Шанс киров олимп. Шанс Киров Олимп: ремонт бытовой техники и электроники, новостройки, спортивные события

Ещё новости о событии:

Команда «Стулово» стала победителем второго этапа турнира юных хоккеистов «Надежда»

20 марта на базе ледового дворца «Олимп Арена» г.Кирова состоялся второй этап поощрительного турнира для юных хоккеистов «Надежда».
10:31 26.03.2018 Главный федеральный инспектор — Киров

Вятскополянские хоккеисты отличились

На днях в Кирово-Чепецке состоялся второй этап турнира юных хоккеистов «Надежда».
08:43 26.03.2018 Vp43.ru — Вятские Поляны

Киров. Адреса букмекерских контор для ставок на спорт

Здесь объединены адреса букмекерских контор в городе Киров. Неточности возможны.

1. ул. Воровского, д. 104

1. пер. Базарный, д. 9
2. ул. Пролетарская, д. 17а, пом. 1001
3. ул. Московская, д. 4, пом. 1054
4. ул. Энгельса, д. 59
5. ул. Щорса, д. 21
6. Ленинский район, проспект Строителей, д. 24, пом. 1002

1. ул. Московская, д. 4, помещение 1054
2. ул. Пролетарская, 17а, помещение 1001
3. ул. Карла Маркса, 127
4. Ленинский район, проспект Строителей, д. 24
5. ул. Менделеева, д. 21

1. ул. Ленина, д. 88
2. ул. Свободы, 135в
3. ул. Профсоюзная, д. 44
4. Нововятский р-н, ул.Советская, д.11 г
5. ул. Щорса, д. 21
6. ул. Московская, д. 52
7. ул. Воровского, д. 143
8. ул. Павла Корчагина, д. 80, помещение 1002
9. Октябрьский район, ул. Чернышевского, д. 5, пом. 1006
10. проспект Строителей, д. 52
11. ул. Воровского, д. 119

1. Ленинский район, ул. Комсомольская, д. 42а

1. ул. Московская, д. 4, пом. 1054
2. ул. Дерендяева и Воровского, д. 80/71
3. ул. Щорса, д. 21

1. ул. Пролетарская, д. 17а
2. ул. Дерендяева и Воровского, д. 80/71

1. ул. Дерендяева и Воровского, д. 80/71
2. ул. Дерендяева и Воровского, д 80/71

1. ул. Пролетарская, 17А, помещение 1001
2. ул. Ленина, д. 86
3. улица Дерендяева/ Воровского, д. 80/ 71
4. ул. Воровского, д. 159

1. Ленинский р-н, пр-т Строителей, д. 1а

1. ул. Карла Либкнехта, д. 119
2. ул. Милицейская, д. 29
3. Первомайский район, ул. Профсоюзная, д. 11
4. ул. Московская, д. 4, пом. 1054

1. ул. Пролетарская, д. 17а, пом. 1001

1. Ленинский р-н, ул. Комсомольская, д. 40а
2. ул. Воровского, д. 137-137б

1. проспект Строителей, д. 1а

Какие редкие чемпионаты лучше подходят для ставок?

Голы (первый, последний), кто, когда, как забьёт – спорт прогнозы, ставки

Ставки на лыжный спорт, лыжи, двоеборье, прыжки с трамплина

Разница коэффициентов и прибыль

Чемпионат Европы – ставки, прогнозы, смотреть live

(2013) Технические характеристики »ShotOnWhat?

Супервайзер Vfx: Prophecy FX

Освещение Td / старший художник Matchmove

Художник по свету и рендерингу

Арт-директор по визуальным эффектам

Технический директор по эффектам

Художник по отслеживанию и сопоставлению

Цифровой художник: Ghost VFX

Цифровой наборщик / ведущий цифровой наборщик

Супервайзер визуальных эффектов: Ghost VFX

Координатор визуальных эффектов: Ghost VFX

Цифровой наборщик / On-set Data Wrangler

Сетевой администратор визуальных эффектов Супервайзер

Concept Designer

Концептуальный дизайнер

Технический директор по свету

Цифровой наборщик: Ghost VFX

Руководитель отдела: Worldwide FX

Координатор визуальных эффектов

Технический директор по эффектам

Руководитель отдела визуальных эффектов

Продюсер предварительной визуализации

Координатор визуальных эффектов 003

Координатор визуальных эффектов

Старший супервайзер по визуальным эффектам

Художник по свету и рендерингу

Цифровой наборщик: Ghost VFX

Цифровой наборщик: Ghost VFX

Руководитель съемок визуальных эффектов

Менеджер проектов по визуальным эффектам

Директор по операциям с FX

Координатор визуальных эффектов

Координатор превизуализации

Руководитель проекта по визуальным эффектам

Координатор визуальных эффектов

Координатор визуальных эффектов

Координатор визуальных эффектов

Координатор визуальных эффектов

Qfx и менеджер проектов

Qfx WWFX, Луизиана

Ведущий координатор визуальных эффектов

Цифровой композитор: Base FX

Руководитель: WWFX Shreveport

Старший композитор: Base FX

Художник по свету и рендерингу

Lead Effects Tec Технический директор: BaseFX

Цифровой композитор / основной блок Data Wrangler

Технический директор по освещению и поиску

Художник текстур: Worldwide FX

Цифровой композитор: Ghost VFX

Руководитель студии визуальных эффектов: Worldwide FX Sofia

Руководитель отдела разработки

Системный администратор визуальных эффектов

Начальник отдела Matchmove

Технический директор по эффектам

Технический директор по свету

Цифровой композитор: Ghost VFX

Цифровой наборщик / художник по визуальным эффектам

Технический директор по эффектам

Производство и техническая поддержка

и путеводитель по Санкт-Петербургу.Петербург, Россия.

О белых ночах Санкт-Петербурга, которые проходят с конца мая до середины июля, ходят легенды. В, казалось бы, бесконечных сумерках, когда солнце опускается за горизонт чуть больше часа сразу после полуночи, город обладает незабываемой сказочной красотой, которая действительно захватывает дух. Отсутствие темноты влияет на саму ткань жизни в городе, и весь город, кажется, принимает участие в двухмесячном круглосуточном празднике.Улицы изобилуют людьми до утра, разношерстная флотилия лодок курсирует по рекам и каналам без остановок, а ночная жизнь города наиболее активна и бурна, здесь проводится множество фестивалей и мероприятий.

Лето в Петропавловской крепости

Все это делает его самым популярным временем года для посетителей, поэтому вам нужно бронировать заранее. Имейте в виду также, что самые популярные достопримечательности могут быть переполнены, а очереди почти неизбежны.Кроме того, к концу июня большинство крупных культурных учреждений города будут отдыхать до сентября. Если главная цель вашей поездки — высокая культура, то весна или осень могут оказаться для вас более полезными.

Великим исключением из этого правила является всемирно известный фестиваль «Звезды белых ночей», который проходит с конца мая по июнь. В настоящее время он зарекомендовал себя как один из величайших фестивалей классической музыки в мире, ежегодно собирает множество международных звезд и демонстрирует лучшие местные таланты из оперных и балетных трупп Мариинского театра (более известного как Кировский за рубежом. ).Наряду с главным фестивалем проводится Международный фестиваль «Музыкальный Олимп» — уникальное мероприятие, которое собирает вместе молодых лауреатов мировых премий за музыкальные премьеры и дает им возможность выступить вместе с некоторыми очень известными именами.

Это также идеальное время, чтобы посетить царские дворцы по всему городу, увидеть знаменитые фонтаны в Петергофе — они официально включаются в начале июня с сопровождающими их гуляниями — и полюбоваться великолепными парками в Пушкине и Павловске.Однако имейте в виду, что это то, что будут делать все остальные.

К концу июля весь город как бы похолодел. Ничего особенного не происходит, и большинство жителей уезжают на дачи или отдыхать в другое место. Лучше всего последовать их примеру, и это прекрасное время, если вы используете Санкт-Петербург в качестве базы для путешествий по Северной России.

С конца мая погода обычно теплая и влажная, но не чрезмерно, а вечера могут быть прохладнее, даже когда солнце все еще светит, поэтому стоит взять с собой хотя бы один теплый свитер.Следует отметить, что если вам больше пятнадцати лет, шорты сразу отметят вас как туриста и никак не повлияют на вашу популярность среди местных жителей. Также следует помнить о комарах, которые могут доставлять неудобства, особенно в старых зданиях. Наиболее эффективная защита обеспечивается съемными фумигаторами, которые дешевы и доступны в киосках, супермаркетах и ​​хозяйственных магазинах. Самые распространенные бренды — Raptor и Raid, и они должны обеспечивать нормальный ночной сон.

Птицы Лаем Пак Биа, Таиланд

Если вы любитель природы, не упустите шанс понаблюдать за птицами в Таиланде . Различные экосистемы страны и ее расположение вдоль основного пути миграции объясняют тот факт, что здесь было идентифицировано около 1000 видов. Одно из лучших мест для наблюдения за птицами, особенно куликов, — это Лаем Пак Биа, район всего в 2 часах езды от Бангкока. Этот регион также является лучшим местом для посещения соляных ванн Таиланда.Земля выдается в Сиамский залив, образуя песчаную косу, а на береговой линии есть несколько мангровых зарослей. Это также место реализации проекта Laem Pak Bia по экологическим исследованиям и развитию (инициированный королевской властью «Королевский проект»), который является лучшим местом из всех. Вход сюда бесплатный, и вы можете ездить по водоемам на машине в качестве слепого. Также есть подходящая смотровая площадка / штора и пешеходная тропа в мангровые заросли. Обращает на себя внимание разнообразие птиц и их обилие.Эта фотогалерея состоит из снимков, сделанных во время двух отдельных посещений парка. ( Все фотографии © Кевин Револински. Не использовать без разрешения. )

Большой баклан

Серая цапля

Серая цапля

Большая цапля

Не самый лучший снимок — слишком далеко, немного размыто, так себе светлее — и я почти не снял его.Я подумал, что, пеликан? Мех. Оказывается, это пеликан с пятнистым клювом. Еще в 2002 году в мире их было менее 10 000, но сейчас это число немного больше. Его появление в Таиланде считается лучшей защитой мест размножения в Камбодже. Это все еще «почти под угрозой», и это было более важным событием, чем я думал.

Маленькая белая цапля

Маленький баклан сушится сам

Маленький баклан

Кайт-брамин, всегда крепкий, чтобы получить хороший снимок наверху на фоне яркого неба.

Чернокрылая ходуля в полете

Чернокрылая ходуля. Многие из них можно увидеть в соляных озерах.

Чернокрылая ходуля

Белогорлый зимородок всего в паре метров от машины.

Белогрудый Уотерхен, неуловимый маленький парень. Наконец-то я получил полупрозрачный снимок.

Здесь обычны усатые крачки.

Red-Wattled Lapwing

Я отделен от моих книг о птицах, так что сейчас Неизвестная птица.

В парке есть несколько довольно крупных варанов, которые ползают или плавают…

… и грубо высовывают нам языки.

Маленький зеленый пчелоед

Маленький зеленый пчелоед в полете.

Маленькая поганка с негнездовым оперением.

Маленький баклан

Серия прудов просто загружена птицами.

Яванская прудовая цапля в негнездовом оперении.

Напротив, яванская прудовая цапля в брачном оперении.

Яванская прудовая цапля в брачном наряде

Бекас обыкновенный. А вы думали, охота на бекасов — это миф?

Большой баклан

Все фотографии © Кевин Револински.Не использовать без разрешения.

Если вы заметили какие-либо ошибки при идентификации птиц, укажите на них. Я обычно использую путеводитель Крейга Робсона:

Эта поездка требует автомобиля и находится чуть более двух часов езды от Бангкока (в сторону Хуахина, см. Карту ниже). Лучше всего наблюдать за птицами утром и ближе к вечеру, но мы прекрасно проводим время здесь в любое время дня. Эта экскурсия проходит по территории, изобилующей соляными лужами. Еще одно достойное занятие — увидеть тайские соляные сковороды, которые здесь прекрасно сочетаются.Кроме того, есть замечательный тайский ресторан морепродуктов, до которого можно добраться только на лодке (но только по выходным и по предварительному заказу, часто за неделю или три).

Районные отели:

Эволюция нейрональных и астроглиальных нарушений в периконтузионной коре мышей, выявленная с помощью двухфотонной визуализации in vivo

Abstract

При черепно-мозговой травме механические силы, приложенные к черепу и мозг вызывает необратимые первичные нейрональные и астроглиальные повреждения, связанные с конечными дендритными перегибами и потерей позвоночника, что представляет собой острое повреждение синаптических цепей.Отек быстро развивается после травмы, повышая внутричерепное давление, что приводит к уменьшению кровотока и, как следствие, к церебральной ишемии, которая может вызвать вторичное повреждение периконтузионной коры. Также было показано, что распространение деполяризации происходит после черепно-мозговой травмы у людей и на животных моделях и, как полагают, ускоряет и обостряет вторичное повреждение тканей в корковой области, подверженной риску. Тем не менее, механизмы острого вторичного повреждения тонких синаптических цепей в периконтузионной коре после легкой черепно-мозговой травмы остаются неизвестными.Модель легкого фокального кортикального ушиба сенсомоторной коры взрослой мыши была реализована с помощью устройства для контролируемого повреждения коркового слоя. In vivo. Двухфотонная микроскопия в периконтузионной коре головного мозга использовалась для мониторинга через оптическое окно желтого флуоресцентного белка, экспрессирующего нейроны, усиленного зеленого флуоресцентного белка, экспрессирующего астроциты, и капиллярного кровотока. Дендритные бусинки в периконтузионной коре головного мозга развивались медленно, и потеря капиллярного кровотока предшествовала терминальному повреждению дендритов.Астроциты были опухшими, что указывало на отек, и оставались опухшими в течение следующих 24 часов на протяжении всего сеанса визуализации. В этой модели легкой черепно-мозговой травмы не было повторяющихся спонтанных распространяющихся деполяризаций; однако, когда распространяющиеся деполяризации неоднократно вызывались за пределами периконтузионной коры путем инъекции KCl под давлением, дендриты претерпевают быстрое сгибание и восстановление, совпадающее с прохождением распространяющихся деполяризаций, что было подтверждено электрофизиологическими записями в непосредственной близости от изображенных дендритов.Тем не менее, накопление метаболического стресса в результате всего лишь четырех раундов распространяющейся деполяризации значительно увеличивало долю дендритов с бусинами, которые были неспособны восстанавливаться во время реполяризации, тем самым облегчая терминальное повреждение. Напротив, аналогично индуцированные четыре раунда распространяющейся деполяризации у другой группы контрольных здоровых мышей не вызывали накопления дендритных повреждений, поскольку дендриты полностью восстанавливались от образования бусинок во время реполяризации. Взятые вместе, наши данные позволяют предположить, что при легкой черепно-мозговой травме острое повреждение дендритов в периконтузионной коре головного мозга вызвано снижением местного кровотока, скорее всего, в результате развивающегося отека.Кроме того, распространяющаяся деполяризация является специфическим механизмом, который может ускорить повреждение синаптических цепей в метаболически нарушенной периконтузионной коре, усугубляя вторичное повреждение после черепно-мозговой травмы.

Ключевые слова: острая травма головного мозга, дендритные бусинки, астроглиальный отек, кортикальная деполяризация, in vivo , двухфотонная микроскопия первичная и вторичная травма головного мозга.Первичная травма возникает в результате воздействия механических сил на череп и мозг. Основное повреждение активирует несколько факторов, которые еще больше увеличивают повреждение периконтузионной коры (Graham et al. , 2000). Эти факторы включают повышенное внутричерепное давление, цитотоксический / вазогенный отек, распространяющуюся деполяризацию, повышенный уровень внеклеточного калия, дисрегуляцию кальция, эксайтотоксичность, выработку свободных радикалов и воспалительные процессы, и это лишь некоторые из наиболее часто изучаемых механизмов (Greve and Zink, 2009).Церебральная ишемия долгое время считалась одним из механизмов вторичного повреждения ЧМТ (Bouma et al. , 1991), поскольку повышение внутричерепного давления из-за отека ткани приводит к потере кровотока (Nortje and Menon, 2004). . Подобно фокальному инсульту, повреждение после ЧМТ, по-видимому, усугубляется повторяющимися распространяющимися волнами распространяющейся деполяризации у ~ 55% пациентов-людей (Hartings et al. , 2009; Dreier, 2011; Hartings et al. , 2011 ). b ; Lauritzen et al., 2011). Более того, распространение вызванного деполяризацией увеличения внутриклеточного кальция и высвобождения глутамата указывает на то, что эксайтотоксичность во время ЧМТ может вызывать пагубные эффекты через распространяющийся путь деполяризации (Obrenovitch and Urenjak, 1997).

Поскольку большинство возбуждающих синапсов происходит на дендритных ветвях, дендриты были предсказаны как начальное место эксайтотоксического повреждения, ведущего к повреждению и гибели нейронов (Bindokas and Miller, 1995). Действительно, устойчивые высокие уровни кальция, которые, как было показано, развиваются в дистальных дендритах при эксайтотоксическом поражении, способны медленно распространяться на сому, что в конечном итоге приводит к острой гибели нейронов (Shuttleworth and Connor, 2001; Vander Jagt et al., 2008). Распространение деполяризации, зарегистрированное in vivo , в условиях серьезного метаболического нарушения, например, во время глобальной ишемии, быстро повреждает тонкую синаптическую схему (Murphy et al. , 2008), а в отсутствие реперфузии, как видно из ишемического ядра, дендриты остаются конечными бусинами, а шипы теряются (Zhang and Murphy, 2007; Risher et al. , 2010). Одновременно концевые дендритные бусинки указывают на необратимое острое повреждение нейронов (Hori and Carpenter, 1994; Risher et al., 2010), и это ранний признак активации пути клеточной смерти (Enright et al. , 2007). Распространение деполяризации способствует повреждению тонких синаптических цепей в ишемической полутени (Risher et al. , 2010), но эволюция в реальном времени пространственно-временного повреждения синаптических цепей в периконтузионной коре неизвестна, и лежащие в основе механизмы неизвестны. Чисто. Здесь мы предположили, что распространение вторичного повреждения синаптических цепей в периконтузионной коре после легкой ЧМТ зависит от наличия местного кровотока (т.е.е. степень ишемии) с распространяющейся деполяризацией, усугубляющей повреждение.

Контролируемая фокальная непроникающая деформация коры головного мозга широко используется для индукции ЧМТ у грызунов (Dixon and Kline, 2009). Однако для изображений in vivo одним из самых больших препятствий для мониторинга развития вторичных повреждений на клеточном уровне является кровотечение на поверхности мозга после ЧМТ. Таким образом, мы адаптировали и модифицировали эту модель контролируемого повреждения коркового слоя с высокой воспроизводимостью, чтобы вызвать легкую травму с уменьшением субдурального кровоизлияния в мозг, что сделало ее пригодной для визуализации с помощью 2-фотонной лазерной сканирующей микроскопии (2PLSM) с высоким разрешением.Наши данные предполагают, что локальная церебральная ишемия является одним из главных механизмов вторичного повреждения тонких синаптических цепей в периконтузионной коре с распространяющейся деполяризацией, значительно ускоряющей острое повреждение.

Материалы и методы

Трансгенные мыши

Все процедуры соответствовали рекомендациям Национального института здравоохранения по гуманному уходу и использованию лабораторных животных и ежегодно пересматривались Комитетом по уходу и использованию животных Университета здравоохранения Джорджии.Основатели колонии B6.Cg-Tg (Thy1-YFPH) 2Jrs / J (YFP-H) были приобретены в Jackson Laboratories. Мыши YFP-H демонстрируют яркую флуоресценцию во фракции пирамидных нейронов неокортекса, что облегчает визуализацию in vivo 2PLSM. Однопометники мышей YFP-H дикого типа также использовали в экспериментах по поведенческому тестированию, лазерной доплеровской флоуметрии крови, в некоторых электрофизиологических экспериментах и ​​для гистологии. Основатели колонии FVB / N-Tg (GFAP-EGFP) GFEA-FKi (GFAP-EGFP) были любезно предоставлены доктором.Х. Кеттенманн (Центр молекулярной медицины Макса Дельбрука, Берлин, Германия). Мыши этой линии демонстрируют яркую флуоресценцию астроцитов из нескольких областей ЦНС. Всего в этом исследовании использовали 40 YFP-H, восемь GFAP-EGFP и 12 взрослых самцов и самок мышей дикого типа со средним возрастом ~ 7 месяцев.

Подготовка мышей для

Хирургические процедуры для краниального окна выполнялись по стандартному протоколу, используемому ранее (Risher et al. , 2010).Для визуализации острых состояний анестезию вызывали внутрибрюшинной инъекцией уретана (1,5 мг / г веса тела) или внутрибрюшинной инъекцией авертина (0,025 мг / г веса тела) для многодневных сеансов визуализации или поведенческого тестирования. Температуру тела поддерживали на уровне 37 ° C с помощью грелки (Sunbeam). Короткий L-образный стеклянный капилляр размером ~ 1 см (диаметром 1,2 мм) был вставлен в трахею и закреплен двумя швами у мышей, используемых для визуализации острых состояний. Череп обнажился после разреза по средней линии. Стоматологическое сверло (Midwest Stylus Mini 540S) с коронкой на одну четверть использовалось для утончения окружности круглой области черепа диаметром 4 мм с центром в стереотаксических координатах -1.5 мм от брегмы и 2,0 мм латеральнее сенсомоторной коры. Истонченная кость была поднята с помощью пинцета, и была создана оптическая камера, покрывая неповрежденную твердую мозговую оболочку тонким слоем 1,5% агарозы, приготовленной в буфере для коры головного мозга, содержащем (в мМ) 135 NaCl, 5,4 KCl, 1 MgCl ₂ , 1,8 CaCl ₂ , 5 HEPES, pH 7,3. Оптическая камера была оставлена ​​открытой для последующего индукции TBI. Небольшой алюминиевый стержень с двумя резьбовыми отверстиями был приклеен к черепу с помощью стоматологического акрилового цемента (Co-Oral-Ite Dental), а затем голова мыши была стабилизирована винтами, затянутыми на изготовленную на заказ регулируемую металлическую руку L-образной формы, прикрепленную к опорная пластина, установленная на столике микроскопа Луигса и Неймана для получения изображений.Ректальную температуру контролировали непрерывно и поддерживали на уровне 37 ° C с помощью обогревающего одеяла (Harvard Apparatus). Уровень насыщения крови кислородом оценивался с помощью пульсоксиметра MouseOx® (STARR Life Sciences), установленного на левом бедре, чтобы гарантировать, что насыщение O ₂ остается> 90% в течение всего времени визуализации, что указывает на то, что мыши дышат правильно. Глубина анестезии определялась по отсутствию рефлекса защемления пальца стопы и мониторинга частоты сердечных сокращений (450-650 уд / мин) с помощью пульсоксиметра MouseOx® и поддерживалась только минимальными добавками (<10% начальной дозы уретана) до 8 ч.Гидратация поддерживалась внутрибрюшинной инъекцией 0,9% NaCl (200–300 мкл) с 20 мМ глюкозы с интервалом в 1-2 часа. 0,1 мл болюса 5% (мас. / Об.) Декстрана Texas Red® (70 кДа) (Invitrogen) в 0,9% NaCl вводили в хвостовую вену для визуализации кровотока. Все химические вещества были от Sigma Chemical, если не указано иное.

Модель черепно-мозговой травмы

Легкая ЧМТ была вызвана устройством контролируемого кортикального удара (Pittsburgh Precision Instruments) в соответствии с протоколом, адаптированным из Dixon and Kline (2009).Базовую пластину, содержащую подголовник и мышь, переместили со столика микроскопа на устройство для контролируемого кортикального удара. Агарозу, покрывающую кору, удалили, и пневматический поршень, содержащий наконечник ударного элемента с плоским краем диаметром 2,0 мм, отрегулировали так, чтобы обеспечить удар, нормальный к кортикальной поверхности. Чтобы уменьшить вероятность неточности при обнулении наконечника импактора на твердой мозговой оболочке, наконечник был расположен так, чтобы контактировать с твердой мозговой оболочкой под большим увеличением стереомикроскопа Zeiss Stemi SV6 с использованием нониуса регулировки глубины удара с погрешностью, равной 5 мкм. .Кора головного мозга подвергалась удару со скоростью 5,0 м / с на глубину 0,1 мм при продолжительности удара 100 мс, после чего твердую мозговую оболочку осторожно удаляли. Кора головного мозга была покрыта 1,5% агарозой, приготовленной в буфере для коры головного мозга, и закрыта круглым покровным стеклом (Bellco, # 1943-00005) с использованием стоматологического цемента для предотвращения любого смещения покровного стекла из-за набухания мозга.

Двухфотонная лазерная сканирующая микроскопия

Изображения были получены с помощью оптимизированного для инфракрасного излучения водно-иммерсионного объектива × 40 / 0,80 NA (Carl Zeiss) с использованием многофотонной системы Zeiss LSM 510 NLO META, установленной на моторизованном вертикальном микроскопе Axioscope 2FS.Модуль сканирования был напрямую соединен с титан-сапфировым широкополосным лазером с синхронизацией мод (Mai-Tai) компании Spectra-Physics, настроенным на 910 нм для двухфотонного возбуждения. Излучаемый свет регистрировался внутренними фотоумножителями модуля сканирования при полностью открытом отверстии. Изображенные дендриты и астроциты обычно находились в пределах 100 мкм от пиальной поверхности и, следовательно, в слое I. Для отслеживания структурных изменений были получены трехмерные покадровые изображения с шагом 1,0 мкм с использованием оптического увеличения × 3, что привело к номинальному пространственному разрешению. из 13.65 пикселей / мкм (12 бит / пиксель, время пикселя 1,26 мкс) в поле изображения 75 × 75 мкм или с шагом 2,0 мкм с оптическим зумом 0,7, что приводит к номинальному пространственному разрешению 3,19 пикселей / мкм (8 бит / пиксель, время пикселя 2,51 мкс) в поле изображения 318 × 318 мкм. Мы смогли успешно визуализировать одни и те же отдельные астроциты до и после ЧМТ, хотя вся периконтузионная область испытала резкое опухание. Это было достижимо благодаря относительно большому размеру астроцитов и редкой экспрессии EGFP, маркирующей только небольшую часть астроглии.Отдельные стопки изображений астроцитов были получены до и через 0,5 часа после ЧМТ, а интервальная съемка продолжалась с интервалами 0,5 часа. Технически было более сложно найти одни и те же дендриты до и после повреждения в нейропиле с высокой плотностью меченных желтым флуоресцентным белком (YFP) дендритов, которые смещались вне регистра в 2D-пространстве из-за набухания ткани. Следовательно, сначала мы проверили, что в целом дендриты не были повреждены и выглядели здоровыми до TBI, а затем мы получили стопки изображений определенных дендритов на 0.Через 5 часов после ЧМТ и покадровую визуализацию выполняли с интервалами в 1 час, начиная с 1 часа после ЧМТ. Когда произошло смещение фокальной плоскости, поле фокуса было отрегулировано и повторно центрировано перед получением следующих наборов изображений (Ришер и др. , 2010). Кровоток отображали в режиме повторяющейся строчной развертки (1000 строк на сканирование) вдоль центральной оси капилляра (1,15 мс / линия, 0,2 мкм / пиксель, 8 бит / пиксель, время пикселя 4,57 мкс). Сбор данных контролировался программным обеспечением Zeiss LSM 510.

Анализ изображений

Анализатор изображений LSM 510 (Zeiss) использовался вместе с NIH ImageJ для анализа и обработки изображений 2PLSM.Срединный фильтр (радиус = 2) был применен к изображениям в и для уменьшения шума фотонов и фотоумножителей. Программное обеспечение для деконволюции изображений Scientific Volume Imaging Huygens Professional использовалось для обработки изображений дендритов и астроцитов в. Дендритные бусинки были идентифицированы как появление округлых областей, выходящих за пределы диаметра родительского дендрита, разделенных «межбусинчатыми» сегментами. Восстановление дендритов было определено как исчезновение округлых «бусинок». Прогрессирование повреждения дендритов оценивалось путем количественной оценки количества дендритных бусинок в поле визуализации в соответствии с опубликованными протоколами (Murphy et al., 2008). Вкратце, стопки изображений были преобразованы в проекции максимальной интенсивности, а затем процент бисерных дендритов был подсчитан в квадратах размером 20 мкм, которые были наложены поверх изображений с помощью ImageJ. Каждая коробка была отмечена как вышитая бисером или нет. Учитывались только коробки с дендритами.

Развитие дендритных бусинок в периконтузионной коре. ( A ) Изображение с камеры ПЗС, демонстрирующее гематому через 30 минут после ЧМТ в месте первичного удара и прилегающей к нему нормальной периконтузионной коры.Область в рамке показана в B . ( B ) 2PLSM мозаичное проекционное изображение максимальной интенсивности с малым увеличением ( слева, ), полученное через 30 минут после TBI, демонстрирует дендриты в форме бусинок в месте первичного удара ( вверху ) и сохранившиеся дендриты в периконтузионной коре ( нижний ). Через 4 ч дендриты образуют бусинки ( справа ). Изображения с большим увеличением в области, выделенной рамкой, показаны в C . ( C ) Интервальная визуализация 2PLSM выявляет медленно прогрессирующее повреждение дендрита в течение нескольких часов после ЧМТ.( D ) Динамика образования бусинок на дендритах в периконтузионной коре от пяти мышей показывает, что примерно 100% дендритов образовались к 8 часам. Значения основаны на вручную подсчитанных процентах расслоения в полях изображений с использованием сетки 6 × 6 (Мерфи и др. , 2008). Звездочки указывают на значительную разницу через 1 час после ЧМТ. * P < 0,05, *** P < 0,001, односторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями.

Потеря кровотока приводит к образованию бусинок дендритов в периконтузионной коре.( A ) Проекции максимальной интенсивности стеков изображений YFP-положительных дендритов (зеленый) и кровеносных сосудов (красный; плазма крови, меченная декстраном Texas Red®) через 1, 2, 3 и 4 часа после ЧМТ. Кровоток регистрировали с помощью повторяющихся сканирований линий вдоль кровеносного сосуда, как показано стрелкой. Через 2 часа кровоток был потерян, и дендритные бусинки прогрессировали. ( B ) Стеки линейных сканирований кровеносных сосудов показаны на A через 1 час ( слева ) и 2 часа ( справа ) после ЧМТ с движущимися эритроцитами (RBC), представленными темными полосами через 1 час. .Обратный наклон этих полос пропорционален мгновенной скорости эритроцитов, рассчитанной как Δx / Δt (вставка). Исчезновение темных полос через 2 ч свидетельствует о полном прекращении кровотока. ( C ) Скорость эритроцитов вычислена из сканирования линий на изображениях, показанных в A , через 1, 2, 3 и 4 часа после TBI. ( D ) Изображения 2PLSM с малым увеличением ( верхний ряд ), показывающие дендриты (зеленые), а также кровеносные сосуды (красные) через 55 и 99 минут после ЧМТ. Все сосуды в поле изображения были остановлены, что было подтверждено визуально по потере полос на сосудах (Zhang and Murphy, 2007) и подтверждено линейным сканированием.Через 55 минут после ЧМТ дендриты были повреждены в месте первичного удара, но многие дендриты в периконтузионной коре все еще были нормальными, как видно на изображении с большим увеличением области в рамке, показанном ниже. На 99 мин все дендриты в поле изображения с малым увеличением были повреждены. На изображении с большим увеличением области в рамке, показанном ниже, видны сильные дендритные бусинки. ( E ) Краткая информация о трех животных, показывающая развитие дендритных бусинок в периконтузионной коре при наличии непроточных ишемических сосудов.В начале покадровой съемки было 52 ± 12% дендритов с гранулами в поле визуализации, при этом доля гранулированных дендритов увеличивалась до 97 ± 3% через 1 час и до 100% через 2 часа мониторинга. * P < 0,05, относительно момента времени в начале построения изображения, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями.

Несколько раундов распространяющейся деполяризации способствуют повреждению терминальных дендритов в периконтузионной коре. ( A ) Последовательность проецируемых изображений максимальной интенсивности, показывающая дендриты (зеленый) и проточные кровеносные сосуды (красный), как показано полосами, вызванными сканированием движущихся нефлуоресцентных эритроцитов.Дендриты претерпевают быстрое изгибание (изображения 2, 4, 6 и 8) во время прохождения четырех последующих распространяющихся деполяризаций (SD) с меньшим восстановлением, наблюдаемым во время реполяризации (изображения 3, 5, 7 и 9), в то время как кровеносные сосуды продолжают течь. Распространение деполяризации было вызвано микроинъекцией KCl вдали от поля изображения. Каждое пронумерованное изображение соответствует моменту времени, указанному на соответствующей записи потенциала постоянного тока со стеклянного микроэлектрода, помещенного рядом с отображаемыми дендритами.( B ) Резюме 20 распространяющихся деполяризаций у пяти животных, показывающих, что дендриты в периконтузионной коре неспособны к восстановлению после нескольких раундов распространяющейся деполяризации. Дендритные бусинки были обратимы во время прохождения первой индуцированной расширяющейся деполяризации. Последующие три раунда расширяющейся деполяризации постепенно увеличивали долю дендритов с окончательными выступами до ~ 85%. Полосы темно-серого цвета указывают на существенное отличие от момента времени до первой распространяющейся деполяризации.Звездочки на каждом столбце во время распространения деполяризации указывают на существенное отличие от момента времени до распространения деполяризации, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями.

Несколько раундов распространяющейся деполяризации не вызывают повреждения терминальных дендритов в нормоксическом здоровом неокортексе. ( A ) Последовательность проецируемых изображений максимальной интенсивности показывает дендриты (зеленые), претерпевающие быстрое изгибание (изображения 2, 4, 6 и 8) во время прохождения четырех последовательных KCl-индуцированных расширяющихся деполяризаций (SD) с полным восстановлением во время реполяризации (изображения 3, 5, 7 и 9).Каждое пронумерованное изображение соответствует моменту времени, указанному на соответствующей записи потенциала постоянного тока со стеклянного микроэлектрода, помещенного рядом с отображаемыми дендритами. ( B ) Резюме 20 распространяющихся деполяризаций у пяти мышей, показывающих, что дендриты в нормальном здоровом неокортексе способны к полному восстановлению после нескольких раундов распространяющейся деполяризации. Звездочки на каждом столбце во время распространения деполяризации указывают на существенное отличие от момента времени до распространения деполяризации, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями.

ЧМТ вызывает отек астроглии в периконтузионной коре головного мозга, отражающий отек. ( A ) Парные односекционные изображения 2PLSM, показывающие астроцит (зеленый) вместе с соседним кровеносным сосудом (красный) в слое I периконтузионной коры до (контроль) и через 30 минут после ЧМТ. Полоски внутри кровеносного сосуда — признак кровотока. Кровь течет, но астроглиальная сома и отростки набухают через 30 мин после ЧМТ. Контрольные и 30-минутные изображения TBI накладываются друг на друга ( справа ) со стрелкой, указывающей на зеленую область, иллюстрирующую морфологию набухания вне контроля.( B ) Резюме семи астроцитов пяти животных, показывающих увеличение размера астроглиальной сомы через 30 и 60 минут после ЧМТ. ** P < 0,01, относительно контроля, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями. ( C ) Скорость эритроцитов, вычисленная из сканирования линий вдоль семи кровеносных сосудов, демонстрирующая потерю ~ 50% кровотока около семи отображаемых астроцитов, измеренных в B через 60 минут после TBI. * P < 0,05, парный t -тест.

Стойкое набухание астроглии через 24 часа после ЧМТ.( A ) Последовательность проецируемых изображений максимальной интенсивности, показывающая астроцит и близлежащий кровеносный сосуд в контроле через 1 и 24 часа после ЧМТ. Астроцит набухал через 1 час после TBI и оставался набухшим через 24 часа, поскольку кровь продолжала течь, на что указывает изображение сосуда в виде полос. Внизу , в середине и слева : Наложения, показывающие объединенный контроль и изображения астроцитов через 1 час и 24 часа после TBI, соответственно. Зеленые области (стрелки) обозначают опухоль, превышающую контрольный размер.Шеврон указывает на опухший конец астроглии. ( B ) Сводка по 10 астроцитам у трех животных, показывающая значительное увеличение площади сомы поперечного сечения астроглии через 1 час после ЧМТ, которая длится в течение 24 часов. * P < 0,02, *** P < 0,002, относительно контроля, однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями.

Поскольку осевое разрешение 2PLSM относительно низкое (∼2 мкм), небольшие астроглиальные процессы не были легко измеримы, и, следовательно, объемные изменения тонких астроглиальных процессов не были определены количественно.Чтобы упростить интерпретацию морфометрических данных, обусловленную более низким осевым разрешением 2PLSM по сравнению с латеральным разрешением (∼0,4 мкм), мы использовали 2D-проекции максимальной интенсивности стопок изображений (толщиной ∼20 мкм) для оценки относительных изменений в поперечном разрезе. -секционная область сомы отдельных астроглиальных клеток, как было описано ранее (Andrew et al. , 2007; Risher et al. , 2009, 2012). Этот анализ проекционных изображений с максимальной интенсивностью предполагал, что объем астроглиальной сомы изменяется равномерно во всех направлениях, что основано на просмотре астроцитов вдоль оси z в контроле и в каждой экспериментальной временной точке.Такой морфометрический анализ изменений боковых размеров был адекватен для определения относительных изменений объема, которые недооценивали фактические изменения объема, предполагая, что они приблизительно изотропны. Поэтому, как и в наших предыдущих исследованиях, для анализа астроцитов использовались три метода: (i) проекционные изображения максимальной интенсивности были вручную отслежены в цифровом виде для измерения площади профилей астроглиальной сомы в контроле и для каждой временной точки. В качестве альтернативы, изображения проекции максимальной интенсивности фильтровали с помощью медианного фильтра (радиус = 1), вычитали фон и устанавливали пороговые значения с помощью ImageJ.Затем пороговое изображение с астроцитарными соматами было обрисовано в общих чертах и ​​автоматически измерено с помощью функции «анализировать частицы» ImageJ. Относительное изменение профилей сомы, отслеживаемое вручную или автоматически, дало аналогичные результаты; (ii) контрольные и экспериментальные проекционные изображения максимальной интенсивности были окрашены в псевдоцветный красный и зеленый цвета, выровнены и наложены, чтобы выявить различные области, которые оставались зелеными, в отличие от желтых перекрывающихся областей; и (iii) контрольные контуры были созданы и заполнены для создания маски, которая показывала области вздутия при наложении на изображения после удара.Скорость эритроцитов измерялась по пространственно-временному изображению, сформированному набором линейных сканирований вдоль центральной оси капилляра, где движущиеся эритроциты видны в виде темных полос (Kleinfeld et al. , 1998). Знак и обратный наклон этих полос отражают направление потока и скорость. Скорость красных кровяных телец рассчитывается как (Δx / Δt), где Δx — среднее расстояние между полосами в фиксированное время, а Δt — среднее время между полосами в фиксированном положении.

Измерения мозгового кровотока

Двумерные карты мозгового кровотока с высоким пространственно-временным разрешением были получены с помощью лазерной спекл-визуализации, как описано в другом месте (Dunn et al. , 2001; Risher et al. , 2010). Вкратце, кортикальную поверхность освещали через расширитель анаморфного луча Edmund Optics лазером StockerYale с длиной волны 785 нм под углом ~ 30 ° и отображали с помощью объектива × 4 / 0,075 NA (Zeiss). ПЗС-камера Zeiss AxioCam MRm, управляемая программным обеспечением AxioVision (Zeiss), использовалась для захвата 150 изображений с частотой 13 Гц и временем экспозиции 20 мс.Индивидуальные изображения дисперсии были созданы из необработанных изображений спеклов с использованием функции 2D-фильтрации дисперсии (размер ядра 3 × 3 пикселя, 3,23 мкм / пиксель) ImageJ. Отдельные 32-битные изображения стандартного отклонения были рассчитаны путем извлечения квадратного корня из изображений дисперсии. Изображение контрастности лазерных спеклов ( k ) было получено путем деления изображения стандартного отклонения на среднее значение каждого необработанного изображения и последующего усреднения стопки для получения единственного изображения.

Значения времени корреляции спеклов (τ _c ) использовались для количественной оценки относительных изменений скорости мозгового кровотока, как описано в другом месте (Dunn et al., 2001; Ayata et al. , 2004; Ришер и др. , 2010). Вкратце, изображения спекл-контраста ( k ) были преобразованы во временные изображения спекл-корреляции (τ _c ) с использованием уравнения τ _c ≈ 2Tk ² , где T — длительность экспозиции камеры (Tom и др., , 2008). Процент базового церебрального кровотока был вычислен путем расчета отношения базового изображения значений τ _c до TBI с изображениями значений τ _c в различные моменты времени после TBI (Dunn et al., 2001; Ayata et al. , 2004).

Обычные лазерные доплеровские записи мозгового кровотока проводились у мышей дикого типа с использованием системы PeriFlux 5000 (устройство для лазерного доплеровского мониторинга перфузии Perimed PF5010), оснащенной небольшим (диаметром 1 мм) датчиком 407-1 (Perimed) и программным обеспечением для анализа PeriSoft. . Зонд помещали в стереотаксические координаты -1,0 мм от брегмы и 0,7 мм латеральнее для контакта с покровным стеклом, закрывающим оптическую камеру, и измеряли контрольный регионарный церебральный кровоток для получения исходных значений.После контролируемого коркового воздействия трепанацию черепа снова закрыли и церебральный кровоток непрерывно контролировали в течение 6 часов. Церебральный кровоток через 30-минутные интервалы времени рассчитывали по средним значениям за 1 мин.

Электрофизиологические записи и распространение индукции деполяризации

Кортикальный медленный потенциал постоянного тока регистрировался с помощью стеклянного микроэлектрода (заполненного 0,9% NaCl, 1-2 МОм), вставленного через небольшое отверстие в покровном стекле в периконтузионную область к месту изображения дендритов в слое I коры.Гранулированный электрод сравнения Ag / AgCl (A-M Systems) устанавливали под кожей над носовой костью. Распространяющуюся деполяризацию вызывали введением под давлением ~ 50 нл 1 M KCl с Picospritzer (Parker Instruments) через микропипетку (1 МОм), вставленную на глубину 200–300 мкм на расстоянии ~ 2 мм от места получения изображения. Сигналы регистрировали с помощью усилителя MultiClamp 700B, фильтровали с частотой 1 кГц, оцифровывали с частотой 10 кГц с помощью интерфейсной платы Digidata 1322A и анализировали с помощью программного обеспечения pClamp 9 (Molecular Devices).

Поведенческий тест

Для оценки вестибуломоторной функции тесты с ходьбой на пучке проводились в четырех различных временных точках; перед ЧМТ и через 1, 3 и 7 дней после ЧМТ. Процедуры теста обхода луча следовали протоколу, адаптированному из Feeney et al. (1982). Мышей приучили избегать яркого света и громкого белого шума, пересекая узкую деревянную балку (длина 50 см, ширина 6 мм), чтобы войти в затемненный перчаточный ящик на противоположном конце балки. Производительность оценивалась по 7-балльной шкале, как описано ранее (Masuda et al., 2010): 1, не может пересечь луч и не может поставить левую заднюю конечность на горизонтальную поверхность луча; 2, не может пересечь луч, но ставит левую заднюю конечность на горизонтальную поверхность луча; 3, пересекает луч, перетаскивая левую заднюю конечность; 4, пересекает пучок и, по крайней мере, один раз помещает левую заднюю конечность на горизонтальную поверхность пучка; 5, пересекает пучок и использует левую заднюю конечность менее чем за половину своего шага вдоль пучка; 6, пересекает пучок и использует левую заднюю конечность более чем на половине шагов вдоль пучка; 7, пересекает балку с проскальзыванием не более чем на два фута.Обучающие испытания продолжались до тех пор, пока мышь не пересекла пучок с результатом 7 в трех последовательных испытаниях, после чего через день начинали фиктивную операцию или контролируемое повреждение кортикальным ударом. Данные для каждого ежедневного сеанса состояли из лучших из трех испытаний.

Гистология

После TBI через 8, 24, 48 и 72 часа подгруппу мышей анестезировали уретаном и перфузировали внутрикардиально 25 мл холодного PBS, а затем 25 мл 4% параформальдегида (электронная микроскопия) в фосфатном буфере.Головной мозг удаляли и фиксировали в том же фиксаторе в течение 36 часов. Коронковые срезы вырезали толщиной 100 мкм с помощью микротома с вибрирующим лезвием (VT1000S, Leica Instruments), наносили дистиллированной водой на покрытые желатином предметные стекла, сушили в течение ночи и затем гидратировали через градуированные спирты до дистиллированной воды. Для окрашивания гематоксилином и эозином срезы окрашивали гематоксилином (Fisher Scientific) в течение 15 минут, а затем промывали в дистиллированной воде в течение 20 минут. Затем срезы окрашивали раствором эозин-флоксина (Thermo Fisher Scientific) в течение 2 минут, обезвоживали, очищали ксилолом (Fisher Scientific) и помещали на предметные стекла микроскопа для дальнейшего исследования с использованием цифрового сканера предметных стекол Aperio ScanScope CS с Olympus × 20 / 0.75 NA Plan Apo цель. Для окрашивания Fluoro-Jade (мыши дикого типа) срезы помещали в раствор 0,06% KMnO ₄ на 15 мин, промывали дистиллированной водой и затем окрашивали 0,001% раствором Fluoro-Jade (Histo-Chem) для 30 минут. Затем срезы промывали дистиллированной водой, сушили, очищали ксилолом и помещали на предметные стекла микроскопа с установочной средой DPX (Aldrich) для дальнейшего исследования с использованием системы Zeiss LSM 510 с объективом Zeiss 10 × / 0,30 NA.

Статистика

SigmaStat (Systat) использовался для статистического анализа.Парный двухсторонний тест t и однофакторный дисперсионный анализ с повторными измерениями с последующими апостериорными тестами Тьюки или Стьюдента Неймана – Кеулса использовали для сравнения групповых средних для параметрических данных. Для сравнения средних значений непараметрических данных использовались ANOVA Краскела – Уоллиса или ANOVA с односторонними повторными измерениями по рангам, за которым следовали тесты Тьюки или Стьюдента Неймана – Кеулса post hoc . Для количественной оценки силы взаимосвязи между двумя переменными применялся линейный регрессионный анализ.Критерий значимости был установлен на уровне P <0,05. Данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.

Результаты

Легкое травматическое повреждение головного мозга, вызванное непроникающей локальной деформацией коры головного мозга, создает область, подходящую для получения изображения в реальном времени

В то время как предыдущие гистологические исследования изучали посттравматическое повреждение после контролируемого ушиб кортикального удара (Кочанек и др. , 1995; Смит и др., 1995; Hall et al. , 2005, 2008), отдельные дендриты и астроциты не отслеживались последовательно в периконтузионной коре, чтобы выявить развитие повреждения синаптических цепей с течением времени. Используя 2PLSM-визуализацию на клеточном уровне разрешения, мы исследовали динамическое вовлечение периконтузионной коры в зону повреждения. Поскольку кровотечение на поверхности мозга было слишком большим, чтобы можно было получить изображение после глубины деформации ткани 750–1000 мкм, используемой в мышиных моделях тяжелого контролируемого повреждения кортикального удара (Smith et al., 1995; Hall et al. , 2005; Deng et al. , 2007; Hall et al. , 2008; фон Баумгартен et al. , 2008), мы уменьшили глубину компрессии коры до 100 мкм, что значительно уменьшило кровотечение и позволило визуализировать периконтузионную кору, прилегающую к месту первичного повреждения (A). Визуализация и электрофизиологические записи были начаты через 0,5 ч после контролируемого коркового воздействия. Эта задержка была необходима для обеспечения качественной сборки оптической камеры после ушиба головного мозга.Согласно оценке электрофизиологических записей у 18 животных, не было никаких повторяющихся спонтанных распространяющихся деполяризаций, происходящих в периконтузионной коре между 0,5 и 6 часами после первичного воздействия (B). Гистологическая оценка с окрашиванием гематоксилином и эозином и флуоро-нефритом показала, что повреждение ткани было локализовано в коре головного мозга (C и D), что позволяет предположить, что эта модель ЧМТ более мягкая, чем другие модели контролируемого повреждения кортикального слоя на мышах (Smith et al. , 1995; Холл и др., 2005; Deng et al. , 2007; Hall et al. , 2008). Тем не менее, результаты теста «ходьба пучком» выявили значительный моторный дефицит через 7 дней после ЧМТ (E), что указывает на то, что эту модель можно использовать для исследования развития вторичных повреждений при легкой ЧМТ.

Легкое корковое воздействие вызвало легкую ЧМТ. ( A ) Изображение области коркового удара над сенсомоторной корой головного мозга. Краниотомия выявляет место первичного удара (звездочка) и прилегающую сохраненную периконтузионную кору.Запечатанное покровное стекло сдерживало отек. ( B ) Пример записи с микроэлектрода, помещенного в периконтузионную кору через 0,5 часа после контролируемого ушиба кортикального слоя. Обратите внимание на отсутствие спонтанной деполяризации распространения во время непрерывной записи в этом типичном случае. ( C ) Окрашивание гематоксилином и эозином через 8 ч после TBI показывает повреждение ткани (звездочка), локализованное в коре головного мозга с сохраненным ипсилатеральным гиппокампом. ( D ) Корональный срез мозга с окрашиванием фторо-нефритом выявляет умирающие нейроны (ярко-зеленые) во всех слоях периконтузионной коры через 48 часов после ЧМТ у мыши дикого типа.Синяя рамка указывает на область, показанную с большим увеличением на вставке ( вверху справа ). Умирающих нейронов в ипсилатеральном гиппокампе не было (основное изображение, справа, ). ( E ) Поведенческое тестирование подтвердило умеренный моторный дефицит. Сводная информация по 12 животным, показывающим баллы теста «ходьба пучком», выполненного до ЧМТ и на 1, 3 и 7 дни после ЧМТ. Легкая ЧМТ ( n = 6, животные) привела к легкой моторной дисфункции со значительным различием по сравнению с до TBI и ложной ( n = 6 мышей).* P < 0,05, относительно перед TBI, однофакторный дисперсионный анализ Фридмана с повторными измерениями по рангам; * P < 0,05, относительно фиктивного в каждый момент времени, ANOVA Краскела – Уоллиса.

Чтобы количественно оценить изменения в регионарном мозговом кровотоке, мы провели лазерные доплеровские измерения с помощью небольшого зонда (диаметром 1 мм), расположенного над околоконтузионной корой. Региональный церебральный кровоток снизился до 74,3 ± 8,2% от контрольного значения через 0,5 часа после ЧМТ (A, P < 0,05) и оставался значительно сниженным в течение следующих 6 часов.Фиксированные коронковые срезы, взятые у животных, перфузированных через 8 часов после TBI, также показали, что декстран Texas Red, который вводили для маркировки плазмы крови перед травмой, застрял в закупоренных сосудах, окружающих место первичного удара (B). Эти данные свидетельствовали о существовании ишемической зоны в околоконтузионной коре. Двумерные карты церебрального кровотока с высоким пространственно-временным разрешением, полученные с помощью лазерной спекл-визуализации, подтвердили потерю кровотока в месте первичной травмы, а также подтвердили прогрессирующую гипоперфузию в периконтузионной коре, расширяющейся на 0.5–1 мм за пределами зоны первичного удара (C – F). Поэтому мы использовали лазерную спекл-визуализацию, чтобы очертить периконтузионную кору и направить визуализацию 2PLSM во всех экспериментах. Мы пришли к выводу, что в этой модели мышей с легкой ЧМТ периконтузионная кора головного мозга может быть точно анатомически локализована и сравнена между животными для изучения пространственно-временного развития вторичного повреждения синаптических цепей.

Снижение кровотока в периконтузионной коре подтверждено тремя методами. ( A ) Резюме по шести животным, показывающее изменение регионального мозгового кровотока в периконтузионной коре, измеренное с помощью традиционной лазерной допплеровской флоуметрии.ЧМТ привела к умеренному снижению регионарного церебрального кровотока в периконтузионной коре, как в среднем по площади поперечного сечения наконечника лазерного доплеровского зонда диаметром 1,0 мм. * P < 0,02; указывают на значительную разницу по сравнению с односторонним дисперсионным анализом ANOVA с повторными измерениями до ЧМТ. ( B ) Корональный срез мыши с фиксированной перфузией через 8 ч после ЧМТ. Декстран Texas Red® был вымыт из проточных кровеносных сосудов во время фиксации, обнажив непроточные сосуды с захваченным красителем. ( C ) Контрольное изображение в градациях серого с контрастированием лазерных спеклов показывает кортикальную сосудистую сеть непосредственно под краниотомией, при этом проточные сосуды выглядят темными.( D и E ) Тяжелая потеря мозгового кровотока в месте первичного удара (звездочка) и снижение мозгового кровотока в прилегающей периконтузионной коре (стрелка) показаны через 0,5 и 1 час после ЧМТ, соответственно. . ( F ) Процент относительных изменений мозгового кровотока между 0,5 и 1 часом после ЧМТ, как показано в правом нижнем углу . Для облегчения сравнения изображение относительного церебрального кровотока (в процентах от исходного уровня) через 0,5 часа после ЧМТ вычитали из соответствующего изображения относительного мозгового кровотока через 1 час.Псевдоцветное изображение показывает снижение церебрального кровотока через 1 час по сравнению с 0,5 часа после ЧМТ.

Повреждение дендритов в периконтузионной коре головного мозга развивается относительно медленно

При закупорке сосудов в периконтузионной коре казалось вероятным, что острое терминальное ишемическое повреждение дендритов будет развиваться в этой области с течением времени. Мы визуализировали периконтузионную кору, чтобы отслеживать изменения в дендритной структуре в течение 8 часов после воздействия. Поверхностная корковая ткань в периконтузионной области сразу после удара сохранила относительно нормальный вид с небольшим кровотечением в коре (А).Получение изображений с помощью двухфотонной лазерной сканирующей микроскопии с малым увеличением в большом поле, окружающем переход от поврежденной к относительно неповрежденной ткани, показало, что периконтузионная кора содержала много дендритов с нормальным внешним видом через 0,5 часа после ЧМТ (B). Однако через 4 часа после удара большая часть дендритов превратилась в бусинки (B). Покадровая съемка 2PLSM с большим увеличением над границей перехода между нормальными и поврежденными дендритами показала относительно медленное прогрессирующее образование бусинок дендритов в течение следующих 6 часов после TBI с характерным появлением «шариков на нитке» поврежденных дендритов (C).Количественная оценка серии изображений 2PLSM у пяти животных подтвердила, что не все дендриты в периконтузионной коре сразу повреждаются, но они подвержены терминальному повреждению, развивающемуся с течением времени (D).

Потеря кровотока предшествует образованию дендритных бусинок в периконтузионной коре

Было продемонстрировано, что без распространения деполяризации развитие дендритных бусинок в метаболически нарушенной ишемической полутени происходит постепенно и зависит от наличия местного кровотока (Zhang and Murphy, 2007; Ришер и др., 2010). Следовательно, можно предположить, что после легкого контролируемого ушиба кортикального слоя посттравматическое повреждение дендрита в метаболически нарушенной периконтузионной коре похоже на относительно медленно развивающееся повреждение дендрита, показанное в ишемической полутени в отсутствие распространяющихся деполяризаций. Более того, было показано, что отдельные проточные кровеносные сосуды могут поддерживать интактную дендритную структуру в пределах ~ 80 мкм в ишемическую область (Zhang and Murphy, 2007).Таким образом, мы определили, как присутствие соседнего проточного или непроточного сосуда повлияет на исход синаптических цепей в периконтузионной коре с течением времени. В примере, показанном на A, дендриты были нормальными, и кровеносный сосуд продолжал течь через 1 час после TBI, как было измерено с помощью линейного сканирования вдоль сосуда (B и C). Полная потеря кровотока через 2 часа после ЧМТ (B и C) сопровождалась началом дендритных бусинок, которые постепенно развивались в течение следующих 2 часов (A). Другое изображение в D, сделанное над большим полем, показывает переход от поврежденных дендритов в месте первичного удара к в основном нормальным дендритам в периконтузионной коре, но все кровеносные сосуды уже были заблокированы во всем поле изображения.В этом состоянии тяжелая гипоперфузия дендритных бусинок образовалась в течение следующих 45 минут (D). Эти наблюдения, количественно выраженные в E, подтвердили почти полное расслоение всех дендритов в поле изображения в течение следующего 1 часа после потери кровотока.

Распространение деполяризации ускоряет острое повреждение дендритов в метаболически нарушенной периконтузионной коре

Распространяющаяся деполяризации, вызванная инсультом, приводит к образованию бусинок дендритов в метаболически нарушенной ткани, что является обратимым, если нейроны не имеют серьезного энергетического нарушения (Murphy et al., 2008; Ришер и др. , 2010). Тем не менее, повторяющиеся распространяющиеся деполяризации увеличивают метаболический стресс в ишемической полутени, значительно ускоряя повреждение синаптических цепей даже при наличии соседних протекающих кровеносных сосудов (Risher et al. , 2010). Здесь мы определили, могут ли распространяющиеся деполяризации увеличивать и способствовать острому повреждению дендритов в метаболически нарушенной периконтузионной коре. Поскольку в этой модели умеренной ЧМТ не было спонтанных распространяющихся деполяризаций, мы вызвали серию распространяющихся деполяризаций путем инъекции под давлением ~ 50 нл 1 М KCl далеко от места визуализации.Быстрое расслоение дендритов наблюдалось, когда первая распространяющаяся деполяризация проникла в периконтузионную кору (А). Бусинчатые дендриты восстановились во время реполяризации, но последующие три раунда расширяющейся деполяризации привели к окончательному повреждению синаптических цепей, несмотря на то, что кровь продолжала течь в соседних сосудах (A). Количественная оценка серии изображений 2PLSM у пяти животных подтвердила, что доля гранулированных дендритов увеличилась с 23,5 ± 15,6% до 96,2 ± 5,7% во время первой индуцированной расширяющейся деполяризации (B).Однако дендриты быстро восстанавливались после прохождения первой расширяющейся деполяризации, при этом доля гранулированных дендритов в поле изображения возвращалась к 23,8 ± 13,0% при 75 ± 17 с реполяризации. Точно так же доля дендритов с гранулами увеличивалась до 99,2 ± 1,8%, 100,0 ± 0,0% и 99,4 ± 1,4% во время прохождения второй, третьей и четвертой распространяющейся деполяризации соответственно. Одновременно с этим, эти последующие раунды распространения деполяризации увеличивают фракцию дендритов с окончательными выступами до 61.2 ± 13,8%, 73,7 ± 18,7% и 84,8 ± 22,9% при измерениях при 101 ± 17 с, 74 ± 33 с и 115 ± 95 с во время реполяризации соответственно. Эти данные убедительно указывают на то, что накопленный стресс, вызванный распространяющейся деполяризацией, ускоряет острое повреждение дендритов в периконтузионной коре.

Распространение деполяризации не вызывает накопления повреждений дендритов в здоровом неокортексе

Распространение вызванных деполяризацией морфологических изменений дендритов в нормоксической коре головного мозга неоднозначно.В самом деле, сообщалось, что дендриты могут подвергаться разным степеням структурных изменений во время прохождения нормоксической деполяризации распространения, в пределах от отсутствия изменений до разной степени дендритных бусинок (Takano et al. , 2007). Здесь мы исследовали, может ли нормоксическая KCl-индуцированная распространяющаяся деполяризация привести к дендритному разрушению с накоплением дендритных повреждений в нормоксическом здоровом неокортексе по сравнению с метаболически нарушенной периконтузионной корой. Подобно экспериментам с моделью легкой ЧМТ, мы вызвали четыре раунда распространения деполяризации у пяти здоровых мышей путем инъекции под давлением ~ 50 нл 1 М KCl вдали от места визуализации.Круги быстрого образования бусинок и восстановления наблюдались, когда последующие распространяющиеся деполяризации вторгались в область визуализации у четырех из пяти животных, но не было накопления дендритных повреждений, поскольку все дендриты быстро восстанавливались во время реполяризации (A). Кроме того, дендриты были замечательно стабильны во время прохождения распространяющейся деполяризации у одной мыши (изображения не показаны). Количественная оценка серии изображений 2PLSM у пяти животных подтвердила, что во время прохождения четырех последующих распространяющихся деполяризаций доля дендритов с бусинами достигала 74.0 ± 41,9%, 70,0 ± 43,7%, 60,8 ± 41,6% и 61,7 ± 46,3% соответственно (B). Важно отметить, что дендриты восстанавливались до уровня деполяризации, предшествовавшего распространению, при измерении через 87 ± 24 с, 92 ± 58 с, 52 ± 40 с и 58 ± 42 с во время реполяризации, соответственно. Таким образом, на основе представленных здесь количественных оценок мы заключаем, что распространяющиеся деполяризации не несут риска накопления дендритных повреждений в нормоксическом неокортексе (B), тогда как резко ускоряют терминальное повреждение дендритов в периконтузионной коре с метаболическими нарушениями (B).

Устойчивый астроглиальный отек в периконтузионной коре

Астроглиальный отек ранее предлагался как возможная причина травмы и цель терапии после ЧМТ (Kimelberg, 1992; Mongin and Kimelberg, 2005). Недавно мы показали, что в первые минуты или часы после инсульта астроциты набухают и остаются набухшими в ишемизированном неокортексе с умеренным и тяжелым дефицитом энергии (Risher et al. , 2012). Чтобы выявить динамическую реорганизацию астроцитов в периконтузионной коре, мы визуализировали семь астроцитов рядом с кровеносными сосудами у пяти животных.Через 0,5 часа после удара наблюдалось значительное набухание астроглиальной сомы в периконтузионной коре, а также набухание мелких астроглиальных отростков (A), но последнее наблюдение не было количественно оценено, поскольку небольшие отростки было трудно измерить, особенно вдоль z — ось. Кроме того, астроцит набухал даже в присутствии соседнего проточного сосуда (А). Площадь сомы в поперечном сечении астроглии увеличилась на 30,4 ± 24,0% по сравнению с контролем через 30 мин и на 42.3 ± 23,6% через 60 мин после ЧМТ (B). Кровоток в сосудах рядом с этими астроцитами снизился на 54,3 ± 41,5% ( P < 0,05) через 60 минут после ЧМТ (C), но величина отека астроглии не коррелировала ( P = 0,6) со степенью потери кровотока. Тем не менее, опухоль астроглии была очевидна, что указывало на отек. Действительно, во время визуализации вся периконтузионная область испытала резкий отек. Кроме того, в другой группе экспериментов мы провели продольную визуализацию 10 астроцитов у трех животных через 1 и 24 часа после ЧМТ.Набухание астроглии сохранялось в течение 24 часов (A) со средним увеличением размера сомы на 18,5 ± 13,3% по сравнению с контролем через 1 час и на 26,5 ± 8,0% через 24 часа (B), что отражает стойкий отек. Одновременно кровоток снизился на 69,2 ± 12,6% ( P < 0,02) вместе с восемью астроцитами, как измерено через 24 часа после ЧМТ у двух животных. Не было корреляции ( P = 0,9) между величиной отека астроглии и степенью потери кровотока.

Обсуждение

Мы применили in vivo 2PLSM в реальном времени к модели легкого фокального кортикального ушиба для мониторинга развития вторичного повреждения в периконтузионной коре на клеточном уровне.Насколько нам известно, это первые эксперименты по изучению в реальном времени динамики прогрессирующего вторичного повреждения на уровне синаптических сетей после легкой ЧМТ. В отсутствие распространяющихся деполяризаций визуализация 2PLSM показала медленно прогрессирующие дендритные бусинки в периконтузионной коре во время острой фазы (8 ч) после кортикального воздействия, в то время как астроциты постоянно набухали. Одновременное наблюдение за кровеносными сосудами и дендритами показало, что после полной потери кровотока все дендриты в поле изображения превратились в бусинки в течение 1 часа.Когда последовательные раунды распространяющейся деполяризации были индуцированы для вторжения в область визуализации в неповрежденной коре головного мозга контрольных мышей, дендритные бусинки совпадали с прохождением деполяризации у большинства животных с полным восстановлением во время реполяризации. Напротив, когда распространяющиеся деполяризации были индуцированы для вторжения в периконтузионную кору, раунды дендритных бусинок последовательно совпадали с прохождением распространяющихся деполяризаций, но только с частичным восстановлением во время реполяризации, что указывало на накопление терминального повреждения дендритов, что означало распространение повреждения в перистальтику контузионная кора.

Мы использовали модель контролируемой корковой травмы головного мозга, которая широко используется для имитации ряда ушибов человека (Dixon et al. , 1991; Morales et al. , 2005). Особым преимуществом этой модели для текущего исследования было то, что параметры деформации, такие как время, скорость и глубина удара, можно было легко контролировать, чтобы создать периконтузионную область, подходящую для визуализации 2PLSM. В предварительной серии экспериментов мы использовали параметры деформации для получения тяжелой травмы (Hall et al., 2005; Deng et al. , 2007), но кровотечение на поверхности мозга было слишком значительным для успешной визуализации. Поэтому мы уменьшили глубину удара с ∼1000 мкм до ∼100 мкм и диаметр ударного элемента с 3 до 2 мм, чтобы получить более легкую травму. Важно отметить, что краниотомия была закрыта покровным стеклом, чтобы сохранить эффект посттравматического повышения внутричерепного давления (Morales et al. , 2005). Контролируемое корковое воздействие привело к небольшому очагу ушиба, но по-прежнему вызывало ощутимое повреждение, что было подтверждено гистологическими анализами и поведенческими тестами.Кроме того, лазерная спекл-визуализация подтвердила потерю кровотока в месте первичного удара и выявила наличие гипоперфузированной периконтузионной коры, приспособленной к месту первичного повреждения. Таким образом, на протяжении всего исследования лазерная спекл-визуализация использовалась для направления 2PLSM в периконтузионную кору, которая могла быть точно локализована, что облегчало получение изображений с высоким разрешением in vivo .

В легких и умеренных моделях ЧМТ региональный кровоток часто остается выше ишемического уровня (Morales et al., 2005). В нашем исследовании лазерная допплеровская флоуметрия в области диаметром 1 мм, приспособленной к месту первичного удара, также показала умеренное (~ 30%) уменьшение регионарного кровотока. Тем не менее, Texas Red®, попавший в сосуды, окружающие место первичного повреждения, выявил наличие ишемических сосудов. Этот результат согласуется с ранними исследованиями, в которых сообщалось о значительном локальном снижении кровотока в области рядом с первичным воздействием даже при легких уровнях травмы (Yamakami and McIntosh, 1991; Dietrich et al., 1996). Двухфотонная лазерная сканирующая микроскопия отдельных кровеносных сосудов дополнительно подтвердила потерю кровотока в периконтузионной коре, показывая, что нашу модель можно использовать для изучения ишемии как механизма вторичного повреждения клеточных компонентов синаптических цепей при легкой степени тяжести. TBI.

В настоящее время точный механизм, вызывающий дефицит перфузии в нашей модели, неизвестен. Микротромбоз в результате аномальной активации тромбоцитов на ранней стадии после ЧМТ (Dietrich et al., 1994, 1996; Maeda et al. , 1997) может привести к потере перфузии в периконтузионной коре (Bramlett and Dietrich, 2004). Отек быстро развивается во время травмы головного мозга, повышая внутричерепное давление в жесткой полости черепа (Greve and Zink, 2009). Следовательно, повышение внутричерепного давления из-за отека тканей считается одним из основных механизмов потери кровотока (Nortje and Menon, 2004). Как и ожидалось, отек развивался в нашей модели ЧМТ, о чем свидетельствует стойкое набухание астроглии.Кроме того, во время визуализации фокальная плоскость медленно смещалась в течение нескольких часов, обеспечивая внутренний индикатор непрерывного набухания ткани. Однако внутричерепное давление не отслеживалось в наших экспериментах, и необходимы дальнейшие исследования, чтобы установить, способствует ли повышенное внутричерепное давление потере кровотока. В текущем исследовании мы сосредоточились на визуализации дендритов, астроцитов и близлежащих кровеносных сосудов в режиме реального времени с высоким разрешением после легкой ЧМТ.

Постепенная дегенерация дендритной структуры наблюдалась на большой площади через 8 часов после ЧМТ, отражая вторичное повреждение периконтузионной коры.Ранее сообщалось о появлении дендритных бусинок при ишемическом состоянии (Hori and Carpenter, 1994; Zhang et al. , 2005), и без восстановления достаточного кровотока это было надежным индикатором терминального повреждения тонких синаптических цепей (Zhang and Murphy , 2007; Ли, Мерфи, 2008; Ришер и др. , 2010). Действительно, недавние исследования с использованием in vivo 2PLSM-визуализации показали, что без повторяющихся распространяющихся деполяризаций повреждение дендритной структуры зависит от степени ишемии после локальной потери кровотока в фототромботической модели фокального инсульта (Zhang et al., 2005; Ришер и др. , 2010). Во время тяжелой ишемии (уменьшение кровотока на ~ 90%) дендритная структура утрачивается в течение 10-40 минут, но при умеренной ишемии (уменьшение кровотока примерно на 50%) дендритные бусинки образовывались в течение нескольких часов (Zhang et al. , 2005). В фототромботической модели дендритная структура может поддерживаться в ишемизированной ткани при наличии проточного капилляра на расстоянии ~ 80 мкм (Zhang and Murphy, 2007), а артериолы могут доставлять кислород даже на большие расстояния, значительно превышающие 100 мкм (Kasischke ). и другие., 2011). Фототромботическая окклюзия приводит к резкой и серьезной потере кровотока в облученной области, которая отделена узкой полутеневой зоной с гипоперфузией (<380 мкм) от области с нормальным кровотоком (Zhang and Murphy, 2007). В нашем исследовании периконтузионная зона с гипоперфузией шире (до 1 мм). Следовательно, возможно, что более мягкий градиент метаболического стресса на большой площади приведет к более медленной (в течение нескольких часов) потере дендритной структуры. Тем не менее, когда кровоток был полностью остановлен, дендритные бусинки образовывались в течение первого часа, что близко соответствовало динамике повреждения дендритов во время тяжелой ишемии (Zhang et al., 2005; Чжан и Мерфи, 2007). Эти данные, вместе взятые, позволяют предположить, что снижение местного кровотока является причиной образования дендритных бусинок в периконтузионной области после легкой ЧМТ.

Распространение потенциально повреждающих веществ, высвобождаемых из места первичного удара и во время экстравазации, может способствовать острому повреждению дендритов в нашей модели ЧМТ. Действительно, просачивающаяся плазма содержит 30–80 мкМ глутамата (Meldrum, 2000). Неожиданно было показано, что экстравазация вызывает незначительное или не вызывает дополнительных острых повреждений дендритов в фототромботической модели инсульта (Zhang and Murphy, 2007).Кроме того, разрыв единственной проникающей артериолы не вызывает повреждения дендрита, как продемонстрировано в другом недавнем исследовании 2PLSM (Rosidi et al. , 2011). Тем не менее, вполне вероятно, что большая утечка диффундирующих факторов сывороточного происхождения (включая эксайтотоксический глутамат) может способствовать острому повреждению дендритов. Однако в нашем исследовании систематические измерения между корковыми областями с экстравазацией и без нее были невозможны. Будущие эксперименты с 2PLSM будут необходимы, чтобы выяснить, способствует ли экстравазация острому повреждению дендритов в периконтузионной коре.

Эффекты распространения деполяризации на животных моделях ЧМТ неоднозначны. Частично это можно объяснить сложностью первичного и вторичного повреждения ЧМТ у людей, которое модели на животных воспроизводят редко (Lauritzen et al. , 2011). В моделях на грызунах первичное поражение обычно приводит к расширяющейся деполяризации, но спонтанные распространяющиеся деполяризации реже с меньшей продолжительностью или не происходят (Sunami et al., , 1989; Ozawa et al., , 1991; Nilsson et al., 1993; Williams et al. , 2005; фон Баумгартен et al. , 2008). Кроме того, продолжительность и частота распространяющихся деполяризаций зависят от тяжести травмы, например легкое повреждение приводит к кратковременной деполяризации распространения, подобной событию мигрени, тогда как тяжелое повреждение вызывает более длительную деполяризацию распространения (Rogatsky et al. , 1996, 2003). У людей длительная распространяющаяся деполяризация связана с худшим клиническим исходом при травме головного мозга (Hartings et al., 2011 b ) с двумя отложенными пиками деполяризации на ~ 24 часа и на 6-7 дни (Hartings et al. , 2009). Напротив, такие длительные распространяющиеся деполяризации не были зарегистрированы в животных моделях TBI (Lauritzen et al. , 2011). Тем не менее, клинические данные показывают, что весь спектр волн и даже короткие распространяющиеся деполяризации вызовут значительную метаболическую проблему (Hashemi et al. , 2009; Feuerstein et al. , 2010), особенно когда они будут вторгаться в гипоперфузию перистальтики. -контузионная кора.Отсутствие спонтанной распространяющейся деполяризации в нашей модели (0,5–6 ч после травмы) могло быть связано с легкой травмой, которая была реализована для получения изображений, но продольные записи не проводились. Еще одно ограничение — мы не регистрировали во время контролируемого коркового воздействия и в первые 30 мин после травмы.

Исследование in vivo , проведенное фон Баумгартеном et al. (2008) не смог выявить эффект распространения деполяризации на увеличение объема ушиба, оцененный с помощью гистологического исследования крезилового фиолетового через 24 часа.Однако гистологические исследования с одной временной точкой не могут выявить динамическую реорганизацию клеток с течением времени. Напротив, используя визуализацию внутреннего оптического сигнала для отслеживания распространяющейся деполяризации во времени и пространстве в модели травмы неокортикального среза, Черч и Эндрю (2005) показали, что единичная распространяющаяся деполяризация увеличивает травматическое повреждение. В наших экспериментах мы использовали приложение KCl на удаленном участке, чтобы вызвать раунды распространяющейся деполяризации для вторжения в периконтузионную кору, как ранее использовалось в TBI (von Baumgarten et al., 2008) и модели инсульта (Back et al. , 1996; Busch et al. , 1996). Следует отметить, что существует континуум деполяризации между конечной длительной и кратковременной распространяющейся деполяризацией, и биофизические характеристики деполяризации сохраняются, поскольку она распространяется в ткани по градиенту метаболического стресса (Dreier, 2011; Dreier et al. ). , 2013). Это дает дополнительное обоснование для экспериментов с искусственно вызванными распространяющимися деполяризациями, поскольку они представляют явления той же природы, что и повторяющиеся спонтанные распространяющиеся деполяризации, которые могут быть вредными при вторжении в гипоперфузионную периконтузионную кору.

В описанных здесь экспериментах распространение деполяризации привело к быстрому образованию бусинок дендритов в течение нескольких секунд. Как и в лишенной энергии ишемической полутени с повторяющимися спонтанными распространяющимися деполяризациями (Risher et al. , 2010, 2011), распространение искусственно индуцированных волн деполяризации через метаболически вызываемую периконтузионную кору головного мозга значительно усилило терминальное повреждение дендритов. Эти результаты показывают, что в условиях, когда повторяющиеся деполяризации происходят спонтанно, их распространение через лишенную энергии периконтузионную кору может быть пагубным, приводя к быстрому терминальному повреждению тонких синаптических цепей.

Исследование in vivo , проведенное Takano et al. (2007) показал, что даже в нормальных условиях распространяющаяся деполяризация может сопровождаться сложной структурой дендритных бусинок или отсутствием бусинок. Таким образом, мы вызвали множественные KCl-индуцированные распространяющиеся деполяризации, чтобы проверить, может ли количество искусственно индуцированных распространяющихся деполяризаций, равное количеству моделей TBI, вызвать терминальное повреждение дендритов в здоровом нормальном неокортексе. Результаты показывают, что в отличие от метаболически нарушенной периконтузионной коры, распространение деполяризации не вызывало агрегированного повреждения дендритов в нормальном неокортексе.Интересно, что быстрое образование бусинок и восстановление дендритов совпало с циклами распространения деполяризации у четырех мышей, но у одного животного отображаемые дендриты были удивительно стабильными во время прохождения деполяризации. В нормальном кортексе распространяющаяся деполяризация является патофизиологическим коррелятом ауры мигрени (Lauritzen, 1994), но даже здесь она может вызывать нехватку энергии (Hashemi et al. , 2009) и может сопровождаться коротким периодом тканевой гипоксия со сложной картиной распределения по капиллярному ложе (Takano et al., 2007; Yuzawa et al. , 2012). Это, возможно, может привести к сложной схеме распространения дендритных бусинок, вызванных деполяризацией, таким образом отражая паттерны тканевой гипоксии через капиллярное русло, при этом бусинки, возможно, не возникают в областях роскошного снабжения кислородом вблизи проникающих артериол (Kasischke et al. , 2011). Для проверки этой идеи потребуются будущие эксперименты с 2PLSM.

Недавно, используя визуализацию in vivo 2PLSM с высоким разрешением, мы показали, что астроглиальная сома набухает на ~ 21% после гипоосмотического стресса, вызванного внутрибрюшинной инъекцией дистиллированной воды, и на ~ 33% после полной глобальной ишемии, вызванной остановкой сердца. (Ришер и др., 2009). Аналогичным образом в другом исследовании (Risher et al. , 2012) мы наблюдали стойкое набухание астроглии на ~ 28% между 30–60 минутами тяжелого эпизода глобальной ишемии, вызванной двусторонней окклюзией общей сонной артерии. Более того, астроциты в метаболически нарушенной ишемической полутени обнаруживают стойкое набухание ~ 31% в течение 30-60 минут после фототромботической окклюзии (Risher et al. , 2012). Это исследование также выявило раннюю и длительную реакцию астроглиального набухания в периконтузионной коре, аналогичную по величине набуханию, вызванному другими патологическими состояниями, такими как ишемия и осмотический стресс.Точно так же при гипоперфузии ишемической полутени астроциты были набухшими, несмотря на присутствие соседнего проточного сосуда со сниженным кровотоком, и оставались набухшими через 24 часа, в то время как кровеносные сосуды продолжали течь со сниженной скоростью. Эти данные предполагают, что на рассасывание отека мозга после ЧМТ (то есть отек астроглии) может значительно повлиять снижение кровотока в периконтузионной коре. Необходимы дальнейшие эксперименты, чтобы определить, как на разрешение отека астроглии, зависящее от времени, повлияет степень ишемии, определяемая снижением кровотока.

Набухание может отражать нейрозащитные процессы, происходящие в астроцитах, такие как поглощение внеклеточного глутамата и калия, повышенный метаболизм гликогена и высвобождение глутатиона для защиты нейронов от окислительного повреждения (Dienel and Hertz, 2005; Mongin and Kimelberg, 2005). Напротив, приток воды через аквапорин 4 во время набухания может вызывать активацию астроцитарных сигнальных событий, которые могут усугублять патологический исход (Thrane et al. , 2011).Следовательно, набухание астроглии может быть вредным и влиять на их способность обеспечивать поддержку нейронов (Kimelberg, 1992, 2005). Набухание астроглии может приводить к высвобождению нейроактивных и эксайтотоксических веществ, таких как глутамат, аспартат, АТФ и d-серин (Kimelberg et al. , 1990; Schell et al. , 1995; Mongin and Kimelberg, 2002), что приводит к гибель нейронов (Orellana et al. , 2011). Будущие эксперименты будут необходимы для определения судьбы набухших астроцитов в периконтузионной коре и их способности защищать соседние нейроны.

Краткий обзор: значение результатов относительно потенциальной цели для лечения пациентов с черепно-мозговой травмой

Среди ключевых факторов, требующих немедленного внимания после травмы головного мозга, является контроль распространения вторичного повреждения от гипоксии и ишемии (Bullock, 2007 ). Действительно, у трети пациентов с ЧМТ и у 90% пациентов, умерших от ЧМТ, наблюдается ишемическое повреждение (Winchell and Hoyt, 1997; Rudehill et al. , 2002; Greve and Zink, 2009).Используя доклиническую модель ЧМТ, мы показали наличие ишемических кровеносных сосудов в периконтузионной коре головного мозга, которые могут привести к опасному ишемическому состоянию и, следовательно, к отсроченному ишемическому повреждению синаптических цепей. Цитотоксический отек является одним из основных источников отека мозга после ЧМТ (Unterberg et al. , 2004) и отека астроглии, который возникает в первые часы после травмы головы у человека (Bullock et al. , 1991). был предложен в качестве возможной причины травмы и мишени для терапии после ЧМТ (Kimelberg, 1992; Mongin and Kimelberg, 2005).Здесь мы наблюдали стойкое набухание астроглии после ЧМТ, указывающее на стойкий отек и возможное нарушение нервно-сосудистой связи. Следовательно, разработка лечебных стратегий, направленных на улучшение кровотока в периконтузионной зоне, должна быть направлена ​​не только на микротромбоз или отек, но и на нарушение нейроваскулярного сопряжения. Среди других важных факторов, усугубляющих вторичную травму в результате ЧМТ, являются распространяющиеся деполяризации, которые, как обнаружено, часто встречаются у пациентов с травмами головы (Lauritzen et al., 2011). Полный спектр от кратковременных до очень продолжительных распространяющихся волн деполяризации был зарегистрирован в эволюции ЧМТ в человеческом мозге (Hartings et al. , 2011 b ). Более того, пациенты с множественной или длительной распространяющейся деполяризацией имеют очень плохой прогноз выздоровления (Hartings et al. , 2011 a , b ). Здесь мы предоставили прямые доказательства того, что всего несколько раундов распространяющейся деполяризации резко ускорили острое повреждение синаптических цепей в метаболически нарушенной периконтузионной коре, таким образом, указывая на распространение деполяризации как на полезную фармакологическую мишень при ЧМТ.Тем не менее, кратковременные распространяющиеся деполяризации, которые проникают в нормоксические окружающие ткани, могут иметь косвенные положительные эффекты, как недавно было рассмотрено (Dreier, 2011). В будущем необходимы совместные усилия ученых и врачей, занимающихся фундаментальными науками и клиническими исследованиями, и врачей, чтобы решить, когда и при каких обстоятельствах распространение деполяризации может переключиться с вредной на защитную.

Новости

Новости

Фото: naassomz1 / pixabay.com В Мехико прошла встреча, посвященная сотрудничеству университетов России и Мексики.Представитель Московского государства имени Баумана …

Фото: mos.ru / ru.wikipedia.org (CC BY 4.0) Спутник V производить очень выгодно, уверен глава Итало-российской торговой палаты Винченцо Трани. По его мнению, спрос на вакцину в мире намного превышает предложение, передает РИА Новости …

Фотография: 995645 / pixabay.ком В среду, 9 июня, в Бангкоке открылась выставка «Слава Воину-освободителю!», Сообщает на своей странице в Facebook посольство России в Таиланде. Она была приурочена к 80-летию начала Великой Отечественной войны. .

Соотечественники в Турции проводят серию мероприятий в честь Дня России. Это конференция, региональные презентации, мероприятия и фестиваль, сообщается на сайте Московского Дома соотечественников.7 июня …

Фото: mos.ru (CC BY 4.0) МГУ им. М.В. Ломоносова занимает 78-е место в рейтинге QS World University Rankings 2022 года, сообщает РИА Новости. Он стал лучшим среди российских вузов. Рейтинг, составленный специалистами мирового консалтингового агентства …

Фото: JC Christie’s / Flickr (CC BY-SA 2.0) Более 8,5 миллиона долларов ушли в аукционный дом Christie’s на аукционе предметов русского искусства, сообщает ТАСС. Этот…

Фото: 3D-модель экспериментального демонстрационного энергетического комплекса / rosatom.ru Росатом приступил к строительству первого в мире энергоблока нового поколения БРЕСТ-ОД-300, сообщает РИА Новости.Строительство началось в Северске на месте Сибирского химического комбината …

Фото: Ю. Иванко / mos.ru (CC BY 4.0) Русскоязычные люди из разных стран приглашаются отдохнуть и пообщаться на итальянском курорте Чезенатико, расположенном недалеко от Сан-Марино. Форум «Новая волна» пройдет с 30 июня по 4 июля. …

Фотография предоставлена: mos.ru (CC BY 4.0) В здании парламента Греции начала работу выставка фотографий, посвященная 200-летию независимости Греции. В экспозиции представлены фотографии, хранящиеся в архиве ТАСС. Он был подготовлен как …

Фото: пресс-служба Минобрнауки России / edu.gov.ru (CC BY 4.0) Акция «Ночь географии» в этом году объединила 29 стран мира, сообщается на сайте Русского географического общества (РГО).Это длилось …

Фото: Посольство России в Испании / facebook.com Памятник первому космонавту планеты Юрию Гагарину украсил столицу Испании, сообщает РИА Новости. Он установлен напротив центрального входа в Мадридский планетарий. Его открытие состоялось во вторник июня …

Фото: Франк Винклер / pixabay.ком Власти Канады продолжают «проводить антироссийский курс», говорится в сообщении МИД России. Официальный представитель МИД Мария Захарова назвала действия Оттавы в этом отношении «неуместными и контрпродуктивными» …

Фото: Резо Габриадзе, 2010 / Джордж Мел / wikipedia.org (CC BY-SA 2.0) Известный писатель, сценарист, кинорежиссер, художник и основатель Театра драмы марионеток Резо Габриадзе скончался в Тбилиси, Грузия, сообщает ТАСС.В советской и грузинской легенде 84 …

Фото: EdwinSurbeck / pixabay.com Концерт, посвященный Международному дню русского языка, прошел накануне, 6 июня, в ООН. Как передает ТАСС, он проводился онлайн Обществом камерной музыки ООН. …

Фото: кадр из новостей Первого канала / youtube.ком В Петербургском международном экономическом форуме (ПМЭФ) приняли участие представители 140 стран, сообщает РИА Новости. …

Фото: pxhere.com (CC0 Public Domain) Международный литературно-музыкальный онлайн-марафон «Пушкин миру» стартовал в России и других странах. Он приурочен ко Дню русского языка, который отмечается в день рождения русского поэта…

Фото: pxhere.com (CC0 Public Domain) Юбилей великого русского поэта Александра Пушкина отмечали в разных странах. С этим днем ​​традиционно совпадает День русского языка. …

Миф об Аполлонии Екатерины Веры | Конкурс рассказов 2015

Многие восхищались рассказами о всемогущих богах Древней Греции, трепеща перед их сверхчеловеческой силой и мощью.И все же мало кто верит самим гражданам, которые, не обладая благородством богов, многого достигли. Но когда человеческая гордость превращается в высокомерие, могут происходить ужасные вещи. Итак, наша сказка начинается.

— — —

Когда-то в Древней Греции жила красивая молодая женщина по имени Аполлония. Многие хвалили ее за красоту, но у девушки был еще один дар: она умела создавать изысканные блюда, почти превращая простую еду в прекрасные композиции, такие же прекрасные, как и она сама.Этот навык повысил ее уверенность в себе, и она днем ​​и ночью готовила потрясающие и вкусные блюда.

Владыка Зевс, могущественный царь бессмертных, слышал истории о прекрасной девушке, которая также была превосходным поваром. Таким образом, могущественный лорд разыскал еду, приготовленную девушкой. Однако Зевс знал, что он не может показать себя в своей истинной форме, иначе он напугает смертных, поэтому он замаскировался под человека, как он делал это в бесчисленных других случаях.

При встрече с девушкой Зевс потребовал, чтобы она приготовила ему еду.Когда он прибыл, он был сразу поражен ее красотой и восхищен вкусной едой. Когда он закончил, он представился Царем богов и потребовал, чтобы Аполлония немедленно собрала свои вещи и сопровождала его на гору Олимп, чтобы приготовить для богов, потому что никогда еще он не пробовал ничего более аппетитного. Однако Зевс знал, основываясь на прошлом опыте, что его жена Гера будет очень презирать его, приведя еще одну девушку на гору Олимп. Таким образом, Зевс вытащил из своего золотого плаща черную маску и приказал Аполлонии надеть ее, когда они прибудут на гору Олимп, чтобы скрыть свою красоту от ревнивой жены.Она была рада уйти, так как стала настолько смелой, получив столько комплиментов, что искренне верила, что ее место среди богов.

По прибытии на гору Олимп Аполлония была поражена, увидев храм во всей его красе и чудесах, погруженный в облака. Он был величественнее любого места на Земле. Конечно, ни один смертный не мог войти в это изысканное место без разрешения одного из богов, и Аполлония чувствовала, что она лучше всех других людей, поскольку ее пригласили внутрь.Она надела свою черную маску, как и просил Зевс.

Прибыла Гера, прекрасная царица богов, в завораживающем плаще из бледной розы. Аполлония глубоко вздохнула; за этой прекрасной богиней была сила и ярость, сдерживаемая, как свирепый лев, за решеткой в ​​клетке, но едва сдерживаемая.

Гера впервые заметила таинственную девушку, сопровождавшую Зевса. В то время как сразу же подозрительно и возмутительно рассерженная, Гера была немного облегчена, увидев, что девушка была просто одета в единственную черную маску и не была преобразована во что-то, как это сделал ранее Зевс.

«Моя дорогая Гера, — быстро начал объяснять Зевс, — эта девушка, которую ты видишь перед собой, не похожа на любую другую …»

«И этим, Зевс, ты хочешь сказать, что она не похожа на бесчисленное множество других девушек, которых ты привел сюда?» — прервала богиня.

«Не бойся, милая Гера. Девочку привели сюда просто, чтобы она шеф-поваром у богов. В конце концов, еда, которую она готовит, действительно исключительна — даже ты сможешь это оценить».

«Разве ты не знаешь, что Гестия готовит для нас прекрасный нектар и амброзию? Зачем нам нужен кто-то другой, чтобы готовить? Мне очень жаль, но я действительно не понимаю.Гестия не нуждается в помощнике ».

«Что, если бы я сказал тебе, — продолжал Зевс, — что эта девушка должна быть не помощница Гестии, а быть у Гестии? Ее готовка действительно лучше, чем любая из амброзии или нектара Гестии …»

Но теперь Аполлония, наблюдавшая со стороны, увидела, что Зевс зашел слишком далеко. Обычно спокойные голубые глаза Геры вспыхнули огненно-красным пламенем, низкий рык в ее голосе перерос в рычание.

«Как ты посмел!» Гера закричала в ярости: «Я отказываюсь позволить какой-то незнакомке занять место бога! На самом деле, я приказываю ей немедленно уйти!»

«Гера, дорогая, — рассуждал Зевс, — давайте не будем чрезмерно критичны или суровы.Должно быть решение или, по крайней мере, золотая середина … »

К этому моменту мысли Аполлонии забились. Ей нужно было остаться здесь, на Олимпе, и доказать, что она достойна, и все же она не могла предположить, что Геру убедят заявления Зевса. В конце концов, она больше не могла этого выносить, или, возможно, ее сильный характер просто взял верх над ней. Аполлония тяжело сглотнула и смело обратилась к Королеве Богов.

«Моя королева, все, что я прошу от вас, — это шанс проявить себя. В конце концов, отсутствие доказательств — это все, что омрачает ваше суждение.Позвольте мне представить вам доказательства, которых вам не хватает, чтобы вы могли искренне определить, действительно ли мне следует запретить посещать эту священную гору или я должен остаться, чтобы стать верховным поваром богов, которым я рожден! »

«И что может быть лучше, чем проявить себя, прекрасная дева, чем провести соревнование, — поддержал Зевс, — чтобы мы действительно смогли сравнить твои навыки с таковыми Гестии!»

Слово Зевса было окончательным, и больше не было никаких споров.Как только Зевс разработал план, даже Гера не могла ему противостоять. Тем не менее ее по-прежнему шокировал тот факт, что ее муж мог подумать о такой нелепой идее.

После тщательного обдумывания она решила последовать плану, зная, что ни одна смертная девушка никогда не сможет приготовить такую ​​чудесную еду, чтобы боги оставили амброзию и нектар, которые сохраняли их бессмертие.

Соревнование должно было продлиться три дистанции и началось в тот же вечер. Гера, теперь одетая в темно-розовый плащ, велела Гестии не волноваться и просто приготовить свой обычный ужин.Гестия с радостью согласилась на этот план, так как она была одной из самых милых и щедрых богинь. В прошлом она даже отказалась от своего престола, чтобы Дионис мог занять место среди богов. Гера объявила о первом курсе. Все боги сидели на своих тронах, перед ними стоял элегантный стол. Афина, богиня мудрости, знала, что такое соревнование глупо и неразумно, но, как и все другие боги, ей было любопытно попробовать пищу, которую приготовит этот таинственный незнакомец.Боги уловили знакомый запах золотого нектара Гестии, плывущий из очага, но из кухни доносился более интригующий запах. Аполлония появилась, когда дверь из кухни распахнулась, все еще в черной маске и с тарелкой, на которой дюжина чаш были наполнены нежнейшим освежающим бульоном. Дионис, бог вина, который, следовательно, был богом, который мог больше всего ценить прекрасные напитки, провозгласил, что суп Аполлонии лучше нектара Гестии, и все боги (даже Гера) должны были согласиться.Услышав это, Аполлония стала очень гордой и уверенной. Она громко заявила, что обязательно выиграет конкурс, потому что основная еда, которую она приготовит в следующий раз, была лучше, чем что-либо на Земле или на Олимпе!

На самом деле Аполлония ничего не приготовила. Аполлония лихорадочно обыскивала кухню, открывала все шкафы и по-прежнему ничего не нашла. В конце концов, она решила побродить по двору в поисках вдохновения.

Выйдя на улицу, она пошла по узкой тропинке, которая вела в великолепный сад.Аполлония не могла не быть поражена красотой этого места. Справа лежала небольшая грядка с овощами, а слева — прочно укоренившаяся в свежей земле яблоня. Только сейчас ей пришло в голову, что это, должно быть, собственный сад Геры, и в ней закипело волнение. Каждое растение, растущее в этом саду, должно быть самого высокого качества!

Краем глаза бросился в глаза красный отблеск. Аполлония повернулась к растению в поисках ярко-красного цвета, который она увидела.Сначала ей показалось, что она это вообразила. При пристальном взгляде ничто не выглядело необычным, просто море здоровых зеленых стеблей и листьев, растущих у стены. Но Аполлония, которая никогда не сомневалась, смотрела еще сильнее. Присев на корточки, она подняла тонкий лист — и самый спелый, самый красный помидор уставился на нее.

Адреналин в ушах, Аполлония протянула дрожащую руку. Она оглянулась через плечо. Ей нужно действовать быстро и быстро. Последствия того, что тебя поймали в частном саду Геры, были слишком серьезными.С бешено колотящимся сердцем она повернула красный шар против часовой стрелки и потянула. Наконец, после последнего решительного поворота и рывка спелый помидор упал ей в руки с мягким, но торжествующим стуком.

Она помчалась обратно на кухню, где использовала помидоры, чтобы приготовить идеальный соус для вкусной пасты.

«Прекрасно», — пробормотала она с улыбкой на губах.

Девушка в маске подала еду, которая понравится любому. Для этого блюда Гестия просто решила нарезать типичную порцию амброзии, и хотя она была восхитительной, как обычно, она не могла конкурировать с божественным вкусом свежеприготовленной еды Аполлонии.И снова Зевс заявил, что основное блюдо, приготовленное Аполлонией, было гораздо более очаровательным, чем обычная амброзия Гестии. И снова Аполлония, теперь исполненная гордости и храбрости, хвасталась, что непременно выиграет следующий и окончательный путь, как она преуспела в двух других.

Гера и Афина очень встревожились. Афина отвела королеву в сторону и сказала ей, что Аполлонии нельзя позволить выиграть состязание, потому что, если боги перестанут есть свою магическую амброзию и нектар, они потеряют свое бессмертие.Гера согласилась, что этого нельзя допустить.

Между тем Аполлония наслаждалась всей похвалой и успехом, которые принесла ей паста с помидорами Геры. Однако ее быстро осенило, что ей придется жить в соответствии с этими стандартами, если не превзойти их, чтобы выиграть последний курс.

И вот, она снова вышла из кухни и направилась в очаровательный двор, который лежал за ней. В этом последнем десертном курсе ей нужно будет повторить успех предыдущих блюд.В ее голове проносились разные идеи, она остановилась только на самом изысканном из сладостей: яблочном пироге, посыпанном восхитительной корицей и сахаром. Влажное и нежное лакомство обязательно победит богов.

Она вышла во двор, который, как всегда, был мирным и красивым. Тихо и нежно пела ласточка с ближайшего дерева. Как обычно, никого не было. Она миновала небольшой мостик, украшенный розовыми азалиями, и направилась не к священному саду справа, а к прочной яблони, стоящей слева.

Не испытывая никаких опасений, которые были у нее, когда собирала помидор, она протянула руку и смело сорвала с дерева единственное яблоко. Глаза ее расширились: это яблоко было не похоже ни на что другое, как, кажется, и все здесь, на Олимпе. Он сверкал, как драгоценный камень, отражая солнечный свет. Очарованная его красотой, она грациозно подошла к пруду, преклонила колени и начала мыть необыкновенный плод.

Потом все случилось. Быстрый.

Одно мгновение Геры нигде не было.В следующий раз она стояла в воротах двора, ее плащ, теперь ужасного темно-фиолетового цвета, яростно развевался позади нее. Облака сомкнулись, становясь темными и тяжелыми, и вспышка молнии, за которой последовал раскат грома, сигнализировал о начале шторма. Глаза Геры снова стали огненно-красными, горящими глубоко в ее душе. Лев внутри богини начал расхаживать, его ярость неотвратима, барабаня в ушах Аполлонии. Существо начало рычать, затем зарычало и, наконец, испустило полный рев, наконец вырвавшись из клетки.Поскольку Зевс отсутствовал на сцене и, таким образом, не мог ее сдержать, богиня атаковала беспомощную девушку в маске, еще одна вспышка молнии имитировала ее настроение. Секундой позже она стояла над девушкой. Гера, всемогущая богиня, отбросила руку назад, сад содрогнулся от ее гнева, и снова обрушила ее на Аполлонию, искры загорелись на кончиках ее пальцев.

Аполлония открыла глаза. Но что-то было не так. Буря полностью исчезла, и сад вернулся к своей первоначальной красоте.Она пряталась под всемогущей богиней, но теперь Геры нигде не было. Она осторожно наклонилась, глядя в зеркальную гладь пруда. Сначала поверхность была размытой, но пока она ждала, вода стала кристально неподвижной.

В своем отражении она увидела себя — но не совсем.

Усы теперь обрамляли стороны ее лица. Пока она смотрела с удивлением, начали происходить еще более невозможные вещи. Сначала это были просто близлежащие цветы, медленно увеличивающиеся в размерах.Потом был пруд, земля под ней, и, наконец, все, что она могла видеть, начало расширяться с нарастающей скоростью, все быстрее и быстрее.

«Что происходит?» — воскликнула Аполлония в панике. И вдруг ее осенило. «Ничего не становится больше, так что я, должно быть, сжимаюсь!»

Снова бросившись к пруду, ее гипотеза подтвердилась. Она протянула руку, чтобы коснуться своего отражения, затем закричала. Там, где раньше была бледно-персиковая кожа, рос серый и спутанный мех, когти торчали из кончиков пальцев.Ее уши начали скользить вверх к верхней части лица, где они превратились в заостренные равнобедренные треугольники. Затем вырос хвост, покрытый яркими черными, серыми и белыми полосами. С силой, которую она могла собрать, она дотянулась до лица и натянула черную маску. С последним криком отчаяния она поняла, что было слишком поздно. Черная маска была навсегда приклеена к ее лицу.

С этого момента девочка и ее потомки всегда будут вынуждены носить черную маску, которую они никогда не смогут снять.Они никогда не смогли бы есть пищу, если бы не мыли ее снова и снова. Им также придется сновать по ночам, потому что они будут бояться быть замеченными.

В стыде и позоре за то, что она увидела свою новую форму, Аполлония поспешила так быстро, как ее новые четыре лапы несли ее, и навсегда убежала с Олимпа. С тех пор все ее дети никогда не могли снять свои черные маски и обнаружили, что вынуждены всегда мыть еду. Аполлония узнала, как бедная Арахна, превратившаяся в паука, что неразумно быть слишком смелым и бросать вызов богам.

Конец

Быть или не быть в партии

Об этой книге

Введение

В марте 1985 года к власти в Советском Союзе пришел Михаил Горбачев. Изначально с большим трудом можно было заметить серьезные изменения в политике и заявлениях этого нового, молодого и, очевидно, эффективного лидера.Находясь за границей, Горбачев сказал, что антисталинизм — это форма антикоммунизма. Газеты пестрели словами, восхваляющими «священные традиции 30-х годов». В то же время кампания против пьянства, коррупции и разгильдяйства, начатая Юрием Андроповым, получила новый импульс и высочайшую партийную поддержку. В апреле 1986 года произошла чернобыльская трагедия. Первая реакция советских властей была обычной. Советская общественность не была должным образом информирована о катастрофе и ее беспрецедентной опасности.Миллионы ликующих советских граждан заполнили площади и улицы Киева и Минска во время Первомайских гуляний. Остается только догадываться, какой была бы реакция кремлевских властей, если бы шведские ученые не проследили и не объявили миру угрожающий уровень радиоактивности. Неужели термины «гласность» и «перестройка» распространились в мировой прессе с такой интенсивностью и живостью? Год спустя популярный советский писатель написал в советских СМИ: «Чернобыль оказался не только общенациональным событием, бедствием, которое разделяет каждый из нас, но и разделительной линией между двумя эпохами.

Ключевые слова

Партия СССР будущих научно-технических женщин

Авторы и аффилированные лица

1. 1. Кафедра Российского университета Далхаузи, Галифакс, Новая Шотландия, Канада

Библиографическая информация

• Заголовок книги Быть или не быть в партии
• Подзаголовок книги Членство в Коммунистической партии СССР
• Авторы Юрий Глазов
  
• Название серии Советика
• DOI https: // doi.org / 10.1007 / 978-94-009-2963-0
• Информация об авторских правах Springer Science + Business Media B.V.1988 г.
• Имя издателя Спрингер, Дордрехт
• электронные книги Архив книг Springer
• ISBN в твердом переплете 978-90-277-2716-9
• ISBN в мягкой обложке 978-90-277-2717-6
• электронная книга ISBN 978-94-009-2963-0
• Серия ISSN 0561-2551
• Номер издания 1
• Количество страниц VII, 235
• Количество иллюстраций 1 ч / б иллюстрация, 0 иллюстраций в цвете
• Темы История, общая
  
• Купить эту книгу на сайте издателя