Кт817Б характеристики: Аналоги для кт817б — Аналоги

Первый метод поиска заключался в следующем: один металлический стержень лежал в земле там, где должна была находиться руда. Он был подключен к одной клемме аккумулятора. Другой вывод был подключен к плавающему проводу. Металлические стержни втыкались в землю в разных точках и постоянно касались проводов.При обнаружении металлического предмета появились искры.

В 1870 году в устройстве использовались два отдельных стержня. Провод, подключенный через аккумулятор, упал на землю. При контакте с металлом прозвенел предупредительный звонок.

Аппарат «Пират»

А теперь посмотрим на современные инструменты. Некоторые из них — «Пират» — металлоискатель, работающий по проводимости электричества, индуктивным и магнитным свойствам металла. Кстати, свое интересное название устройство получило от изобретателей: ПИ — импульсный принцип работы, RAT — сокращенно от Radio Scot (сайт изобретателей).

Металлоискатель «Пират», фото которого представлены в этой статье, имеет унифицированный дизайн. Он включает в себя генератор, вырабатывающий переменный ток, который проходит через катушку с магнитным полем. Если металл, проводящий ток, находится слишком близко к катушке, то вихревые потоки будут направлены к металлу. Это способствует образованию переменного магнитного поля в металле. Обнаружение последнего позволяет использовать другую катушку для измерения магнитного поля.

Преимущества адаптации

«Пират» (металлоискатель) имеет простую конструкцию и унифицированную конфигурацию, не содержит программируемых элементов, которых так опасаются многие радиолюбители. Устройство отлично подойдет новичкам. И помните, что он не умеет различать металлы.

Металлоискатель «Пират», печатная плата которого представлена ​​микросхемой NE555 (отечественный аналог КР1006ВИ1), не содержит дорогих или труднодоступных деталей. По техническим параметрам он не уступает зарубежным аналогам, цена которых достигает 300 у.е.е.

И главные преимущества этого устройства перед другими — стабильность работы и реакция на металл с большого расстояния.

Унифицированный «Пират» (металлоискатель для начинающих) имеет определенные технические характеристики. Его мощность 9-12 вольт, а уровень энергопотребления 3-40 мА. Устройство распознает предметы размером до 150 см.

Конструкция

Передающий и приемный узлы являются основными, металлоискатель «Пират». Печатная плата, представляющая собой модель NE555, и переключатель высокой мощности на транзисторе IRF740 входят в передающий узел.А приемный узел собран на базе микросхемы К157УД2 и транзистора BC547.

Намотка катушки осуществляется на оправке диаметром 190 мм и содержит 25 витков провода ПЭВ 0,5.

Биполярный транзистор NPN заменил модель Т2 и имеет напряжение не менее 200 вольт. Его можно взять от экономичной лампы или устройства для зарядки мобильного телефона. В крайнем случае Т2 можно заменить на КТ817.

В качестве Т3 можно использовать любую схему транзистора NPN.

Правильно собранный прибор не требует дополнительной настройки. Возможно, придется прибегнуть к применению резистора R12, чтобы щелчки при движении появлялись в среднем положении R13.

С помощью осциллографа можно контролировать длительность управляющего импульса на затворе Т2 и уровень частоты генератора. Оптимальная длительность импульса 130-150 мкс, частота 120-150 Гц.

Как работать с прибором

После включения прибора «Пират» (металлоискателя) следует подождать 15 или 20 секунд, после чего ручка чувствительности устанавливается в положение, при котором при движении слышны щелчки.Это послужит индикатором максимальной чувствительности.

Устройство имеет единую систему управления, поэтому приобрести навыки работы с ним не так уж и сложно.

Металлоискатель «Пират» своими руками

Многие задаются вопросом: как самому сделать металлоискатель «Пират»? Сборка такой сборки возможна людям с элементарными знаниями в области электроники.

Импульсный металлоискатель «Пират» имеет нестандартный и копируемый дизайн. Устройство содержит ряд компонентов и простую в использовании поисковую катушку.Если его диаметр составляет 280 мм, то он может обнаруживать объекты размером от 20 до 150 см.

Изготовление металлоискателя «Пиратские» руки — задача несложная, что является огромным преимуществом этого прибора. Компоненты сборки доступны и их легко найти. Они очень дешевые. Купить их можно в магазине радиодеталей или на рынке.

Перечень необходимых деталей для изготовления

Попробуем собрать металлоискатель «Пират» своими руками. Подробная инструкция поможет сделать это без ошибок даже неопытным радиолюбителям.

Устройство имеет две схематические модификации. В первом случае используется микросхема NE555 (отечественный аналог микросхемы КР1006ВИ1) — таймер. Но если у вас не получилось получить этот компонент, авторы также предусмотрели другой вариант схемы, основанный на транзисторах.

Тем не менее, рекомендуется собирать устройство по первой схеме, так как она имеет большую стабильность при работе.

При сборке на основе транзисторов выбирайте правильную частоту и длительность, так как они имеют довольно большой разброс технических характеристик.Для этого воспользуйтесь осциллографом.

Печатная плата прибора

Самодельный металлоискатель «Пират» имеет несколько вариантов разводки печатной платы, но чаще всего используют плату серии «Сприн Лайот».

После пайки к нему подключается питание. Для этого подайте любой источник питания с напряжением 9-12 Вольт. Можно прибегнуть к использованию батареек «Крона» (3 или 4 штуки) или батарейки. Использование одной «короны» не рекомендуется, так как это вызовет быстрое падение напряжения, что, в свою очередь, приведет к постоянному зависанию устройства.

Изготовление катушки для металлоискателя «Пират»

Как и другие модели импульсных устройств для поиска металла, прибор нетребователен к точности при изготовлении катушки. Вполне допустимо использовать ту, которая наматывается на оправку диаметром 190-200 мм — 25 витков. В этом случае используется обмоточный эмалированный провод сечением 0,5 мм.

Обмотки катушки обматываются изоляционной лентой или лентой. Кстати, чтобы увеличить глубину поиска устройства, можно прибегнуть к намотке названной детали, диаметром 260-270 мм, 21-22 витка тем же проводом.

Катушка прибора закреплена в твердом корпусе, который должен быть изготовлен, например, из пластика. Это необходимо для защиты устройства от ударов о землю или траву во время работы агрегата. Такой чехол можно приобрести в интернет-магазинах. Вообще, при изготовлении поисковых катушек не рекомендуется использование металлических деталей.

Выводы указанной детали припаяны к многожильному проводу сечением 0,5 — 0,75 мм. В идеале это две самоплетенные проволоки.Ваше устройство готово!

Обзоры

Имеющиеся на металлоискателе «Пират» отзывы свидетельствуют о том, что он стал очень популярным среди пользователей. По их словам, устройство обладает высокой степенью функциональности, а вещи из металла находят в короткие сроки и без ошибок. Легко наносится и не ощущается в руке.

Готовый прибор собран из нескольких частей, которые легко собираются. Нижняя часть — это его основание. Системная работа с устройством очень наглядная.Установить металлоискатель «Пират» не составит труда.

Развитие эноцитов у красного мучного жука Tribolium castaneum

Abstract

Эноциты — это особый тип клеток, необходимый для процессинга липидов, секреции феромонов и передачи сигналов в процессе развития. Их развитие хорошо охарактеризовано у Drosophila melanogaster , но остается неизвестным, сохраняется ли программа развития у других видов насекомых. В этом исследовании мы сравниваем спецификацию и развитие личиночных оеноцитов у Drosophila и красного мучного жука Tribolium castaneum .Во-первых, мы идентифицируем несколько полезных реагентов для мечения личиночных оеноцитов, включая линию улавливания энхансера Tribolium GFP и простой метод окрашивания конъюгированным с флуофором стрептавидином, который распознает эноциты у разных видов насекомых. Во-вторых, мы используем эти инструменты для описания развития оеноцитов в эмбрионах Tribolium , и наши результаты подтверждают консервативную роль передачи сигналов MAP-киназы, а также Spalt, Engrailed, HNF4 и вентральные вены, лишенные факторов в производстве специфичных для брюшной полости оеноцитов. клетки.Однако эмбрионы Tribolium продуцируют в четыре раза больше эноцитов на брюшной сегмент, чем Drosophila , и в отличие от Drosophila , эти клетки быстро подавляют экспрессию фактора транскрипции Spalt. Таким образом, эти результаты обеспечивают новое понимание молекулярных путей, регулирующих спецификацию эноцитов у разных видов насекомых.

Введение

Эноциты — это особый тип клеток, ответственный за множество важных метаболических и поведенческих ролей у насекомых (Chapman, 1998; Snodgrass, 1993).Функция эноцитов, пожалуй, лучше всего изучена у Drosophila melanogaster , который имеет отдельные популяции личинок и взрослых оеноцитов (Gould et al., 2001). Личиночные эноциты изначально формируются в эмбрионе и после созревания экспрессируют большое количество различных ферментов, необходимых для метаболизма липидов (Gutierrez et al., 2007). Фактически, избирательное удаление оеноцитов личинки приводит к неспособности личинки мобилизовать и перерабатывать липиды из жирового тела, что в конечном итоге приводит к серьезным дефектам роста и летальному исходу до окукливания (Gutierrez et al., 2007). Взрослые эноциты развиваются независимо от имагинальных тканей во время окукливания, и недавние работы показали, что они модулируют ухаживание и агрессивное поведение взрослых мух посредством выработки кутикулярных углеводородов, которые служат феромонами (Billeter et al., 2009; Fernandez et al., 2010 ). Следовательно, оеноциты личинок были уподоблены гепатоцитам позвоночных из-за их критической роли в гомеостазе липидов, тогда как взрослые оеноциты участвуют в коммуникации животных посредством продукции феромонов.В этой статье мы сосредоточены на сравнении и противопоставлении развития личиночных эноцитов у двух разных видов насекомых.

Личиночные оеноциты в Drosophila melanogaster представляют собой специфический для брюшной полости тип клеток, который формируется в кластеры от трех до девяти клеток в каждом полусегменте первых семи сегментов брюшка (Gould et al., 2001). Элегантные исследования показали, что генетическое взаимодействие между Hox-фактором Abd-A (Abd-A), факторами транскрипции Spalt (Spalt-major (Salm) и Spalt-related (Salr)) и передачей сигналов рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) пути необходимы для спецификации эноцитов (Brodu et al., 2002, 2004; Эльстоб и др., 2001; Рустен и др., 2001). В этой модели Abd-A индуцирует секрецию лиганда EGF Spitz из специфической клетки-предшественника сенсорного органа брюшной полости, которая находится внутри спинной эктодермы, экспрессирующей Spalt. Соседние клетки, которые получают сигнал EGF, дополнительно активируют экспрессию Spalt, расслаиваются в эмбрионе и передаются на судьбу личиночных клеток оеноцитов. Поскольку в этом контексте EGF ведет себя как морфоген ближнего действия, одновременно указываются только три-четыре клетки, контактирующие с сенсорным предшественником (Brodu et al., 2004; Шило, 2005). Однако, как только первые клетки расслаиваются на эмбрион, от трех до четырех новых клеток вступают в контакт с сенсорным предшественником, получают сигнал EGF и повторяют еще один цикл спецификации эноцитов. Поскольку сенсорный предшественник секретирует EGF в течение ограниченного периода времени во время эмбриогенеза, обычно происходит только два раунда рекрутирования оеноцитов, дающих в среднем шесть оеноцитов на кластер (Brodu et al., 2004; Witt et al., 2010). После спецификации оеноциты созревают и впоследствии активируют экспрессию фактора транскрипции ядерного фактора гепатоцитов-4 (HNF4), а также многочисленных липид-модифицирующих ферментов, необходимых для процессинга липидов во время роста личинок (Gutzwiller et al., 2010; Паланкер и др., 2009).

Эксперименты, сфокусированные на продукции личинок дрозофилы , предоставили множество генетических и молекулярных маркеров, специфичных для оеноцитов. Однако до сих пор использование этих реагентов ограничивалось исследованием D. melanogaster . Напротив, эноциты у других видов были описаны только на стадиях личинки / нимфы с использованием классических гистологических и анатомических подходов, где они идентифицируются по их большому размеру, политеническим ядрам и свойствам окрашивания (Jackson and Locke, 1989; Snodgrass, 1993).Даже без использования молекулярных маркеров эти исследования установили степень разнообразия в расположении и количестве эноцитов в разных кладах насекомых. В то время как большинство видов склонны группировать свои оеноциты в небольшие группы по 6–10, Истхэм описал паразитических ос с> 20 оеноцитов на кластер (Eastham, 1929; Gould et al., 2001). Более того, распределение эноцитов может сильно различаться. У большинства клад есть метамерные скопления непосредственно под покровом брюшных сегментов. Однако некоторые также рассредоточивают свои эноциты среди тканей жирового тела, в то время как другие, такие как жесткокрылые (жуки), организуют их непрерывной полосой по всей длине брюшка (Chapman, 1998; Wheeler, 1892).Есть даже описания кузнечиков и муравьев с эноцитами, распространившимися на грудные сегменты на поздних стадиях их соответствующих личинок / нимф (Wheeler, 1892; Zara and Caetano, 2004). Таким образом, различия в конечном местоположении и количестве оеноцитов личинок у разных видов насекомых представляют собой потенциально полезную модель для проведения сравнительных исследований биологии эволюционного развития.

Учитывая разнообразие насекомых и важную роль личиночных эноцитов в метаболических функциях, мы хотели изучить развитие эноцитов у отдаленно родственных видов насекомых.Для сравнительных исследований с Drosophila melanogaster мы выбрали красного мучного жука Tribolium castaneum. T castaneum — это новый модельный организм, имеющий секвенированный геном, и в отличие от Drosophila , Tribolium представляет собой насекомое с короткими зародышевыми полосками, которое последовательно добавляет сегменты во время эмбрионального развития (Richards et al., 2008; Roth and Hartenstein, 2008 ). Здесь мы идентифицируем несколько молекулярных маркеров, которые распознают личиночные оеноциты в Tribolium , в том числе линию ловушек-энхансеров, специфичных для oenoctye, около вентральных вен , лишенную гомолога ( vvl ), который также экспрессируется в оеноцитах Drosophila (Inbal и другие., 2003). Кроме того, мы определили, что конъюгированный с флуорофором стрептавидин действует как новый биомаркер, способный обнаруживать личиночные эноциты у нескольких видов насекомых. Наконец, мы используем эти биомаркеры для выявления как сходства, так и различий между эмбриональным развитием личиночных оеноцитов в пределах Tribolium по сравнению с таковыми в Drosophila . Наши находки показывают, что, подобно Drosophila , Tribolium оеноциты личинок являются абдоминально-специфическими и первоначально рекрутируются из Spalt-положительной эктодермы, которая впоследствии активирует экспрессию фактора HNF4.В отличие от Drosophila , однако, оеноциты Tribolium быстро подавляют экспрессию Spalt, рекрутируются в гораздо большем количестве (более 20 оеноцитов на полусегмент) и образуют непрерывную полосу оеноцитов между брюшными сегментами. Обсуждаются значение методов окрашивания эноцитов насекомых и результаты межвидового исследования.

Материалы и методы

Насекомые

Жуков выращивали в пластиковых бутылках при 30 ° C в инкубаторе Digitherm 47L (Tritech Research, DT2-MP-38), увлажняемом через небольшой лоток с водой.Жуки KT817 ( vvl-GFP ) были приобретены у Сью Браун в складе запасов Tribolium Университета штата Канзас (http://www.geku-base.uni-goettingen.de/) (Trauner et al., 2009 ). Сайт встраивания элемента piggybac-XP3-GFP определяли с помощью обратной ПЦР (iPCR) на кольцевых геномных фрагментах, полученных в результате расщепления Hha1. Продукт ПЦР секвенировали с использованием праймеров PRF1 5’-ACCGATAAAAACACATGCGTCAAT-3 ’и PRR1 5’-ATGCATTTGCCTTTCGCCTTAT-3’. Сайт интеграции и ориентация были подтверждены генотипированием ПЦР с использованием локус-специфичных праймеров (5′-AAGTCAGCCACCAATCATCG-3 ‘, 5′-GCTCAATTCGGGTGCTTGTT-3′) в паре со специфическими для piggybac праймерами (PRF1 и PLR1 5’-ACAGCGACGGATTCGCG соответственно) .Все стоки Drosophila выращивали при 25 ° C, и ранее были описаны трансгенные линии Rho654-lacZ (Li-Kroeger et al., 2008) и svp-lacZ (Elstob et al., 2001).

Продукция антител

Бактериальный экспрессионный вектор Tribolium castaneum HNF4 получали с использованием ПЦР для амплификации и клонирования кДНК HNF4, кодирующей аминокислоты 162-494 в рамке считывания с N-концевой меткой 6X-His (pET14b, Novagen). Плазмиду экспрессии трансформировали в бактерии BL21-CodonPlus (DE3) -RP (Stratagene), и экспрессию белка индуцировали с использованием 0.25 мМ IPTG в течение 2 часов при 37 ° C. Бактерии лизировали в 8М буфере для лизиса мочевины и очищали с помощью Ni-аффинной хроматографии, как описано ранее (Gutzwiller et al., 2010). Очищенный белок использовали для генерации антител к HNF4 у крыс с использованием стандартных протоколов (Cocalico Biologicals)

Фиксация эмбрионов и окрашивание антителами

Эмбрионы Tribolium отделяли от трехпрофильтрованной среды путем просеивания через сито # 50. Собранные эмбрионы подвергали дехорионированию в 50% растворе отбеливателя в течение 8 минут, промывали в H ₂ O и фиксировали встряхиванием в 8% растворе формальдегид / гептан в течение 20 минут.Эмбрионы экстрагировали в метаноле и растирали через иглу 20 г с удалением голых эмбрионов через каждые ~ 10 проходов. Drosophila эмбрионов были собраны стандартными методами. Личинки Drosophila и яйца кабачка получали аналогично эмбрионам Tribolium , но вместо этого обрабатывали 100% отбеливателем и фиксировали встряхиванием в течение 30 мин.

Для окрашивания антител образцы инкубировали в течение ночи в коктейле первичных антител в PBX (PBS плюс 0.2% Triton-X) при 4 ° C, выдерживали 3 раза по 20 минут в PBX, инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре с соответствующими вторичными антителами, конъюгированными с флуорофором, промывали 4 раза по 20 минут в PBX и устанавливали для микроскопического анализа. Изображения получали либо на флуоресцентном микроскопе Zeiss, оборудованном апотомным фильтром, либо на конфокальном микроскопе Leica. Были использованы следующие первичные антитела: Cut (мышь, 1:20, DSHB, # 2B10), фосфогистон 3 (мышь, 1: 1000, Millipore, # 05-806), Dm HNF4 (крыса, 1: 2000, ( Gutzwiller et al., 2010)), Tc HNF4 (крыса, 1: 2000), Dm Spalt (кролик, 1: 1500, (Xie et al., 2007)), фосфо-ERK (дифосфорилированный MAPK; Mouse, 1:50, Sigma , M-8159) Engrailed (мышь, 1:20, DSHB, # 4D9), бета-галактозидаза (курица, 1: 1000, Abcam) Dm Abd-A (морская свинка, 1: 500, (Li-Kroeger et al. , 2008)) и UbdA (Mouse, 1: 5, DSHB FP6.87). Для обнаружения стрептавидина в оеноцитах образцы инкубировали в течение ночи с Cy5-конъюгированным стрептавидином (1: 1000) и промывали 4 раза по 20 мин, по крайней мере, с одной дополнительной промывкой в ​​течение ночи в PBX.Подсчет эноцитов проводили на 10 совпадающих по возрасту эмбрионах Drosophila с использованием Dm анти-HNF4 и 9 соответствующих по возрасту эмбрионах Tribolium с использованием комбинации vvl-GFP и Tc анти-HNF4. Все результаты были проанализированы ANOVA с использованием Excel.

Результаты

Для проведения сравнительного исследования образования личиночных оеноцитов у разных видов насекомых мы сначала оценили способность двух антител, которые маркируют оеноциты Drosophila , перекрестно реагировать с консервативными белками в эмбрионах Tribolium .У эмбрионов Drosophila белки Spalt-major (Salm) и ядерного фактора гепатоцитов 4 (HNF4) коэкспрессируются в абдоминальных эноцитах на стадии 16 эмбрионов Drosophila (). Поскольку Tribolium содержит один гомолог генов HNF4 и Spalt и антигены Drosophila Salm и HNF4, используемые для создания каждого антитела, включающего высококонсервативные белковые домены (не показаны), мы протестировали эти реагенты на эмбрионах Tribolium (Gutzwiller et al. al., 2010; Xie et al., 2007). Как показано в, мы обнаружили, что антитело, индуцированное против белка Drosophila Spalt, но не против HNF4 (не показано), обнаруживает отчетливый паттерн экспрессии в эмбрионах Tribolium . В соответствии с паттерном, наблюдаемым у ранних эмбрионов Drosophila , антитело Spalt маркирует широкую полосу дорсальной эктодермы, которая включает область, из которой возникают эноциты в эмбрионах Tribolium (и см. Сравнение ранних эмбрионов D. melanogaster с эмбрионами начало т.castaneum ) (Li-Kroeger et al., 2008; Rusten et al., 2001). Кроме того, мы обнаружили, что это антитело Spalt демонстрирует паттерн экспрессии, идентичный опубликованному паттерну Spalt in situ в заднем крыле Tribolium (не показано и (Tomoyasu et al., 2005)). Однако, в отличие от Drosophila , не наблюдали отчетливых Spalt-положительных скоплений брюшных клеток у зрелых эмбрионов, что позволяет предположить, что этот фактор может не поддерживаться в личиночных оеноцитах Tribolium .

B-B » ‘) Вид сбоку 46h зародыша Tribolium castaneum (Tc), иммуномеченного на HNF4 (зеленый) и Spalt (пурпурный), показывает, что эти два фактора не локализуются совместно в эноцитах эмбриона жука. .

C-C » ‘) Вид сбоку 46h Tribolium castaneum (Tc) эмбриона, иммуномеченного на HNF4 (зеленый) и стрептавидина, конъюгированного с флуорофором (SA-Cy5), выявляет скопления оеноцитов в брюшной полости, но не на груди сегменты. Обратите внимание, что дополнительное сильное окрашивание SA-Cy5 наблюдается в плевроподе (P) в первом сегменте брюшной полости.

D) Крупным планом вид сбоку трех брюшных сегментов третьего возраста Личинка Drosophila melanogaster , окрашенная стрептавидином, конъюгированным с флуорофором (SA-Cy5), выявляет скопления примерно из шести эноцитов в каждом сегменте.

E) Изображение в светлом поле, показывающее вид сбоку зрелого эмбриона Hemipteran Anasa tristis .

F-F ’) Вид сбоку зрелого эмбриона Hemipteran Anasa tristis , меченного флуорофор-конъюгированным стрептавидином (SA-Cy5), выявляет скопления эноцитов в брюшных сегментах.Подмножество нейронов (n) также маркируется стрептавидином (F ‘).

A) Вид сбоку трех брюшных сегментов со стадии 11 svp-lacZ Эмбрион Drosophila , иммуноокрашенный на Engrailed (En, красный), β-галактозидазу (β-gal, зеленый) и Spalt (синий). svp-lacZ (β-gal) маркирует вновь определенные оеноциты Drosophila (стрелки), которые лежат в заднем компартменте, отмеченном En.

B) Вид сбоку трех брюшных сегментов на стадии 14 svp-lacZ Эмбрион Drosophila , иммуноокрашенный на Engrailed (En, красный), β-галактозидазу (зеленый) и Spalt (синий). На этой стадии оеноцитов Drosophila все еще положительны по svp-lacZ (β-gal) и Spalt, но они имеют подавляющую регуляцию En и лежат впереди заднего компартмента (стрелка).

C) Вид сбоку трех брюшных сегментов эмбриона 26h Tribolium , иммуноокрашенного на En (красный), vvl-GFP (зеленый) и Spalt (синий).Обратите внимание, что ранние vvl-GFP положительные клетки (стрелка) лежат в домене Spalt (C ’’, звездочка) и перекрываются с экспрессией En в брюшных сегментах.

D) Вид сбоку трех брюшных сегментов эмбриона 46h Tribolium , иммуноокрашенного на En (красный), vvl-GFP (зеленый) и Spalt (синий). Обратите внимание, что GFP-положительные клетки оеноцитов лежат впереди En-положительных клеток заднего компартмента и не экспрессируют Spalt.

Поскольку антитело Drosophila HNF4 не распознало специфический паттерн в эмбрионах Tribolium , мы затем создали антисыворотку против белка HNF4 Tribolium .Как показано в, мы обнаружили паттерн экспрессии HNF4, который маркирует многообещающий набор кластеров клеток, которые ограничены брюшными сегментами у 46-часовой эмбрионов. Используя оптические срезы, эти клетки можно отличить от подлежащей мезодермы HNF4 + как по интенсивности окрашивания HNF4, так и по их латеральному положению. В соответствии с тем, что эти HNF4-положительные клетки являются личиночными оеноцитами, они также коэкспрессируют липид-модифицирующий фермент (увы, приложение, рис. 1), который экспрессируется в оеноцитах Drosophila , а также несколько других маркеров оеноцитов, описанных ниже.Более того, совместное окрашивание с антителом Spalt подтвердило, что в отличие от сильной повышающей регуляции, наблюдаемой в зрелых оеноцитах D. melanogaster , оеноциты в более старых эмбрионах T. castaneum лишены экспрессии Spalt (’’ ’).

Новый биомаркер личиночных оеноцитов

В процессе подтверждения того, что HNF4-экспрессирующие абдоминально-специфические клетки в эмбрионах Tribolium являются личиночными оеноцитами, мы случайно определили новый биомаркер для оеноцитов.При тестировании множества антител на перекрестную реактивность в Tribolium (полный список антител см. В дополнительной таблице 1) мы попытались усилить сигнал с помощью системы мечения биотин-стрептавидин. Вместо этого мы обнаружили, что всякий раз, когда использовался биотин-стрептавидин, устойчивый устойчивый сигнал специфически маркирует цитоплазму тех же кластеров клеток брюшной полости, которые экспрессируют HNF4, а также отросток плевропода 1 сегмента брюшной полости (). Последующее поэтапное удаление как первичных, так и вторичных антител показало, что добавление одной только молекулы стрептавидина, конъюгированной с флуорофором, приводит к этой специфической для брюшной полости паттерну.Сильное мечение личиночных оеноцитов стрептавидином, вероятно, связано с этим типом клеток, содержащим высокие уровни биотина, который служит важным коферментом для метаболизма жирных кислот (Fletcher and Myant, 1960). Таким образом, флуоресцентный конъюгированный стрептавидин является полезным красителем для распознавания личиночных оеноцитов в эмбрионах Tribolium .

Затем мы определили общую применимость стрептавидина в качестве биомаркера эноцитов, протестировав окраску на двух других насекомых. В то время как стрептавидин не распознавал личиночные эноциты во время эмбриогенеза D melanogaster , это окрашивание было очень эффективным для мечения эноцитов в личинке третьего возраста ().Более того, способность стрептавидина распознавать этот тип клеток имеет дополнительное преимущество, заключающееся в том, что не требуется рассечение личинок (см. Методы). Чтобы дополнительно проверить применимость окраски стрептавидином к насекомым, мы собрали эмбрионы полуокрылых из рода Anasa (часто называемые жуками-кабачками) из тыквенной тыквы на юго-западе Огайо. Яичная скорлупа вручную отделялась от каждого эмбриона на поздней стадии (), и нанесение флуоресцентно-конъюгированного стрептавидина выявило сильное окрашивание областей живота, соответствующее скоплениям эноцитов (стрелки, ‘).Однако следует отметить, что окрашивание стрептавидином в Anasa , а также в Drosophila и Tribolium также пометило подмножество других клеток, включая нейроны. Следовательно, по возможности следует использовать дополнительные маркеры для определения клеток, меченных стрептавидином, как эноцитов. Тем не менее, эти данные предполагают, что стрептавидин, вероятно, будет широко применимым маркером личиночных оеноцитов у многих видов насекомых.

Линия улавливания энхансеров для отслеживания развития оеноцитов в

Мощным инструментом для мечения конкретных типов клеток в модельных организмах является использование линий ловушек энхансеров.Недавняя работа нескольких исследовательских групп сделала множество таких ловушек энхансеров GFP в Tribolium castaneum доступными через базу данных GEKU (http://www.geku-base.uni-goettingen.de/) (Trauner et al., 2009 ). Сканирование доступных линий ловушек энхансеров выявило несколько с интересными паттернами экспрессии, специфичными для брюшной полости. Одна из этих линий, KT817, была выбрана для анализа, и было обнаружено, что она экспрессирует GFP по той же схеме, что и клетки, меченные HNF4 () и стрептавидином (). (Обратите внимание, что дополнительное слабое окрашивание GFP в каждом сегменте связано с не-сайт-специфической активностью конструкции GFP).Используя протокол iPCR (см. Методы), мы определили, что piggybac-GFP находится на расстоянии ~ 60 килобайт от гомолога Tribolium вентральных вен без гена ( vvl ), который, как известно, экспрессируется в ранних личиночных оеноцитах в D melanogaster (Inbal et al., 2003). Таким образом, мы полагаем, что специфический для эноцитов паттерн экспрессии, скорее всего, обусловлен энхансером Tribolium vvl , несмотря на присутствие нескольких других предсказанных генных моделей в локусе.Этот вывод становится более правдоподобным из-за относительно большого расстояния между генами в геноме Tribolium , а также из предыдущих находок, описывающих энхансеры более чем на 100 килобайт от их генов-мишеней (Levine, 2010). Следовательно, ловушка энхансера KT817 в дальнейшем обозначается как vvl-GFP .

A) Снимок экрана обзора GB, показывающий сайт интеграции (красная стрелка) вектора piggybac-GFP ~ 60 т.п.н. ниже по потоку от Tribolium без вентральной вены ( vvl ) гомолог.

до н.э.) Вид сбоку 46h эмбриона vvl-GFP Tribolium , иммуномеченного на GFP (зеленый) и либо HNF4 (B, пурпурный), либо совместно окрашенного стрептавидином, конъюгированным с Cy5 (SA-Cy5, пурпурный), показывает брюшную полость -специфические кластеры GFP-положительных клеток, которые метятся совместно с HNF4 и SA-Cy5. Сегменты T3 и A1 помечены.

Затем мы использовали vvl-GFP и антитело HNF4 в качестве маркеров для изучения развития личиночных оеноцитов Tribolium во время эмбриогенеза (и Дополнение на рис. 2).Антитело против фактора транскрипции Cut также использовалось в качестве маркера близлежащих ямок трахеи (). Для этого анализа мы выполнили синхронизированные коллекции эмбрионов и определили несколько временных точек и ориентиров развития, которые коррелируют с морфологическими переходами для эноцитов. Во-первых, начальные следы экспрессии vvl-GFP можно увидеть вскоре после завершения расширения зародышевой полосы (26 часов), и это окрашивание быстро усиливается, выявляя кластер примерно из 15 клеток в каждом сегменте брюшной полости (через 28 часов).В это время GFP-положительные клетки лишены экспрессии HNF4, а сигнал GFP имеет небольшую, но стабильно более высокую интенсивность в передних (A1-A3) по сравнению с задними (A4-A8) сегментами брюшной полости (через 28 часов). Это открытие согласуется с тем, что Tribolium представляет собой насекомое с короткими зародышевыми полосами, которое добавляет новые (более молодые) задние сегменты брюшка во время развития (Schroder et al., 2008). К 34 часам каждый из сегментов брюшной полости с A1 по A8 содержит клеток, экспрессирующих vvl-GFP , которые совместно экспрессируют HNF4 (), и эти клетки образуют кластер клеток в форме полумесяца вокруг Cut-положительной трахеальной ямки.По завершении ретракции зародышевой ленты (46 ч) количество GFP- и HNF4-положительных оеноцитов увеличивается до более чем 20 клеток на кластер в большинстве сегментов брюшной полости, и эти клетки присутствуют в одном кластере дорсальнее трахеальной ямки в каждом из них. сегмент. К 50 часам суставы ног образуют четкие границы, и удлинение кишечной трубки можно увидеть у эмбрионов, наклоненных в сторону дорсальной проекции (не показано). На этом этапе скопления эноцитов начинают распространяться как кзади, так и внутрь от покровов, что приводит к формированию характерной формы акульих зубов.Кроме того, многие неоеноцитные клетки начинают экспрессировать высокие уровни HNF4, но эти клетки не распознаются стрептавидином и не экспрессируют vvl-GFP (через 50 часов, данные не показаны). К 58 часам кишечная трубка образует полную петлю, и дорсальное закрытие завершается. На этой стадии GFP-положительные клетки все еще сильно окрашиваются стрептавидином, но экспрессия HNF4 значительно снизилась. Более того, эноциты образуют непрерывную полосу, проходящую через сегментарные границы, и мигрировали дорсально, морфология соответствует классическому описанию личиночных оеноцитов жесткокрылых (Snodgrass, 1993; Wheeler, 1892).

Эмбрионы были сопоставлены по стадиям и окрашены по общей морфологии (DAPI в A), маркерам эноцитов ( vvl-GFP в B и D, HNF в C и D), и Cut-антитело, которое маркирует развивающуюся трахеальную ямку (E). Эноциты, маркированные vvl-GFP , сначала появляются в виде слабых скоплений в задней части брюшных сегментов на 28 часах развития. Экспрессия GFP становится более устойчивой к 34 часам, клетки начинают экспрессировать HNF4, и кластер оеноцитов тянется к переднему и дорсальному в каждом сегменте брюшной полости.На 46 час. Большинство эноцитов располагаются в кластере дорсальнее трахеальной ямки, при этом небольшое количество клеток остается только кзади, что приводит к образованию характерной формы запятой. К 50 часам метка GFP показывает, что оеноциты образуют кластер клеток в форме «акульего зуба» в каждом сегменте брюшной полости, и хотя оеноциты поддерживают экспрессию HNF4, многие дополнительные клетки также начинают экспрессировать высокие уровни этого белка. После дорсального закрытия (58 ч) эноциты образуют непрерывную полосу клеток, и экспрессия HNF4 начала угасать.Более того, эноциты мигрировали внутрь и дорсально относительно наружных отверстий трахеальных ямок.

Сравнение спецификации оеноцитов между

Оеноциты Drosophila первоначально определяются в эмбрионах стадии 11, когда клетки дорсальной эктодермы, экспрессирующие Spalt, получают временный сигнал EGF. (Elstob et al., 2001). ; Rusten et al., 2001). Клетка-отправитель EGF, специфический предшественник сенсорного органа (SOP), может быть помечена с использованием трансгенной репортерной линии, взятой из ромбовидного локуса : Rho654-LacZ , а принимающие EGF клетки можно визуализировать с помощью фосфо-ERK-антитела. который распознает активированный сигнальный путь MAP-киназы () (Gabay et al., 1997; Ли-Крегер и др., 2008; Witt et al., 2010). Клетки, принимающие EGF, впоследствии активируют и поддерживают экспрессию Spalt во время созревания эноцитов. Напротив, мы обнаружили, что зрелые оеноциты Tribolium (отмеченные HNF4 и стрептавидином) не поддерживают экспрессию Spalt (). Однако возможно, что оеноцитов Tribolium первоначально рекрутируются из Spalt-экспрессирующих клеток дорсальной эктодермы и впоследствии подавляют этот фактор во время созревания. Чтобы проверить эту идею, мы тщательно проанализировали раннюю экспрессию Spalt, фоспо-ERK и vvl-GFP в эмбрионах жуков.Как показано на, небольшой вентральный выход Spalt-положительных клеток слабо, но постоянно окрашивается с использованием антитела фосфо-ERK. Хотя эти эмбрионы не экспрессируют трансген vvl-GFP на этой стадии развития, самая ранняя экспрессия vvl-GFP обнаруживается внутри Spalt-позитивного выхода на поверхность, который ограничен брюшными сегментами (). Однако в отличие от Drosophila , Tribolium Spalt экспрессия быстро теряется в этих клетках, при этом белок не обнаруживается в GFP-положительных клетках к 34 часам развития.

C) Вид сбоку трех брюшных сегментов 28-часового эмбриона Tribolium , иммуноокрашенного на UbdA (пурпурный) и vvl-GFP (зеленый).Обратите внимание, что первые vvl-GFP положительные клетки экспрессируют абдоминальный Hox-фактор, обнаруживаемый антителом UbdA.

D) Вид сбоку трех брюшных сегментов эмбриона 46h Tribolium , иммуноокрашенного на UbdA (пурпурный) и vvl-GFP (зеленый). Обратите внимание, что GFP-положительные клетки оеноцитов экспрессируют низкие уровни абдоминальных Hox-факторов.

Подсчет эноцитов в

Предыдущие публикации показали, что эмбрионов Drosophila melanogaster имеют скопления эноцитов в брюшной полости, в среднем приблизительно шесть клеток в каждом полусегменте (Brodu et al., 2002, 2004; Gould et al., 2001). Используя HNF4 в качестве маркера, мы обнаружили схожее количество эноцитов в эмбрионах D melanogaster стадии 16 (5,79 ± 0,92 на кластер), а также определили, что количество эноцитов существенно не различается между сегментами брюшной полости вдоль передне-задней части. ось (). Напротив, визуализация личиночных оеноцитов в Tribolium выявляет гораздо более крупные скопления клеток в сегментах брюшной полости. Чтобы оценить количество эноцитов, которые образуются на кластер в Tribolium , мы выбрали для анализа эмбрионы, меченные HNF4 и vvl-GFP , в момент времени (46 часов), в котором легко обнаруживается сильное ядерное окрашивание HNF (см.).Число эноцитов было сведено в таблицу для каждого сегмента брюшной полости девяти эмбрионов соответствующего возраста, что показало общее среднее значение 22,3 ± 0,6. Однако количество эноцитов, которые формируются между брюшными сегментами, варьировалось в зависимости от положения вдоль передне-задней оси в этот момент времени развития. Как показано на фиг.4, самый передний сегмент А1 в среднем составлял 28,3 ± 1,0 оеноцитов, тогда как самый задний сегмент А8 в среднем составлял 14,7 ± 1,3 клетки на кластер. К сожалению, нам не удалось определить количество эноцитов в более старых эмбрионах, потому что эноциты из разных сегментов находятся в тесном контакте друг с другом (см. Временные точки от 58 до 65 часов на рис. 2 и дополн.), А окрашивание ядер HNF4, используемое для подсчета этих клеток, исчезает во время разработка.Однако это различие в количестве эноцитов вдоль передне-задней оси, вероятно, является временным событием, поскольку размер положительных кластеров vvl-GFP- у более старых эмбрионов Tribolium и ранних личинок одинаков во всех сегментах брюшной полости (см. Рис. ). Таким образом, в отличие от эмбриона с длинным зародышем Drosophila , который одновременно продуцирует одинаковое количество оеноцитов во всех абдоминальных сегментах, эмбрион с коротким зародышевым поясом Tribolium продуцирует оеноциты с градиентом от высокого к низкому вдоль передне-задней оси живот.

A-B) Сравнение количества эноцитов на кластер в каждом брюшном сегменте эмбрионов Drosophila (A) и Tribolium (B) График показывает среднее значение и стандартную ошибку для количества эноцитов, образующихся в каждом сегменте брюшной полости. Drosophila эмбрионов в среднем составляет около 6 оеноцитов на кластер, при этом статистических различий между сегментами брюшной полости от А1 до А7 не наблюдается.Напротив, у эмбрионов Tribolium в среднем более 20 эноцитов на кластер, а сегменты A1 (*) и A8 (**) статистически отличаются от всех других сегментов брюшной полости (p <0,05).

CD) Вид сбоку трех брюшных сегментов 26h (C) или 40h (D) эмбриона Tribolium , иммуноокрашенного на vvl-GFP (зеленый) и фосфогистон3 (ph4, пурпурный), показывают, что клетки экспрессирующие GFP не могут колокализоваться с маркером ph4 G2-M.

Более высокое количество эноцитов, продуцируемых в Tribolium , может быть связано либо с привлечением большего количества эноцитов из пула компетентных клеток, либо с последующим размножением эноцитов посредством деления клеток. Чтобы различить эти возможности, мы окрасили эмбрионов vvl-GFP митотическим маркером фосфо-гистон 3 (ph4) (Mahadevan et al., 1991). Как показано на фиг.4, ph4 мечен множеством клеток внутри эмбриона Tribolium . Однако мы не обнаружили совместного мечения GFP-положительных клеток с ph4 на любой стадии эмбриогенеза ().Эти находки согласуются с предыдущими исследованиями на Drosophila , которые показали, что эноциты являются постмитотическими после их первоначальной спецификации (Gould et al., 2001). Таким образом, увеличенное количество vvl-GFP -положительных оеноцитов в Tribolium не происходит за счет пролиферации после спецификации и, вероятно, связано с повышенным рекрутированием клеток этого типа.

Обсуждение

Личиночные оеноциты представляют собой тип клеток, обнаруживаемый у насекомых, и функциональные исследования на Drosophila melanogaster показали, что они необходимы для правильного метаболизма липидов и роста личинок (Chapman, 1998; Gutierrez et al., 2007). В этом исследовании мы сравниваем спецификацию и развитие личиночных эноцитов между D melanogaster и красным мучным жуком Tribolium castaneum . Наши результаты имеют два важных значения: 1) Мы определили общий инструмент (конъюгированный с флуорофором стрептавидин), который можно использовать для распознавания эноцитов у других видов насекомых, а также несколько полезных маркеров для изучения эноцитов в триболии Tribolium . 2) Мы применили эти инструменты для описания спецификации оеноцитов у эмбрионов Tribolium , и наши результаты показывают как сходство, так и различия в их развитии по сравнению с Drosophila .

Стрептавидин является полезным маркером судьбы эноцитов у насекомых

Из-за своего относительно небольшого размера и высокого сродства к стрептавидину биотин долгое время был излюбленной молекулой для мечения и очистки биологических белков. Однако биотин также является важным коферментом, необходимым для многочисленных клеточных реакций, включая правильный синтез жирных кислот и метаболизм (Fletcher and Myant, 1960). Следовательно, неудивительно, что оеноциты личинок, которые экспрессируют многие липид-модифицирующие ферменты, необходимые для метаболизма жирных кислот, имеют относительно высокие концентрации биотина, который может быть помечен с использованием стрептавидина, конъюгированного с флуорофором.Мы показали полезность окрашивания стрептавидином у видов, встречающихся в пределах Diptera, Coleoptera и Hemiptera, предполагая, что этот метод мечения оеноцитов, вероятно, будет широко применим ко многим видам насекомых. Однако следует помнить о двух важных предостережениях при использовании стрептавидина для мечения клеток. Во-первых, способность окрашивания стрептавидином строго маркировать личиночные эноциты зависит от стадии. Например, окрашивание стрептавидином распознало эноциты в личинке третьей стадии Drosophila melanogaster , но не метило эти клетки в эмбрионе.Напротив, стрептавидин сильно пометил оеноциты Tribolium вскоре после их спецификации в эмбрионе жука. Это дифференциальное мечение личиночных эноцитов стрептавидином предполагает, что каждый организм может иметь особые потребности в концентрации биотина для ферментативных реакций внутри эноцитов в разные моменты времени развития. Во-вторых, поскольку биотин играет важную роль в цикле лимонной кислоты, стрептавидин, вероятно, метит большинство клеток и, следовательно, не является специфическим для эноцитов красителем.Однако клетки, такие как эноциты, которым требуется высокая концентрация биотина по сравнению с их соседями, будут легко обнаружены стрептавидином. Дополнительные типы клеток, включая подмножество нейрональных клеток, помечены стрептавидином в Drosophila , Tribolium и Anasa эмбрионах и / или личинках (не показаны) (Ziegler et al., 1995). Таким образом, для окончательной идентификации клеток как личиночных оеноцитов могут потребоваться другие маркеры и / или морфологические характеристики, такие как размер и положение клеток в организме.Тем не менее, простота получения и использования стрептавидина, конъюгированного с флуорофором, для мечения личиночных оеноцитов делает его мощным инструментом для изучения этого типа клеток.

Сравнительное развитие личиночных оеноцитов между

Развитие эноцитов можно разделить на два ключевых этапа; спецификация клеток и созревание клеток. У Drosophila спецификация личиночных оеноцитов требует активации передачи сигналов EGF в дорсальных клетках эктодермы, которые экспрессируют фактор транскрипции Spalt.Сигнал EGF исходит от конкретной клетки-предшественника сенсорного органа в заднем отделе брюшных сегментов. В среднем шесть соседних клеток на полусегмент брюшной полости получают достаточную передачу сигналов EGF, чтобы дополнительно регулировать экспрессию Spalt и передавать судьбу клеток оеноцитов (Brodu et al., 2002, 2004). Во время клеточной спецификации оеноциты также экспрессируют несколько других факторов транскрипции, включая белки Ventral-veinless (Vvl) и Seven-up (Svp) (Brodu et al., 2002; Inbal et al., 2003). После спецификации эноцитов эти клетки становятся постмитотическими, остаются сгруппированными и в конечном итоге активируют высокие уровни фактора транскрипции HNF4, а также многочисленные липид-модифицирующие ферменты посредством в значительной степени неизвестных механизмов во время созревания (Gutierrez et al., 2007; Palanker et al. , 2009).

В этом исследовании мы создали и использовали несколько маркеров для изучения развития личиночных оеноцитов у Tribolium castaneum , и наши результаты выявили сходства и различия в развитии оеноцитов между этими двумя видами.Как и в случае Drosophila , личиночные оеноциты Tribolium специфичны для брюшной полости (хотя оеноциты образуются в первых 8 сегментах брюшной полости у Tribolium по сравнению с первыми 7 сегментами брюшной полости у Drosophila ), и эти клетки являются постмитотическими после клеток. Спецификация. Более того, эноциты возникают из Spalt-экспрессирующих клеток дорсальной эктодермы в заднем компартменте, и эти клетки также метят антитело фосфо-ERK. Однако, в отличие от Drosophila , оеноциты Tribolium не активируют Spalt, и его экспрессия не поддерживается в зрелых оеноцитах.Эти находки подтверждают, что Spalt может играть существенную роль в процессе спецификации, но не в созревании эноцитов. Вместо этого созревающие личиночные эноциты как в Tribolium , так и в Drosophila экспрессируют фактор транскрипции HNF4. Кроме того, наш анализ динамики развития vvl-GFP согласуется с оеноцитами Tribolium , участвующими в обширном паттерне миграции, который не наблюдается у Drosophila . После спецификации в заднем компартменте оеноцитов Tribolium становятся локализованными вокруг формирующейся трахеи, которая лежит в более передне-дорсальной области каждого абдоминального сегмента.Кластеры Tribolium впоследствии образуют непрерывную полосу эноцитов между брюшными сегментами, что согласуется с паттерном, описанным в классических исследованиях (Snodgrass, 1993; Wheeler, 1892).

Дополнительным отличием между Drosophila и Tribolium является подсчет эноцитов. Оба вида образуют кластеры оеноцитов, но кластеры Tribolium примерно в 4 раза больше — 22 клетки / кластер по сравнению с 6 в кластерах Drosophila .Это различие может быть результатом более длительного периода, в течение которого оеноциты набираются в Tribolium . Как и Drosophila , большинство оеноцитов Tribolium рекрутируются в начальный импульс, который происходит через 24-26 часов развития жука. Однако дополнительные vvl-GFP -положительные клетки ( оеноцитов Tribolium ) продолжают возникать из полосы Engrailed в небольших количествах до 46 часов развития. Продолжающаяся продукция в vvl-GFP -положительных клетках не является следствием клеточного деления, поскольку мы не обнаружили совместного мечения с маркером пролиферации клеток фосфо-гистоном-3.Следовательно, личиночные оеноциты являются постмитотическими после спецификации как у Drosophila , так и у Tribolium . Кроме того, мы обнаружили, что передние брюшные сегменты продуцируют больше эноцитов на сегмент, чем задние брюшные сегменты у Tribolium , но не у Drosophila . Это открытие предполагает, что насекомые с короткими зародышевыми полосками ( Tribolium ) производят меньше эноцитов в задних сегментах, которые добавляются позже в процессе развития, тогда как насекомые с длинными зародышевыми полосками ( Drosophila ), которые образуют все брюшные сегменты, одновременно производят одинаковое количество эноцитов в каждый сегмент.

Оставшийся без ответа вопрос, который поднимают наши открытия, заключается в том, что является источником сигнала фосфо-ERK в Tribolium и зависит ли он от передачи сигналов EGF? В отличие от Drosophila , по-видимому, не существует центральной одиночной сигнальной клетки, поскольку у Tribolium наблюдаются широкие полосы активности фосфо-ERK, которые покрывают более 10 клеток одновременно. Более того, активность фосфо-ERK может представлять активацию нескольких основных тирозинкиназозависимых сигнальных путей, и, таким образом, окрашивание фосфо-ERK не окончательно демонстрирует, что передача сигналов EGF участвует в спецификации оеноцитов в Tribolium .У Drosophila секретирующие EGF клетки можно идентифицировать путем анализа экспрессии ромбовидных сериновых протеаз , которые обрабатывают EGF (Elstob et al., 2001; Lage et al., 1997). Мы проанализировали эмбриональную экспрессию ромбовидных генов в эмбрионах Tribolium и обнаружили, что единственным ортологом ромбовидной формы с различимым паттерном экспрессии является ромбовидный-A (корневой ортолог ромбовидных образований 909–399 D.melanogaster ). Однако, хотя мы обнаружили экспрессию rhomboid-A в области образования трахеи (не показано), мы не обнаружили экспрессию, относящуюся к области рекрутирования оеноцитов. Это открытие может указывать на то, что либо ромбовидный не является источником передачи сигналов фосфо-ERK, чтобы индуцировать оеноциты, либо что уровни ромбовидного , экспрессируемого в этой области, ниже нашего порога обнаружения. В соответствии с более поздней возможностью, экспрессия Drosophila rhomboid в сенсорных клетках брюшной полости, которые индуцируют эноциты, намного ниже, чем экспрессия, обнаруженная в трахеальных ямках Drosophila .Следовательно, будущие исследования потери функции ромбовидных генов и пути EGF необходимы для окончательного установления их роли в спецификации эноцитов Tribolium .

Ультразвуковой туман. Ультразвуковой генератор тумана: характеристика, фото и отзывы

Не спорю, можно было бы быстрее купить готовый ультразвуковой увлажнитель, но у меня его так много, что вышел сам. В статье я покажу, как и из чего я сделал, а в конце расскажу, как бы я сделал это сейчас, исходя из опыта текущего запуска.
В марте приехал ультразвуковой опрыскиватель в пластиковый корпус, специально готовился к лету, собирали конструкцию, но в один прекрасный день в ультразвуковой головке не сработал датчик уровня, и в результате работы на сухой — корпус сенсора оплавился, и кое-где правда, заметил не сразу — стоило.
Неделю назад мне попала ультразвуковая головка в металлическом корпусе и поэтому пришлось разбирать всю конструкцию и переделывать заново.

Нужно

• — Ведро офисное емкостью 10 литров;
• — блок питания на 12 вольт;
• — опрыскиватель ультразвуковой в металлическом корпусе;
• — монтажная коробка черного цвета размером 100 x 60 x 25 мм;
• — любой буст-модуль, у меня оказался модуль XL6009;
• — Регулятор опрокидывания 12 вольт;
• — Турбина;
• — выключатель питания, несколько гнезд и вилок к ним;
• — в процессе сборки появилась дурацкая мелочь;
• — А еще — случай с неисправным контроллером бунта — вы увидите дальше.

Визуальная составная схема

• — на входе 12 вольт поднимается на модуль до 22 вольт и подается на ультразвуковой распылитель;
• — Также вход 12 вольт подается на вентилятор, регулирующий оборот;
• — оба подключены параллельно и через общий выключатель питания, подключенный к входному разъему.

Узел вентилятора

Узел накладки

• — Сначала наметили и проделали дырку для наружного тумана;
• — Потом просушил отрезал прямоугольное окно для веерного узла;
• — Чтобы заглохнуть клапан, по всей внутренней части крышки наклеил водостойкий клей из поролона;
• — заготовка, чтобы пары не травили, пришлось хорошо смочить в одном клее в несколько приемов;
• — После высыхания на почти водоотталкивающую поролоновую заготовку наклеил заготовку из обрезки линолеума.

Узел качающийся

Узел электроники

Ультразвуковая головка и поплавковая система

Пробный запуск

• — Корзина офисная — 2 шт.5 долларов.
• — Опрыскиватель ультразвуковой — 5,6 дол.
• — увеличение модуля XL6009, который может быть другим — 0,80 доллара.
• — Турбина — 1,43 доллара.
• — Черный ящик 100х60х25 мм — 1,08 доллара.
• — Готовый регулятор революции стоит 1,32 доллара.

Ультразвуковая пушка собрана своими руками на всех двух логических инверторах и имеет минимальное количество компонентов. Несмотря на простоту сборки, конструкция довольно мощная и может применяться против пьяных пьяниц, собак или подростков, которые сидят и поют в чужих подъездах.

Схема ультразвукового пистолета

Для генератора микросхемы CD4049 (HeF4049), CD4069 или отечественные микросхемы K561LN2, K176PU1, K176PU3, K561PU4 или любые другие стандартные логические микросхемы с 6 или 4-мя логическими инверторами, но придется менять подвал.

Схема нашей ультразвуковой пушки выполнена на микросхеме HeF4049. Как уже было сказано, нам нужно использовать всего два логических инвертора, а какой из шести инверторов использовать — решать вам.

Сигнал с выхода последней логики усилен транзисторами. Для накатки последнего (силового) транзистора в моем случае применены два маломощных транзистора КТ315, но выбор огромный, можно поставить любые NPN транзисторы малой и средней мощности. .

Выбор ключа питания тоже не критичен, можно поставить транзисторы из серии КТ815, КТ817, КТ819, КТ805, КТ829 — последний составной и будет работать без дополнительного усилителя на маломощных транзисторах.Для увеличения выходной мощности можно использовать мощные композитные транзисторы типа CT827 — но для его раскачки все равно понадобится дополнительный усилитель.

В качестве излучателя можно использовать любые SC и RF головки мощностью 3-20 Вт, также можно использовать пьезоизлучатели от сирен (как в моем случае).

Выбор конденсатора и сопротивления сильного резистора — Частота настраивается.

Такой ультразвуковой пистолет, собранный своими руками, вполне подойдет для защиты загородного участка или частного дома. Но не нужно забывать — ультразвуковой диапазон опасен! Не слышно, но тело чувствует. Дело в том, что уши воспринимают сигнал, но мозг не в состоянии его отклонить, отсюда такая реакция нашего тела.

Собирайте, тестируйте, радуйтесь — но будьте предельно внимательны, и я прощаюсь с вами, но ненадолго — он же Касьян.

Климатическая техника постоянно развивается, предлагая потребителю новые возможности регулирования параметров микроклимата.Решение проблемы увлажнения воздуха давно вышло из разряда опциональной заправки массивных конденсаторов и реализовано в виде полноценных автономных устройств. Сегодня желающим освежить помещение в доме частицами влаги предлагается огромный ассортимент компактных увлажнителей воздуха. И отдельное место в этом классе техники занимает туман, который тоже подходит для бытового использования, но при этом имеет свои особенности эксплуатации.

Общие сведения о генераторах тумана

Внешне такие устройства напоминают большие увлажнители воздуха или малогабаритные мобильные кондиционеры.По конструкции это небольшой блок, который подключается к электросети и работает в заданном режиме. Намного интереснее принципы работы устройства. Есть два типа генераторов — для образования матовости (декоративные) и непосредственно для увлажнения холодного тумана. В первом случае генерация осуществляется механически под давлением — через насос и компрессор буквально выдавливается и мелкие частицы жидкости выбрасываются в помещение. Особенность таких систем в том, что они работают не с обычной водой, а с аэрозолями и модифицированными смесями.Конечно, они тоже содержат воду, но в качестве разбавителя. В качестве активных ингредиентов обычно выступают глицерин или гликоль. В свою очередь, ультразвуковой генератор тумана направлен на распыление частиц холодной воды с целью изменения микрокламатических характеристик. Принцип работы этого устройства заслуживает отдельного внимания.

Как работают ультразвуковые модели?

Чтобы понять особенности работы таких устройств, важно выделить две составляющие рабочего процесса — это непосредственно генерирующий ультразвуковой аппарат и рабочая среда.Первый компонент воздействует на рабочую жидкую среду колебательными волнами (ультразвуком) с частотами, достаточными для разрушения поверхностного слоя на мелкие элементы. В процессе работы водная среда называется озвученной — в данный момент ультразвуковой генератор тумана выполняет над ней следующие операции:

• Воздействие на поверхность.
• Увеличение поверхности взаимодействия звуковых волн с жидкостью.
• Дисперсия. Дисперсия жидких частиц на фоне тонкого помола.
• Эмульгирование. Генерация эмульсий.

Не всегда обязательно выполнять полный цикл описанных операций. Более того, не каждый генератор в принципе может осуществлять, например, диспергирование и эмульгирование. Конкретные режимы работы со списком операций устанавливает сам пользователь.

Технические характеристики

В характеристиках устройства можно проследить отличия от обычных увлажнителей. В первую очередь это сила.Для квартиры или небольшого дома вполне хватит инструмента на 700-1000 Вт. Но если мы говорим о больших студиях, площадках или беседках, то мощность должна быть порядка 1200-1500 Вт. Из этого показателя производительность, составляющая 250-300 м 2 / мин и далее. То есть это количество выработки и выпуска пара. Иногда производители подсчитывают эту сумму в «кубиках». В этом случае средний показатель производительности составит 50-70 м 3 / мин. Что касается характеристик блока питания, то для обслуживания бытового ультразвукового увлажнителя воздуха достаточно 220 В.А вот генератор тумана из профессионального сегмента может питать трехфазную сеть напряжением 380 В. Это промышленные установки, которые также отличаются большими размерами.

Положительные отзывы

С точки зрения обычного потребителя, генераторы ультразвука отличаются способностью быстро заполнять помещения до тумана. Если тому же увлажнителю или даже парогенератору для обеспечения желаемого результата требуется от 30 минут до 1,5-2 часов, то в случае с генератором тумана — 8-10 минут.К достоинствам также можно отнести качество распыления, которым отличается даже бюджетный туманообразователь. Ультразвук хорошо проявляет себя с точки зрения защитных качеств. Он устойчив к перегрузкам в сети и внешним воздействиям, в том числе температурным.

Отрицательная обратная связь

Несмотря на привлекательные характеристики, эргономика большинства генераторов этого типа оставляет желать лучшего. И в плане дизайнерских качеств, и в управлении пользователи больше ценят аккуратные и компактные устройства для увлажнения и промывки воздуха.Кроме того, генераторы требуют особого обслуживания. Например, во время работы следует периодически очищать или заменять мембрану ультразвукового увлажнителя тумана генератора, но компоненты для такого оборудования не всегда легко найти на рынке. С другой стороны, многие владельцы отмечают высокую степень надежности конструкции, поэтому поломки случаются редко.

Самостоятельное производство генератора

Для сборки генератора вам понадобится ультразвуковой модуль для функции колебания, источник питания, пластиковый контейнер вентилятора и водопроводная арматура для подачи жидкости.В процессе работы ультразвуковой модуль будет создавать колебательный эффект с выбросом мелких частиц воды. В свою очередь, перед этим модулем устанавливается вентилятор, выводящий поднятые частицы за пределы помещения. Соответственно, вода все это время будет находиться в емкости. Какие функции еще должен иметь ультразвуковой генератор тумана? Своими руками можно собрать поплавок, который будет подниматься и опускаться в зависимости от уровня воды. Эта функция важна, если вы планируете оставить устройство в рабочем состоянии несколько часов или даже дней.По мере того, как жидкость рассеивается, система подойдет к точке отключения, которая просто вызывает поплавок с механикой пресса на соответствующую кнопку источника питания.

Как выбрать ультразвуковой генератор тумана?

Многое зависит от назначения генератора. Чаще всего такие устройства приобретаются для увлажнения помещения, если до этого оно было сухим. В этом случае важны основные параметры, среди которых интенсивность образования тумана, производительность и качество распыления как таковые, чтобы образовавшееся облако не привело к чрезмерному приближению обоев или мебели.Опять же, есть модели, предназначенные исключительно для декоративной функции. Они создают только дымку определенной плотности, которую можно использовать на студийных съемках. В этом случае необходимо отдать предпочтение ультразвуковому генератору тумана с подсветкой, который сделает то же облако визуально ярче и эффектнее. Важно учитывать возможность использования генератора вне дома, то есть без возможности подключения к электросети. Такие устройства есть — на них нужно будет рассчитать потенциал аккумулятора.В среднем аккумулятор обеспечивает автономную работу в течение 30-60 минут.

Заключение

При всех достоинствах генераторы с функциями формирования тумана еще не полностью вписались в сферу бытового использования. Об этом говорит и отсталая эргономика, и устаревшая система управления. И это понятно, поскольку инструменты пришли из промышленного сегмента, в котором такие качества практически не учитываются. И напротив, это решение более чем подходит для жилищного строительства.Что касается стоимости, то она тоже немаленькая — в среднем 5-6 тысяч рублей. Однако на ресурсе Avito ультразвуковой генератор тумана можно найти за 2 тысячи здесь, кстати, можно будет договориться с продавцами комплектующих с расходниками к устройству. Стоят они тоже недорого, но важно учитывать соотношение технических параметров Компоненты с конструкцией генератора. Для тех же мембран размеры стандартизированы, но найдены современные модификации, к которым предъявлены новые нормативные требования.Поэтому перед покупкой стоит обязательно проверить соответствие отдельных деталей и комплектующих.

Всем привет!

Зимой особенно актуальным становится вопрос увлажнения воздуха в квартире. На курорт поступает огромный ассортимент всевозможных устройств, некоторые с задачей справляются, а некоторые нет.
Итак, в погоне за экономией, 3 года назад не совсем правильно выбрала, и приобрела прибор нулевой эффективности по увлажнению воздуха. После нескольких дней попыток использования это «ведро с вентилятором» отключили и сняли с глаза.
Позже на просторах Алиэкспресс был замечен дешевый аппарат — герой сегодняшнего обзора. Было решено приобрести его и модернизировать вышеупомянутый «ковш».
Подробнее Из этого получилось под кат.

Внешний вид, размеры и вес

Устройство выглядит как небольшой цилиндр с проволокой.Сверху есть отверстие, в которое вкручивается пластиковая гайка, откручивая, мы увидим мембрану, которая естественно не прилипает. Больше ничего интересного. С нижней стороны есть прорези для забора воды.

Возможно снизу это тоже что-то можно открутить, но не смог, но извините.

Есть модификации устройств со встроенными светодиодами.

Габаритные размеры устройства:
Диаметр — 35мм.
Высота — 29мм

На блоке питания есть подвижная резиновая заглушка диаметром 16мм.

Вес устройства 58 грамм

Длина кабеля — 93 сантиметра

Разъем для подключения блока питания круглый, центральный плюс, внешний минус.

Блок питания 24 В и устройство 1a приобретались отдельно.

Штепсельная вилка имеет диаметр около 6 мм.

Мощность кабеля питания 91 см.

Демонстрация работы

Демонстрация работы устройства на небольшом видео.

Колхозная плавающая корзина

Чтобы не нервничать! Дикий колхоз !!!

Допирование имеющегося «увлажнителя»

Все остальное собираем и проверяем как работает.

Отлично, можно верх с вентилятором поставить.

Получившийся результат

Малая демонстрация на видео

выводы

В увлажнителе я использую воду из-под фильтра с обратным осмосом, чтобы на поверхностях в помещении не появлялись известковые образования.

Работой получившегося увлажнителя доволен.

Из минусов:
1. Требуется еще розетка.
2. При работе аппарата слышен небольшой «буффель».

Вот и все.

Всем здоровья и спасибо за внимание!

Экология потребления. Подробности: Многие считают приобретение увлажнителя воздуха для квартиры делом неудачным и ненужным. Но это совсем не так. Это устройство вовсе не роскошь. Тем более что сделать своими руками ультразвуковой увлажнитель воздуха можно.

Многие считают, что приобретение увлажнителя воздуха для квартиры — дело неудачное и ненужное.Но это совсем не так. Это устройство вовсе не роскошь. Тем более что сделать своими руками ультразвуковой увлажнитель воздуха можно.

Очень часто увлажнители приобретают в связи с необходимостью регулировки качества воздуха в тех помещениях, в которых постоянно проживают люди. Такая необходимость может быть вызвана появлением заболеваний, причиной которых может стать некачественный сухой воздух, затрудняющий дыхание и негативно влияющий на общее самочувствие. Кроме того, сухость на воздухе может навредить не только людям, но и предметам мебели из дерева, натурального паркета, а также растениям и цветам.

Для детской комнаты увлажнитель воздуха просто незаменимый прибор, так как недостаточная влажность воздуха вредит детскому организму. Сухой воздух повреждает слизистые оболочки и увеличивает вероятность респираторных заболеваний.

Любые увлажнители воздуха для дома и офиса не требуют установки и имеют возможность круглые сутки в закрытом помещении, которым может быть офис, квартира или офис. Такие устройства работают достаточно тихо, поэтому их можно установить в спальне.

По устройству и принципу работы можно выделить пять основных типов увлажнителей воздуха:

Это наиболее традиционный вид увлажнителей. Функционирование этого устройства заключается в холодном испарении жидкости. Вода заливается в емкость, затем направляется на поддон, а оттуда в испарительные картриджи. Самые простые модели имеют сменные бумажные фильтры. От испарительных элементов воздух, увлажняясь, уходит в комнату.

Такие устройства не только увлажняют воздух, но и очищают его. Вся грязь скапливается в картриджах и фильтрах. Для увлажнителей холодного воздуха используется дистиллированная вода. Достоинством таких устройств является еще и то, что они очень экономят электроэнергию. Важно, чтобы они работали практически без шума. Увлажнители этого вида принято устанавливать в детской и спальне, а также в офисах. Недостаток такого устройства заключается только в том, что они имеют небольшую емкость.

Функционирование этих устройств основано на испарении жидкости за счет ее нагрева. Такие устройства работают по принципу электрочайника. Если вода в испарителе полностью перевернулась, сам прибор отключается. Поэтому такие устройства полностью пожаробезопасны. Этот тип увлажнителей имеет гидростат, который позволяет прибору контролировать влажность воздуха и выключаться самостоятельно, когда этот показатель достигает желаемого значения.

Паровой или ультразвуковой увлажнитель воздуха лучше всего использовать для создания комфортного климата в Апельсинах.Положительные качества паровых приборов — удобство эксплуатации и использования их для ингаляций. Вам просто нужно добавить в прибор настой из лекарственных компонентов или ароматических масел. Ароматические масла позволяют применять прибор также в качестве освежителя воздуха.

Принцип действия ультразвукового увлажнителя воздуха заключается в переводе частиц воды в состояние «водяного облака». Это происходит не за счет закипания жидкости, а за счет высокочастотных колебаний. Сухой воздух попадает в увлажнитель.Затем с помощью вентилятора выводятся в виде холодного тумана. Такие увлажнители не нагревают воду, поэтому их можно использовать в помещениях, где находятся маленькие дети.

Ультразвуковые увлажнители воздуха подходят для помещений, в которых находятся объекты, требующие поддержания определенного уровня влажности. К таким предметам относятся антиквариат, антикварная мебель, музыкальные инструменты. Также в жилом помещении можно установить ультразвуковой увлажнитель воздуха.

Принцип работы ультразвукового увлажнителя воздуха позволяет очень точно контролировать влажность.Конечно, такие устройства довольно дороги, но их достаточно просто сделать самостоятельно.

Такие увлажнители помогают не только увлажнять, но и очищать воздух от любых загрязнений. Процесс увлажнения проходит по принципу работы паровых приборов. Фильтр, вставленный в устройство, чаще всего является антиаллергенным и антибактериальным. Если устройство оборудовано угольным фильтром, это поможет уберечь помещение от неприятных запахов и табачного дыма. Эти комплексы можно устанавливать в офисах и детских комнатах.В некоторые модели можно вставлять капсулы для ароматерапии.

Хотя все эти типы увлажнителей имеют свои преимущества, но все же используются ультразвуковые увлажнители, которые можно изготовить самостоятельно. Помочь в этом может пошаговая инструкция, описанная ниже.

Такие увлажнители воздуха распыляют водную суспензию, в которой находятся мельчайшие частицы воды. Извлеченная из увлажнителя суспензия переходит в состояние пара. Такие устройства очень мощные, но стоят очень дорого. Поэтому такие увлажнители, которые еще называют форсунками, устанавливают только в производственных помещениях, где они могут себя оправдать.

Положительные стороны таких устройств видны невооруженным глазом. К ним можно отнести высокую степень безопасности, простоту использования, малошумный показатель и небольшие размеры, что очень важно для российских квартир. К тому же такие увлажнители, несмотря на хорошую производительность, экономят электроэнергию. Точная регулировка влажности также является важным преимуществом.

Единственным недостатком таких устройств является жесткая потребность в воде.Лучше всего, если он будет дистиллированным.

Для того, чтобы сделать ультразвуковой увлажнитель воздуха своими руками, вам потребуется:

• Ультразвуковой отпариватель.
• Вентилятор для компьютера.
• Пластиковая тара на 5 или 10 литров.
• Пластиковый стаканчик.
• Деталь детской пирамиды в виде бублика.
• Электропитание на 24В 7.
• Гибкая труба, гофрированная.
• Стабилизатор.
• Алюминиевый уголок

Каждый необходимый для создания увлажнитель воздуха можно найти дома или купить в магазине. Общая стоимость такого самодельного приема составит не более одной тысячи рублей, что значительно ниже стоимости заводского увлажнителя воздуха. Итак, как сделать ультразвуковой увлажнитель воздуха? Опишем весь процесс.

Подпишитесь на наш YouTube канал Ekonet.ru, который позволяет смотреть онлайн, скачивать с YouTube бесплатно видео о выздоровлении, омоложении человека..

Нравится, поделись с друзьями!

https://www.youtube.com/channel/ucxd71u0w04qcwk32c8ky2ba/videos.

Подписаться —

Лабораторный блок питания TL431 — Buzz On Live

Всем привет, сегодня мы сделаем лабораторный блок питания на корпусе старого компьютерного блока питания ATX. Он не идеален, но имеет право на жизнь!
Технические характеристики устройства следующие: Стабилизированное регулируемое выходное напряжение 2,7-17В Регулируемый выходной ток 0-3А (5А) Мощность 50 (80) Вт Линейная схема
Инструменты и материалы:
— Неисправен блок питания ATX
— Конденсаторы 2шт. 100nF
-Конденсаторы 1шт 10мкФ
-Конденсаторы 2шт 2200мкФ
-Мощный транзистор npn 3шт MJE13007
-Транзистор KT817 (kt815) BD139
-Резисторы разного номинала и мощности
-12V Zeneriometer
-12V Zeneriometer
-12V
— Микросхема TL431
— Транзистор 1шт 2N5551
— Переменный резистор 1шт 1К
— Переменный резистор 1шт 10К
— Предохранитель 2А
— Трансформатор TN-7 (любой TN) или другой
— Диодный мост не менее 6А
— Паяльник
— Паяльник
Припой
-Flux
Схема:
Диоды D1 и D2 — 1N4007, C6 и C7 на 100 нФ.Т1 и Т5, Т3 любой мощный n-p-n транзистор (13007).
R6 — шунт 0,22 Ом, T2 — KT817 (KT815, BD139). А Т4 — 2N5551, Br1 — диодный мост на 6А и больше!
P1 для 10 кОм, P2 для 1 кОм, R2 для 240 Ом 2 Вт, R4 для 1 кОм 1 Вт и R8 10 кОм 2 Вт (5 Вт).
D4 — стабилитрон 12В, охладитель 12В. R7 на 220 Ом (не 1КОМ), также трансформатор Тр1 ТН-7 или любой другой!
Creation
Разберем блок питания ATX и возьмем корпус и радиатор, кулер, возможно, еще и диодный мост.
Ставим диодный мост и транзистор на термопасту!
Паяем конденсатор и радиатор с деталями на макетную плату.Просверливаем отверстия под клей, трансформатор и потенциометр.
Ввинтить трансформатор в корпус, припаивать первичную обмотку через предохранитель к кабелю.
Перед этим подключить обмотки на 220В и 12,6В.
Паяем схему и кулер.
Закрепляем клеммы и потенциометр, закрываем крышкой! Подключаемся к сети.
Формулы и расчеты
Для начала необходимо определить сопротивление резистора. При максимальном входном напряжении 19 В согласно закону Ома сопротивление рассчитывается следующим образом:
R = U / I = 19 В / 0.