Как выявить клетки крови без ГФИ-связанных белков при ПНГ. Какие преимущества дает использование CD157 в качестве мишени. Почему 5-цветный метод может быть предпочтительнее стандартного 4-цветного. Насколько чувствителен новый метод для обнаружения минорного ПНГ-клона.
Пароксизмальная ночная гемоглобинурия (ПНГ) — редкое приобретенное заболевание крови, вызванное соматической мутацией в гене PIG-A. Эта мутация нарушает синтез гликозилфосфатидилинозитола (ГФИ) — молекулы, прикрепляющей различные белки к поверхности клеток крови. В результате на поверхности клеток ПНГ-клона отсутствуют важные регуляторные белки, что делает эритроциты чувствительными к комплемент-опосредованному лизису.
Современные методы диагностики ПНГ-клона
Диагностика ПНГ основана на выявлении клеток крови, лишенных ГФИ-связанных белков на своей поверхности. Наиболее точным и чувствительным методом для этого является проточная цитометрия.
Международное общество клинической цитометрии (ICCS) разработало стандартизированный протокол 4-цветного анализа для определения ПНГ-клона среди моноцитов и гранулоцитов. Этот метод использует следующую комбинацию антител:
- FLAER-Alexa 488
- CD45-PerCP
- CD15-APC/CD64-APC
- CD24-PE/CD14-PE
Анализ проводится в двух разных пробах периферической крови — одна для определения ПНГ-клона среди моноцитов, другая — среди гранулоцитов.
Новый 5-цветный метод с использованием CD157
Исследователи предложили усовершенствовать стандартный метод, используя CD157 в качестве мишени для определения ПНГ-фенотипа вместо CD24 и CD14. Преимущество CD157 заключается в том, что этот белок экспрессируется одновременно на моноцитах и гранулоцитах.
Новая 5-цветная комбинация антител включает:
- FLAER-Alexa 488
- CD45-PerCP
- CD15-PE-Cy7
- CD64-APC
- CD157-PE
Это позволяет определять ПНГ-клон среди моноцитов и гранулоцитов одновременно в одной пробе крови.
Сравнение стандартного и нового методов
Было проведено сравнительное исследование результатов, полученных стандартным 4-цветным и новым 5-цветным методами. Анализ показал:
- Размер ПНГ-клона, определенный обоими методами, был идентичным как для моноцитов, так и для гранулоцитов
- Наблюдалась высокая корреляция результатов (R2 > 0,99) между стандартным и новым методом
- 5-цветный метод позволил выявить минорный ПНГ-клон с чувствительностью, аналогичной стандартному методу
- Новый метод показал низкий уровень ложноположительных событий в контрольных образцах крови
Преимущества нового метода с использованием CD157
Использование CD157 в качестве маркера ПНГ-фенотипа имеет ряд преимуществ:
- Позволяет анализировать моноциты и гранулоциты в одной пробе, что упрощает и ускоряет процедуру
- Снижает расход реагентов и образцов крови
- Уменьшает вероятность ошибок при подготовке проб
- Может быть особенно полезен при первичном скрининге пациентов из групп риска
Чувствительность метода для выявления минорного ПНГ-клона
Важным показателем любого диагностического метода является его способность выявлять небольшие популяции аномальных клеток. Исследование показало, что новый 5-цветный метод с использованием CD157 способен определять минорный ПНГ-клон с чувствительностью, аналогичной стандартному 4-цветному методу.
Это означает, что метод позволяет выявлять даже небольшие популяции ПНГ-клеток, что критически важно для ранней диагностики заболевания и мониторинга эффективности терапии.
Применение нового метода в клинической практике
Новый 5-цветный метод с использованием CD157 может найти широкое применение в клинической практике, особенно в следующих случаях:
- Первичный скрининг пациентов из групп риска развития ПНГ
- Диагностика ПНГ у пациентов с неясной анемией или тромбозами
- Мониторинг размера ПНГ-клона в процессе лечения
- Оценка эффективности терапии ПНГ
- Выявление резидуального ПНГ-клона после трансплантации гемопоэтических стволовых клеток
Простота и высокая информативность метода делают его привлекательным для внедрения в рутинную лабораторную диагностику.
Заключение
Новый 5-цветный метод определения ПНГ-клона с использованием CD157 показал высокую корреляцию результатов со стандартным 4-цветным методом. При этом он обладает рядом преимуществ, включая возможность одновременного анализа моноцитов и гранулоцитов в одной пробе крови. Метод демонстрирует высокую чувствительность при выявлении минорного ПНГ-клона и может быть рекомендован для внедрения в клиническую практику, особенно при первичном скрининге пациентов из групп риска развития ПНГ.
Серия 157 — Сезон 1 — Клон — Мелодрамы — Сериалы
- Сезон: 1
- Номер серии: 157
- Продолжительность: 45 мин
- Год выпуска: 2002
Миру рассказывает Журе, что Шанди снял квартиру. Жура очень недовольна, что ее сын снова будет жить вместе с Мел. Нанду по телефону предлагает Мел очередную дозу наркотика, но девушка отказывается. Мел собирает вещи и уезжает из дома, намеренно не говоря, куда именно. Зейн и Ивети прилетают в Фес. Жади очень волнуется. Она надеется, что Лукас уже приехал. Жади говорит Саиду, что хочет купить подарок сыну Рании. Саид, услышав эти слова, моментально отпускает жену вместе с Зораиди. В городе Жади оставляет служанку и убегает искать Лукаса. Прогуливаясь по улицам города, Зейн замечает… Жади! Он не может отвести взгляда от незнакомки. Жади все-таки удается встретить Лукаса и она успевает назначить ему встречу в развалинах. Дуния и еще одна из жен Али, устраивают мужу жуткий скандал, обвиняя его в недостатке внимания. Али их прогоняет, обещая всем наказание. Зораиди очень переживает из-за долгого отсутствия Жади. Жади и Лукас благополучно встречаются в развалинах. Жади передает возлюбленному паспорт и другие документы. Лукас говорит, что он сделал все необходимое, чтобы Саид не смог силой вернуть жену; он клянется, что уже ничто не заствит его передумать. Мел приходит к Шанди с чемоданом. Она переживает, что Жура против ее отношений с Шанди. Далва рассказывает Маизе, что Мел уехала и не сказала куда. Маиза решает пустить в ход новую «тактику»: изображать полное безразличие по отношению к дочери… Лидиани требует от Телминьи рассказать все, что та знает о Мел. Креуза приносит Одетти и Карле «образец». Одетти приказывает дочери положить конвертик в холодильник… Леонидас приходит в бешенство, узнав, что Лукас уехал в Марокко из-за «очередной юбки». Снова увидев фляжку у Лобату, Карол решает расстаться с ним. Леонидас приказывает Кларисси срочно разыскать Лукаса. Жади и Лукас занимаются любовью в развалинах. Саид встречает Зораиди на улице. Служанка как всегда пытается выгораживать Жади. Саид решает тоже подождать жену. Зейн рассказывает Ивети, что на улице он встретил очень красивую женщину. Ивети вспоминает о счастливах моментах, проведенных в Фесе вместе с Леонидасом много лет назад, о трагической случайности с Диогу. Ивети рассказывает Зейну о незнакомце в марокканском костюме, которого она встретила в клубе, он напомнил ей пустыню… Альбиери и Лео прилетают в Фес. Али расскавает Сумайе о своем друге, который захотел сравняться с Аллахом. Жади все не возвращается, Зораиди сильно переживает, а Саид жутко злится. Жади возвращается; в доказательство своей невиновности она предъявляет мужу подарок для сына Рании. В подзорную трубу Амин наблюдает за раздевающейся Карлой. За этим занятием его застает Абдулл, старика это приводит в полный восторг, он решает, что мальчик наблюдает за звездами. Абдулл рассказывает Мохаммеду, какой у него прекрасный сын, увлекающийся астрономией. Мохаммед дарит сыну книгу о созвездиях, приказывая выучить первую главу, а затем пересказать… Самира очень рада такому «подарочку» для брата. Анинья приглашает Назиру на праздник. Абдулл говорит Мохаммеду, что Назира все больше напоминает ему женщин Каира. Старикашка в присутствии Аниньи отчитывает Назиру. Назира говорит Латиффе, что у него сильно болит голова; женщина уходит в свою комнату и просит ни при каких обстоятельствах ее не беспокоить… Деуза сообщает Эдне, что Альбиери и Лео прятались у Матьоли. Эдна просит Деузу немедленно проводить ее к священнику.
Клон 157 серия смотреть онлайн на русском языке
Добавлена 1 сезон 250 серия
Все серии и сезоны
Рейтинг : 7.9
Проголосовало людей:
Смотреть Клон 157 серию
Это интересно:
Легендарный Бразильский сериал «Клон» Все серии на русском языке В 2001 году бразильскими кинематографистами был выпущен в свет один из самых успешнейших телевизионных сериалов, сценарий для которого был написан Глорией Перес. Премьера сериала, который получил название «Клон», состоялась 1 октября 2001 года на телевизионном канале «Глобо». В этом киноромане впервые была затронута этическая сторона темы клонирования человека, а также, взгляд на эту проблему сквозь призму мусульманской морали. Без преувеличения его можно назвать историей бразильско-мусульманской любви. Трудности с прокатом могли возникнуть уже в самом начале демонстрации сериала, так как он появился на голубых экранах всего через пару недель после трагически известного террористического акта в Нью-Йорке. Создатели сериала всерьез опасались, что поднявшаяся волна возмущения против мусульманского фундаментализма повлияет на его рейтинги. Однако этого не произошло. Зрителям сразу же пришлась по душе эта мелодраматическая история. Сама история начинается в 80-х годах в Рио-де-Жанейро. Потерявшая родителей мусульманская девушка Жади, роль которой играет актриса Джованна Антонелли, вынуждена вернуться на свою историческую родину в Марокко, где ее воспитание должен продолжить родной дядя Али (Стенио Гарсия). В этом Вы сами сможете убедиться, если захотите сериал «Клон» смотреть онлайн. Так как Жади всю жизнь прожила в Бразилии, то о принципах мусульманской семьи она знает совсем немного. В это же время из Бразилии в Марокко приезжает на отдых семья богатого фабриканта Леонидаса Феррас (Режиналдо Фария). У Леонидаса два сына близнеца – Лукас и Диого (актер Мурило Бенисио). Случайна встреча Жади и Лукаса рождает между ними глубокое чувство, которое не могут разрушить даже мусульманские традиции. Жади ради любви готова сбежать с Лукасом обратно в Бразилию. Но внезапная гибель в авиакатастрофе Диого, ломает все планы молодой пары и заставляет Лукаса отложить побег. В это время друг семьи и крестный отец Диого доктор Аугусто Албиери, который всю жизнь занимается проблемами клонирования животных, решает попробовать воссоздать образ любимого крестного сына из донорской клетки Лукаса. Эта попытка приносит много недоразумений и разочарований в жизнь героев сериала.Смотрите сериал Клон 157 серия онлайн бесплатно на нашем сайте. Видео доступно на русском языке полностью, в хорошем качестве hd 720 без регистрации и смс. Не забывайте оставлять комментарии и делиться ссылкой на сериал с друзьями. Если серия не вышла в русская озвучка, то она доступна Клон 157 серия субтитры.
IM2285, TCR Vβ5.1-PE Conjugated Antibody, IMMU 157, 1 mL, ASR
IM2285
Продукт добавлен в корзину
Ошибка
Also called TCRBV5S1 Vβ5 is a multimembered subfamily of the T cell receptor. Vβ5.1 is expressed by 4.2% to 7.2% of peripheral CD3+ cells in normal blood. This sequence is also referred to as TRBV5-1 (based on the IMGT gene nomenclature).
Технические характеристики
НЕКОТОРЫЕ ПРОДУКТЫ МОГУТ БЫТЬ НЕДОСТУПНЫ В РЯДЕ СТРАН. ДОСТУПНОСТЬ И РЕГУЛЯТОРНЫЙ СТАТУС ПРОДУКЦИИ ЗАВИСЯТ ОТ СТАТУСА ЕЕ РЕГИСТРАЦИИ В СООТВЕТСТВИИ С НОРМАМИ МЕСТНОГО ЗАКОНОДАТЕЛЬСТВА.
Перечень регуляторных статусов продукции:
IVD: In Vitro Diagnostic. Данная продукция предназначена для клинической диагностики in vitro.
ASR: Analyte Specific Reagents. Специфические аналитические реагенты. Аналитические и рабочие характеристики не установлены.
CE: Продукция предназначена для клинической диагностики in vitro и соответствует директиве Европейского союза (98/79/EC). (Примечание: Оборудование с маркировкой CE может соответствовать другим директивам Европейского союза.)
RUO: Research Use Only. Данная продукция предназначена только для научных исследований и не предназначена для клинической диагностики.
LUO: Laboratory Use Only. Продукция предназначена только для лабораторного использования.
Без регуляторного статуса: Немедицинские изделия и изделия, не требующие обязательной регистрации в регуляторных органах. Данная продукция не предназначена для клинического применения.
| Позиция | Кол-во | Ед. изм. | Цена | Сумма | Доля |
|---|---|---|---|---|---|
| 1. Антитела моноклональные мышиные к человеческим CD99, Продукты гена MIC2, Маркер Саркомы Юинга, клон 12E7 | 1 | упак | 21 170,00 ₽ | 21 170,00 ₽ | 0,75% |
| 2. Антитела моноклональные мышиные к человеческим Ki-67 Антиген, клон MIB-1 | 1 | упак | 20 701,00 ₽ | 20 701,00 ₽ | 0,74% |
| 3. CD23 клеточный маркер ИВД, антитела | 1 | упак | 69 360,01 ₽ | 69 360,01 ₽ | 2,46% |
| 4. CD33 клеточный маркер ИВД, антитела | 1 | упак | 99 580,00 ₽ | 99 580,00 ₽ | 3,54% |
| 5. CD117 (c-kit) клеточный маркер ИВД, антитела | 1 | упак | 116 580,00 ₽ | 116 580,00 ₽ | 4,14% |
| 6. CD3 клеточный маркер ИВД, антитела | 1 | упак | 19 343,01 ₽ | 19 343,01 ₽ | 0,69% |
| 7. Кроличьи поликлональные антитела к IgA | 1 | упак | 17 921,00 ₽ | 17 921,00 ₽ | 0,64% |
| 8. Мышиные моноклональные антитела к CD163, клон MRQ-26 | 1 | упак | 74 100,00 ₽ | 74 100,00 ₽ | 2,63% |
| 9. Антитела моноклональные мышиные к человеческим CD138, клон MI15 | 1 | упак | 20 701,00 ₽ | 20 701,00 ₽ | 0,74% |
| 10. p53 опухолевый белок ИВД, набор, иммуногистохимическая реакция с ферментной меткой. | 1 | набор | 20 701,00 ₽ | 20 701,00 ₽ | 0,74% |
| 11. Фильтр угольный для гистопроцессора | 2 | упак | 48 832,00 ₽ | 97 664,00 ₽ | 3,47% |
| 12. Раствор для восстановления антигена, низкий pH | 1 | упак | 63 549,00 ₽ | 63 549,00 ₽ | 2,26% |
| 13. Система детекции, высокий pH | 1 | упак | 346 100,00 ₽ | 346 100,00 ₽ | 12,29% |
| 14. Антитела поликлональные кроличьи к Терминальной Деоксинуклеотидил Трансферазе | 1 | упак | 59 860,00 ₽ | 59 860,00 ₽ | 2,13% |
| 15. Антитела поликлональные кроличьи к SOX-11, клон MRQ-58 | 1 | упак | 107 340,00 ₽ | 107 340,00 ₽ | 3,81% |
| 16. Мышинные моноклональные антитела к Podoplanin D2-40 | 1 | упак | 87 713,00 ₽ | 87 713,00 ₽ | 3,12% |
| 17. Кроличьи моноклональные антитела PD-L1 (ZR3) | 1 | упак | 123 970,00 ₽ | 123 970,00 ₽ | 4,40% |
| 18. Кроличьи моноклональные антитела c-Myc EP121 | 1 | упак | 74 260,00 ₽ | 74 260,00 ₽ | 2,64% |
| 19. Антитела моноклональные мышиные к человеческим В-Клеточный Специфический Белок-Активатор, клон DAK-Pax5 | 1 | упак | 20 701,00 ₽ | 20 701,00 ₽ | 0,74% |
| 20. Антитела моноклональные мышиные к человеческим MUM1 Протеин, клон MUM1p | 1 | упак | 20 701,00 ₽ | 20 701,00 ₽ | 0,74% |
| 21. Карандаш гидрофобный для ИГХ | 4 | шт | 24 030,00 ₽ | 96 120,00 ₽ | 3,41% |
| 22. Антитела моноклональные мышиные к человеческому Васкулярный Эндотелиальный Ростовой Фактор, клон VG1 | 1 | упак | 50 727,00 ₽ | 50 727,00 ₽ | 1,80% |
| 23. Антитела моноклональные мышиные к человеческому Плазматическим Клеткам, клон VS38c | 1 | упак | 114 400,00 ₽ | 114 400,00 ₽ | 4,06% |
| 24. Антитела моноклональные мышиные к человеческому Миелоидному/Гистиоцитарному Антигену, клон MAC 387 | 1 | упак | 114 400,00 ₽ | 114 400,00 ₽ | 4,06% |
| 25. Антитела моноклональные мышиные к человеческому Волосато- Клеточная Лейкемия, клон DBA.44 | 1 | упак | 114 400,00 ₽ | 114 400,00 ₽ | 4,06% |
| 26. Антитела моноклональные мышиные к человеческому Вирус Иммунодефицита, р24, клон Kal-1 | 1 | упак | 63 560,00 ₽ | 63 560,00 ₽ | 2,26% |
| 27. Антитела моноклональные мышиные к человеческим Фолликулярным Дендритным Клеткам, клон CNA.42 | 1 | упак | 114 400,00 ₽ | 114 400,00 ₽ | 4,06% |
| 28. Антитела моноклональные мышиные к человеческому ЭФРР Дикого типа, клон DAK-h2-WT | 1 | упак | 53 373,00 ₽ | 53 373,00 ₽ | 1,90% |
| 29. Кроличьи поликлональные антитела к GLUT1 | 1 | упак | 45 819,00 ₽ | 45 819,00 ₽ | 1,63% |
| 30. Антитела моноклональные мышиные к человеческому CD35, клон Ber-MAC-DRC | 1 | упак | 114 400,00 ₽ | 114 400,00 ₽ | 4,06% |
| 31. Антитела моноклональные мышиные к человеческим CD2, клон AB75 | 1 | упак | 38 970,00 ₽ | 38 970,00 ₽ | 1,38% |
| 32. Антитела моноклональные мышиные к человеческому Гликофорин С, клон Ret40f | 1 | упак | 114 450,00 ₽ | 114 450,00 ₽ | 4,06% |
| 33. Мышинные моноклональные антитела к вирусу Эпштейна-Барра | 1 | упак | 26 690,00 ₽ | 26 690,00 ₽ | 0,95% |
| 34. Антитела моноклональные мышиные к человеческому BCL6 онкопротеин, клон GL191E/А8 | 1 | упак | 83 880,01 ₽ | 83 880,01 ₽ | 2,98% |
| 35. Антитела моноклональные мышиные к человеческим BCL2 Онкопротеин, клон 124 | 1 | упак | 20 701,00 ₽ | 20 701,00 ₽ | 0,74% |
| 36. Миелопероксидаза лейкоцитов ИВД, набор, иммуногистохимическая реакция с ферментной меткой | 1 | набор | 20 701,00 ₽ | 20 701,00 ₽ | 0,74% |
| 37. Мышиные моноклональные антитела к CD31, клон JC70 | 1 | упак | 43 120,00 ₽ | 43 120,00 ₽ | 1,53% |
| 38. Антитела моноклональные мышиные к человеческим CD56, клон 123C3 | 1 | упак | 20 701,00 ₽ | 20 701,00 ₽ | 0,74% |
| 39. Антитела моноклональные мышиные к человеческим CD34 Class II, клон QBEnd 10 | 1 | упак | 20 701,00 ₽ | 20 701,00 ₽ | 0,74% |
| 40. CD20 клеточный маркер ИВД, антитела | 1 | упак | 20 670,00 ₽ | 20 670,00 ₽ | 0,73% |
| 41. Антитела моноклональные мышиные к человеческим CD10, клон 56C6 | 1 | упак | 41 570,00 ₽ | 41 570,00 ₽ | 1,48% |
Новые возможности диагностики клона пароксизмальной ночной гемоглобинурии Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»
О КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015 УДК 616.633.963.42-039.31-076.5
НОВЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ДИАГНОСТИКИ КЛОНА ПАРОКСИЗМАЛЬНОЙ НОЧНОЙ ГЕМОГЛОБИНУРИИ
Гальцева И.В. 1, Фидарова З.Т. 1, Борисов В.И. 2, Михайлова Е.А. 1
1ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России, 125167, г. Москва, Россия; 2ООО Алексион Фарма,
Россия
Резюме. Современная диагностика клона пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ) основана на выявлении с помощью проточной цитометрии клеток крови, не имеющих на своей поверхности гликозилфосфатидилинозитол (ГФИ), связанный белок. Международным обществом клинической цитометрии (ICCS) был предложен протокол 4-цветного метода диагностики, определяющего ПНГ-клон среди моноцитов и гранулоцитов в двух разных пробах периферической крови. Экспрессия белка CD157 одновременно на моноцитах и гранулоцитах позволяет использовать его как мишень для определения ПНГ-фенотипа вместо CD24 и CD14 и таким образом усовершенствовать метод выявления ПНГ-клона. В данной работе выполнено сравнение результатов, полученных при использовании стандартного метода диагностики ПНГ-клона с 4-цветным сочетанием антител (FLAER-Alexa 488, CD45-PerCP, CD15-APC/ CD64-APC, CD24-PE/CD14-PE) и метода с использованием 5-цветного набора антител (FLAER-Alexa 488, CD45-PerCP, CD15-PE-Cy7, CD64-APC, CD157-PE) для одновременного определения ПНГ-клона среди моноцитов и гранулоцитов в одной пробе. Размер ПНГ-клона в обеих популяциях клеток был идентичен и имел высокую корреляцию (R2 > 0,99) между стандартным 4-цветным набором антител и 5-цветной комбинацией с антителами к CD157. Новая 5-цветная комбинация позволила определить с аналогичной чувствительностью минорный ПНГ-клон и имела низкий уровень ложноположительных событий в контрольных образцах крови. Важно, что метод с использованием моноклональных антител против CD157 может иметь преимущество при первичном скрининге пациентов из групп риска.
Ключевые слова: пароксизмальная ночная гемоглобинурия; ПНГ-клон; проточная цитометрия;
CD157.
Для цитирования: Гематология и трансфузиология. 2015; 60 (2): 6-9.
NEW POTENTIALITIES IN THE DIAGNOSIS OF PAROXYSMAL NOCTURNAL HEMOGLOBINURIA CLONE
Galtseva I.V.1, Fidarova Z.T.1, Borisov V.I .2, Mikhailova E.A.1 hematological Research Center, 125167, Moscow, Russia; 2Alexion Pharma, Moscow Region, Russia
Summary. Modern diagnosis of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) clone is based on the detection (by flow cytometry) of blood cells free from surface glycosylphosphatidylinositol (GPI)-bound protein. The International Clinical Cytometry Society (ICCS) suggests a 4-color diagnostic protocol, detecting the PNG clone among monocytes and granulocytes in two different specimens of peripheral blood. Simultaneous expression of CD157 protein on monocytes and granulocytes suggests using it as a target for detection of PNH phenotype instead of CD24 and CD14 and thus improve the method for detection of PNH clone. We compared the results of PNH clone detection by 4-color combination of antibodies (FLAER-Alexa 488, CD45-PerCP, CD15-APC/CD64-APC, and CD24-PE/CD14-PE) and by 5-color set of antibodies (FLAER-Alexa 488, CD45-PerCP, CD15-PE-Cy7, CD64-APC, and CD157-PE) for simultaneous detection of PNH clone among monocytes and granulocytes in the same sample. The size of PNH clone was identical in both cell populations and the results of the standard 4-color and 5-color combinations of antibodies to CD157 were in high correlation (R2>0.99). The new 5-color test detected the minor PNH clone with sensitivity similar to the standard test with a low level of false-positive events in control blood samples. Importantly that the use of monoclonal antibodies to CD157 could be preferable in primary screening of risk group patients.
Key words: paroxysmal nocturnal hemoglobinuria; PNH clone; flow cytometry; CD157. Citation: Gematologiya i transfuziologiya. 2015; 60 (2): 6-9. (in Russ)
Пароксизмальная ночная гемоглобинурия (ПНГ) -редкое клональное заболевание, при котором в результате соматической мутации нарушается синтез гликозилфосфатидилинозитола (ГФИ) — гликолипи-да, прикрепляющего белки к клеточной мембране. Мутация в гене ГФИ приводит к уменьшению или полному исчезновению ГФИ-связанных регулиру-
Для корреспонденции:
Гальцева Ирина Владимировна, кандидат медицинских наук, заведующая лабораторией иммунофенотипирования клеток крови и костного мозга ФГБУ Гематологический научный центр Минздрава России
Адрес: 125167, Москва, Новый Зыковский проезд, д. 4. Телефон: +7(495) 614-90-42 E-mail: [email protected]
Corresponding author:
Galtseva Irina, MD, PhD ([email protected])
ющих белков системы комплемента CD55 и CD59, которые определяют чувствительность клеток к ком-плементопосредованному лизису. Хроническая неконтролируемая активация комплемента приводит к развитию внутрисосудистого гемолиза, тромботиче-ских осложнений, хронической болезни почек и др. [1, 2]. Кроме того, ПНГ-клон выявляется и при так называемых синдромах костномозговой недостаточности, к которым относят апластическую анемию (АА) и миелодиспластические синдромы (МДС) из группы низкого риска. Ряд исследователей [3, 4] рассматривают этот феномен в качестве благоприятного прогностического маркера ответа на иммуносупрес-сивную терапию (ИСТ). Поэтому тестирование периферической крови на наличие ПНГ-клона у пациентов с такими диагнозами, как АА, МДС, и при со-
Таблица 1
Многоцветный набор реагентов для ПНГ-типирования лейкоцитов
Набор моноклональных Клеточные популяции
антител гранулоциты моноциты эритроциты
4-цветный CD45-PerCP (2D1), BD CD15-APC (HI98), BD D24-PE (ALB9), BC FLAER-Alexa488, CED CD45-PerCP (2D1), BD CD64-APC (10.1), BD CD14-PE (RMO52), BC FLAER-Alexa488, CED CD235a (гликофорин A)-FITC (11E4B-7-6), BC, CD59-PE (MEM-43), Invitrogen
5-цветный CD45-PerCP (2D1), BD CD15-PE-Cy7 (HI98), BD
CD157-PE (eBioSY11B5), eBio FLAER-Alexa488, CED
Примечание. BD — «Becton Dickinson», США, BC — «Beckman Ci стояниях, проявляющихся гемолизом и цитопенией, должно обязательно входить в комплекс диагностических мероприятий [5-7].
Последние методические руководства по диагностике ПНГ-клона рекомендуют использовать проточную цитометрию как золотой стандарт. Принцип метода основан на выявлении в периферической крови клеток с ПНГ-фенотипом, т.е. эритроцитов, гранулоцитов и моноцитов, на поверхности которых в связи с полным (III тип) или частичным (II тип) отсутствием ГФИ-якоря отсутствуют белки ГФИ-комплекса. Процентное отношение данных клеток в каждой клеточной линии определяет размер ПНГ-клона среди эритроцитов, гранулоцитов и моноцитов. Обязательным условием современной диагностики ПНГ-клона среди лейкоцитов является использование реагента FLAER [8]. FLAER непосредственно связывается с ГФИ-якорем, и его отсутствие позволяет точно выявить ПНГ-клон. Для большей специфичности и чувствительности дополнительно применяют антитела против ГФИ-белков, которые специфически экспрессируются на определенных типах клеток: CD24 — на гранулоцитах, CD14 — на моноцитах [9]. При анализе только одновременное отсутствие FLAER и одного из антител против ГФИ-связанных белков позволяет точно определить размер ПНГ-клона [10]. Использование сертифицированного метода позволяет сопоставлять результаты, полученные в разных лабораториях [11].
Предложенное Международным обществом клинической цитометрии практическое руководство по диагностике ПНГ [8] включает измерение клона среди гранулоцитов, моноцитов и эритроцитов. Для каждой популяции клеток происходит измерение в отдельной пробирке со своим определенным набором реагентов, что занимает длительное время при
;r», США, CED — «Cedarlane», Канада, eBio — «eBioscience», США. пробоподготовке и анализе. Основываясь на использовании такого реагента, как FLAER, общая методика проведения диагностики с помощью проточной цитометрии продолжает совершенствоваться и оптимизироваться.
Белок CD157 является ГФИ-связанным и экс-прессируется как на моноцитах, так и гранулоци-тах, что теоретически позволяет использовать его вместо предложенных в руководстве CD24/CD14. Практическое применение метода с использованием CD157 и FLAER [12] показало более четкое разделение гранулоцитов и моноцитов на II тип (частичное отсутствие экспрессии ГФИ-белков) и III тип (полное отсутствие экспрессии ГФИ-белков). Однако в настоящее время клиническое значение выявления лейкоцитов II типа неизвестно, но их важно включать для оценки размера ПНГ-клона.
Целью данной работы является проведение сравнительного исследования результатов тестирования стандартным 4-цветным методом и методом с использованием антител к ГФИ-белку CD157, что позволит создать 5-цветный набор реагентов для определения ПНГ-клона на моноцитах и гранулоцитах в одной пробирке и таким образом уменьшить трудоемкость метода диагностики ПНГ-клона и снизить расход моноклональных антител.
Материалы и методы
В исследование включены 35 больных (22 женщины и 13 мужчин) в возрасте от 15 до 66 лет: 32 больных АА, 2 — ПНГ, 1 — МДС, которым проводили обследование в ФГБУ Гематологический научный центр (ГНЦ) Минздрава России (Москва). У всех пациентов ранее был выявлен ПНГ-клон стандартным методом проточной цитометрии. В контрольную группу вкючили 5 доноров в возрасте от 23 до 40 лет и 7 больных АА без ПНГ-клона в возрасте от 19 до 29 лет.
Рис. 1. Сравнение стандартного 4-цветного метода (а, б) выявления ПНГ-клона с использованием CD24 для гранулоцитов и CD14 для моноцитов и метода с использованием 5-цветного набора реагентов с CD157 (в, г).
Проведено сравнение стандартного 4-цветного метода для определения размера ПНГ-клона среди моноцитов (реагенты FLAER, CD14, CD64, CD45) и гранулоцитов (реагенты FLAER, CD24, CD15, CD45) с 5-цветным методом, при котором использовали антитела против ГФИ-белка CD157 с целью детекции обеих популяций клеток в одной пробирке (FLAER, CD157, CD15, CD64, CD45) (табл. 1).
Для выявления ПНГ-эритроцитов цельную кровь предварительно разбавляли Cellwash (BD) в 100 раз, затем отбирали 50 мкл и добавляли моноклональные анти-CD235 и анти-CD59-антитела в объеме согласно указаниям производителя, инкубировали 20 мин при комнатной температуре в темноте с последующей двойной отмывкой Cellwash («BD», США) при 1000 об/мин в течение 5 мин.
Для определения ПНГ-клона среди лейкоцитов цельную кровь предварительно лизировали OptiLyse («BD», США), согласно инструкции производителя, затем осаждали при 1000 об/мин в течение 5 мин. Осадок встряхивали и затем клетки разносили по трем цитометрическим пробиркам: в одну добавляли комбинацию линейно-специфичных антител, FLAER и CD157, в две другие добавляли также комбинацию линейно-специфичных антител, FLAER и ГФИ-связывающие антитела для моноцитов и гранулоцитов (см. табл. 1). Антитела добавляли в объеме согласно инструкции производителя, инкубировали в течение 20 мин в темноте при комнатной температуре, затем отмывали Cellwash («BD», США) при 1000 об/мин 5 мин.
Полученные образцы анализировали на проточном ци-тометре FACS Canto II («BD», США).
Выделение гранулоцитарного гейта проводили по параметрам каналов светорассеяния и показателям экс-
прессии CD45, CD15 и бокового светорассеяния. Анализ экспрессии FlAER и CD24, FlAER и CD157 проводили с помощью точечных графиков. Моноциты выделяли также по параметрам каналов светорассеяния и показателям экспрессии CD45 и CD64 и бокового светорассеяния. Определение экспрессии FlAER и CD14, FlAER и CD157 на моноцитах проводили с помощью точечных графиков. ПНГ-гранулоциты/ПНГ-моноциты находились в левом нижнем квадранте точечных графиков, нормальные грану-лоциты/моноциты — в правом верхнем. Получено хорошее разделение популяции ПНГ-клеток и нормальных гранулоцитов и моноцитов (рис. 1) и сопоставимые значения ПНГ-клона при использовании разных методик как среди гранулоцитов (см. рис. 1, а, в: 45,6% против 46,7%), так и среди моноцитов (см. рис. 1, б, г: 55,5% против 54,27%).
Корреляцию между методами рассчитывали с помощью линейного регрессионного анализа с использованием метода наименьших квадратов. Однако сильная корреляция двух величин еще не означает их совпадение, сходство между ними. Учитывая данный факт, сравнение результатов, полученных двумя методами, проводили с помощью линейного регрессионного анализа. Систематическую ошибку (bias) рассчитывали как среднее различий между двумя методами в определении показателя ПНГ-клона среди гранулоцитов и моноцитов отдельно. Пределы соглашения (Limits of Agreement — LOA) между двумя методами для 95% доверительного интервала (confidence interval — CI) рассчитывали как bias ± 2 стандартных отклонения. Сравнение систематической ошибки и LOA проводили с помощью метода Бленда-Альтмана [13], процентную ошибку определяли как отношение двух стан-
100-
90″
80-
et 70-
ш
60-
LL
1 50-
Ю 40″
5
о зо-
SS 20″
ю-
0
40 60 % CD24-/FLAER-
100
60 100 % С014-Л=1-АЕ1Ч-
Рис 2. Корреляционная прямая между результатами, полученными при использовании реагентов CD24″/FLAER» против CD157″/FLAER» для гранулоцитов и CD14″/FLAER» против CD157-/FLAER- для моноцитов.
8
б н
4 2 0 -.. -2 -4 -6 -i -8 —10-12 Н -14-16-20
а.
LU <
о
о +
к.
LU
5
■ +95%CL (6,059) -+1.96SD (4,618)
■ -95%CL (3,177)
о——+95%CL
— Bias
4 -i
3 —
2 — «»»
1 —
0——
-1 —2 — —3 —4—
fcp.271 95%CL (-2,
Щ05)
720)
-■ +95%CL (-2,720) —1,96SD (-5,160) — —95%CL (-6,601)
0 20 40 60 80 100 120 CD14/FLAER*+CD 157/FLAER* 1, %
б
+95%CL (6,059) +1,96%SD (2,169) -95%CL (1,531)
+95%CL (0,3935) . Bias (0,2916) -95%CL (0,3345)
+95%CL (-1,450) -1.96SD (-2,110) -95%CL (-2,741)
-20 0 20 40 60 80 100 CD14/FLAER4-CD157/FLAERM, %
120
Рис. 3. Метод Бленда-Альтмана для сравнения ПНГ-клона среди гранулоцитов (а) и моноцитов (б), определенного стандартным 4-цветным методом и с применением СD157.
Таблица 2
Среднее значение ПНГ-клона в популяции лейкоцитов пациентов разных групп в зависимости от метода исследования (М ± т)
Размер ПНГ-клона среди лейкоцитов, определенный 4-цветным методом ПНГ-клон среди гранулоцитов, % ПНГ-клон среди моноцитов, %
CD24-/FLAER- CD157VFLAER CD14-/FLAER- CD157-/FLAER-
0-0,99% 0,19 ± 0,064 0,376 ± 0,087 0,323 ± 0,045 0,378 ± 0,05
1-9,99% 3,98 ± 0,570 3,8 ± 0,70 4,38 ± 0,72 4,16 ± 0,72
более 10% 69,27 ± 10,7 73,26 ± 10,05 60,0 ± 9,70 58,52 ± 9,97
дартных отклонений парных различий к среднему значению ПНГ-клона, определенному стандартным 4-цветным методом. В соответствии с критериями L. Critchley и J. Critchley [14] процентная ошибка менее 30% свидетельствует о допустимых различиях между методами.
Результаты и обсуждение
При проведении исследования клона ПНГ-клеток среди лейкоцитов была выявлена высокая корреляция между результатами, полученными двумя методами. Оба метода показали высокую чувствительность определения размера ПНГ-клона в пределах от 0 до 99,3% (min-max). Коэффициент корреляции составил для гранулоцитов R2 = 0,9956 и для моноцитов R2 = 0,9992 (рис. 2).
Методом Бленда-Альтмана установлено, что при измерении гранулоцитарного ПНГ-клона (рис. 3, а) процентная ошибка составила 22,9%. Для моноцитар-ного ПНГ-клона (рис. 3, б) процентная ошибка — 9,1%. Таким образом, процентная ошибка между стандартным методом определения ПНГ-клона и методом с использованием CD157 для определения ПНГ-клона среди гранулоцитов и моноцитов была менее 30% (22,9 и 9,1% соответственно), что свидетельствует о допустимых различиях между методами.
С целью сравнения двух методов больные были распределены в зависимости от размера ПНГ-клона по гранулоцитам, определенным стандартным методом, на группы: от 0 до 1%, 1-10% и 10-100%. Результаты представлены в табл. 2, из которой видно, что при измерении стандартным методом при размере клона менее 1% гранулоцитарный клон был почти в 2 раза меньше моноцитарного. Однако различие это статистически незначимо (р = 0,14), вероятно, вследствие небольшого количества наблюдений. С антителами к CD157 эти различия исчезают (см. табл. 2). У больных со значением ПНГ-клона от 1 до 10% размер ПНГ-клона, определенного 5-цветным методом, среди гранулоцитов был несколько меньше, чем среди моноцитов, и эти различия были одинаковы при использовании обеих методов. В группе с ПНГ-клоном больше 10% также не было различий в размерах ПНГ-клона между гранулоцитами и моноцитами, как при измерении классическим методом, так и с антителами к CD157.
Результаты определения ПНГ-клона в контрольной группе показали идентичность двух методов и не привели к ложноположительным результатам по выявлению ПНГ-клона как среди доноров, так и среди больных АА без ПНГ-клона.
Результаты выявления ПНГ-клона, полученные при применении нового метода с использованием моноклональных антител к CD157, сопоставимы с результатами стандартного метода. Однако примене-
ние антител к CD157 имеет важное техническое преимущество: определение размера ПНГ-клона среди гранулоцитов и моноцитов происходит в одной пробирке с использованием 5-цветной комбинации, что значительно уменьшает время выполнения исследования и расход антител в отличие от стандартной методики с использованием 2 пробирок и 4-цветной комбинации. Анализ полученных данных позволяет рекомендовать метод с антителами CD157 для выявления и мониторинга минорного ПНГ-клона (менее 1%) у больных АА и МДС.
ЛИТЕРАТУРА [REFERENCES]
1. Hill A., Richards S.J., Hillmen P. Recent developments in the understanding and management of paroxysmal nocturnal haemoglobinuria. Br. J. Haematol. 2007; 137(3): 181-92.
2. Parker C., Omine M., Richards S., Nishimura J., Bessler M., Ware R., et al. Diagnosis and management of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Blood. 2005; 106(12): 3699-709.
3. Nakao S., Sugimori C., Yamazaki H. Clinical significance of a small population of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria-type cells in the management of bone marrow failure. Int. J. Hematol. 2006; 84(2): 118-22.
4. Kulagin A., Lisukov I., Ivanova M., Golubovskaya I., Kruchkova I., Bondarenko S., et al. Prognostic value of paroxysmal nocturnal haemo-globinuria clone presence in aplastic anaemia patients treated with combined immunosuppression: results of two-centre prospective study. Br. J. Haematol. 2014; 164(4): 546-54.
5. Lewis S.M., Dacie J.V. The aplastic anaemia-paroxysmal nocturnal haemoglobinuria syndrome. Br. J. Haematol. 1967; 13(2): 236-51.
6. Dunn D.E., Tanawattanacharoen P., Boccuni P., Nagakura S., Green S.W., Kirby M.R. et al. Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria cells in patients with bone marrow failure syndromes. Ann. Intern. Med. 1999; 131(16): 401-8.
7. Sugimori C., Mochizuki K., Qi Z., Sugimori N., Ishiyama K., Kondo Y., et al. Origin and fate of blood cells deficient in glycosylphosphatidylino-sitol-anchored protein among patients with bone marrow failure. Br. J. Haematol. 2009; 147(1): 102-12.
8. Borowitz M.J., Craig F.E., Digiuseppe J.A., Illingworth A.J., Rosse W., Sutherland D.R., et al.; International Clinical Cytometry Society. Guidelines for the diagnosis and monitoring of paroxysmal nocturnal hemo-globinuria and related disorders by flow cytometry. Cytometry B Clin. Cytom. 2010; 78(4): 211-30. doi: 10.1002/cyto.b.20525.
9. Brodsky R.A., Mukhina G.L., Li S., Nelson K.L., Chiurazzi P.L., Buckley J.T., Borowitz M.J. Improved detection and characterization of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria using fluorescent aerolysin. Am. J. Clin. Pathol. 2000; 114(3): 459-66.
10. Sutherland D.R., Keeney M., Illingworth A. Practical guidelines for the high-sensitivity detection and monitoring of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria clones by flow cytometry. Cytometry B Clin. Cytom. 2012; 82(4): 195-208.
11. Наумова Е.В., Почтарь М.Е., Кисиличина Д.Г., Плеханова О.С., Си-пол А.А., Бабенко Е.В. и др. Стандартизация диагностики парок-сизмальной ночной гемоглобинурии с помощью проточной цитометрии. Клиническая лабораторная диагностика. 2013; 7: 54—8.
[Naumova E.V., Pochtar M.E., Kisilitchina D.G., Plekhanova O.S., Sipol A.A., Babenko E.V., et al. The standardization of diagnostic of paroxysmal night hemoglobinuria cytometry. Klinicheskaya laboratornaya diag-nostika. 2013; 7: 54-8]. (in Russian)
12. Sutherland D.R., Acton E., Keeney M., Davis B.H., Illingworth A. Use of CD157 in FLAER-based assays for high-sensitivity PNH granulocyte and PNH monocyte detection. CytometryB Clin. Cytom. 2014; 86(1): 44—55.
13. Bland J.M., Altman D.G. Statistical methods for assessing agreement between two methods of clinical measurement. Lancet 1986; 1: 307—10.
14. Critchley L.A., Critchley J.A. A meta-analyzis of studies using bias and precision statistics to compare cardiac output measurement techniques. J. Clin. Monit. Comput. 1999; 15: 85-91.
Поступила 02.04.15 Received 02.04.15
КЛИНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СВОБОДНЫХ ЛЕГКИХ ЦЕПЕЙ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ЛИМФОЛЕЙКОЗОМ | Катаева
1. Martin W., Abraham R., Shanafelt T., Clark R.J., Bone N., Geyer S.M., et al. Serum free light chain – a new biomarker for patients with B-cell non-Hodgkin lymphoma and chronic lymphocytic leukemia. Transl. Res. 2007; 149(4): 231–5.
2. Fabbri G., Dalla-Favera R. The molecular pathogenesis of chronic Lymphocytic leukemia. Nature Rev. Cancer. 2016; 16(3): 145–62.
3. Maurer M.J., Cerhan J.R., Katzmann J.A., Link B.K., Allmer C., Zent C.S., et al. Monoclonal and polyclonal serum free light chains and clinical outcome in chronic lymphocytic leukemia. Blood. 2011; 118(10): 2821–6. doi: 10.1182/blood-2011-04-349134.
4. Katzman J.A., Clark R.J., Abraham R.S., Bryant S., Lymp J.F., Bradwell A.R., Kyle R.A. Serum reference intervals and diagnostic ranges for free kappa and free lambda immunoglobulin light chains: relative sensitivity for detection of monoclonal light chains. Clin. Chem. 2002; 48(9): 1437–44.
5. Pratt G., Harding S., Holder R., Fegan C., Pepper C., Oscier D., et al. Abnormal serum free light chain ratios are associated with poor survival and may reflect biological subgroups in patients with chronic lymphocytic leukaemia. Br. J. Haematol. 2009; 144(2): 217–22. doi: 10.1111/j.1365-2141.2008.07456.x.
6. Maurer M.J., Micallef I.N., Cerhan J.R., Katzmann J.A., Link B.K., Colgan J.P., et al. Elevated serum free light chains are associated with event-free and overall survival in two independent cohorts of patients with diffuse large B-cell lymphoma. J. Clin. Oncol. 2011; 29(12): 1620–6. doi: 10.1200/JCO.2010.29.4413.
7. Hallek M., Cheson B.D., Catovsky D., Caligaris-Cappio F., Dighiero G., Dohner H., et al.; International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia. Guidelines for the diagnosis and treatment of chronic lymphocytic leukemia: a report from the International Workshop on Chronic Lymphocytic Leukemia updating the National Cancer Institute – Working Group 1996 guidelines. Blood. 2008; 111(12): 5446–56. doi: 10.1182/blood-2007-06-093906.
8. Поддубная И.В., Савченко В.Г., ред. Российские клинические рекомендации по диагностике и лечению лимфопролиферативных заболеваний. М.; 2016. Доступно на: http://www.hematology.ru/oncohematology/standarts/clinical_guidelinesdraft.pdf
9. Despezieri A., Kyle R.A., Katzmann J.A., Therneau T.M., Larson D., Benson J., et al. Immunoglobulin free light chain ratio is an independent risk factor for progression of smoldering (asymptomatic) multiple myeloma. Blood. 2008; 111(2): 785–9.
Партии Петра Порошенко и Виталия Кличко объединились перед местными выборами
«Блок Петра Порошенко «Солидарность»» (БПП) и УДАР мэра Киева Виталия Кличко вчера стали единой политической силой. Собеседники «Ъ» в партии президента Порошенко назвали итоги съезда «логичным завершением долгой политической истории». Украинские эксперты же сочли такой маневр попыткой минимизировать последствия падения рейтингов нынешнего руководства ради успешного выступления на местных выборах 25 октября. Главным же выгодополучателем стал Виталий Кличко — он не только занял пост лидера объединенной партии, но и гарантировал для себя отсутствие конкурентов среди членов БПП в борьбе за кресло мэра Киева.
«Наша цель проста — мы хотим объединить усилия проевропейских, проукраинских сил. Быть вместе всегда лучше, чем по отдельности»,— заявил «Ъ» депутат Верховной рады от БПП Алексей Гончаренко, комментируя итоги съезда в Киеве. По его словам, разногласий между соратниками президента Порошенко и членами УДАРа давно нет. «Объединиться мы решили не вчера. Год назад мы вместе прошли президентскую кампанию и выборы в Киеве, потом парламентскую кампанию. Уже почти год работаем в Раде в одной фракции,— отметил депутат.— Так что речь идет о логичном завершении достаточно долгой политической истории».
Эти же «примеры единения» вспоминал вчера Виталий Кличко. При этом он предупреждал участников съезда: «Мы не должны допустить ошибок прошлого, когда демократические силы после «оранжевой революции» дрались, кто влиятельнее, и заигрались так, что страна получила януковичей при власти. Сегодня надо сомкнуть ряды, чтобы эта чума не проскользнула снова!»
Сам господин Кличко вчера возглавил объединенную партию и, по мнению украинских экспертов, тем самым повысил шансы на переизбрание на пост мэра 25 октября. «Посредством союза с БПП он рассчитывает на административный ресурс президентской власти. Кроме того, теперь у БПП точно не будет своего кандидата на выборах мэра»,— поясняет «Ъ» мотивы Виталия Кличко украинский политолог Дмитрий Понамарчук. Как ожидается, главным соперником действующего градоначальника станет кандидат от партии Игоря Коломойского «Укроп» бизнесмен Геннадий Корбан.
В целом же новой партии объединение обещает более высокий результат на выборах. «Доверия к правящим партиям у украинского народа сегодня нет. Есть потребность в других политических силах. Например, очень активно развернулся «Укроп» Коломойского. На этом фоне БПП и УДАР надеются на эффект синергии. Они считают, что объединение усилий поможет им выиграть»,— поясняет Дмитрий Понамарчук.
Директор Киевского центра политических исследований и конфликтологии Михаил Погребинский также считает, что слияние выгодно и БПП, и УДАРу. «Цель соратников президента — удержать под контролем политическую силу, которая по своим взглядам ничем не отличается от БПП, но в случае каких-либо осложнений в отношениях с Порошенко будет готова выступить в качестве относительной оппозиции. Кроме того, им важно, чтобы ответственность за проблемы в стране распределилась между всеми, а не падала на одного виноватого»,— говорит эксперт. УДАРу же, по его словам, союз с БПП выгоден тем, что на местных выборах в ряде регионов по соглашению сторон будут выдвигаться именно члены команды Кличко, даже при отсутствии у них высокого рейтинга.
Украинские СМИ ранее не исключали, что к БПП может присоединиться еще одна партия — «Народный фронт» премьера Украины Арсения Яценюка. Заместитель главы фракции БПП Игорь Кононенко вчера заявил, что вопрос пока не стоит на повестке. Вместе с тем сам господин Яценюк дал понять, что никаких вариантов исключать нельзя: он заявил о важности сохранения единства между «всеми демократическими партиями» и недопущения «реванша Януковича». При этом премьер решил не мешать союзу БПП и УДАРа на местных выборах, отказавшись от выдвижения своих кандидатов.
Подготовку к выборам ведут не только правящие силы. За день до объединительного съезда партий власти состоялась презентация нового партийного проекта «Наш край», который объединил более 60 мэров украинских городов, состоявших раньше в Партии регионов. Лидерами нового движения стали депутаты Рады из Харькова и Одессы Александр Фельдман и Антон Киссе, мэры Николаева и Мариуполя Юрий Гранатуров и Юрий Хотлубей, а также бывший первый зампред киевской городской администрации Александр Мазурчак. Представители нового движения уже заявили о намерении принять участие в октябрьских выборах.
Впрочем, по данным собеседников в «Ъ» в администрации украинского президента, новый проект создан по ее инициативе. Цель — оттянуть голоса у «Оппозиционного блока», который в восточных областях страны имеет шансы оставить далеко позади новую объединенную пропрезидентскую партию.
Павел Тарасенко, Илья Барабанов
Anti-Thyroxin (T4) (Клон 157) — очищенный
Номер по каталогу: LEI-T106-1.0MG
Обзор продукта| Название статьи: | Анти-тироксин (T4) (клон 157) — очищенный |
| Биозол Номер по каталогу: | LEI-T106-1.0MG |
| Номер по каталогу поставщика: | T106-1,0 мг |
| Альтернативный номер по каталогу: | LEI-T106-1.0MG |
| Производитель: | Leinco Technologies |
| Категория: | Antikörper |
| Концентрация: | 1.0 мг / мл |
| Обозначение клона: | 157 |
Клон — СНОУБОРД VIMANA
€ 499.00 € 499,00
€ 499,00
Клон
Расцвет нового жанра
Длина подписи Верни Сток, Фредрик. Аустбо и Мичи Альбин
Это высокоскоростное направленное зарядное устройство оснащено нашим самым агрессивным на сегодняшний день боковым вырезом.
Благодаря сбалансированному изгибу и 2-сантиметровому отступу Clone подарит вам непревзойденную реакцию.
Отправляйтесь на бездорожье и наслаждайтесь легкими поворотами. Прокатитесь на свежеприготовленном пистолете и, наконец, прибейте этот полный круг.
Идеально сбалансированная, полная уверенность
✔️ БЕСПЛАТНАЯ ДОСТАВКА
Характеристики
Сверхлегкая сердцевина из дерева
Смесь углерода / кевлара
Истинный развал
Спеченный 7200
Направленный
Ltd
Коэффициент гибкости
8/10
Ручной работы
Длина (см) (A) | 153 | 157 | 161 |
Рабочая длина (см) (B) | 113 | 116 | 121 |
Ширина носа (мм) (C) | 297 | 298 | 300 |
Ширина хвоста (мм) (E) | 291 | 295 | 298 |
Ширина талии (мм) (Г) | 249 | 251 | 254 |
Боковой вырез (мм) | 7900 | 8100 | 8600 |
Ultralight Woodcore Мы используем сверхлегкую древесину тополя, выращенную недалеко от нашего завода.
Смесь карбона и кевлара Высокая мощность олли и глотание вибраций
Спеченный 7200 Основа конкурентного качества, самая быстрая основа в мире
Направленный Более быстрые повороты, большая устойчивость, идеальная балансировка.
Развал Огромная мощность олли, максимальный отклик.
FeaturБыстрая доставка 🔥
Доставка 1–4 дня
Бесплатная доставка 👌
Прямо к вашей двери
Возврат за 30 дней
Покупки без забот
Клон
€ 499.00 € 499,00
€ 499,00
{{{productMediaThumbs}}}
| Альтернативное название 1: | Асцит, Клон: 157, Mab против крупного рогатого скота, вирус вирусной диареи типа 1 E2 (gp53) |
|---|---|
| Альтернативное название 2: | Асцит, Клон: 157, Mab антитело-бычий, вирус вирусной диареи типа 1 E2 (gp53) |
| Альтернативное название 3: | Асцит, Клон: 157, Mab антитело-бычий, вирус вирусной диареи типа 1 E2 (gp53) |
| Альтернативное название 4: | Антивирусный вирус диареи Ty 1 E2 gp53 Клон: 157 асцитов |
| Альтернативное название 5: | Вирус вирусной диареи Ty 1 E2 gp53 Клон: 157 асцитов |
| Клональность: | Моноклональные антитела |
| Описание: | Среди преимуществ моноклональных антител: тот факт, что, хотя гибридома требует немного больше времени для получения, при правильном использовании и в соответствии с протоколом, по сравнению с поликлональными антителами, моноклональные антитела высокоспецифичны к данному эпитопу и могут быть используются в приложениях, где требуется специфическое нацеливание, когда линия готова, фактически бесконечный запас этих антител на протяжении всего времени с небольшими вариациями сайтов распознавания антигена в разных партиях или без них, это антитело обеспечит превосходные и воспроизводимые результаты с гарантированными успех для проверенных и подтвержденных приложений. Это моноклональное антитело, которое сильно очищено и с высокой аффинностью связывания с антигеном, против которого оно повышается против | .
| Хранение и обращение: | Антитела в жидкой форме можно транспортировать и хранить в течение короткого периода времени при +4 градусах Цельсия, антитела, которые лиофилизированы, можно транспортировать при температуре окружающей среды и кратковременно хранить при +4 градусах Цельсия, для длительного хранения (до до одного года) следует добавить 25-50% глицерина или этиленгликоля, а затем контейнер хранить при -20 ° C, более длительное время — при -20 ° C, обычно |
| Консультации: | Для антител в жидкой форме или восстановленных лиофилизированных антител небольшие количества соулов могут быть захвачены на крышке или стенках контейнера. Непосредственно перед использованием вы можете ненадолго центрифугировать флакон, чтобы собрать весь раствор на дне. следует избегать качества и сродства циклов замораживания и оттаивания антител |
| О: | Каждое мышиное моноклональное тело имеет свою собственную аффинность, специфичную для клона. Мышиные моноклональные антитела представляют собой очищенный белок A или G и могут быть конъюгированы с FITC для проточной цитометрии или FACS и могут иметь разные изотипы. Моноклональные антитела этого антигена доступны в различных клонах. |
| Тест: | A / J, BALB / c, Мыши созревают через 40 дней для самок и 55 дней для самцов, SCID, в то время как CD-1 является аутбредным как линия. Самки мышей беременны только 20 дней и могут родить 10 пометов. 6-8 мышей в год, трансгенные, конгенные и незаряженные штаммы известны по C57BL / 6, нокаут, Мыши, мыши из вида Mus musculus используются для производства мышиных моноклональных антител или моноклональных антител, а также в качестве исследовательской модели для людей в вашем регионе. lab, или & nbsp |
| Латинское название: | Mus musculus |
| Перевод на французский: | антикорпс |
| Генная цель: | Моноклональный асцит, вирус вирусной диареи 1 E2 (gp53) 157 |
| Краткое наименование: | Мышиное моноклональное антитело — Асцит, вирус вирусной диареи 1 E2 (gp53) Клон: 157 |
| Техника: | Моноклональные или моноклональные антитела, мыши, мыши |
| Виды: | генов Bos Taurus доступны из базы данных генома крупного рогатого скота, мышей, вирусов, крупного рогатого скота |
| Альтернативное название: | Асцит, мышиный моноклональный (антитело к) — бычий, клональность: 157, Вирус вирусной диареи, классификация 1 E2 (gp53) |
| Альтернативная техника: | мышь |
Кроличье моноклональное антитело против триметил-гистона h4 (Lys79), клон RM157; h4K79me3, гистон h4 (триметил K79) — RevMAb
| Подробнее о продукте | |
| Название продукта | Кроличьи моноклональные антитела против триметил-гистона h4 (Lys79) [RM157] |
| Описание продукта | Кролик, моноклональный к триметилированному гистону h4, лизину 79, h4K79me3, гистону h4 (триметил K79) |
| Кат. | 31-1053-00 |
| Имя клона | RM157 |
| Лист данных продукта | Лист данных кроличьих моноклональных антител против триметил-гистона h4 (Lys79) RM157 |
| Специфичность | RM157 реагирует на гистон h4, триметилированный по лизину 79 (K79me3). Отсутствует перекрестная реактивность с монометилированным лизином 79 (K79me1), диметилированным лизином 79 (K79me3) или другими метилированиями в гистоне h4. |
| Иммуноген | Триметилпептид, соответствующий триметил-гистону h4 (Lys79). |
| Приложение | Вестерн-блот (WB) ELISA Multiplex |
| Виды Реактивность | Человек Позвоночные |
| Конъюгат | Нет |
| Использование по назначению | Только для исследовательских целей |
| . | |
| Недвижимость | |
| Форма | Жидкость |
| Инструкции по хранению | Хранить при -20.0 ° С |
| Стабильность | Стабильность 1 год при -20,0 ° C с даты получения |
| Буфер для хранения | 50% глицерин / PBS с 1% BSA и 0,09% азида натрия |
| Объем / размер | 100 мкг |
| Концентрация | 1,0 мг / мл |
| Purity | Белок А, очищенный сродством из надосадочной жидкости культуры, не содержащей животного происхождения |
| Тип клона | Моноклональный |
| Изотип | Кролик IgG |
| Использование | Вестерн-блот: 0.2 мкг / мл — 1 мкг / мл; ELISA: 0,1 мкг / мл — 0,5 мкг / мл; Multiplex: 0,1 мкг / мл — 0,5 мкг / мл. |
| Ключевые слова | |
| . | |
| Изображения продукта | |
Точечная диаграмма пептидов показывает, что RM157 реагирует только на гистон | |
RM157 специфически реагирует на гистон h4, триметилированный | |
Вестерн-блоттинг рекомбинантного гистона h4.3 (1) | |
Сопутствующие товары
Моноклональные антитела к CD44 (DMAB5404MH) — Creative Diagnostics
Нокдаун EZh3 в устойчивых к тамоксифену клетках MCF-7 раскрывает новые цели для восстановления чувствительности к тамоксифену
РАК МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
Авторы: Кумари, Канчан; Кумар, Сударшан; Парида, Диллип К.; Мишра, Сандип К.
Абстрактный
Актуальность проблемы Приобретенная устойчивость к лекарственным средствам включает многослойную генетическую и эпигенетическую регуляцию.Было доказано, что ингибирование EZh3 обращает резистентность к тамоксифену обратно в состояние чувствительности при раке груди. Однако молекулярные игроки, участвующие в EZh3-опосредованном воздействии на устойчивые к тамоксифену клетки MCF-7, неизвестны. Это исследование было проведено для понимания глобального изменения протеомного профиля устойчивых к тамоксифену клеток рака молочной железы MCF-7 после нокдауна EZh3. Методы Устойчивость к тамоксифену Клетки рака молочной железы MCF-7 были установлены с использованием возрастающих концентраций 4-гидрокситамоксифена. Используя подход протеомики без метки, мы изучили изменение общего протеома в резистентных клетках, а также в клетках, трансфицированных siEZh3, по сравнению с чувствительными и клетками, трансфицированными не нацеливающей siRNA.Результаты Здесь мы приводим список белков, роль которых в устойчивости к тамоксифену ранее не была признана, и которые тесно связаны с выживаемостью пациентов с раком молочной железы. Белки Аннексин А2, CD44, белок сборки нуклеосомы 1 и ламин A / C были среди белков с наибольшей активностью в резистентных к тамоксифену клетках, которые, как было обнаружено, аннулировались при нокдауне EZh3. Исследование предполагает участие различных белков в приобретении устойчивости к тамоксифену и предполагает дальнейшие исследования для изучения их терапевтического потенциала.Заключение В целом, мы предполагаем, что нацеливание на EZh3 или молекулы вниз по каскаду может быть полезным для восстановления чувствительности к тамоксифену при раке груди.
Экзосомное высвобождение микроРНК-454 клетками рака груди поддерживает биологические свойства раковых стволовых клеток через ось PRRT2 / Wnt при раке яичников
НАУКИ О ЖИЗНИ
Авторы: Ван, Линг; Он, Мяо; Фу, Ли; Цзинь, Юэмэй
Абстрактный
Цели. Экзосомы, полученные из рака, несущие молекулы опухолевого происхождения, такие как miRNA и белки, относящиеся к различным фенотипам, были обнаружены как в кровотоке, так и в других биожидкостях пациентов с различными видами рака.Таким образом, нашей основной целью здесь было определить роль экзосомальной микроРНК-454 (miR-454), полученной с помощью MDA-MB-231, в самообновлении раковых стволовых клеток (CSC) при раке яичников (OC). Материалы и методы. Экстракцию экзосом, полученных из клеток MDA-MB-231 (экзосом, полученных из 231), проводили для обработки клеток CD44 + / CD133 + SKOV3 и CoC1 для наблюдения за ростом и стволовостью клеток. Затем дифференциально экспрессируемые miRNA в клетках SKOV3 после обработки экзосом были отфильтрованы с использованием анализа микрочипов. Впоследствии жизнеспособность клеток определялась после уменьшения экзосомальной miR-454 и добавления ингибитора пути Wnt C59.Наконец, была исследована про-туморогенная функция экзосом на ОК-клетках in vivo. Основные выводы: После совместного культивирования с экзосомами, полученными из 231, стволовость CSC повысилась. Впоследствии уменьшение экзосомальной miR-454 ослабило роль экзосом в стволовости клеток. Обогащенный пролином трансмембранный белок 2 (PRRT2) был подтвержден как целевой ген для miR-454 в клетках SKOV3 и CoC1. C59 обращает репрессивную роль экзосом в стволовых клетках РСК. При оценке на мышиной модели экзосомальный miR-454 привел к эффективному эффекту подавления веса и объема опухоли in vivo.Значимость: в целом, экзосомы, происходящие из 231, несущие miR-454, нарушили путь Wnt, воздействуя на PRRT2, тем самым способствуя стволовости CSC in vitro и росту OC-клеток in vivo.
Готовый к последовательности контиг клона ВАС 2,2-мегабайтного сегмента хромосомы человека 1q24
Абстрактные
Хромосомная область человека 1q24 кодирует два клонированных гена болезни и находится в пределах больших интервалов генетического включения для нескольких гены болезней, которые еще предстоит идентифицировать.Мы сконструировали один контиг клона бактериальной искусственной хромосомы (ВАС). который охватывает более 2 Мб 1q24 и состоит из 78 клонов, соединенных 100 STS. Средняя плотность отображаемых СТС — одна из самый высокий из описанных для мультимегабазной области генома человека. Контиг был эффективно построен путем генерации STS от концов клона, после чего идет обход библиотеки. Информация о расстоянии была добавлена путем определения размеров вставок всех клонов, и экспрессированные теги последовательностей (EST) и гены были включены для создания частичной карты транскриптов области, обеспечивая гены-кандидаты для локальных очагов болезни.Порядок генов и содержание региона позволяют понять древнюю дупликацию. события, произошедшие на проксимальном 1q. Теперь все готово для дальнейшего изучения этого интересного региона с помощью крупномасштабное секвенирование.
[Данные о последовательностях, описанные в этой статье, были представлены в GenBank под номерами доступа. G42259 – G42312 и G42330 – G42335.]
Сноски
№1 Автор, ответственный за переписку.
ЭЛЕКТРОННАЯ ПОЧТА vollrath {at} genome.stanford.edu; ФАКС (650) 723-7016.
- Поступила 29.09.1998 г.
- Принята к печати 15 декабря 1998 г.
- Лабораторный пресс Колд-Спринг-Харбор
Высокопатогенный клон шига-токсина, продуцирующий Escherichia coli O157: H7, Англия и Уэльс — Том 24, номер 12 — декабрь 2018 г. — Журнал Emerging Infectious Diseases
Принадлежность авторов: Общественное здравоохранение Англии, Лондон, Великобритания (Л.Бирн, Т.Дж. Даллман, Н. Адамс, A.F.W. Михаил, К. Дженкинс); Национальный институт исследований в области здравоохранения, Лондон (Т.Дж. Даллман, Н. Адамс, Н. Маккарти); Уорикский университет, Ковентри, Великобритания (Н. Маккарти)
Вырабатывающий токсин шига Escherichia coli (STEC) O157: H7 вызывает широкий спектр желудочно-кишечных симптомов, включая легкий гастроэнтерит, боль в животе, рвоту и кровавую диарею ( 1 ). У части пациентов, чаще всего очень старых и очень молодых, развивается гемолитико-уремический синдром (ГУС) ( 2 ).STEC O157: H7 являются зоонозными, и передача людям чаще всего связана с жвачими животными, особенно крупным рогатым скотом и овцами. Передача происходит при употреблении зараженной пищи или воды либо при прямом контакте с животными или окружающей их средой. Инфекционная доза невысока (10–100 организмов), и передача вируса от человека к человеку может происходить в домашних условиях, детских садах и других учреждениях ( 1 ). Патотип STEC определяется наличием генов, кодирующих токсин шига (Stx) типа 1, типа 2 или обоих, локализованных на бактериофаге, включенном в бактериальный геном ( 3 ).Stx1 и Stx2 можно разделить на подтипы Stx1a – 1d и Stx2a – 2g; Stx2a тесно связан с серьезным заболеванием ( 4 , 5 ). Популяция STEC O157: H7 ранее была разделена на 3 основные линии (I, I / II и II) ( 6 ) и 7 подлиний (Ia, Ib, Ic, IIa, IIb, IIc и I / ll. ) ( 5 ).
В Англии наиболее распространенным серотипом STEC является O157: H7, который вызывает в среднем 800 случаев в год ( 1 ).Все STEC O157: H7, выделенные в лабораториях местных больниц из образцов фекалий госпитализированных пациентов, и все случаи в сообществе отправляются в Справочный центр по желудочно-кишечным бактериям (GBRU) Министерства здравоохранения Англии для подтверждения идентификации и типирования. С 2000 по 2016 г. фаг типа (PT) 8 с профилем stx stx1a / stx2c и PT21 / 28 с профилем stx stx2a или stx2a / stx2c чаще всего обнаруживался в Англии, с PT21 / 28 наиболее часто связаны с тяжелым заболеванием ( 2 , 7 ).
С 2015 г. все изоляты, представленные в GBRU, секвенированы. Полногеномное секвенирование (WGS) демонстрирует беспрецедентную чувствительность и точность в выявлении связанных случаев ( 8 ). Использование данных WGS во время расследования вспышек повысило надежность выявления случаев и предоставило судебно-медицинские доказательства для связи случаев заболевания людей с источником их инфекции ( 9 , 10 ). Филогенетический вывод может также более точно выявить, как штаммы связаны во времени и пространстве, чем другие методы молекулярного типирования, и может дать представление об эволюционном и эпидемиологическом контексте возникающих патогенных клонов ( 8 , 10 , 11 ).
В 2015 году всего 47 человек пострадали от вспышки желудочно-кишечного заболевания пищевого происхождения в Англии, вызванной STEC O157: H7 PT8 stx2a . Вспышка была связана с употреблением зараженных фасованных салатных листьев ( 11 ). Штамм вспышки продолжал вызывать спорадические инфекции и вспышки болезней пищевого происхождения в течение 2016 и 2017 годов ( 11 ). Целью нашего анализа было изучить историю эволюции этого недавно появившегося штамма STEC O157: H7 PT8 stx2a и оценить риск для здоровья населения.
Штаммы бактерий
Все изоляты, представленные в GBRU для подтверждения и типирования из местных больничных лабораторий в Англии и Уэльсе в период с июля 2015 г. по декабрь 2017 г., были секвенированы для планового эпиднадзора (Национальный центр биотехнологической информации Краткий архив (биопроект PRJNA248042)). Мы включили дополнительные 74 клинических изолята STEC O157: H7, принадлежащих к подлинии IIb, линии, содержащей STEC O157: H7 PT8 stx2a , которые были отправлены в GBRU в период с января 2010 г. по июнь 2015 г. из предыдущих исследований ( 5 , 8 ) (таблица в Техническом приложении).Мы выбрали эти изоляты STEC O157: H7 на основе подтипа stx и разнообразия типов фага, чтобы предоставить контекст в качестве образца фоновой популяции. Мы определили изоляты STEC O157: H7 от пациентов, которые были госпитализированы в результате их желудочно-кишечных симптомов или которые сообщили о кровавой диарее как о высокопатогенных или имеющих повышенный патогенный потенциал по сравнению с изолятами от пациентов, у которых не было симптомов или которые сообщали о диарее без крови.
Анализ последовательности генома
Для WGS мы экстрагировали ДНК из культур STEC O157: H7 для секвенирования на приборе HiSeq 2500 (Illumina, Сан-Диего, Калифорния, США).Мы сопоставили качественно обрезанные показания Illumina ( 12 ) с эталонным геномом STEC O157: H7 Sakai (инвентарный номер GenBank BA000007) с использованием Burrows Wheeler Aligner-Maximum Exacting (BWA-MEM) ( 13 ). Мы идентифицировали однонуклеотидные полиморфизмы (SNP) с помощью Genome Analysis Toolkit версии 2 ( 14 ) в режиме унифицированного генотипа и извлекли основные позиции генома, которые имели высококачественный SNP (консенсус> 90%, минимальная глубина × 10, GQ> 30 ) в> 1 изоляте для дальнейшего анализа.Мы выполнили иерархическую кластеризацию единичного сцепления на попарной разнице SNP между всеми штаммами на различных пороговых расстояниях (250, 100, 50, 25, 10, 5, 0). Результатом кластеризации является профиль SNP или адрес SNP, который можно использовать для описания структуры популяции на основе клональных групп ( 15 ).
Мы выполнили рекомбинационный анализ с использованием Gubbins ( 16 ) и реконструировали синхронизированные филогении с использованием BEAST-MCMC версии 2.4.7 ( 17 ). Мы вычислили альтернативные модели часов и априорные значения населения и оценили их пригодность на основе тестов факторов Байеса.Самой поддерживаемой моделью была расслабленная логарифмически нормальная тактовая частота с байесовской моделью популяции горизонта. Мы запустили все модели с длиной цепочки в 1 миллиард. Мы реконструировали дерево максимальной достоверности клады с помощью TreeAnnotator версии 1.75 ( 17 ).
Мы выполнили подтипирование Stx, как описано Ashton et al. ( 18 ). Интеграция профага, кодирующего Stx, в геном хозяина охарактеризована в 6 генах-мишенях: wrbA , кодирующем NAD-хинон-оксидоредуктазу; yehV , регулятор транскрипции; sbcB , экзонуклеаза; yecE , ген неизвестной функции; ген тРНК argW ; и Z2577, который кодирует оксидоредуктазу ( 5 ).Мы сопоставили короткие чтения из геномов STEC O157: H7 с интактными эталонными последовательностями этих генов и выровняли их с BWA MEM ( 13 ). Мы определили занятые сайты встраивания бактериофага Stx (SBI) как те штаммы, у которых было нарушено выравнивание ( 5 ). Мы использовали планшет для визуализации скоплений чтения ( 19 ).
Анализ данных
Национальная усовершенствованная система наблюдения для STEC (NESSS) в Англии была внедрена 1 января 2009 г. и подробно описана в другом месте ( 1 ).Для этого исследования мы извлекли данные из NESSS для случаев, идентифицированных как инфицированные штаммами, которые были секвенированы и принадлежат к рассматриваемому кластеру подлинии IIb (содержащему STEC O157: H7 PT8 stx2a , штамм вспышки). Мы исключили бессимптомных носителей, выявленных в результате скрининга контактов высокого риска с симптомными пациентами, а также пациентов, которые не отправили расширенный опросный лист (ESQ) в NESSS. Анализируемые данные включали возраст, пол и сообщал ли пациент о симптомах диареи без крови, кровавой диарее и рвоте, а также о том, были ли пациенты госпитализированы, развился ли типичный ГУС или умер.Случаи были разделены на детей (<16 лет) и взрослых на основании априорных знаний о том, что дети наиболее подвержены риску как инфекции STEC, так и прогрессирования в HUS ( 1 ). Если клинические симптомы не указывались в ESQ, мы кодировали их как отрицательные ответы на эти симптомы. Мы разделили случаи на 3 группы на основе подтипа stx : stx2a , stx2c, и stx- негативный.
Сначала мы описали симптомы пациентов по подтипу stx , а также по возрастной группе и полу, а также исследовали распределение подтипа stx по возрасту и полу.Мы использовали точные тесты Фишера для сравнения пропорций между разными группами. Мы оценили сообщения о кровавой диарее или госпитализации в качестве маркера тяжести заболевания по подтипу stx . Мы использовали логистическую регрессию для расчета отношения шансов (OR) для оценки кровавой диареи по подтипу stx с поправкой на возраст (ребенок / взрослый) и пол. Мы выполнили все анализы в Stata 13.0 (StataCorp LLC, College Station, TX, US).
Подраздел IIb
Рисунок 1
Рисунок 1.Случаи продуцирования токсина шига Escherichia coli O157: H7, принадлежащего к подлинии IIb, кластер одиночных связей однонуклеотидного полиморфизма 250, 18%, по профилю подтипа stx , представленному в Отдел по изучению бактерий желудочно-кишечного тракта в Общественном …
Клон STEC O157: H7 stx2a , проанализированный в этом исследовании, был локализован в подлинии IIb и принадлежал к кластеру с единичным сцеплением 250 SNP, обозначенному 18%. Этот кластер включал 251 клинический изолят: 138 из STEC O157: H7 stx2a , 77 из stx- отрицательных E.coli O157: H7 и 36 из STEC O157: H7 stx2c (рисунок 1; таблица технического приложения). С июля 2015 года, когда Служба общественного здравоохранения Англии внедрила использование WGS для STEC, количество случаев, выявленных в подлинии IIb, оставалось стабильным (≈60 / год). Однако количество случаев клона stx- отрицательного E. coli O157: H7 снизилось, тогда как клонов stx2a и stx2c растет (рис. 1).
Эволюционная шкала времени и вставка профага Stx в STEC O157: H7
Рисунок 2
Рисунок 2.Синхронизированная филогения продуцирующих токсин Shiga изолятов Escherichia coli O157: H7 подлинии IIb, иллюстрирующая последовательную потерю stx2c и последующее увеличение stx2a . Шкала показывает прошедшие годы.
Мы реконструировали временную филогению подлинии IIb (рис. 2). Мы подсчитали, что частота мутаций STEC O157: H7 в подлинии IIb составляет ≈2 мутации на геном в год (95% самая высокая апостериорная плотность [HPD] 1,7–2,4). Этот показатель меньше, чем 2,6 мутации на геном в год, ранее рассчитанные для всей популяции STEC O157 ( 5 ).Наш анализ показал, что появляющийся клон stx2a произошел от недавнего отрицательного предка stx- с приобретением stx2a ≈10 лет назад (95% HPD 9.0 лет – 12.7 лет). Ранее этот stx -отрицательный клон произошел от предка stx2c ≈20 лет назад (95% HPD 17,6–24,6 лет) после потери stx2c .
Исторически сложилось так, что большинство штаммов в подлинии IIb несут профаг, кодирующий Stx2c по sbcB , с сайтом SBI yehV , занятым укороченным профагом, не кодирующим Stx ( 5 ).Анализ данных короткого считывания показал, что в клоне IIb отрицательной сублинии stx- , yehV был нарушен, но sbcB был интактным, что указывает на потерю профага, кодирующего Stx2c, из сайта SBI. Недавно появившийся клон подлинии IIb stx2a нарушил сайты SBI только на sbcB и yehV , что указывает на то, что фаг, кодирующий Stx2a, был вставлен в sbcB , сайт остался вакантным в stx- отрицательном. clone после потери stx2c .
Тяжесть клинических случаев заболевания в кластере подлиния IIb по
stx ПодтипВ целом, 91,6% пациентов (230/251, 95% ДИ 88,1–95,1) имели симптомы диареи, и аналогичный процент был зарегистрирован независимо от профиля подтипа stx STEC O157: H7, вызвавшего инфекцию (Таблица 1). Частота появления других симптомов варьировала; 28,3% пациентов (71/251, 95% ДИ 22,7–33,9) сообщили о рвоте, 35,1% (88/251, 95% ДИ: 29,1–41,0) испытали кровавую диарею и 18.7% (47/251, 95% ДИ: 13,9–23,5) были госпитализированы. Госпитализация происходила чаще у пациентов с кровавой диареей (35,2% [31/88, 95% ДИ 25,0–45,4]), чем у пациентов без кровавой диареи (9,8% [16/163], 95% ДИ 5,2–14,1; p <0,001) . Половина (50,0%) пациентов, инфицированных изолятами stx2a , сообщили о кровавой диарее (69/138, 95% ДИ 41,5–58,4) по сравнению с 15,6% пациентов, инфицированных stx -отрицательными изолятами (12/77, 95%). ДИ 7,3–23,9) и 19,4% инфицированных изолятом stx2c (7/36, 95% ДИ 5.9–33,0; р <0,001). Известно, что ни у одного пациента не было ГУС, и никто не умер.
Среди 251 клинического случая 141 (56,2%, 95% ДИ 50,0–62,3%) были взрослыми и 136 (54,2%, 95% ДИ 48,0–60,4%) — женщинами. Взрослые пациенты были инфицированы штаммами stx2a (61,0% [86/141], 95% ДИ 52,8–69,1%) чаще, чем дети (47,3% [52/110], 95% ДИ 37,8–56,7%; p = 0,030). Напротив, дети чаще заражались отрицательными штаммами stx- , чем взрослые: 41,8% (46/110) детей (95% ДИ 32.4–51,2%) по сравнению с 22,0% (31/141) взрослых (95% ДИ 15,1–28,9%; p = 0,001). Были также вариации в подтипе stx по полу; пропорционально больше пациентов женского пола были инфицированы штаммами stx2a (61,0% [83/136], 95% ДИ 52,7–69,3%), чем пациенты мужского пола (47,8% [55/115], 95% ДИ 38,6–57,1%). ; p = 0,036). Взрослые пациенты чаще сообщали о кровавой диарее (46,8% [66/141], 95% ДИ 38,5–55,1%), чем дети (20,0% [22/110], 95% ДИ 12,2–27,6%; p <0,001), как и пациенты женского пола (40.4% [55/136], 95% ДИ 32,1–48,8%) по сравнению с пациентами мужского пола (28,7% [33/115], 95% ДИ 20,3–37,1%), хотя разница не была статистически значимой (p = 0,05). Доля госпитализированных пациентов существенно не различалась по полу и возрастным группам (данные не показаны).
После поправки на возраст (взрослый или ребенок) и пол, отношение шансов испытать кровавую диарею было значительно выше у пациентов, инфицированных клоном stx2a , по сравнению с пациентами, инфицированными клоном stx -отрицательным (Таблица 2).Вероятность кровавой диареи в случаях, инфицированных клоном stx2c , не различалась по сравнению с отрицательным клоном stx . Среди проанализированных случаев детство предохраняло от симптомов кровавой диареи.
Описанные здесь данные подтверждают предыдущие исследования, которые показали, что приобретение и потеря фага, кодирующего Stx, очень динамично в STEC O157: H7 ( 5 , 20 ). Наиболее часто описывается приобретение stx1a или stx2a предшественником STEC O157: H7 stx2c с последующей потерей stx2c в штаммах, которые приобрели stx2a .Участие stx -отрицательного промежуточного продукта в этом процессе, как здесь зафиксировано, ранее не описывалось. Утрата фага, кодирующего Stx2c, по-видимому, облегчила приобретение фага, кодирующего Stx2a, потому что последний был вставлен в тот же сайт SBI, sbcB , оставленный свободным из-за фага, кодирующего Stx2c.
Используя филогенетический анализ изменчивости на уровне всего генома, мы реконструировали недавнюю эволюционную историю этого появляющегося патогенного клона в пределах STEC O157: H7 подлиния IIb.Мы наблюдали потерю stx2c от предшественника stx2c , которая вызвала stx -отрицательный клон ≈20 лет назад, с последующим приобретением stx2a ≈10 лет назад и последующим расширением, как показано на рисунке 1. Ранее мы показали, что историческое приобретение бактериофага, кодирующего Stx2a, популяцией STEC O157: H7 PT2 stx2c , принадлежащей к линии I / II, коренной в популяции крупного рогатого скота Великобритании, было связано с первыми вспышками ГУС у детей в Великобритании. Англия в начале 1980-х ( 5 , 7 ).Впоследствии рост заболеваемости STEC O157: H7 PT21 / 28 в течение 1990-х годов был связан с приобретением stx2a коренным населением STEC O157: H7 stx2c , принадлежащим к подлинии Ic, что привело к высокопатогенному современному клон STEC PT21 / 28 stx2a / stx2c ( 1 , 2 , 5 , 7 ). Этот клон был связан с несколькими вспышками в Соединенном Королевстве, связанными с высокой заболеваемостью HUS ( 10 , 21 — 23 ).Здесь мы описали клон E.coli O157: H7 из еще одной британской внутренней линии (подлиния IIb), которая недавно приобрела фаг, кодирующий Stx2a, и демонстрирует доказательства увеличения патогенного потенциала.
Анализ тяжести заболевания в клинических случаях по подтипу stx изолятов STEC O157: H7 в пределах одного кластера подлинии IIb показал значительную связь между присутствием stx2a и маркерами тяжести заболевания; в частности, кровавый понос, связанный с более высокими показателями госпитализации.Предыдущие исследования сообщили о доказательствах повышенной патогенности STEC, содержащих stx2a ( 4 , 5 ). Однако в этих исследованиях сообщается о STEC по широкому спектру различных серотипов, демонстрируя большое разнообразие подтипов stx , и они основаны на относительно небольших наборах данных. В этом исследовании мы представляем анализ большого набора данных, ориентированного на конкретную кладу в пределах одного серотипа, характеризуемого ограниченным количеством комбинаций подтипов stx , в частности stx2c , stx отрицательных и stx2a только.Этот анализ позволил нам провести прямые сравнения между конкретными профилями stx , ограничив влияние других факторов в геноме.
Штаммы Stx-отрицательных E. coli O157: H7 считаются атипичными энтеропатогенными E. coli (EPEC), что определяется наличием гена интимина ( eae ) и отсутствием stx и Плазмида фактора адгезии (EAF) E. coli ( 24 ). EPEC являются частой причиной детской диареи и диареи путешественников и, как известно, вызывают легкую диарею у взрослых ( 25 ).В этом исследовании тот факт, что в клинических случаях, инфицированных E. coli O157: H7 stx -отрицательным клоном, сообщалось об аналогичной частоте симптомов, включая кровавую диарею и госпитализацию, что и у инфицированных STEC O157: H7 stx2c несмотря на потерю stx была неожиданной находкой, требующей дальнейшего расследования.
Проведенная по времени филогенетическая реконструкция эволюционной истории кластера сублинии IIb позволила выявить недавнее появление высокопатогенного клона STEC O157: H7 stx2a .Симптом кровавой диареи, маркер тяжести и предиктор развития ГУС ( 2 ), был тесно связан со случаями, инфицированными изолятами STEC O157: H7, содержащими stx2a , по сравнению с изолятами без stx или с изолятами с stx2c . Наш анализ также проиллюстрировал высокодинамичный характер фагов, кодирующих Stx. В отличие от наблюдаемых событий вырезания фагов, кодирующих stx2c , в O157: H7, есть данные, позволяющие предположить, что как только фаг, кодирующий Stx2a, интегрирован в популяцию, он имеет тенденцию сохраняться ( 5 ).Таким образом, появление еще одной подсети STEC O157: H7, приобретающей stx2a , вызывает озабоченность в области общественного здравоохранения. С помощью этого исследования мы демонстрируем, что данные наблюдения STEC O157: H7 WGS играют важную роль в мониторинге и прогнозировании возникающих угроз общественному здоровью и способствуют нашему пониманию основных патогенных механизмов, связанных с тяжелыми желудочно-кишечными заболеваниями.
Д-р Бирн — ведущий эпидемиолог STEC в Национальной инфекционной службе Министерства здравоохранения Англии, Лондон, Великобритания.В ее интересы входит наблюдение в области общественного здравоохранения за STEC и гемолитико-уремическим синдромом, а также расследование вспышек желудочно-кишечных заболеваний пищевого происхождения.
Вершина
Мы благодарим Флоренс Аромона, Лукеки Каиндама, Налини Пурохит и Майка Харте за их вклад в Национальную усовершенствованную систему надзора для STEC в Англии, а также всех практикующих специалистов общественного здравоохранения, которые подчиняются системе. Мы также благодарим весь лабораторный персонал Отделения по изучению желудочно-кишечных бактерий, особенно Мишелу Райт, Эми Джентл, Нила Перри и Доун Хеджес.
Исследование финансировалось Национальным институтом исследований в области здравоохранения (NIHR) Отделом исследований в области защиты здоровья (желудочно-кишечные инфекции Ливерпульского университета в партнерстве с Общественным здравоохранением Англии, в сотрудничестве с Университетом Восточной Англии, Оксфордским университетом и Институтом Квадрам).
