spaggiari GM, Marcenaro S, Martini S, Rivera P, Capobianco A, Falco M, Lanino E, Pierri I, Zambello R и др.: Анализ взаимодействий рецептор-лиганд в естественном убийце опосредованный лизис свежевыделенных миелоидных или лимфобластных лейкозов: доказательства участия рецептора полиовируса (CD155) и нектина-2 (CD112).Кровь. 2005, 105: 2066-73. 10.1182 / кровь-2004-09-3548.

   CAS Статья PubMed Google Scholar

9. 9.

   Castriconi R, Dondero A, Corrias MV, Lanino E, Pende D, Moretta L, Bottino C, Moretta A: Опосредованное естественными клетками-киллерами убийство свежевыделенных клеток нейробластомы: критическая роль вспомогательной молекулы ДНКX-1 -полиовирусное рецепторное взаимодействие. Cancer Res. 2004, 64: 9180-4. 10.1158 / 0008-5472.CAN-04-2682.

   CAS Статья PubMed Google Scholar

10. 10.

    Pende D, Bottino C, Castriconi R, Cantoni C, Marcenaro S, Rivera P, Spaggiari GM, Dondero A, Carnemolla B, Reymond N и др .: PVR (CD155) и нектин-2 (CD112) как лиганды человека Активирующий рецептор DNAM-1 (CD226): участие в лизисе опухолевых клеток. Мол Иммунол. 2005, 42: 463-9. 10.1016 / j.molimm.2004.07.028.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

11. 11.

    Эль-Щербины Ю.М., Мид Д.Л., Холмс Т.Д., МакГонагл Д., Маки С.Л., Морган А.В., Кук Г., Фейлер С., Ричардс С.Дж., Дэвис Ф.и др. и NKp46 в опосредованном естественными клетками-киллерами уничтожении миеломных клеток.Cancer Res. 2007, 67: 8444-9. 10.1158 / 0008-5472.CAN-06-4230.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

12. 12.

    Боттино С., Кастрикони Р., Моретта Л., Моретта А: клеточные лиганды активирующих рецепторов NK. Trends Immunol. 2005, 26: 221-6. 10.1016 / j.it.2005.02.007.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

13. 13.

    Bryceson YT, March ME, Ljunggren HG, Long EO: синергия между рецепторами на покоящихся NK-клетках для активации естественной цитотоксичности и секреции цитокинов.Кровь. 2006, 107: 159-66. 10.1182 / кровь-2005-04-1351.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

14. 14.

    Fuchs A, Colonna M: Роль распознавания NK-клетками нектина и нектин-подобных белков в иммунном надзоре за опухолью. Semin Cancer Biol. 2006, 16: 359-66. 10.1016 / j.semcancer.2006.07.002.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

15. 15.

    Sloan KE, Eustace BK, Stewart JK, Zehetmeier C, Torella C, Simeone M, Roy JE, Unger C, Louis DN, Ilag LL и др.: CD155 / PVR играет ключевую роль в подвижности клеток во время инвазии и миграции опухолевых клеток . BMC Рак. 2004, 4: 73-10.1186 / 1471-2407-4-73.

    PubMed Central Статья PubMed Google Scholar

16. 16.

    Моримото К., Сато-Ямагути К., Хамагучи А., Иноуэ Y, Такеучи М., Окада М., Икеда В., Такай Ю., Имаи Т.: Взаимодействие раковых клеток с тромбоцитами, опосредованное рецептором Necl-5 / полиовируса, усиливается. метастазирование раковых клеток в легкие.Онкоген. 2008, 27: 264-73. 10.1038 / sj.onc.1210645.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

17. 17.

    Баури Б., Массон Д., Макдермотт Б.М., Джарри А., Блоттьер Н.М., Бланшарди П., Лаборатория С.Л., Люстенбергер П., Раканиелло В.Р., Денис М.Г.: Идентификация секретируемых изоформ CD155. Biochem Biophys Res Commun. 2003, 309: 175-82. 10.1016 / S0006-291X (03) 01560-2.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

18. 18.

    Jia W, Liu XS, Zhu Y, Li Q, Han WN, Zhang Y, Zhang JS, Yang K, Zhang XH, Jin BQ: Получение и характеристика mab против различных эпитопов CD226 (PTA1). Гибридома. 2000, 19: 489-94. 10.1089 / 027245700750053986.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

19. 19.

    Masson D, Jarry A, Baury B, Blanchardie P, Laboisse C, Lustenberger P, Denis MG: Сверхэкспрессия гена CD155 в колоректальной карциноме человека.Кишечник. 2001, 49: 236-40. 10.1136 / gut.49.2.236.

    PubMed Central CAS Статья PubMed Google Scholar

20. 20.

    Ravens I, Seth S, Forster R, Bernhardt G: Характеристика и идентификация Tage4 как мышиного ортолога рецептора полиовируса человека / CD155. Biochem Biophys Res Commun. 2003, 312: 1364-71. 10.1016 / j.bbrc.2003.11.067.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

21. 21.

    Ochiai H, Moore SA, Archer GE, Okamura T, Chewning TA, Marks JR, Sampson JH, Gromeier M: Лечение внутримозговых неоплазий и неопластического менингита с региональной доставкой онколитического рекомбинантного полиовируса. Clin Cancer Res. 2004, 10: 4831-8. 10.1158 / 1078-0432.CCR-03-0694.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

22. 22.

    Бай Ф, Го Х, Ян Л., Ван Дж, Ши И, Чжан Ф, Чжай Х, Лу И, Се Х, Ву К. и др.: Установление и характеристика высокого метастатического потенциала в брюшине. для рака желудка человека путем имплантации ортотопических опухолевых клеток.Dig Dis Sci. 2007, 52: 1571-8. 10.1007 / s10620-006-9570-х.

    Артикул PubMed Google Scholar

23. 23.

    Stolpe van de A, Saag van der PT: Молекула межклеточной адгезии-1. J Mol Med. 1996, 74: 13-33. 10.1007 / BF00202069.

    Артикул PubMed Google Scholar

24. 24.

    Knox PG, Milner AE, Green NK, Eliopoulos AG, Young LS: ингибирование расщепления металлопротеиназой усиливает цитотоксичность лиганда Fas.J Immunol. 2003, 170: 677-85.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

25. 25.

    Альбитар М., До К.А., Джонсон М.М., Джайлс Ф.Дж., Джилани И., О’Брайен С., Кортес Дж., Томас Д., Рассенти Л.З., Киппс Т.Дж. и др.: Свободно циркулирующий растворимый CD52 в качестве онкомаркера в хронический лимфолейкоз и его значение в терапии антителами к CD52. Рак. 2004, 101: 999-1008. 10.1002 / cncr.20477.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

26. 26.

    Хакулинен Дж, Джунниккала С., Сорса Т., Мери С. Белок-кофактор мембраны ингибитора комплемента (MCP; CD46) конститутивно выделяется из мембран раковых клеток в везикулах и превращается металлопротеиназой в функционально активную растворимую форму. Eur J Immunol. 2004, 34: 2620-9. 10.1002 / eji.200424969.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

27. 27.

    Hallermalm K, De Geer A, Kiessling R, Levitsky V, Levitskaya J: Аутокринная секреция лиганда Fas защищает опухолевые клетки от Fas-опосредованного уничтожения цитотоксическими лимфоцитами.Cancer Res. 2004, 64: 6775-82. 10.1158 / 0008-5472.CAN-04-0508.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

28. 28.

    Waldhauer I, Steinle A: Протеолитическое высвобождение растворимого UL16-связывающего белка 2 из опухолевых клеток. Cancer Res. 2006, 66: 2520-6. 10.1158 / 0008-5472.CAN-05-2520.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

29. 29.

    Marten A, von Lilienfeld-Toal M, Buchler MW, Schmidt J: растворимая МПК повышена в сыворотке пациентов с карциномой поджелудочной железы, что снижает цитотоксичность Т-клеток гаммадельта.Int J Cancer. 2006, 119: 2359-65. 10.1002 / ijc.22186.

    Артикул PubMed Google Scholar

30. 30.

    Cao W, Xi X, Hao Z, Li W, Kong Y, Cui L, Ma C, Ba D, He W: RAET1E2, растворимая изоформа UL16-связывающего белка RAET1E, продуцируемого опухолевыми клетками, ингибирует NKG2D-опосредованную цитотоксичность NK. J Biol Chem. 2007, 282: 18922-8. 10.1074 / jbc.M702504200.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

31. 31.

    Харрисон Д., Филлипс Дж. Х., Ланье Л. Л.: Участие металлопротеиназы в спонтанном и индуцированном сложным форболовым эфиром высвобождении связанного с естественными клетками-киллерами Fc гамма RIII (CD16-II). J Immunol. 1991, 147: 3459-65.

    CAS PubMed Google Scholar

32. 32.

    Gutwein P, Oleszewski M, Mechtersheimer S, Agmon-Levin N, Krauss K, Altevogt P: Роль киназ Src в ADAM-опосредованном высвобождении молекулы адгезии L1 из опухолевых клеток человека.J Biol Chem. 2000, 275: 15490-7. 10.1074 / jbc.275.20.15490.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

33. 33.

    Цакадзе Н.Л., Ситу С.Д., Сен У., английский В.Р., Мерфи Г., Д’Суза С.Е.: Фермент, превращающий альфа-фактор некроза опухоли (TACE / ADAM-17), опосредует расщепление эктодомена межклеточной адгезионной молекулы. 1 (ICAM-1). J Biol Chem. 2006, 281: 3157-64. 10.1074 / jbc.M510797200.

    CAS Статья PubMed Google Scholar

34. 34.

    Moldovan I, Galon J, Maridonneau-Parini I, Roman Roman S, Mathiot C, Fridman WH, Sautes-Fridman C: Регулирование производства растворимых Fc-рецепторов гамма типа III в нормальных и патологических состояниях. Immunol Lett. 1999, 68: 125-34. 10.