Кд208А параметры. Диод КД208А: характеристики, применение и аналоги

Репортерную конструкцию HRE (элемент реакции на гипоксию) получали путем введения трех повторов мотивов HRE, полученных из промотора PGK1 человека, перед кассетой экспрессии люциферазы в векторе pGL2-TK. Плазмиды ShRNA, нацеленные на человеческие мРНК FBP1, G6PC и HIF1A , были приобретены у Open Biosystems. Антисмысловые последовательности короткой шпильки против человеческого FBP1 представляют собой 5’-ATGTTGGAAGATCCATCAAGG-3’ (SH-1) и 5’-AACATGTTCATAACCAGGTCG-3’ (SH-2).Антисмысловая последовательность против человеческого G6PC представляет собой 5′-TTCAAGGAGTCAAAGACGTGC-3′, а последовательности против человеческого HIF1A представляют собой 5′-TAACTTCACAATCATAACTGG-3′ (SH-1) и 5′-ATTCGGTAATTCTTTCATCAC-3′ (SH-2). . Экспрессионные плазмиды FBP1, G6PC и PFKL конструировали путем клонирования открытой рамки считывания каждой кДНК в сайт множественного клонирования вектора PCDNA3.1-V5. Мутант FBP1 G260R ​​был получен с использованием набора для мутагенеза QuikChange II компании Stratagene (Agilent). FBP1 NES был получен путем связывания эффективной ядерной экспортной последовательности (LALKLAGLDIGS) с С-концом FBP1 его экспрессионной кассеты.Укорочения экзонов FBP1 были получены путем субклонирования следующих кодирующих областей из полноразмерного FBP1 (1–338): ΔE1 (58–338), ΔE2 (1–57, 112–338), ΔE3 (1–111, 143–338) , ΔЕ4 (1–142, 189–338), ΔЕ5 (1–188, 236–338), ΔЕ6 (1–235, 276–338), ΔЕ7 (1–275). Полноразмерные FBP1, HIF1α и HIF2α клонировали в вектор pGEX-6P-1 для создания белковых конструкций, меченных GST. Различные GST-меченые мотивы HIF1α были созданы путем субклонирования следующих областей из полноразмерного HIF1α (1–826) в вектор pGEX-6P-1: bHLH (1–80), PASA (81–235), PASB (236–236). 329), ЛИНК (330–392), НОДД (393–531), НТАД (532–603), ИД (604–786), СТАД (787–826).Для анализов трансактивации GAL4 последовательности HIFα, в которых отсутствует мотив связывания ДНК bHLH, клонировали в вектор pBIND (Promega), который находится в рамке считывания с ДНК-связывающим доменом GAL4 (GBD) на N-конце. Серия усечений GBD-HIF1α была создана путем удаления указанных мотивов HIF1α. Точно так же укорочения GBD-HIF2α были созданы путем индивидуальной делеции следующих мотивов из последовательностей HIF2α (1–870): PASA (80–236), PASB (237–331), LINK (332–395), NODD (396–495). , NTAD (496–581), ID (582–830), CTAD (831–870).Конструкции GFP-FIh2 и GFP-PHD2 были получены от доктора Эрика Метцена через Addgene.

Трансфекция плазмид и вирусная инфекция

Экспрессионные конструкции трансфицировали в линии раковых клеток с использованием реагента Lipofectamine LTX (Life Technologies) в соответствии с протоколом производителя. Лентивирус был получен путем совместной трансфекции клеток 293T векторами экспрессии pRSV-Rev, pMD2.G, pMDLg/pRRE и pLKO.1-puro shRNA или pCDH-puro. Вирус собирали через 48 часов фильтрованием вируссодержащей среды через 0.Фильтр Steriflip 45 мкМ (Millipore). Заражение вирусом осуществляли путем инкубации клеток со средой, содержащей указанный вирус и 8 мкг/мл полибрена (Sigma) в течение 24 часов. Клетки восстанавливались в полной среде в течение 24 часов, а затем отбирались с помощью пуромицина в течение 24 часов (анализ мРНК) или 48 часов (анализ белков и фенотип). Выжившие пулы подвергали указанным экспериментам. Обратите внимание, что клеткам HK-2, подвергшимся вирусной инфекции и отбору пуромицином, обычно требуется 10–14 дней для восстановления перед тем, как их подвергнуть экспериментам.

Анализ TCGA RNAseq

Необработанные данные RNAseq для 480 опухолей ccRCC и 69 нормальных тканей почек были загружены из проекта TCGA ccRCC (http://cancergenome.nih.gov) 2 апреля 2013 г. Данные были проанализированы на дифференциальную экспрессию генов с помощью DeSeq (Bioconductor, версия 2.12). Были экспортированы нормализованные подсчеты, значения p, значения p с поправкой на частоту ложных открытий (p-adj) и кратность изменения экспрессии для каждого гена. Для проведения анализа набора генов полный список из 2752 генов, кодирующих все известные метаболические ферменты и переносчики человека, был сгруппирован в функциональные наборы в соответствии с метаболическими путями, аннотированными KEGG (http://www.genome.jp/kegg/). Пороговое значение p-adj было установлено равным 0,1, чтобы исключить гены, которые не были постоянно обнаружены с помощью RNAseq. Для изучения активности HIF, ассоциированной с опухолью, необработанные данные каждого секвенированного гена были перемасштабированы, чтобы установить медиану равной 1, и активность HIF была количественно определена путем усреднения нормализованной экспрессии 44 генов-мишеней HIF, включая те, которые кодируют IGFBP3, EDN2, PFKFB4, FLT1, TFR2, BNIP3L, TGFA, BNIP3, PGK1, EGLN1, LDHA, EGLN3, CP, TGFB3, PFKFB3, HK1, TFRC, EDN1, CDKN1A, CA9, ADM1, HMOX1, SERPINE1, LOX, NDRG1, CA12, PDK1, VEGFA, ERO1L, RORA, P4HA1, MXI1, SLC2A1(GLUT1), STC2, MIF, DDIT4, ENO1, CXCR4, PLOD1, P4HA2, GAPDH, PGAM1, TMEM45A и PIM1 ²⁸ .

Количественное определение метаболитов

Скорость поглощения глюкозы и секреции лактата определяли с помощью многопараметрической биоаналитической системы YSI 7100 (YSI Life Sciences). Уровни NAPDH измеряли с использованием набора для количественной оценки NADP ⁺ /NADPH (BioVision) в соответствии с протоколом производителя. Уровни глюкозо-6-фосфата (G6P) определяли с использованием набора для флуорометрического анализа PicoProb G6P (BioVision) в соответствии с протоколом производителя. Абсолютные уровни NADPH или G6P нормализовали по отношению к клеткам контроля вектора, установив уровни контроля вектора равными 1.Панметаболический анализ был выполнен на 20 первичных опухолях ccRCC и 20 соседних нормальных тканях почек (полученных из Cooperative Human Tissue Network) с помощью Metabolon. В частности, пробоподготовку проводили с использованием автоматизированной системы MicroLab STAR® (Hamilton). Стандарты добавляли перед первой стадией экстракции в целях контроля качества. Экстракты метаболитов разделяли на две фракции; одну фракцию анализировали с помощью газовой хроматографии-масс-спектрометрии (ГХ-МС), а другую с помощью жидкостной хроматографии-тандемной масс-спектрометрии (ЖХ-МС/МС).Образцы для анализа ГХ-МС высушивали в вакуумной сушке в течение 24 часов перед дериватизацией в атмосфере азота с обработкой бистриметилсилилтрифторацетамидом (БСТФА). Колонка ГХ содержала 5% фенила, а линейное изменение температуры составляло от 40 до 300°C за 16-минутный период. Образцы анализировали на быстросканирующем одноквадрупольном масс-спектрометре Thermo-Finnigan Trace DSQ с использованием ионизации электронным ударом. Часть этого анализа, связанная с ЖХ-МС/МС, была основана на УЭЖХ Waters ACQUITY UPLC и масс-спектрометре Thermo-Finnigan LTQ, который состоит из источника ионизации электрораспылением (ESI) и масс-анализатора с линейной ионной ловушкой (LIT).Экстракты образцов разделяли на две аликвоты, сушили и восстанавливали по отдельности в кислых или основных растворителях. Одну аликвоту анализировали в условиях, оптимизированных для кислых положительных ионов, а другую — в условиях, оптимизированных для основных отрицательных ионов, с использованием специальных колонок. Экстракты, восстановленные в кислых условиях, элюировали градиентом воды и метанола, содержащего 0,1% муравьиной кислоты, а основные экстракты элюировали водой и метанолом, содержащим 6,5 мМ бикарбоната аммония. Анализ МС чередовался между сканированием МС и МС/МС с использованием динамического исключения.Соединения идентифицировали путем сравнения с собственной метаболомической библиотекой с очищенными стандартами. Зарегистрировано более 3000 коммерчески доступных стандартных соединений для определения их аналитических характеристик. Комбинация хроматографических свойств и масс-спектров указывала на совпадение с конкретным соединением или изобарической единицей. Для исследований, охватывающих несколько дней, был включен этап нормализации данных, чтобы скорректировать отклонения, возникающие в результате различий в настройке инструментов.Для создания конечного отчета необработанные данные по каждому метаболиту были перемасштабированы, чтобы установить медиану, равную 1. Для попарного сравнения метаболитов, связанных с пентозофосфатным путем, были выполнены t-критерии Уэлча. Также сообщается значение q для описания частоты ложных обнаружений при множественном тестировании.

Для измерения обогащения ¹³ С в промежуточных продуктах цикла ТХУ, [1, 2- ¹³ С], меченных глюкозой (48 часов при 37 °С) или [U- ¹³ C] клетки, меченные глутамином (3 часа при 37 °C), экстрагировали 4% хлорной кислотой (PCA), как описано ранее ²⁹ .Вкратце, клетки дважды промывали PBS, а затем инкубировали с 4% PCA в течение 30 минут при 4 ° C на качающейся платформе. Экстракты клеток собирали и нейтрализовали с помощью 5М КОН. После центрифугирования надосадочные жидкости переносили на колонку AG-1 (100–200 меш, 0,5 × 2,5 см, Bio-rad) для обогащения органическими кислотами, глутаматом и аспартатом, которые затем превращали в трет-бутилдиметилсилильные производные. Изотопное обогащение изотопомеров глутамата ¹³ C контролировали с использованием ионов с m/z 432, 433, 434, 435, 436 и 437 для M0, M1, M2, M3, M4 или M5 (содержащих от 1 до 5 ¹³ атомов C выше M0, естественной численности) соответственно.Изотопное обогащение изотопомеров аспартата ¹³ C контролировали с использованием ионов с m/z 418, 419, 420, 421 и 422 для M0, M1, M2, M3 и M4 (содержащих от 1 до 4 ¹³ атомов C выше M0, естественное изобилие) соответственно. Изотопное обогащение лактата ¹³ C определяли с использованием ионов с m/z 261, 262, 263 и 264 для M0, M1, M2 и M3 (содержащих от 1 до 3 ¹³ атомов C выше естественного содержания), соответственно. Изотопное обогащение ¹³ C изотопомеров пирувата контролировали с использованием ионов с m/z 259, 260, 261 и 262 для M0, M1, M2 и M3 (содержащих от 1 до 3 ¹³ атомов C выше естественного содержания), соответственно.Изотопное обогащение ¹³ изотопомеров малата C оценивали с использованием ионов с m/z 419, 420, 421, 422 и 423 для M0, M1, M2, M3 и M4 (содержащих от 1 до 4 ¹³ атомов C выше естественного содержания) , соответственно, и обогащение ¹³ C изотопомеров цитрата ¹³ C было проанализировано с использованием ионов с m/z 459, 460, 461, 462, 463, 464 и 465 для M0, M1, M2, M3, M4, M5 и M6 (содержащие от 1 до 6 ¹³ атомов C сверх естественного содержания) соответственно. Изотопное обогащение изотопомеров ¹³ C рибозо-5-фосфата определяли с использованием системы ЖХ-МС, как описано ранее ²⁹ .Для рибозы в режиме MRM мы измерили ионные пары 561-175, 562-175, 563-175, 564-175, 565-175 и 566-175 для определения М0, М1, М2, М3, М4 и М5 соответственно. (содержащие от 1 до 5 ¹³ атомов C сверх естественного содержания).

Количественная оценка пентозофосфатного пути

Метаболический поток, проходящий через пентозофосфатный путь (PPP), был количественно определен на основе ранее описанного метода ³⁰ с использованием [1, 2- ¹³ C] глюкозы в качестве метки .Вкратце, прямой гликолиз [1, 2- ¹³ C] глюкозы (без прохождения через PPP) дает лактат, меченый M2, в то время как поток, проходящий через окислительную часть PPP, удаляет первый углерод из глюкозы и высвобождает его в виде СО ₂ . Полученные промежуточные продукты, меченые M1, возвращаются обратно в гликолиз для производства лактата, меченого M1, посредством неокислительного действия PPP. Соотношение лактата, меченого M1 и M2, указывает отношение потока, проходящего через PPP, к потоку, проходящему непосредственно через гликолиз.Таким образом, поток PPP рассчитывали на основе следующей формулы: поток PPP = скорость потребления глюкозы (измеренная с помощью анализатора YSI, как описано выше) × обогащение лактатом M1 / ​​(обогащение лактатом M1 + обогащение лактатом M2). Рассчитанный поток PPP был затем нормализован для контрольных клеток-переносчиков путем установки потока контроля вектора равным 1. Важным предположением для этой модели является то, что большинство промежуточных продуктов M1, генерируемых PPP, возвращаются обратно в гликолиз, а не экспортируются для синтеза нуклеотидов ³⁰ .Мы измерили изотопное распределение рибозо-5-фосфата с помощью ЖХ-МС и обнаружили, что обогащение рибозо-5-фосфата, меченого M1, было необнаружимым, подтверждая, что большинство меченых M1 промежуточных продуктов, образующихся в PPP, были рециркулированы обратно в гликолиз.

Анализ роста клеток

Множественные культуры клеток ccRCC или A549 высевали в 6-луночные планшеты с плотностью 5×10 ⁴ клеток/лунку с добавлением DMEM, содержащей 1% FBS. Для анализов роста, проводимых в условиях низкого содержания глюкозы, клетки поддерживали в среде DMEM без глюкозы с добавлением 10% диализированного FBS и 1 мМ глюкозы.Каждый день собирали и подсчитывали один набор культур.

Анализ роста, не зависящего от прикрепления

Клетки 786-O, стабильно экспрессирующие векторный контроль или FBP1, высевали при плотности 6×10 ³ клеток/мл в полной среде, содержащей 0,3% агарозы, на подложки, состоящие из среды, содержащей 0,6% агароза. Культуры подкармливали каждую неделю, и после трех недель роста колонии определяли количественно.

Иммунопреципитация и вестерн-блоттинг

Клетки лизировали буфером для лизиса клеток млекопитающих, состоящим из 25 мМ Трис, 100 мМ NaCl, 1% Тритон Х-100, 1 мМ ЭДТА, 1 мМ ДТТ, 1 мМ NaVO ₄ , 1 мМ β-глицеринфосфат и смесь ингибиторов протеазы (Roche Diagnostics).Для экспериментов по иммунопреципитации клетки собирали в буфере для лизиса, содержащем 0,3% CHAPS вместо 1% Triton X-100 в качестве детергента. 2 мг цельноклеточных лизатов предварительно очищали с помощью 30 мкл гранул с белком G (Life Technologies), а затем инкубировали с 2 мкг соответствующего изотипа контрольного IgG или указанных антител в течение 2 часов на качающейся платформе. Добавляли 50 мкл гранул с белком G и перемешивали еще 2 часа. Иммунопреципитаты собирали центрифугированием и затем разделяли с помощью SDS-PAGE. Разделенные белки переносили на нитроцеллюлозные мембраны и фильтры инкубировали с указанными первичными антителами, разведенными в TBST (20 мМ Трис, 135 мМ NaCl и 0.02% Tween 20) с добавлением 5% бычьего сывороточного альбумина (Sigma). Первичные антитела выявляли с помощью вторичных антител, конъюгированных с пероксидазой хрена (Cell Signaling Technology), с последующим воздействием реагентов ECL (Pierce).

Количественная ОТ-ПЦР

Тотальную РНК выделяли из клеток с использованием набора для очистки RNAeasy (Qiagen). кДНК синтезировали с использованием мастер-микса High Capacity RNA-to-cDNA от Applied Biosystems. Анализ qRT-PCR проводили с использованием реагентов TaqMan Universal PCR, смешанных с указанными кДНК и праймерами TaqMan, в системе ViiA7 Real-Time PCR (Applied Biosystems).Предварительно спроектированные праймеры Taqman были получены из прикладных биосистем, обнаружение следующих генов: FBP1 (ID: HS00983323_M1), HIF1A (ID: HS00153153_M1), PDK1 (ID: HS01561850_M1), LDHA (ID: HS00855332_G1) , GLUT1 ( SLC2A1 , ID: HS00892681_M1), VEGF ( VEGFA , ID: HS00^{5_M1), 18S ( RN18S1 , HS03928985_G1).}

Иммунопреципитация хроматина (ChIP) и анализ ChIP-reChIP

Анализы ChIP проводились с использованием набора Imgenex QuikChIP (Novus).Вкратце, три миллиона клеток RCC10, стабильно экспрессирующих V5-FBP1, сшивали 1% формальдегидом в течение 15 минут при 37 °C. Реакцию перекрестного связывания гасили глицином, и клетки лизировали в SDS-буфере, содержащем смесь ингибиторов протеазы. Клеточные лизаты обрабатывали ультразвуком для разделения хроматиновой ДНК на фрагменты размером 200–1000 пар оснований, а затем подвергали иммунопреципитации с использованием 5 мкг антител IgG (Cell Signaling Technology), V5 (Life Technologies) или полимеразы II (Imgenex). После промывки серией промывочных буферов с низким содержанием соли и высоким содержанием соли иммунопреципитированные фрагменты ДНК депоперечно сшивали при 65 °C в условиях с высоким содержанием соли, очищали с использованием набора для очистки QIAquick PCR (Qiagen), а затем анализировали с помощью qRT-PCR.Для анализов ChIP-reChIP первый ChIP выполняли с использованием антитела HIF1α (5 мкг, Novus) до этапов промывки. Иммунопреципитированные комплексы белок-ДНК инкубировали в элюирующем буфере ChIP-reChIP (10 мМ Трис, 1 мМ ЭДТА, 2% ДСН и 20 мМ ДТТ, рН 7,5) в течение 30 мин при 37 °С. После центрифугирования выделенный супернатант разбавляли не менее чем в 20 раз и подвергали второй ЧИП с использованием 5 мкг антител IgG или V5. В обоих анализах ChIP и ChIP-reChIP qRT-PCR выполняли с использованием следующих праймеров: PDK1 -HRE: 5′-CGCGTTTGGATTCCGTG-3′ и 5′-CCAGTTATAATCTGCCTTCCCTATTATC-3′; LDHA -HRE: 5′-TTGGAGGGCAGCACCTTACTTAGA-3′ и 5′-GCCTTAAGTGGAACAGCTATGCTGAC-3′; GLUT1 -HRE: 5′-CAAATGTGTGGATGTGAGTTGC-3′ и 5′-CCATCACGGTCCTTCTTCATG-3′; VEGF -HRE: 5′-CAGGAACAAGGGCCTCTGTCT-3′ и 5′-GCACTGTGGAGTCTGGCAAA-3′; RPL13A -nonHRE: 5′-GAGGCGAGGGTGATAGAG-3′ и 5′-ACACACAAGGGTCCAATTC-3′.

Репортер люциферазы и анализ трансактивации GAL4

0,5 мг репортерной конструкции HRE трансфицировали в клетки, выращенные в 6-луночных планшетах, вместе с 0,05 мг люциферазы Renilla и 1 мг индицируемой экспрессии или плазмиды кшРНК. Активность люциферазы измеряли через 48 часов с использованием набора для анализа Dual Luciferase (Promega). Активность репортерной люциферазы нормализовали по отношению к люциферазе Renilla, а затем масштабировали, чтобы установить контрольные сигналы вектора, равные 1. В анализе трансактивации GAL4 0.3 мг конструкции GBD-HIFα (с использованием вектора pBIND в качестве основы) трансфицировали в клетки 769-P (GBD-HIF1α) или A549 (GBD-HIF2α) вместе с 0,3 мг репортера UAS (восходящей последовательности активации)-люциферазы и 0,4 мг указанной экспрессии. плазмиды. Активность люциферазы измеряли, как описано выше. Эффективность трансфекции нормализовали по люциферазе Renilla, экспрессируемой из основы pBIND.

Субклеточное фракционирование

Цитозольное и ядерное фракционирование указанных клеток и тканей проводили с использованием реагентов для выделения ядер и цитоплазмы NE-PER (Pierce) в соответствии с протоколом производителя.

Анализ ферментативной активности

20 мкг лизатов клеток 293T, экспрессирующих вектор FBP1 или FBP1 G260R, добавляли к 100 мкл реакционного буфера, содержащего 50 мМ Трис, 10 мМ MgCl ₂ и 100 мкМ D-фруктозы 1,6- бисфосфат тринатриевая соль. Реакцию начинали путем инкубации растворов при 37 °C в течение 15 минут и останавливали по протоколу депротеинизации с использованием набора для подготовки образцов для депротеинизации (BioVision). Каталитическую активность FBP1 количественно определяли по выходу фруктозо-6-фосфата (ферментативный продукт), измеренному с использованием набора для флуорометрического анализа фруктозо-6-фосфата PicoProb (BioVision).

Анализ потребления кислорода

Клетки RCC4 или RCC10, эктопически экспрессирующие вектор или FBP1, высевали в черный непрозрачный 96-луночный планшет с плотностью 70 000 клеток на лунку. После прикрепления культуральную среду в каждой лунке заменяли 150 мкл свежей насыщенной кислородом среды, дополненной 10 мкл раствора зонда MitoXpess (Cayman Chemical). В качестве отрицательного контроля использовали антимицин А. В каждую лунку наносили 100 мкл минерального масла, и весь планшет контролировали с помощью считывателя микропланшетов SpectraMax m2e (Molecular Devices) при 37 °C.Длины волн установлены на 380 нм для возбуждения и 650 нм для излучения.

Очистка белков

Конструкции, кодирующие указанные GST-меченые белки, трансформировали в химически компетентную BL21-DE3 E. coli (Life Technologies), выращенную в среде LB при качании при 37 °C до значения OD600, равного 0,8. Экспрессию белка индуцировали добавлением 1 мМ IPTG (Denville Scientific) к культурам LB, которые встряхивали при 37°C в течение еще 3 часов или при комнатной температуре в течение ночи. После центрифугирования собранные бактериальные осадки ресуспендировали в буфере STE (50 мМ Трис, 150 мМ NaCl и 1 мМ ЭДТА), дополненном коктейлем ингибиторов протеазы (Sigma).Белки, меченные GST, были дополнительно очищены с использованием набора для солюбилизации и ренатурации телец включения GST (Cell Biolabs) в соответствии с протоколом производителя.

GST pull-down assay

Анализ проводили с использованием GST Protein Interaction Pull-Down Kit (Pierce) в соответствии с протоколом производителя. Кратко, 100 мкг указанных белков-приманок, меченных GST, инкубировали с 50 мкл предварительно промытой глутатион-агарозы (Pierce) в 500 мкл вытягивающего буфера GST (20 мМ Трис, 150 мМ NaCl, 2 мМ MgCl ₂ , 0.1% NP-40 и 20 мкг/мл BSA) в течение 1 часа при 4 °C. Между тем, 50 мкг указанных белков-«жертв» предварительно очищали с помощью 50 мкл предварительно промытой глутатион-агарозы в 500 мкл вытягивающего буфера GST в течение 1 часа при 4 °C. Предварительно очищенные растворы «добычи» соединяли с растворами «приманка-агароза» и перемешивали еще 2 часа при 4 °С. Агарозу, связанную с белком, промывали 3 раза и кипятили в буфере для образцов SDS. Супернатанты подвергали SDS-PAGE и вестерн-блоттингу.

Иммуногистохимия тканей и иммунофлуоресценция

Срезы нормальной ткани почки (из Cooperative Human Tissue Network) и предметные стекла с тканевым микрочипом (KD801, KD208, BC07114, BC07115, LV804, LV208 из US Biomax) депарафинизировали путем запекания предметных стекол при 60 °C в течение 30 мин.Предметные стекла регидратировали в серии растворов этанола, и активность эндогенной пероксидазы гасили 3% H ₂ O ₂ в дистиллированной воде в течение 30 мин. После трех промывок в ТТ-буфере (500 мМ NaCl, 10 мМ Trizma и 0,05% Tween-20) проводили выделение антигена путем кипячения предметных стекол в течение 20 минут в демаскирующем антигенном растворе на основе цитрата (Vector Labs). После охлаждения до комнатной температуры предметные стекла инкубировали с 4% нормальной козьей сывороткой в ​​ТТ-буфере в течение 1 часа, а затем блокировали растворами авидина и биотина (набор для блокирования авидина/биотина, Vector Labs).Затем предметные стекла инкубировали с различными первичными антителами при 4°C в течение ночи. После трех промывок в ТТ-буфере на эти предметные стекла добавляли биотинилированные вторичные антитела на 1 час с последующей обработкой в ​​течение 1 часа реагентами ABC (Vectatain ABC Kit, Vector Labs). После трех промывок ТТ слайды обрабатывали либо хромогеном (субстрат ImmPACT DAB, Vector Labs), либо растворами гематоксилина для иммуногистохимического окрашивания, либо тирамидом Alexa Fluor 488 (набор TSA № 22, Life Technologies) для иммунофлуоресцентных экспериментов.Наконец, предметные стекла были либо обезвожены и помещены в раствор Paramount (для иммуногистохимии), либо непосредственно помещены в реагенты против выцветания ProLong Gold (Life Technologies) с добавлением DAPI (для иммунофлуоресценции).

Исследования на животных

Эксперименты с ксенотрансплантатом опухоли были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Пенсильванского университета. Вкратце, пяти самкам голых мышей NIH-III (Charles River, 4–6 недель) вводили подкожно в оба бока пять миллионов клеток 786-O, стабильно экспрессирующих вектор или FBP1.Перед каждой инъекцией клетки ресуспендировали в 150 мкл DMEM, смешанного с равным объемом матригеля (BD Bioscience). После установления пальпируемых опухолей размер опухоли измеряли один раз в неделю с помощью цифрового штангенциркуля. Через четыре недели мышей умерщвляли путем ингаляции CO ₂ , ксенотрансплантатные опухоли вырезали и взвешивали. Рандомизация и ослепление не применимы в этом эксперименте.

Субъекты-люди

Первичные образцы почек человека были получены из Кооперативной сети изучения тканей человека и обработаны в Пенсильванском университете с одобрения комитетов его институционального наблюдательного совета.Все ткани собираются с информированием и согласием донора. Сопутствующие процедуры были выполнены в соответствии с этическими и правовыми нормами.

Анализ выживаемости

Доступные данные о выживаемости пациентов были получены в рамках проекта TCGA ccRCC. Пациенты были ранжированы на основе их опухолевой экспрессии указанных генов, показанных в данных TCGA RNAseq. Верхняя половина ранжированных пациентов была определена как группа «высокие 50% экспрессии», а нижняя половина была определена как группа «нижние 50% экспрессии».Для этих двух групп пациентов были соответственно проведены анализы выживаемости Каплана-Мейера и тесты значимости логарифмического ранга.

Статистические данные

Все результаты, указанные в основных и расширенных данных, представлены как среднее значение ± стандартное отклонение. если не указано иное. Данные были представлены как биологические повторы, за исключением анализов qRT-PCR, где использовались технические повторы репрезентативного эксперимента. Данные за пределами двух стандартных отклонений от среднего значения рассматриваются как выбросы. Значения р рассчитывали на основе двусторонних непарных t-критериев Стьюдента.р<0,05 считали статистически значимым.

Политика конфиденциальности | Carolina Shores Vacation Rentals

Добро пожаловать на наш веб-сайт и благодарим за посещение. Ваша конфиденциальность важна для нас, и в этом обзоре подробно объясняется, как мы собираем, храним и передаем ваши данные на основе вашего взаимодействия с веб-сайтом. Обратите внимание, что эта политика конфиденциальности применяется исключительно к этому веб-сайту и информации, собранной на этом веб-сайте.

Сбор, использование и обмен информацией

Мы являемся исключительными владельцами информации, собранной на этом веб-сайте.У нас есть доступ только для сбора информации, которую вы добровольно предоставляете нам по электронной почте, при взаимодействии с контактной формой или при отправке, или через другие прямые контакты от вас. Мы не будем распространять эту информацию другим лицам.

Мы будем использовать вашу информацию, чтобы ответить на ваш запрос и указать причину обращения к нам. Мы не будем передавать вашу информацию какой-либо третьей стороне за пределами нашей организации, за исключением случаев, когда это необходимо для выполнения вашего запроса.

Если вы не откажетесь, мы можем связаться с вами в будущем, чтобы сообщить вам о рекламных предложениях, новых продуктах или услугах или изменениях в этой политике конфиденциальности.

Какую информацию мы собираем?

Мы собираем информацию от вас, когда вы вводите свою контактную информацию на нашем веб-сайте, включая заполнение контактной формы, запрос на бронирование или согласие на получение наших рекламных электронных писем.

Сюда входят: имя, фамилия, адрес электронной почты, почтовый адрес, номер телефона и/или другая информация.

Для чего используется эта информация?

Любая информация, которую мы получаем от вас, может быть использована одним из следующих способов:

Для персонализации вашего опыта
(ваша информация помогает нам лучше реагировать на ваши индивидуальные потребности)

Для улучшения обслуживания клиентов
(ваша информация помогает нам более эффективно реагировать на ваши проблемы)

Для обработки транзакций

Ваша информация, будь то общедоступная или частная, не будет продана, обменена, передана или передана какой-либо другой компании по какой-либо причине без вашего согласия, другое чем для явной цели обработки транзакции

Для отправки периодических электронных писем

Предоставленный вами адрес электронной почты может использоваться для отправки вам информации и обновлений, относящихся к вашему запросу, в дополнение к получению периодических рекламных предложений

Ваш доступ и управление Дополнительная информация

Вы можете отказаться от любых будущих контактов с нами в любое время.Вы можете сделать следующее в любое время, связавшись с нами по адресу электронной почты или номеру телефона, указанному на нашем веб-сайте.

Файлы cookie

Для дальнейшего улучшения вашего опыта на нашем веб-сайте мы используем файлы cookie для хранения ваших данных. Файл cookie — это часть данных, обрабатываемых нашим веб-сайтом и сохраняемых на вашем устройстве вашим веб-браузером во время вашего взаимодействия с нашим веб-сайтом. Сбор файлов cookie можно использовать для стратегических маркетинговых возможностей, как описано ниже.

Безопасность

Наш веб-сайт работает на уровне HTTPS, что означает, что любая посещаемая страница защищена.Независимо от того, заполняете ли вы контактную форму или отправляете запрос на бронирование, ваша информация полностью конфиденциальна и зашифрована.

Компьютеры/серверы, на которых мы храним личную информацию, хранятся в безопасной среде.

После запроса бронирования ваша личная информация не будет храниться на наших серверах.

Ссылки третьих лиц

Мы размещаем ссылки на другие стороны и услуги на нашем веб-сайте, и мы не несем ответственности за размещенное ими содержание.Эти веб-сайты имеют независимые политики конфиденциальности. Если вы считаете, что веб-сайт, на который мы ссылаемся, не заслуживает доверия, сообщите нам об этом, и мы проведем тщательное расследование.

Ваше согласие

Просматривая и взаимодействуя с нашим веб-сайтом, вы соглашаетесь с нашей политикой конфиденциальности.

Изменения в нашей политике конфиденциальности

Дополнительная информация или изменения в нашей политике конфиденциальности будут обновляться на этой странице.

Связаться с нами

По любым вопросам или опасениям по поводу этой политики конфиденциальности, пожалуйста, напишите или позвоните нам.

Ссылки для отказа

Мы используем ремаркетинг Google, Bing Ads, Facebook Ads и другие. Обратите внимание на следующую информацию о нашей рекламе:

• Сторонние поставщики, включая Google, Bing и Facebook, показывают нашу рекламу на веб-сайтах в Интернете.
• Сторонние поставщики, включая Google, Bing и Facebook, используют файлы cookie для показа рекламы на основе предыдущих посещений пользователем веб-сайта.
• Вы можете отказаться от ремаркетинга Google и использования ваших файлов cookie, посетив Настройки рекламы Google.
• Вы можете отказаться от персонализированной рекламы Bing, посетив Настройки рекламы Bing.
• Вы можете обновить настройки рекламы Facebook в настройках рекламы Facebook.
• Кроме того, у вас есть возможность отказаться от использования файлов cookie сторонними поставщиками, посетив Network Advertising Initiative (NAI) и Digital Advertising Allegiance (DAA).
• Google Analytics: мы используем Google Analytics, чтобы лучше понять, как посетители используют этот веб-сайт, и для рекламы на основе интересов, связанной с вашей учетной записью Google и другими используемыми вами устройствами.Информация, сгенерированная файлом cookie Google Analytics об использовании вами этого веб-сайта, передается и хранится в Google. Если вы не хотите, чтобы Google Analytics отслеживал ваши действия на этом веб-сайте, вы можете отказаться, перейдя по этой ссылке: http://tools.google.com/dlpage/gaoptout?hl=ru.

Если вы считаете, что мы не соблюдаем эту политику конфиденциальности, немедленно свяжитесь с нами по телефону 866-418-5263 или по электронной почте [email protected].

Металлургический дивизион История мировой войны

KO88 — Внутренний заказ (полная структура распределения A1)

Привет гуру,

Я искал решение своей проблемы, но ничего из этого не могло мне помочь.

Когда я запускаю KO88 для полного расчета, я получаю следующую ошибку:

================================================ ================================================== ========

Полная структура распределения A1

Номер сообщения. КД503

Диагностика

Во время расчета система распределяет дебеты отправителя по группам (присвоениям), которые рассчитываются с использованием одного и того же вида затрат для расчета.Назначение расчета выполняется в структуре распределения, которая хранится в правиле расчета для отправителя (в параметрах расчета).
Вид затрат 981550 не может быть присвоен присвоению расчетных затрат в структуре распределения A1 и, следовательно, не может быть присвоен расчетному виду затрат.

Процедура

Возможные решения:

• Если проводка по виду затрат 981550 была выполнена отправителю из-за неправильного ввода, можно отменить проводку и не нужно обновлять структуру перерасчета.Вам нужно только отменить неправильно назначенную проводку, прежде чем повторять расчет. Исключение: для инвестиционного показателя с расчетом по отдельным позициям необходимо расширить структуру распределения даже после сторнирования.

• Если проводка была сделана правильно, то можно сделать следующее:

a) Отправителю можно присвоить другую структуру перерасчета: в ведении основных данных для отправителя выберите «Правило расчета -> Перейти к -> Параметры расчета», а затем введите другую структуру перерасчета.

• При необходимости также проверьте, правильно ли введена структура распределения в профиле расчета. Структура перерасчета устанавливается по умолчанию в профиле расчета при создании основных данных отправителя или при ведении правила расчета.
• Вы можете обновить структуру распределения A1

============================================== ================================================== =========

Что я сделал до сих пор:

1.Создать структуру распределения

2. Группа видов затрат (код T: KAh2) следующим образом

Благодарю за помощь и заранее большое спасибо

С уважением,

Кензо

US Biomax — Избранные ссылки

ССЫЛКИ

Тканевые микроматрицы и продукты US Biomax упоминались в более чем 1200 научных статьях с 2006 г., из них 600 с 2013 г. .Наши продукты были использованы в нескольких статьях ведущих журналов, таких как Nature и Cell.

Чтобы просмотреть последние ссылки, проверьте наши списки в Google Scholar или просмотрите полный список.

Избранные ссылки

Топ-200 по импакт-фактору:

Технология тканевых микрочипов:

1. Хольгер Мок, Юха Кононен, Олли-П. Каллиониеми и Гвидо Заутер, Тканевые микрочипы: что они привнесут в молекулярную и анатомическую патологию. Достижения в области анатомической патологии, том 8, № 1, 14–20, (2001 г.).
2. Рональд Саймон, Ян Рихтер, Урс Вагнер и др., Анализ количества копий 3p25 (RAF1) и 8p12 (FGFR1) на тканевых микрочипах изменения при раке мочевого пузыря. Рак рез. 61:4514-4519, (2001).
3. Марк А. Рубин. Использование микродиссекции с лазерным захватом, микрочипов кДНК, и тканевые микроматрицы в продвижении нашего понимания предстательной железы Рак. Дж. Патол. 195:80-86, (2001).
4. Олли-П. Каллиониеми, Урс Вагнер, Юха Кононен и Гвидо Заутер, Технология тканевых микрочипов для высокопроизводительного молекулярного профилирования рака.Молекулярная генетика человека, том 10, № 7, 657–662, (2001).
5. Дэвид Л. Римм, Роберт Л. Кэмп, Лори А. Шаретт и др., Тканевой микрочип: новая технология увеличения тканевых ресурсов. Раковый журнал, том 7, № 1 (2001 г.).
6. Лукас Бубендорф, Антонио Ноцито, Хольгер Мок и Гвидо Заутер, Технология микрочипов тканей (ТМА): миниатюрные архивы патологий для высокопроизводительных исследований in situ. Дж. Патол. 195:72-79, (2001).
7. Чад Р. Энглерт, Галина В. Байбакова и Майкл Р.Эммерт-Бак, Cancer Res. 60:1526-1530, (2000).
8. Ф. фон Эггелинг, Х. Дэвис, Л. Ломас, В. Фидлер, К. Юнкер, У. Клауссен и Г. Эрнст, Тканеспецифическая микродиссекция в сочетании с технологиями массивов белковых чипов: применение в исследованиях рака. Биотехнологии Том 29, № 5, 1066-1070, (2000).
9. Olivier Braissant и Walter Wahli, Упрощенный протокол гибридизации in situ с использованием нерадиоактивно меченных зондов для обнаружения обильных и редких мРНК на срезах тканей. Биохимия №1, 10-16, (1998).

Тестирование — Все производители — eTesters.com

Показаны последние результаты 1 — 15 из 7974 найденных продуктов.

• Тестирование

  Underwriters Laboratories Inc.

  Наш независимый и строгий процесс тестирования помогает убедиться, что ваша продукция соответствует применимым требованиям и ожиданиям. Мы предлагаем инновационные индивидуальные решения, направленные на оптимизацию процессов тестирования, снижение затрат и ускорение выхода продукции на рынок по всему миру.А знания нашей глобальной команды помогут вам оставаться на шаг впереди меняющихся требований, материалов и технологий.

• Тестирование

  ТЮФ ЗЮД АГ

  TÜV SÜD — мировой лидер в области тестирования и сертификации продукции. Поэтому, когда вы сотрудничаете с нами, ваш бизнес в надежных руках.

• Тестирование

  Лаборатории Апогей

  Apogee Labs предлагает широкий выбор типов модульных шасси, используемых для тестирования приложений с различными модулями тестирования канала передачи данных.

• Испытание на летальность, Испытание на арене, Испытание взрывом

  Национальные технические системы

  Чтобы оценить поражающую способность усовершенствованных боеголовок, необходимо точно охарактеризовать распределение массы и скорости осколка боеголовки, а также пространственное распределение избыточного давления взрыва. Оценка поражающей способности усовершенствованных боеголовок требует точной характеристики распределения массы и скорости осколка боеголовки. , а также пространственное распределение избыточного давления взрыва.

• Тестирование SOA, облачное тестирование, тестирование веб-приложений

  SOAtest — Parasoft Corp.

  Автоматизируйте сквозное тестирование критически важных для бизнеса и безопасности транзакций. Parasoft SOAtest широко известен как ведущее решение корпоративного уровня для тестирования API и проверки целостности API. Тщательно тестируйте составные приложения с надежной поддержкой REST и веб-сервисов, а также 120+ лучших в отрасли протоколов/типов сообщений.

• Испытание на молниезащиту и испытание на устойчивость к импульсным перенапряжениям

  Соответствие трапецеидальным искажениям

  Keystone Compliance предлагает инженерные услуги для выполнения стандартных и пользовательских требований к испытаниям на устойчивость к грозовым импульсам и помехоустойчивости. Молниеносные испытания могут быть выполнены в виде одиночных, многократных и многократных испытаний. Прямые молниезащитные испытания обычно требуются для внешних систем самолета.Косвенное тестирование молниезащиты требуется для большей части бортовой электроники, как внутренней, так и внешней. Непрямая молния имитирует вторичные токи и напряжения, которые проходят через схемы и кабели. Испытание также называют испытанием на устойчивость к импульсным перенапряжениям.

• Услуги по тестированию производительности и нагрузочному тестированию

  Enhops Solutions Pvt Ltd.

  Мы в Enhops предлагаем комплексные услуги по тестированию производительности, которые гарантируют доступность, надежность, масштабируемость и скорость систем и приложений наших клиентов.Наш Центр передового опыта по тестированию производительности анализирует требования наших клиентов к производительности, определяет стратегии тестирования производительности, дорожную карту и показатели, оценивает отчеты и предоставляет рекомендации. Наша команда по тестированию обладает глубоким опытом работы с различными открытыми и коммерческими инструментами для тестирования производительности.

• Услуги по тестированию на электростатический разряд и тестированию с защелкой

  Аналитическая группа Эванс®

  EAG является лидером в области испытаний на электростатический разряд (электростатический разряд) и испытаний на фиксацию.Наша высококвалифицированная команда инженеров использует свои ведущие в отрасли знания и многолетний или реальный опыт работы с новейшими полупроводниковыми технологиями, проектированием схем и физикой устройств для оптимизации результатов наших клиентов в отношении электростатического разряда и защелкивания. Модель человеческого тела (HBM) и модель машины (MM), модель заряженного устройства (CDM), блокировка, импульс линии передачи (TLP).

• Испытание на электростатический разряд / испытание на электростатический разряд

  Соответствие трапецеидальным искажениям

  Испытание на электростатический разряд, также известное как испытание на электростатический разряд, является важным испытанием для многих продуктов.Электростатический разряд может вызвать ряд проблем, включая, помимо прочего, механические неисправности, взрывы угольной пыли, взрывы паров топлива и телесные повреждения. Электростатический разряд — это внезапная передача электричества между электрически заряженными объектами. Этот электростатический перенос может быть вызван контактом, пробоем диэлектрика или коротким замыканием. Испытания на электростатический разряд имитируют различные электростатические воздействия, которые оборудование может испытать во время транспортировки или эксплуатации. Воздействие электростатического разряда может быть значительным, независимо от того, является ли электростатический разряд настолько незначительным, что его невозможно обнаружить на слух или зрение, или столь же впечатляющим, как электрические искры или молния.Испытание на электростатический разряд определяет, соответствует ли продукт требованиям зоны защиты от электростатического разряда и процедурам. Производители электроники должны определить меры по снижению электростатического разряда, если их продукция либо подвержена электростатическому разряду, либо может создавать электростатический разряд. Эти меры могут включать создание электростатических защитных зон, свободных от статического электричества, контроль влажности, использование мер по устранению заряда, таких как отказ от сильно заряжающихся материалов и принятие мер по удалению статического электричества, таких как заземление рабочих или требование антистатических устройств.Испытание на электростатический разряд подтверждает, что оборудование работает правильно в соответствии с требованиями испытаний и рабочими процедурами производителя.

• Наборы для тестирования

  Наборы для тестирования — Детектортестеры

  Тестеры

  Solo доступны либо в виде отдельных компонентов, либо в виде полных комплектов, сконфигурированных как по высоте, так и по области применения. Цена полных комплектов обычно меньше суммы составных частей.

• Нагрузочное тестирование и стресс-тестирование

  Дотком-Монитор

  Нагрузочный тест — это запланированный тест для выполнения определенного количества запросов к системе с целью проверки функциональности системы при определенных уровнях одновременных запросов. Нагрузочный тест гарантирует, что веб-система способна обрабатывать ожидаемый объем трафика, поэтому его иногда называют объемным тестированием. Цель нагрузочного теста — доказать, что система может обрабатывать ожидаемый объем с минимальным или приемлемым снижением производительности.Порог приемлемого снижения производительности должен быть определен тестировщиками как некоторое значение, которое считается приемлемым для конечного пользователя, чтобы пользователи не уходили с сайта.

• Юзабилити-тестирование | Проверка внешнего вида и ощущений

  Национальные технические системы

  NTS может помочь вам определить удобство использования вашего продукта, предоставляя анализ конечного пользователя с различным пользовательским опытом (например,г., новичок, средний уровень, эксперт и т. д.). NTS придумала фразу «Взгляд и ощущение» из термина «Дизайн, ориентированный на пользователя» или (UCD) Уэсли Э. Вудсона. Вудсон определил UCD как «практику проектирования продуктов таким образом, чтобы пользователь мог выполнять необходимые задачи по использованию, эксплуатации, обслуживанию и поддержке с минимальным стрессом и максимальной эффективностью». UCD — это углубленный процесс анализа юзабилити как в качественном, так и в количественном отношении, который требует большого количества времени и денег. А на сегодняшнем конкурентном рынке большинство разработчиков не могут себе позволить такой подход.

• Испытание материалов

  Gaynes Labs, Inc.

  *Испытание на истирание*Испытание на адгезию*Темп. Испытание на твердость*Теплопрогиб*Гидростатическое испытание*Испытание на удар*Испытание на жизненный цикл*Испытание на индекс плавления*Испытание на пластичность*Разделение слоев*Содержание смолы*Испытание на резину*Испытание на прочность на сдвиг*Испытание на трещины под напряжением*Испытание на разрыв*Температурное испытание*Растяжение/удлинение* Воздействие УФ-излучения*Влагопоглощение*Испытание древесины

(PDF) Фруктоза-1,6-бисфосфатаза противостоит прогрессированию рака почки

Последовательности HIFα, лишенные ДНК-связывающего мотива bHLH, были клонированы в вектор pBIND

(Promega), который находится в рамке считывания с ДНК-связывающим доменом GAL4 (GBD) на N-конце.

Серия усечений GBD-HIF1α была создана путем удаления указанных мотивов HIF1α.

Аналогичным образом, укорочения GBD-HIF2α были получены путем удаления по отдельности следующих

мотивов из последовательностей HIF2α (1–870): PASA (80–236), PASB (237–331), LINK (332–

395), NODD (396–495), NTAD (496–581), ID (582–830), CTAD (831–870). Конструкции GFP-FIh2

и GFP-PHD2 были получены от доктора Эрика Метцена через Addgene.

Плазмидная трансфекция и вирусная инфекция

Экспрессионные конструкции трансфицировали в линии раковых клеток с использованием реагента Lipofectamine LTX

(Life Technologies) в соответствии с протоколом производителя.Лентивирус

был получен путем совместной трансфекции клеток 293T векторами экспрессии pRSV-Rev, pMD2.G, pMDLg/pRRE и

pLKO.1-puro shRNA или pCDH-puro. Вирус собирали через 48 часов

путем фильтрации вируссодержащей среды через 0,45 мкМ фильтр Steriflip (Millipore). Заражение вирусом

проводили путем инкубации клеток со средой, содержащей указанный вирус и полибрен 8

мкг/мл (Sigma) в течение 24 часов. Клетки восстанавливали в полной среде

в течение 24 часов, а затем отбирали пуромицином в течение 24 часов (анализ мРНК) или 48 часов

(анализ белков и фенотип).Выжившие пулы подвергали указанным экспериментам.

Обратите внимание, что клеткам HK-2, подвергшимся заражению вирусом и отбору пуромицином, обычно требуется 10–

14 дней для восстановления, прежде чем их можно будет подвергнуть экспериментам.

Анализ TCGA RNAseq

Исходные данные RNAseq для 480 опухолей ccRCC и 69 нормальных тканей почек были загружены

из проекта TCGA ccRCC (http://cancergenome.nih.gov) 2 апреля 2013 г. Данные были проанализированы

для дифференциальной экспрессии генов с помощью DeSeq (Bioconductor, версия 2.12).

Экспортированы нормализованные подсчеты, значения p, значения p с поправкой на частоту ложных открытий (p-adj) и

изменения экспрессии для каждого гена. Для проведения анализа наборов генов полный список

из 2752 генов, кодирующих все известные метаболические ферменты человека и

переносчиков, был сгруппирован в функциональные наборы в соответствии с метаболическими путями

, аннотированным KEGG (http://www.genome.jp). /кегг/). Пороговое значение p-adj было установлено равным 0,1

, чтобы исключить гены, не обнаруживаемые последовательно с помощью RNAseq.Для изучения активности HIF

, ассоциированной с опухолью, необработанные данные каждого секвенированного гена были перемасштабированы, чтобы установить медиану равной 1, и активность

HIF была количественно определена путем усреднения нормализованной экспрессии 44 генов-мишеней HIF

, включая те, которые кодируют IGFBP3, EDN2, PFKFB4, FLT1, TFR2, BNIP3L, TGFA,

BNIP3, PGK1, EGLN1, LDHA, EGLN3, CP, TGFB3, PFKFB3, HK1, TFRC, EDN1,

CDKN1A, CA9, ADM1, HMOX1, LOX, SERPINE1 NDRG1, CA12, PDK1, VEGFA,

ERO1L, RORA, P4HA1, MXI1, SLC2A1(GLUT1), STC2, MIF, DDIT4, ENO1, CXCR4,

PLOD1, P4HA2, GAPDH, PGAM1, TMEM45A и PIM94

9004

.

Количественное определение метаболитов

Скорость поглощения глюкозы и секреции лактата определяли с помощью многопараметрической биоаналитической системы YSI 7100

(YSI Life Sciences).